1_脱氧野尻霉素_DNJ_的研究进展
桑叶中1-脱氧野尻霉素应用分析

桑叶中1-脱氧野尻霉素应用分析作者:许永东来源:《湖北农业科学》2018年第22期摘要:桑叶提取物1-脱氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin,DNJ)是一种强α-糖苷酶抑制剂,也是降血糖活性物质之一,药用开发研究前景广阔。
介绍了DNJ的提取工艺,并着重分析总结了国内外对桑叶提取物DNJ在降血糖领域的进展情况。
关键词:1-脱氧野尻霉素;提取工艺;降血糖;进展中图分类号:R284; ; ; ; ;文献标识码:A文章编号:0439-8114(2018)22-0008-03DOI:10.14088/ki.issn0439-8114.2018.22.002; ; ; ; ; ;开放科学(资源服务)标识码(OSID):Abstract: 1-Deoxynojirimycin(DNJ) is abundant in mulberry leaf,as a inhibitor of α-glycosidases,which have antidiabetic activity and have a large pharmaceutical development prospect. The paper systematically illustrates and analyzes the extraction procedures for 1-Deoxynojirimycin,meanwhile,the analysis focused on the research progresses on hypoglycemic functions of mulberry DNJ and its deveopment at home and abroad.Key words: 1-Deoxynojirimycin; extraction procedures; hypoglycemic; deveopment近年来,随着糖尿病患者逐年增长且患者呈现年轻化,如何预防和治疗糖尿病引起国内外学者的高度重视。
桑叶中1-脱氧野尻霉素研究进展

桑叶中1-脱氧野尻霉素研究进展作者:谢克英娄芳慧孙瑞琳钱志伟来源:《河南农业·教育版》2021年第06期关键词:桑叶;1-脱氧野尻霉素;生产工艺;研究进展桑树属于桑科植物桑属,桑叶性寒、味甘苦,具有疏风散热、润肺祛燥、清肝明目的功效,古医药著作《神农本草经》称其为神仙叶。
现代医学表明,桑叶中含有丰富的营养成分和生物活性物质,桑叶作为中药材已被国家药典正式收录,是卫生部批准的药、食两用宝贵资源[1]。
现有研究报道从桑叶中提取的生物碱,尤其是多羟基生物碱1-脱氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin,1-DNJ)具有良好的降血糖、降血脂和抗氧化等作用[2]。
一、1-DNJ的来源日本Yoshiaki等人在1976年首次从桑根皮中分离提纯得到1-DNJ[3]。
桑树各个器官均含有1-DNJ,但其含量因品种、栽培区域以及树体药用部位不同存在差异。
对桑叶来说,叶位、发育阶段、采收时间和季节这些因素都对1-DNJ 含量有影响。
1-DNJ 来源于植物和微生物[4],除桑树外,野跖草、风信子、沙参属植物也含有1-DNJ及其类似物,但其含量均低于桑树;微生物发酵产生的1-DNJ含量更低,在0.01mg/mL左右。
二、1-DNJ的药理学功能1-DNJ的结构与α-1,4-葡萄糖近似,在机体内与葡萄糖竞争酶上的催化位点。
1-DNJ不仅能够调节餐后血糖水平异常升高,亦可改善糖尿病常见并发症。
降低食物中碳水化合物分解速率,抑制餐后血糖升高,减少葡萄糖摄入的关键是抑制α-葡萄糖苷酶活性[5]。
1-DNJ可以促进B细胞分泌胰岛素,从而起到降血糖的效果。
糖尿病小鼠的血糖、血甘油三酯水平在1-DNJ 作用下显著降低,提高小鼠肝脏的葡萄糖代谢酶活力和蛋白质表达水平,从而提高动物的脂联素水平,激活β-氧化系统,抑制肝脏脂质积累。
利用糖尿病小鼠开展的降糖机理研究表明,1-DNJ可以降低肠道对葡萄糖吸收,调节参与糖转运、糖酵解及糖异生代谢过程的酶,有利于肝内葡萄糖代谢,血糖浓度得以降低。
桑叶中1—脱氧野尻霉素提取纯化及检测方法研究进展

桑叶中1—脱氧野尻霉素提取纯化及检测方法研究进展桑叶中1—脱氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin,DNJ)是一种重要的生物活性物质,具有抗糖尿病、抗癌、抗病毒等多种药理活性。
对于桑叶中DNJ的提取纯化和检测方法的研究具有重要的临床应用价值。
本文将对桑叶中DNJ的提取纯化和检测方法的研究进展进行综述。
桑叶中DNJ的提取一般采用溶剂提取法和超声波辅助提取法。
溶剂提取法是将桑叶与适量的溶剂(如甲醇、乙醇、水等)混合,通过搅拌、浸泡等方法将DNJ溶解到溶剂中。
超声波辅助提取法则是在溶剂的基础上,利用超声波的作用产生剪切力和振荡力,从而促进DNJ与溶剂的充分接触,提高提取效率。
这两种方法都可以有效地提取桑叶中的DNJ,但超声波辅助提取法更加快速、高效。
桑叶中DNJ的纯化方法主要有溶剂萃取法、树脂吸附法、柱层析法等。
溶剂萃取法是通过控制溶剂的极性和挥发性,将DNJ与其他杂质分离。
树脂吸附法则是利用树脂对DNJ 的亲和性,通过溶液与树脂的接触,将DNJ吸附到树脂上,再通过洗脱等步骤将DNJ从树脂上获得。
柱层析法是将提取物注入到柱中,利用固定相、流动相以及样品的分配系数等原理,将DNJ与其他成分分离。
这些方法能够有效地提高DNJ的纯度和产率。
对于桑叶中DNJ的检测方法,主要有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、质谱法(MS)等。
HPLC是最常用的方法,可以通过样品的色谱保留时间和峰面积来定量分析DNJ的含量。
GC法则是将DNJ转化为易于气相色谱分析的衍生体,再通过GC的蒸发、分离等步骤得到DNJ的含量。
质谱法则是通过将DNJ溶解在溶剂中,利用质谱仪分析DNJ的质荷比和相对丰度,从而获得DNJ的含量。
这些方法可以对桑叶中的DNJ进行准确、快速的检测。
桑叶中DNJ的提取纯化和检测方法的研究进展取得了显著的成果。
这些方法不仅能够获得高纯度和高产率的DNJ,还能够对桑叶中的DNJ进行准确、快速的检测。
桑叶中1—脱氧野尻霉素提取纯化及检测方法研究进展

桑叶中1—脱氧野尻霉素提取纯化及检测方法研究进展摘要:桑叶中的1-脱氧野尻霉素 (1-deoxynojirimycin, DNJ) 是一种重要的生物活性物质,具有降血糖、抗肿瘤、抗氧化、抑制糖化等多种药理活性。
本文综述了目前桑叶中 DNJ 的提取、纯化和检测方法的研究进展,包括常规离子交换层析、高效液相色谱、质谱、毒素结合试验、酶联免疫吸附法、近红外光谱及其对 DNJ含量测定的检测方法,并对其各项优缺点进行了分析比较和展望。
1.引言DNJ 分子式为 C6H13NO4,分子量为 163.18 Da,是一种丝氨酸葡萄糖苷酶(α-glucosidase) 抑制剂,具有降低血糖的作用。
此外,DNJ 还具有一定的抗肿瘤[2]、抗氧化[3]和抑制糖化[4]等生物活性。
由于 DNJ 具有广泛的生物活性和较高的药理学研究价值,因此其在药物、保健品、化妆品等领域中的应用前景广阔,已成为当前国内外研究的热点之一。
本文旨在综述桑叶中 DNJ 的提取、纯化和检测方法的研究进展,并尝试对其优缺点进行评价和展望,以期为该领域的后续研究提供参考依据。
2.DNJ 的提取和纯化方法2.1 常规离子交换层析法常规离子交换层析法是目前 DNJ 提取和纯化的主流方法之一,其主要原理是利用固定在层析柱填料上的离子交换基团与待提取化合物的亲和性差别,通过电荷相互作用和竞争吸附来实现分离纯化[5]。
具体方法为:先提取桑叶中的总黄酮和 DNJ ,用超滤膜切分黄酮体系,然后在经过提取的细胞滤液中加入硫酸铵粉末,沉淀时间 2 h,收集沉淀,用常规离子交换层析柱进行纯化[6]。
其优点是简单易行,可扩展性好,但存在一定的操作难度和效率低的缺点。
2.2 高效液相色谱法高效液相色谱法 (High Performance Liquid Chromatography, HPLC) 是 DNJ 分离、纯化和检测的一种高效且常用的方法。
与常规离子交换层析方法相比,其分离能力更强、杂质排除率更高、精度和效率更高,适用于大规模生产和高标准纯化[7]。
1一脱氧野尻霉素的生物特性及功能

163
[44-45]
。
1.2.1.2 DNJ的来源
野尻霉素首先由Inoue等作为抗生素从链霉菌中得到,DNJ是由野尻霉素氢化得到
的。DNJ的来源有两大类:植物来源和微生物来源。植物来源包括:桑(Morus alba L.),
野拓草是野拓草科(commelianceae)植物,它在中药中作为非传染性感冒的退热药及
治疗腹水、浮肿和睑腺炎的主要成分,最近这种草药被用于治疗糖尿病。Hang Sub,Kim
等首次从野拓草中分离并鉴定出DNJ,4 kg干的野拓草中含DNJ 450 mg,其含量为
0.01125%
[50]
。
风信子是百合科(Hyacinthaceae)植物。Asano等从风信子鳞茎的甲醇提取物中分离到
。
离子色谱法具有样品处理简单、易操作等优点,但分离效果和可靠性不够理想。而
且该方法对于设备要求高,一般实验室不具备实验条件。在可供查阅的资料中也没有对
该方法进行色谱分析方法认证的相关试验。
1.2.4.2高效液相色谱法
(1)高效液相色谱法-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)
姜永涛[75],杨梅[76]等人曾分别用高效液相色谱法-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)
的,甚至有人称其为万能检测器,不过目前还在发展摸索的阶段,技术不是很成熟,价
及蚕沙冲剂中的DNJ进行了定量分析。主要方法是,先将家蚕幼虫或蚕沙粉碎后经过
超声处理1h,然后在60℃水中抽提1h,12 000 r/min离心取上清液,之后进行离子色谱
检测。检测结果得到黄血蚕中DNJ的含量是0.1890%,蚕沙中DNJ含量是0.1071%,
1-脱氧野尻霉素的研究进展

1-脱氧野尻霉素的研究进展梁明;王鹏;张会慧;张秀丽;孙广玉【摘要】1-脱氧野尻霉素(DNJ)是一种多羟基哌啶生物碱,具有降血糖、抗病毒、抗肿瘤等生物活性.文中从DNJ的来源、生物活性及作用机理,应用研究等方面综述了其研究进展,并对其未来研究方向进行了展望.%1-deoxynojirimycin (DNJ) is a kind of piperidine alkaloid with much hydroxyl,which can regulate blood sugar level,resist the virus and tumor and so on. The research progress of DNJ was reviewed from its sources,bioactivity, mechanism and applications,and finally its future research prospect was forecasted.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2012(040)017【总页数】2页(P9222-9223)【关键词】1-脱氧野尻霉素;研究进展【作者】梁明;王鹏;张会慧;张秀丽;孙广玉【作者单位】东北林业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨150040;东北林业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨150040;东北林业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨150040;东北林业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨150040;东北林业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨150040【正文语种】中文【中图分类】S1881-脱氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin,DNJ)是一种存在于桑树及其他植物和微生物中的多羟基哌啶生物碱,化学名称为 3,4,5-三羟基-2-羟甲基四氢吡啶,分子式为C6H13NO4,分子量为163,可用于治疗糖尿病、肥胖症、病毒感染等疾病,药用价值高,应用前景可观。
家蚕幼虫体中1-脱氧野尻霉素含量的变化

委亲遍窳
・
第4 4 卷 第3 期
桑叶中1-脱氧野尻霉素(DNJ)的气相法测定

症 的有 效治 疗 ; 它具 有 显 著 的抗 病 毒 逆 转 录酶 活 性 的作 用 ; 肿 瘤转 移具 有抑 制作 用 ; 对 还可 以作 为 工 业化 生产 药 用 高 纯 度 麦 芽 糖 的 有 效 载 体[ 。 1 ] 由于 D 分 子结 构 中缺 少发 色基 团 , 紫外 波 长 NJ 在
检 测 到 。 目前 , NJ的检 测方 法 主要 为离 子 色谱 D 法 和柱 衍 生后 的液相 色谱[ ] 5 。本 研 究 尝试 建立
一
an ri。打 印 出标 准 样 品 图 谱 , 标 准 样 品第 出峰 对
面积 进行 归一 化处 理 。
1 2 3 桑 叶样 品 处理 ..
维普资讯
3 2 Biblioteka 此 方 蚕 业 ★O (总2卷 1 ★ 2 6) 7 第1 期 O3 o
按照 1 2 2和 1 2 3方法处 理后 得到 的试验 .. ..
院周 乐教授 在 试 验 中给 予的 细 心 的 指 导 , 此 表 在
7h 冷却 至常 温后 , 入 2 5 , 加 . mL的 甲醇 ,20 0 1 0
rmi 、 心 5ml , / n离 n 取上 清 液后 , 次 加 入 2 5 再 . mL 的甲醇 , 离心 2 n合并 两 次 的 溶 液 , 甲醇 定 容 mi 用 至 1mL的容量 瓶 中作 为测 试样 品备 用 。 0
种 利 用 气 相 的 方 法 快 速 简 便 的 检 测 桑 叶 中
DN J的新 方法 , 为今后 DN J的 提取 以及该方 面 的
取桑 叶粉 0 5g于 1 的烧 杯 , . 0ml 先后 加 入 l 吡 啶待 D ml NJ溶 解 后 , 入 ・ OH 0 mg 振 加 Na 1 ,
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研究比较了不同因素对 DNJ 提取率的影响,得到 乙醇提取的最佳条件是:以 65%的乙醇为提取剂, 料液比 1:8,超声强化细胞破碎 20min(1800W),提 取率为 95.8%;用阳离子交换树脂纯化,DNJ 的 获得率为 124.54mg/100g,纯度为 92.3%以上。
John J. [42] 等研究发现 DNJ 可作为药理分子伴 侣辅助治疗庞贝氏症,一种由编码酸性 α- 葡糖 苷酶(GAA)基因突变引起的溶酶体储藏变质(LSD)。 实验结果表明,DNJ 显著增加了 16 种不同的、在 患者衍生的纤维细胞和暂时转染的 COS-7 细胞中
第3期
1- 脱氧野尻霉素(DNJ)的研究进展
摘 要:1- 脱氧野尻霉素 (DN)J 是一种哌啶类多羟基生物碱,作为 α-葡糖苷酶抑制剂,具有降
血糖、抗肿瘤及抗病毒作用,成为当前的研究热点。本文对 1- 脱氧野尻霉素的来源、提取和分离纯化方
法以及生理活性的研究进展进行综述。
关键字:1- 脱氧野尻霉素 提取;分离纯化方法;生理活性
中图分类号:S886.9
47
的 GAA 变异体的蛋白质含量和酶活性,并加快这 些 GAA 变异体成为成熟的溶酶体的过程,提出通过 分泌途径促进运输,即 DNJ 可辅助治疗庞贝氏症, 具有开发成为相关药物的潜力。 4.2 DNJ 的抑瘤作用及机理
王然君等[43]报道,DNJ 能明显抑制 B16F10 细胞 的入侵、转移、细胞粘附,抑制率分别达到 50%、 35%、60%;对 MMP-2 的抑制活性仅在 50μg /ml 剂量处有明显抑制,对 MMP-9 的抑制在 50μg /ml 剂量处达到 20%;对 MMP-2 和 MMP-9mRNA 表 达的抑制率分别为 60%和 28%;对 TIMP1 mRNA 表达无明显作用,TIMP2 mRNA 表达则明显增加 31%;此外 DNJ 增加细胞表面 α- 甘露糖的水平 49%、降低低聚糖的水平 21%和甲基化水平 30%。 这些结果表明,DNJ 可作为抑制癌细胞转移的辅 助药剂。 4.3 DNJ 对病毒活性的抑制作用
李佑贵等[39]以四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠作为 模型研究 DNJ 的降血糖作用,通过口服添食 DNJ 和多糖,观察小鼠的反应。研究发现 DNJ 和多糖 混合添食处理的糖尿小鼠病血糖、糖化血红蛋白、 甘油三酯、天冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶水平 明显下降,体重、血浆胰岛素水平和高密度脂蛋白 明显的增加。逆转录聚合酶链反应结果表明,DNJ 和多糖混合添食处理区能通过正 / 负调节限速酶 (GCK 型,PEPCK 和 G-6-Pase)在肝脏中的表达和正 调节胰腺和十二指肠同源因子 -1(PDX-1),insulin-1
杨海霞[16]把桑叶粉碎后放入蒸馏水中进行回流 加热,2~2.5h 后过滤去水溶液再次提取,合并两 次提取液并过滤加热浓缩。然后用阳离交换树脂 纯化,获得的提取物中 DNJ 的含量为 2.2%,回收 率为 63.16%。杨梅等[17]用 6 倍量去离子水分别煎 煮 3 次,每次时间分别为 3h、2h、1.5h。合并 3 次滤液浓缩后加入等体积 95%乙醇,静置 1 夜后 过滤去沉淀,减压回收乙醇获得 DNJ 粗提液,回 收率为 95.98%。姜永涛[18]等先用去离子水煎煮法 提取 DNJ,然后用过 732(H 型)离子交换树脂,纯 化,DNJ 的平均回收率为 96.1%。
46
广东蚕业
第 46 卷
表 2 DNJ 的不同检测方法及具体参数
测定方法
衍生剂或显色剂
检测器
高效液相色谱 - 荧光检测法[22]
芴甲氧酰氯
荧光检测器
高效液相色谱 (HPLC-ELDS) [16-17, 21, 23-25]
无
蒸发光散射检测器
HPLC-DAD[7, 16]
芴甲氧羰酰氯
DAD 检测器
柱前衍生反相高效液相色谱荧光检测法[26-27]
文献标识码:A
文章编号:2095-1205(2012)03-13-06
DNJ 是一种哌啶类多羟基生物碱,化学名称是 (2R,3R,4R,5S)-2- 羟甲基哌啶 -3,4,5- 三醇((2R,3R,4R,5S) -2-Hydroxymethyl-piperidine-3,4,5-trio)l ,分子式为 C6H13NO4,分子量为 163.17。DNJ 最早是由 Yagi 等[1]从桑根皮中分离得到,之后其他学者又在桑 树的其他部位— ——桑枝、桑叶和其他植物及细菌 分泌物中发现。DNJ 具有与 α-1,4- 葡萄糖类似的 结构,是强效的 α-葡糖苷酶抑制剂,具有降血 糖功能,此外还具有抗肿瘤及抗病毒活性。本文 对 1- 脱氧野尻霉素的来源、提取和分离纯化方法 以及生理活性的研究进展进行了综述。
和 insulin-2 在胰腺的表达,调控和肝糖元代谢和 糖异生作用。由于 DNJ 没有清羟基自由基和超氧 自由基的作用,不能修复被破坏的胰岛 β 细胞, 所以只能将血糖降低到一定水平但不能回复到原 先的状态,需要多糖的辅助。
Kong Won-Ho 等 [40]通 过 动 物 模 型 研 究 发 现 , DNJ 能明显改善患者空腹血糖水平和葡萄糖耐量, 特别是明显增加胰岛素敏感性。Kim Ji-Yeon 等[41] 等的研究也表明,桑树水提取物可以通过增加肌 肉和脂肪组织中胰岛素受体的表达水平,明显改 善高脂肪或高蔗糖饮食引起的肥胖大鼠的胰岛素 敏感性。
作者简介:冉艳萍 (1990-),女,硕士。E-mail:iranyanping@ 通讯作者:廖森泰 (1962-),男,研究员,E-mail:Liaost@
第3期
1- 脱氧野尻霉素(DNJ)的研究进展
45
表 1 不同植物中 DNJ 含量
名称
种属
含 DNJ 的部位 DNJ 含量 /%
3 DNJ 的检测方法
常用的DNJ 含量的检测方法有柱前衍生化高 效液相色谱法、高效液相色谱法、分光光度计法、 高效液相色谱 - 示差折光检测法、雷氏盐比色法、 气象色谱法等等,各个检测法由于色谱条件的差 异 , 线 性 范 围 各 有 不 同 (见 表 2)。 其 中 , HPLC-ELDS 法的报道最多,该方法较为方便快 捷,敏感性也较好。HPLC–MS/MS 是由 Nitra 等[36] 开发的一种新的桑叶中 DNJ 定量测定方法,其检 测限(S/N = 3)为 75pg、定量限(S/N = 10)为 100pg, 检测更敏感。
根[4]
0.624
桑 桑科 /Moraceae
枝[5]
0.0825-0.2382
叶[6-7]
0.08-0.344
野跖草科 / 野跖草
Commelianceae
0.01125
风信子
百合科 /
Hyacinthaceae
鳞茎
0.0012
沙参属植物 桔梗科 / Hyacinthaceae
0.00086
Jacobinia
胡瑞君等[21]以无菌过滤水为溶剂,以微波处理 为辅助条件提取桑叶的 DNJ,获得最佳工艺:微 波功率为 406W、微波处理时间为 1.5min、固液比 (g:mL)为 1:40 的条件下提取 2 次,DNJ 的提取率 为 0.024%;Chaluntorn 等在微管中以乙腈和水 1 比 1 混合液 1ml (含 6.5 mM 醋酸铵,pH 5.5) 为溶 剂用超声处理 1min,提取冻干桑叶粉中的 DNJ, 后 离 心 取 上 清 液 过 滤 。 DNJ 的 提 取 率 为 0.1~0.14%。
爵床科 /
叶
/
suberecta Acanthaceae
的产生。 利用人工合成的方法也可生产 DNJ。
2 DNJ 的提取、分离纯化
桑中 DNJ 的提取方法主要有蒸馏水提取法、 盐酸提取法、去离子水煎煮法、乙醇提取法及微 波辅助提取法等。在纯化技术上,多数采用阳离 子交换树脂法,反向色谱纯化技术也有少量研究 报道。
芴甲氧羰酰氯
荧光检测器
反相高效液相色谱法[17]
9- 芴基氯甲酸甲酯
荧光检测器
高效液相色谱 - 串联四极杆质谱法[28]
无
大气压化学电离源
毛细管柱气相色谱法[29]
醋酸苷
6- 氨基喹啉基 -N- 羟基琥 柱前衍生化高效液相色谱 - 荧光检测法[30-32]
珀酰亚氨基甲酸酯
柱前衍生化反相高效液相色谱 紫外检测法 [33]
1 DNJ 的来源
DNJ 的来源有两大类:植物来源和微生物来 源。
植物中的来源主要是桑科植物桑 (Morus alba L). ,桑树的各个部位几乎都发现含有 DNJ,但其
含量受到所属品种、栽培区域及采摘时间、采摘 部位而不同 。 [2-5] 另外野跖草( Commelina communis) [6]、风信子(Hyacinthus orientalis) [7]、桔梗科植物沙 参属植物(Adenophora triphyllavar. japonica) [8]及爵 床科植物(Jacobniai suberecta) [9]等植物中也分离得到 DNJ。从目前已报道的文献中,桑树中 DNJ 的含量 最为丰富 (见表 1)。
第 46 卷 第 3 期
44 2012 年 9 月
广东蚕业 GUANGDONG CANYE
Vol.46, No.9 STB. 2012
DOI:10.3969/j.issn.2095-1205.2012.03.13
1- 脱氧野尻霉素(DNJ)的研究进展
冉艳萍 1, 2 廖森泰 2 刘吉平 1
(1 华南农业大学动物科学学院,广东广州 510642; 2 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所,广东广州 510610)