吸入性及食物性过敏原特异性IgE抗体检测SOP(欧蒙)
欧盟关于过敏源的检测项目
过敏源检测 (2007.09.05)研究表明，发达国家对食物过敏反应的人群约占3.5-5%，这些过敏性人群即使摄入含微量过敏源的食物，也会产生很严重的过敏性反应，甚至致命。
此外，乳糖和小麦蛋白的耐受量也值得过敏性人群的关注。
过敏性人群必须避免含有相关过敏源或超过耐受限量的食物，因此，必须对任何含有潜在致敏反应的食物进行合理的标识。
欧盟法规要求：欧盟关于食品配料标签要求的2003/89/EC 指令规定，任何含有该指令所涉及的过敏源的产品必须标识。
该指令列出了所有过敏源食物，包括任何含有或源自谷物（肤朊/小麦蛋白）、甲壳类动物、鸡蛋、鱼类、花生、大豆、乳及乳制品（包括乳糖）、坚果（榛子、杏仁、巴西坚果、腰果、开心果、胡桃、美洲山核桃、澳大利亚坚果、昆士兰坚果）、芝麻、芹菜、芥末及硫酸盐。
部分主要过敏源及耐受度花生：花生蛋白中大约含有7-10% 致敏性蛋白(如花生碱)，低于10 mg/kg 的水平暂未发现过敏反应 。
鸡蛋： 蛋清中9-11%为蛋白，主要过敏源有：卵类粘蛋白(ovomucoid,11%)、卵清蛋白(ovalbumin, 54%)、转铁蛋白(ovotransferrin, 12%) 及溶菌酶(lysozyme, 3.5%)，而蛋黄的过敏性比较低 。
奶类过敏源： ß-乳球蛋白(BLG)和酪蛋白(casein)是牛奶及乳清的主要组成成分，但同时也是过敏源，对许多婴幼儿产生过敏反应。
小麦蛋白：若产品欲标识为“不含小麦蛋白”，则产品中小麦蛋白含量不得高于 200 mg/kg （干重）。
大豆：大豆是引起严重过敏反应最多的食品。
通常，检测限只有0.5%的ELISA 方法无法满足检测的需要，而PCR 方法则能使检测限低至0.01%，甚至更低。
什么是AllerGene©?√过敏源检测欧盟过敏源列表完全相吻合的过敏源完整检测计划；√通过化学、酶、分子生物学和/或免疫学方法来检测特异性蛋白、DNA 、乳糖和亚硫酸；√可提供最佳的检测项目（或多检测结合），以满足您的特殊要求。
1593 例过敏原检测结果分析
医学食疗与健康 2022年7月中第20卷第20期·综合医学论坛·1593例过敏原检测结果分析马莉（北京航天总医院检验科，北京 100076）【摘要】目的：了解我院周边地区变态反应性疾病过敏原分布情况及特点，为临床预防过敏性疾病提供基础依据。
方法：选取我院2019年1月1日至2021年6月30日收治的过敏性疾病患者血清1593份，采用欧蒙免疫印迹法，进行过敏原检测，并分析检测结果。
结果：1593例标本中共检出阳性吸入性及食物性过敏原616例（38.67%），其中0～20岁的儿童及青少年阳性率最高，为67.11%。
食物性过敏原中最常见的是蟹（15.26%），其次为鸡蛋白（12.50%）和花生（5.84%）；吸入性过敏原中最常见的是艾蒿（38.31%），其次为屋尘螨/粉尘螨（27.92%）和猫毛（18.18%）。
一种过敏原阳性的为287例（46.59%），两种及两种以上阳性的为329例（53.41%）。
秋季过敏原阳性率为43.62%，明显高于其他季节。
结论：我院就诊患者过敏原检测结果具有性别差异，且一半以上为多重过敏原综合致敏引起；该地区食物性过敏原以蟹为主，吸入性过敏原以艾蒿为主；随着年龄的增长过敏原阳性率逐渐下降；一年四季以秋冬季节为主。
【关键词】过敏原检测；过敏；吸入性及食物性【中图分类号】R593.1 R446.6 【文献标识码】A 【文章编号】2096-5249（2022）20-0153-04 Analysis of allergen detection results in 1593 casesMa LiDepartment of Clinical Laboratory, Beijing Aerospace General Hospital, Beijing 100076, China【Abstract】Objective: To understand the distribution and characteristics of allergens in allergic diseases in the surrounding areas of our hospital, and to provide the basis for clinical prevention of allergic diseases. Methods: From January 1, 2019 to June 30, 2021, 1593 serum samples of patients with allergic diseases were selected from our hospital. The allergens were detected by Western blot, and the detection results were analyzed. Results: A total of 616 cases （38.67%）of the 1593 samples were detected positive for inhaled and food allergens, among which the positive rate of children and adolescents aged 0～20 years was the highest （67.11%）. The most common food allergens were crab （15.26%）, followed by egg white （12.50%）and peanut （5.84%）. The most common inhaled allergens were artemisia argyi （38.31%）, followed by house dust mite/dust mite （27.92%）and cat hair （18.18%）. 287 cases （46.59%）were positive for one allergen, and 329 cases （53.41%）were positive for two or more allergens. The positive rate of allergens in autumn was 43.62%, which was significantly higher than that in other seasons. Conclusions: The results of allergen detection in patients around our hospital showed gender differences, and more than half of them were caused by multiple allergens. The food allergens were mainly crabs, and the inhalant allergens were mainly Mugwormwood. With the increase of age, the positive rate of allergens decreased gradually; The four seasons are dominated by autumn and winter. The distribution and characteristics of allergens in the surrounding areas are clear, which is helpful to understand the allergic status of patients, assist the diagnosis of allergic diseases and provide reliable basis for their prevention and treatment.【Keywords】Allergen detection; Allergies; Inhalation and food作者简介：马莉（1988.08—），女，本科，初级检验师，研究方向为医学检验医学食疗与健康 2022年7月中第20卷第20期·综合医学论坛·过敏反应的概念最初由Clemens von Pirquet提出，指的是个体对外来物质的反应能力的增加[1]。
免疫球蛋白E(IgE)测定标准操作程序SOP文件
4.2 校准物
来源：ROCHE配套校准物，符合WHO标准，CRM470,具体如下：
S1：0.9％的NaCl
S2-6:Preciset Serum protein
批特异的定标液的靶值乘以下列的转换因子，用来计算定标曲线。
S2:0.10
S3:0.20
S4:1.00
S5:2.00
贮存条件：校准物在2-8℃保存可保存至有效期。
3 标本
血清及Na/K-肝素, EDTA或枸橼酸盐抗凝血浆,处理方法见标本处理程序。
稳定性：20-25℃7天
2-8℃7天
-20℃6个月
4 试剂
4.1 试剂
来源：ROCHE配套试剂（详见试剂说明书）。
贮存条件及稳定性：未打开试剂盒：2－8℃储存至效期末
R1：打开后机上稳定84天
R2：打开后机上稳定84天
10抗干扰能力：
10.1 标准：回收率在90％－110％之间。
10.2 黄约为60mg/dl）
10.3 溶血：溶血指数达到1000时不会有明显干扰。（血红素浓度约1000mg/dl）
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-43
本法线性范围为10-1000IU/ml，不准确度允许范围 ±3SD，不精密度CV=1.9%，灵敏度为10IU/ml。
9 注意事项
9.1血清标本出现溶血、脂血或黄疸的干扰情况参见抗干扰能力。
9.2 换算公式：IU/ml × 2.4 ＝ ng/ml
ng/ml × 0.42 ＝ IU/ml
9.3 仅应用于体外诊断。
IgE的检测可以指示诊断过敏性疾病。在干草热、过敏性支气管炎症时可以检测到IgE 水平升高。病理性的IgE水平可以在寄生虫病和免疫低下症中出现，例如获得性T-细胞缺乏或者wiskott-Aldrich 综合症等。在婴儿和儿童的呼吸道疾病中，IgE的测定有预示作用。
吸入性 食物性过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒(免疫印迹法)产品技术要求hejiechuangxin
吸入性/食物性过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒（免疫印迹法）适用范围：用于定性检测人血清中的柳树/杨树/榆树、普通豚草、艾蒿、屋尘螨/粉尘螨、屋尘、猫毛、狗上皮、蟑螂、点青霉/分枝孢霉/烟曲霉/交链孢霉、葎草、鸡蛋白、牛奶、花生、黄豆、鳕鱼/龙虾/扇贝、虾、蟹过敏原特异性IgE 抗体。
1.1 试剂盒规格20人份/盒（7项、10项、17项）1.2 试剂盒型号吸入性/食物性过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒（7项）：鸡蛋白、牛奶、花生、黄豆、鳕鱼/龙虾/扇贝、虾、蟹；吸入性/食物性过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒（10项）：柳树/杨树/榆树、普通豚草、艾蒿、屋尘螨/粉尘螨、屋尘、猫毛、狗上皮、蟑螂、点青霉/分枝孢霉/烟曲霉/交链孢霉、葎草；吸入性/食物性过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒（17项）：柳树/杨树/榆树、普通豚草、艾蒿、屋尘螨/粉尘螨、屋尘、猫毛、狗上皮、蟑螂、点青霉/分枝孢霉/烟曲霉/交链孢霉、葎草、鸡蛋白、牛奶、花生、黄豆、鳕鱼/龙虾/扇贝、虾、蟹；1.3 试剂盒组成及规格见表1表1 试剂盒的组成及规格2.1 外观2.1.1 产品包装完整、标签清晰。
液体试剂中，样品稀释液、底物液和酶标二抗为淡黄色，其它试剂为无色，均无混浊，无未溶物。
2.1.2 检测膜条干净、无污渍、无破损。
2.2 膜条尺寸宽度： 2±0.5mm2.3 装量及组件数量检查见1.3，其中装量应不少于标示值。
2.4 阴性符合率用N1-N10总计10份阴性参考品进行检测，各项检测指标检测结果均为阴性。
2.5阳性符合率用P26-P45总计20份企业阳性参考品进行检测，各项检测指标检测结果应符合企业阳性参考品结果。
2.6最低检出限应小于或等于0.35IU/mL。
2.7分析特异性用N11-N15总计5份分析特异性企业参考品进行检测，各项检测指标检测结果均为阴性。
其中，N11为花生特异性IgG抗体阳性，N12为黄豆特异性IgG抗体阳性，N13为虾特异性IgG抗体阳性，N14葎草特异性IgG抗体阳性，N15为屋尘螨/粉尘螨特异性IgG抗体阳性。
两种常用过敏原筛查方案结果对比分析
两种常用过敏原筛查方案结果对比分析王文强１，陈柳青２，闫 琦１，穆小萍１（１．广东省妇幼保健院，广东广州５１００１０；２．广州市红十字会医院，广东广州５１００１０）ＤＯＩ：１０．１１７４８／ｂｊｍｙ．ｉｓｓｎ．１００６－１７０３．２０２０．１１．０２１收稿日期：２０２０ ０８ ０３；修回日期：２０２０ ０９ ２７摘要：目的 对比分析ＡｌｌｅｒｇｙＳｃｒｅｅｎ（敏筛）过敏原特异性ＩｇＥ抗体和总ＩｇＥ抗体检测方案与ＥＵＲＯＬＩＮＥＡｔｏｐｙ（欧蒙）过敏原特异性ＩｇＥ抗体联合ＩｍｍｕｎｏＣＡＰ总ＩｇＥ抗体检测方案结果的一致性，为临床过敏性疾病筛查提供更可靠的试验依据。
方法 选取１３６例过敏性疾病患儿血清标本，年龄在３～１５岁。
应用德国ＡｌｌｅｒｇｙＳｃｒｅｅｎ（敏筛）过敏原ｓＩｇＥ和ｔＩｇＥ抗体检测系统，德国ＥＵＲＯＬＩＮＥＡｔｏｐｙ（欧蒙）过敏原ｓＩｇＥ抗体联合美国ＩｍｍｕｎｏＣＡＰ（赛默飞Ｐｈａｄｉａ２５０）ｔＩｇＥ抗体检测系统，同时检测患儿血清过敏原ｓＩｇＥ和ｔＩｇＥ，采用ＳＰＳＳ２２．０对结果进行统计分析。
结果 两种检测方案过敏原豚草、尘螨的ｓＩｇＥ两项结果一致性强，Ｋａｐｐａ值分别为１．０００、０．８１３。
艾蒿、屋尘、蟑螂、霉菌组合、牛奶、鸡蛋、海鱼组合、虾、蟹九项结果一致性较强，Ｋａｐｐａ值分别为０．６６３、０．７９６、０．６６３、０．６６３、０．６８１、０．６０３、０．６６３、０．６５７、０．７５８。
猫毛和牛肉两项结果一致性中等，Ｋａｐｐａ值分别为０．４２１、０．５５３。
而狗毛一致性较差，Ｋａｐｐａ值为０．１４２。
两种检测方案过敏原ｔＩｇＥ一致性一般，Ｋａｐｐａ值为０．３６２。
两种检测方案过敏原ｓＩｇＥ的等级资料Ｓｐｅａｒｍａｎ相关性分析显示，艾蒿、豚草、尘螨、屋尘、牛奶、鸡蛋、海鱼组合、虾、蟹的等级相关性非常紧密，Ｓｐｅａｒｍａｎ值分别为０．７４３、０．９４５、０．８６４、０．７４６、０．７４５、０．７０３、０．７０３、０．７５７、０．８５８。
过敏原特异性IgE检测
过敏原特异性IgE检测过敏原特异性IgE检测的目的：分析临床常见吸入性过敏原和重要食物过敏原的种类。
过敏原特异性IgE检测的方法：用ImmunoCAP过敏原检测系统所做的过敏原特异性IgE （specific IgE,sIgE）检测结果，统计每种过敏原的检测量、阳性检出量和阳性率，并对过敏原阳性检出量进行排序分析，血清特异性IgE是确诊过敏性疾病的唯一临床指标，当人体免疫细胞调控能力不足或接触到过敏原如尘螨、花粉或食物等后，使TH2型免疫反应过度活化，导致TH2型免疫细胞激素分泌量过高，就会帮助B细胞制造较多的过敏抗体IgE，因而出现过敏症状。
过敏原特异性IgE检测结果：其中吸入性过敏原介导的过敏性疾病IgE阳性高达76%；食物过敏原介导的过敏性疾病IgE阳性高达22%。
常见吸入性过敏原18种分别是：户尘螨、粉尘螨、蒿属花粉、链格孢、白蜡花粉、柏树花粉、豚草花粉、桦树花粉、蟑螂、梧桐花粉、苍耳花粉、屋尘、多主枝孢、狗皮屑、猫皮屑、鹅毛草花粉和烟曲霉等。
重要食物过敏原包括：鸡蛋、牛奶、花粉、大豆、虾、蟹、谷物、坚果和水果等。
过敏原特异性诊断分体内法和体外法，皮肤试验属于体内法，血清特异性IgE检测属于体外法。
结论：不同的过敏性疾病与过敏原IgE检测的阳性率有很大关系，因果关系明显的过敏性疾病检测IgE阳性率高，如季节性过敏性鼻炎，湿疹等，蒿属花粉过敏sIgE检测的阳性率高达64.4%.有些过敏性疾病的过敏原比较隐匿，加之皮肤试验的假阳性较多，很难通过临床资料确定，特别是食物过敏。
目前特异性IgE免疫疗法是惟一可能通过免疫调节机制改变过敏性鼻炎（季节性过敏性鼻炎）免疫自然进程的方式，过敏其实是人体对环境中无害的物质产生的异常免疫反应，而非一般的细菌或病毒，尤其这些过敏都属于黏膜发炎的反应，因此，只要补充肠道抗过敏益生菌（中文名：福敏康益生菌）改善肠道内的益菌生态，提高游走全身黏膜性突出细胞的能力，就可以达到调节全身免疫功能的效果，缓解过敏症状；福敏康抗过敏益生菌富含多种新型抗过敏的乳酸菌菌株，可增强抗过敏的能力，并通过增进TH1型免疫反应来调控因过敏而反应过度的TH2型免疫反应从而减少过敏性鼻炎患者血清中过高的IgE特异性抗体，缓解过敏症状，调整过敏体质，相比单纯药物抗过敏性鼻炎哮喘或皮肤荨麻疹湿疹等过敏性疾病可产生良好的整体疗效，有效的改善过敏患者的生活质量。
吸入性和食物特异性IgE抗体检测试剂盒 DPACNCSOP
特应性过敏原(中国组合)检测试剂盒标准操作流程1方法欧蒙印迹法2原理用于体外半定量检测人血清或血浆中吸入性和食物性过敏原特异性IgE抗体。
试剂盒中的检测膜条上平行包被了21种不同的吸入性和食物性过敏原。
经缓冲液预处理的检测膜条与患者样本进行第一步温育。
如果样本阳性，IgE类特异性抗体与相应的过敏原结合。
为检测结合的抗体，加入酶标单克隆的抗人IgE抗体（酶结合物）进行第二步温育，然后加入酶底物，发生颜色反应。
3试剂品牌、编号、代号、包装、规格（表1）表1 德国欧蒙医学实验诊断有限公司试剂1601(16)4试剂成分4.1包被过敏原的检测膜条：ts20, w1, w6, ds1, h1, e1, e2, i6, ms1, u80, f1, f2, f13, f14,f27,f88, fs33, fs34, f23,f234,CCD 。
4.2酶结合物: 碱性磷酸酶标记的抗人IgE（小鼠），直接使用。
4.34. 色原/底物液:四唑硝基苯胺兰/5-溴-4-氯啶-3-吲哚-磷酸盐（NBT/BCIP），直接使用。
4.4通用缓冲液: 10倍浓缩。
5仪器品牌、型号摇床、扫描仪6检测时间根据样本稀释度与加样量不同检测时间略有不同。
7标本要求待测样本在2-8℃可以稳定14天，已稀释的样本应在同一个工作日内检测。
8试剂准备同一批号试剂盒中各个组分互相匹配，不能与其它批号试剂盒中的组份混用。
所有试剂均应在室温（18-25℃）平衡30分钟后方可使用；液体试剂使用前应充分混匀。
从第一次使用起，试剂盒如保存在2-8℃，并且在没有污染的情况下，可稳定至所标示的有效期。
9操作步骤9.1预处理：当膜条平衡到室温后打开包装，取出所需的膜后应立即密封好原包装并将其保存于2-8℃。
先将10倍浓缩的通用缓冲液充分混匀，如需温育一条检测膜条，可取5ml浓缩缓冲液加入到45ml蒸馏水或去离子水中进行稀释。
稀释后的缓冲液应在同一个工作日用完。
将模条上有编码的一面朝上放入温育槽中，用移液枪吸取1ml的稀释好的通用缓冲液加入到温育槽中，于室温条件下在摇摆摇床上温育5分钟。
欧蒙过敏原总IgE说明书
总IgE检测试剂盒（酶联免疫法）说明书[产品名称][通用名称] 总IgE检测试剂盒(酶联免疫法)[英文名称] Total IgE ELISA适应症：过敏性疾病、蠕虫病、湿疹性或非湿疹性皮炎、IgE骨髓瘤等。
临床意义：1）过敏反应和特应性疾病的诊断：除了皮肤和激发实验、检测特异性IgE外，变态反应性疾病的诊断还包括检测总IgE水平。
但是，过敏反应并不总伴有总IgE水平的升高（成人>100 IU/ml）。
相反，低水平的IgE（成人<25 IU/ml）也不能排除患有特应性过敏反应。
通过长期脱敏治疗和远离过敏原，总IgE滴度通常会下降。
通过测定总IgE水平可以区分过敏性哮喘和内源性哮喘，过敏性鼻炎和血管舒缩性鼻炎以及婴儿特应性皮炎和脂溢性皮炎。
在特应性皮炎患者中可见极高浓度的IgE（数千IU/ml）。
其他过敏性（和高IgE水平）的疾病包括急性复发性或慢性荨麻疹、复发性Quincke水肿（血管神经性水肿）、胃肠道不耐受和不明原因的疹病。
检测总IgE 也可用于鉴别诊断肺部嗜酸性粒细胞浸润、变态反应性曲霉病、外源性变态反应性肺泡炎（农夫肺和养鸽者肺）和Churg-Strauβ 综合征。
2）其他疾病中的IgE：高IgE水平的非变态反应性疾病包括多种形式的蠕虫病，如弓蛔虫病、蛔虫病、血吸虫病、钩虫病、利什曼原虫病、毛线虫病。
然而，在绦虫病和蛲虫病中未见有IgE水平升高。
对于大多数病例，经有效治疗后，IgE水平可降至正常值范围内。
在下列疾病中可检测出高浓度的IgE：•湿疹性或非湿疹性皮炎；•IgE骨髓瘤；•急性系统性红斑狼疮（SLE）；•移植物抗宿主反应；•T细胞缺陷（Wiskott-Aldrich 综合征）；•2度或3度烧伤；•耳鼻喉肿瘤；•肝病（尤其与酒精滥用有关）；•AIDS晚期阶段（CD4+ T细胞明显下降）。
在下列疾病中可有IgE缺陷：•X-染色体相关低丙种球蛋白血症；•严重的联合免疫缺陷（SCID）；•毛细管扩张性运动失调；•肺纤维化疾病；•极少数的健康人。
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吸入性及食物性过敏原特异性IgE抗体检测（欧蒙印记法）1.目的：规范实验室吸入性及食物性过敏原特异性IgE抗体的检测操作。
2.范围：XXX医院xxx科3.测定原理:采用免疫印迹法原理。
经缓冲液预处理的检测膜条与患者样本进行温育。
如果样本阳性，IgE 类特异性抗体与相应的过敏原结合。
在洗涤之后，加入酶标单克隆的抗人IgE 抗体（酶结合物）进行第二步温育，以形成复合物。
在孵育之后，冲洗掉未结合的酶-抗-IgE，然后加入底物液，发生颜色反应。
终止反应之后，风干判读结果。
4.标本:4.1病人准备：要求患者在安静状态下；晨起的精神、体力、情绪等因素的影响较小，是标本采集的最佳时间；抽取肘部静脉血或毛细血管血。
4.2标本种类：人血清或者EDTA、肝素或柠檬酸抗凝血浆。
4.3标本稳定性：待测样本于2-8°C 条件下通常可保存14 天。
稀释后的样本应在同一个工作日内检测。
4.4标本稀释：4.4.1患者样本不需稀释，直接检测（方案a）。
4.4.2如果样本量过少，可用已稀释的通用缓冲液1:11稀释血清或者血浆样本，然后过夜温育（方案b）。
例如：100ul血清用1.0ml已稀释的通用缓冲液稀释，并用旋涡混匀器充分混匀，不适合用加样枪混匀。
4.4.3 如果使用特定的温育盘（ZD9897-0130）用于减少血清用量打的实验，使用这种温育盘未稀释血清用量可以减少至400ul（方案c）。
4.5标本容器：一般用真空采血管中的血清促凝管（红色头盖）或抗凝管（紫色或绿色头盖）。
4.6标本最小用量：血清最小用量 1ml。
4.7标本运送：标本采集于真空采血管后应尽快送实验室分析，物流系统可加快标本传递速度。
若标本不能及时转运到实验室，应将真空采血管内的标本置冰瓶或冷藏箱内，运送过程中应避免剧烈震荡。
当天无法运送的标本应分离血清后冷藏。
5.试剂:5.1来源：欧蒙公司.5.2 规格： 16*1人份/盒5.3试剂盒组成和代号：主要组分：16 人份的试剂盒5.4储存和稳定性：2-8°C 保存，不要冰冻。
未开封前，试剂盒可稳定至所标示的有效期。
已稀释的缓冲液必须在一个工作日内用完。
5.5试剂的准备和稳定性：5.5.1试剂在使用前均应在室温（18-25℃）平衡30分钟左右。
5.5.2包被过敏原的检测膜条：直接使用。
为防止膜条发生冷凝，只有当膜条平衡到室温后才可打开包装。
取出膜条后应立即密封好原包装并将其保存于2-8°C。
5.5.3酶结合物：直接使用。
使用前充分混匀。
通用缓冲液：10 倍浓缩。
在稀释前应充分混匀。
用干净的吸管从瓶中吸取需要量用蒸馏水或去离子水1:10 稀释。
由于欧蒙印迹法中使用了特殊的膜条，因而需要用已稀释的通用缓冲液稀释患者样本和清洗检测膜条。
如需温育一条检测膜条，可取5ml 浓缩缓冲液用45ml 蒸馏水或去离子水稀释。
稀释后的缓冲液应在同一个工作日用完。
5.5.4底物液：直接使用，因对光敏感，使用后应立即盖紧瓶盖。
6.临床标本测定:操作流程预处理：将检测所需的膜条朝上放置于温育槽中，分别加入1.0ml通用缓冲液，于室温温育5分钟后吸去温育槽中的液体。
血清温育手动：第一次： a（省时）：在温育槽中分别加入1.0ml未稀释的患者样本，在摇摆摇床上室温（18-25℃）温育60分钟。
b(省血清量)：将至少1.0ml已稀释的样本在摇床上室温温育过夜（12-24小时），温育时需加盖以防挥发。
c(兼具省时和省血清量)：在每条特殊温育槽（ZD9897-0130）中加入400ul 未稀释的患者样本，在摇床上室温温育60分钟。
自动：方案b中，1:11稀释样本过夜温育，反应液体量为1.65ml（1.5ml通用缓冲液加150ul的样本）。
清洗：手动：吸去每个温育槽内的液体，在摇床上用1.0ml通用缓冲液清洗膜条3次，每次5分钟。
自动：1:11稀释样本过夜温育的方案b中，第一步清洗时的缓冲液的量为1750ul。
酶结合物温育在每个温育槽中加入1.0ml酶结合物（碱性磷酸酶标记的抗人IgE,单克隆），于摇床上室温温育60分钟。
第二次：清洗：吸去每个温育槽内液体，在摇床上用1.0ml通用缓冲液清洗膜条3次，每次5分钟。
色原/底物温育在每个温育槽中分别加入1.0ml色原/底物温育，于摇床上室温温育10分钟。
第三次：终止反应：吸去槽内液体，用蒸馏水或去离子水清洗膜条3次，每次1分钟。
结果判断：将检测膜条放置在结果判断模板中，风干后判定段结果。
7.性能指标:7.1检测范围：欧蒙印记法是一种半定量检测方法。
7.2精密度：通过比较同一样本在相同时间内多次检测结果的差异来研究批内差异；批间差异为用不同批号产品在不同时间对同一样本进行检测所得的差异。
每一次实验，抗原带着色的深浅都在额定范围内。
该欧蒙印迹法试剂具有很好的批内和批间重复性。
7.3灵敏度：采用Pharmacia CAP 系统为参考方法，本检测系统的灵敏度对于牧草(g6)为90%、白桦(t3)为90%、屋尘螨(d1)为83%、粉尘螨（d2）为84%、猫(e1)为98%、马(e3)为82%。
7.4方法学比较：与Pharmacia CAP 系统相比较，该试剂具有很好的特异性和灵敏度。
7.5特异性：采用Pharmacia CAP 系统为参考方法，本检测系统的特异性为牧草(g6)为100%、白桦(t3)为92%、屋尘螨(d1)为100%、粉尘螨(d2)为86%、猫(e1)为91%、马(e3)为100%。
7.6交叉反应：由于过敏原之间具有相似的结构，如化学组成相似或植物学上的相关性，在过敏原之间可出现交叉反应，患者体内的特异性IgE抗体也可与同源性蛋白过敏原上的相同表位结合。
8.方法的局限性:8.1干扰因素：血红蛋白浓度小于5 mg/ml 的溶血、甘油三脂浓度小于20 mg/ml 的脂血和胆红素浓度小于0.4mg/ml 的黄疸对检测结果没有影响。
8.2利用该检测结果进行诊断时，最好结合病人的病史、临床体征和其他检查结果。
9.检测结果的判断及解释:9.1方法：将温育后湿的检测膜条置于结果判定模板的塑料膜上（进行目测判断结果时，判断模板可从欧蒙订购，或者用专用的软件判断检测结果）并与标志对齐。
用吸水纸小心吸去膜条上的水分，待膜条完全干透后，将粘附于塑料膜上，潮湿的膜条上会出现背景颜色，因而必须等膜条完全干透后才能判断结果。
9.2目测判断结果时，将检测膜条上出现清晰可见的，且与结果判定模板上标记位置相同的条带记录在结果判定模板上。
9.3软件判读结果，见其操作指南。
9.4在检测膜条的下端有一条指示带，如果这条指示带出现清晰可见的颜色反应，表明实验各步操作正确。
如果指示带没有出现颜色反应，则表明实验操作不当，应该重新检测。
9.5 鲑鱼/鲈鱼/鲤鱼打的检测结果，仅供研究，不用于临床诊断。
9.6结果的判断：在判断结果时必须考虑到条带饿肚肚位置和颜色强度，通过比较结果判断模板和已温育的检测膜条可确定抗相应过敏原IgE抗体。
条带大的颜色强度可分为4类：膜条上包被抗原位置：位置缩写过敏原1 ts20 树组合2（柳树/杨树/榆树）2 w1 普通豚草3 w6 艾蒿4 ds1 尘螨组合1（屋尘螨/粉尘螨）5 h1 屋尘6 e1 猫毛7 e2 狗上皮8 i6 蟑螂9 ms1 霉菌组合1（点青霉/分枝孢霉/烟曲霉/交链孢霉）10 u80 律草11 f1 鸡蛋白12 f2 牛奶13 f13 花生14 f14 黄豆15 f27 牛肉16 f88 羊肉/羊羔肉17 fs33 海鱼组合1（鳕鱼/龙虾/扇贝）18 fs34 淡水鱼组合1（鲑鱼/鲈鱼/鲤鱼）19 f24 虾/对虾20 f23 蟹21 CCD CCD标记物a lnd 指示带10.注意事项:10.1本检测试剂仅用于体外诊断。
10.2试剂盒中部分试剂含有毒性的叠氮钠，应避免接触皮肤。
10.3试验的所有样品均应作为传染性物品处理。
11.临床意义:过敏反应是一种对异物的超敏反应。
这些异物通常无害，但在过敏反应患者中，则产生强烈的反应。
最常见的过敏反应为I 型过敏反应，其特征是形成特异性IgE 抗体。
一旦跟过敏原接触很快就会产生诸如发红，水肿以及瘙痒等症状。
典型的过敏反应有鼻炎、通常所说的花粉热、结膜炎和哮喘。
接触过敏原的次数越多，过敏反应就会越严重。
如果发生系统性过敏反应，可能会出现危及生命的严重反应（全身性过敏反应）。
吸入性过敏反应可由季节性过敏原(树、草或种子的花粉)引起，也可由常年性过敏原（尘螨、霉菌孢子、宠物的唾液和皮屑）引起。
除了空气传播的过敏原（如花粉、灰尘和霉菌）可引起过敏反应外，还有食物也可引起过敏反应。
最常见的食物过敏原有花生、大豆、小麦、贝类、鱼、牛奶、蛋类和坚果。
食物过敏反应是IgE 介导的过敏反应，在摄入食物后的几个小时内可出现相应的症状。
可能的症状为唇、舌、喉部灼痛或瘙痒、恶心、腹部痉挛、腹泻和红斑，甚至可出现哮喘、气短、心跳加速、恐慌和精神错乱。
有时坚果、贝类、鱼和花生甚至能引起全身型过敏性反应或者致死性过敏反应。
由于保守的植物性过敏原引发的IgE 抗体和相关植物制作的食物或者非食物类过敏原发生交叉反应。
如对于白桦树花粉过敏的患者可能对苹果、胡萝卜、芹菜、榛果、马铃薯或者猕猴桃过敏。
许多过敏原是含有低聚糖侧链的糖蛋白类，这些侧链结合在过敏原的蛋白骨架上。
有时，患者体内会产生针对这种糖类结构的抗体。
CCD 是“引起交叉反应的糖类抗原决定簇”的简写。
CCD普遍存在于大量植物或动物类过敏原中。
由于它们结构的相似性，CCD 可引起很强的交叉反因。
但大多数情况下，认为它们与诊断无关，但同时又对体外诊断阳性结果的解释造成影响。
因此，引入抗CCD 类的特异性IgE 抗体的检测可能会提供有用的信息，尤其当IgE 阳性结果与临床表现不符时，会为我们解释检测结果提供帮助。
该试验可对特异性过敏原IgE进行测定，以确定究竟是对哪一种物质过敏。
12.安全防护措施及处理12.1 按要求穿白大褂，带一次性手套。
12.2处理试剂和样本时需戴一次性手套，操作后应彻底洗手。
所有样本及使用后的试剂盒应视为潜在的传染性物质，废弃处理时，按照当地政府和有关国家规定进行。
12.3如果发生污染，视污染范围，部位选择合适的处理方法（以下浓度84消毒液均由原液配置成）：12.3.1 血液标本污染台面，用7000mg/L的84消毒液浸泡抹布，擦拭污染区域，小心处理容器碎片，消毒后置于利器盒内12.3.2 血液标本溅洒在白大褂上，应脱去衣物，并用300mg/L的84消毒液消毒。
12.3.3 血液标本溅洒在眼睛上，应立即用洗眼器冲洗眼部15min后，上报主任，并去眼科就诊。
12.3.4 血液标本在离心机内破损，应在第一时间停止离心机运行，待其完全停止后，等30min内部气溶胶散去，并带口罩后，用7000mg/L的84消毒液浸泡抹布，擦拭污染区域，小心处理容器碎片，消毒后置于利器盒内13.相关记录文件试剂出库记录14.参考资料吸入性及食物性过敏原特异性IgE抗体检测（欧蒙印记法）说明书编者：审核：批准：批准时间：年月日。