胚胎大鼠背根神经节摘取方法的研究
大鼠蛛网膜下腔置管及背根神经节分离方法的改进
【 关键词 】 蛛 网膜 下腔
背根 神经节 大鼠
大 鼠在生物医学实验 中应用广泛 。在疼痛 和镇痛 的动物研究 中， 鼠的给药 途径通 常为腹腔 内注 射 、 大 皮
重 ２０～２ ０ ｇ 清 洁 级 ， ０ ５ ， 由南 方 医 科 大 学 动 物 中心
提供。
１ ２ 实验 方 法 ．
尾 突然出现侧摆及后腿抽动 为成功标 志。向尾侧 置入 Ｐ １ Ｅ一 ０导管 ２ｃ ｍ。 固定导管 ， 于皮下。术后每 天观察 大 埋
鼠有无脊髓神 经损伤 表现 。术后 第 ２天鞘 内注射 ２ 罗哌卡 因４ ｌ观察双 下肢 阻滞效果 。术后 第 ７天， 内注 ％ ０ ， 鞘 射 ２ ｌ 甲蓝标记导管尖端位置 ，％多聚 甲醛灌 注固定后 打开椎 管及椎 间孔 ， ０ 亚 ４ 观察 导管位 置 ， 辨认并 分 离背根 神经 节， 显微 镜下确认 组织结构。结果 术后 每天观察 置管后 的 大鼠 ， 未见明 显脊髓神 经损 伤症状 ，０只均未 出 ２
１ １ １ 实验 试 剂 １％ 水 合 氯 醛、 哌 卡 因 （ ｓ ．． ０ 罗 Ａ．
ｔ ｚｎｃ ， 国， 号 ５ ３８—０ ） ０ ９ 生 理 盐 水 、 ｒ ｅｅａ 英 ａ 批 ９１ ２ 、．％ ７ ％ 乙醇 、 ５ 碘伏 、 青霉素钠 、％多聚 甲醛 、 甲蓝 。 ４ 亚 １１２ 实验 器材 手术 刀、 ．， 眼科剪 、 组织剪、 有齿镊 、 持
全置 于管腔 内 ， 量 不要外 露 ， 尽 以防刺激 、 肉芽 组织增
生， 为下 一步 实 验增 加 难 度 。导 管埋 于皮下 ， 合 切 缝 口。术毕肌 肉注射 青霉 素钠 。台灯 照射保温 １～ 。 ２ ｈ 大鼠单笼饲养 １周 ， 天检 查有无 脊髓神 经损 伤及 局 每
大鼠脊神经结扎术手术步骤
①位于双侧髂前上棘连线大约为L4/5横突后,手术周围5cm范围剃毛,常规消毒皮肤,铺孔巾。
②以大鼠两骸前上脊连线的中点作中线,中线旁往左5mm,在L5-S1水平做一长约2cm的纵行切口,钝性分离皮下组织和椎旁肌肉。
③钝性分离至暴露L6下关节突,充分显露L6横突。
④用刮骨刀将L6横突周围的肌肉和结缔组织清除干净,暴露骨性结构。
⑤用小咬骨钳小心的咬除L6横突,仔细的分离L6横突下的筋膜,暴露下方的L4和L5神经,L4和L5神经以一定的夹角并排行走,通常靠里靠下粗大的神经为L5,操作时避免触碰到L4神经。
（可以先找坐骨神经，3分支时，中间的是坐骨神经，4分支时。
上2是坐骨神经）⑥用玻璃分针将L5神经充分的游离出来,用镊子将6-0铬肠线穿过L5神经并紧紧的打上两个结,在线结远端5mm处将L5神经剪断。
⑦用无菌生理盐水冲洗伤口,充分止血,擦干血渍,确认无活动性出血后,在伤口洒上链霉素粉防止术后伤口感染,逐层缝合伤口。
⑧手术后将大鼠置于温暖干净的鼠笼中苏醒,并给予自由进食和饮水。
⑨假手术组在进行套线后,不结扎剪断神经,其它步骤与手术组完全一样。
每天检查一次后续L5脊神经结扎的第十天,对大鼠行为学测试后,用戊巴比妥钠对大鼠进行腹腔麻醉。
打开胸腔,暴露其心脏,向左心室插入灌流针管,用止血钳将针管固定。
用憐酸盐缓冲液(O.Olmol/LPBS, pH7.4)冲洗大鼠体内血液。
再用4%多聚甲酸的磷酸盐缓冲液灌流、固定。
待大鼠组织固定后,取脊髓腰膨大节段,放在4%多聚甲醛中4°C冰箱内固定4小时。
后将脊髓转移到30%蔗糖溶液中,4°C冰箱脱水至组织下沉。
用冰冻切片机切片,脊髓厚度为35tim。
切好后将组织贴于载玻片上,放进一2(rc冰箱保存。
用PBS冲洗切片三次,每次7 —10分钟。
然后孵育一抗二抗4.2.1提取脊髓背角上蛋白大鼠断头,取脊髓腰膨大处脊髓背角侧半,保留SNL侧。
然后在装有液氮的碾钵中将组织碾磨成粉末状,移入EP管内,加入蛋白提取试剂,混合均勻放在冰上反应30min。
部分背根切断大鼠脊髓蛋白质组学研究
维普资讯
Байду номын сангаас
第３ ｌ卷第 ３期
Ｖｏ． １， ． １ ３ Ｎｏ ３
济
宁 医 学 院
学
报
２０ ０ ８年 ９月
Ｓ ｐ， ０ ８ ｅ ２ ０
Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＪＮＩ Ｉ ＮＧ ＭＥＤＩ ＣＡＬ ＣＯＵ正 ＧＥ
部分 背根切 断大 鼠脊 髓蛋 白质 组学研究
关 的 内在 机 制 。方法
提
Ｔｈｅ Ｅｘ ｅ ｉ ｅ ｔ ｌＳ ｕｄ ｆ ｔ ｅ Ａｎｔ ｅ ｔ ｉｙ ｐ ｒ ｍ ｎ ａ ｔ ｙ ｏ ｈ ｉ ｒｉ ｔ ｆ ｌ Ｅｆｅ ｔ ｏ ｄ ｏ ｒ ｐｈ ｓ Ｐａ ｉ ｕ ａ ａ ｆ ｃ ｆ Ａｎ ｒ ｇ ａ ｉ ｎ ｃ ｌ ｔ
景 爱红
（ 宁医学 院解剖学 教研室 济
王廷 华
昆明 医学 院神经科学研究所 ）
要 目的 比较部分背根节切除 １ｄ 大鼠脊髓蛋 白质与正常组间的表达差异 ， 讨痛觉传入有 ４后 探 取 成年 Ｓ Ｄ雄 性 大鼠 １ ６只 ， 随机 分 为 两组 。 实验组 切 除双侧 Ｌ 一Ｌ 和 Ｌ 背根 节 ， 保 留 ｋ 背根 节 ； 常组 ８只 ｓ 正 Ｄ大 鼠切 开暴 露 背根神 经 节 ， 不 作切 除 处理 。运 用 双 向 电泳和 质 谱 分析 技 术 ， 但 比较部分背根 节切除 １ｄ 大鼠脊髓蛋 白质与正常组 间蛋 白质的肽指纹 图和氨基酸序列组成差异 。结果 ４后 部分 背根 切 断 １ ｄ大 鼠脊 髓 内免 疫球 蛋 白重链 Ｖ 区（ｇｈ ａｙｃ ａ ｅｉｎ（ｌｎ ４ －） 表 达上 调 ， ４ Ｉ ｅｖ ｈ ｉ Ｖ ｒｇ ｎ ｏ ｃ ｅＸ ｌ２ ） ｏ 果糖 二 磷 酸醛 缩 酶 Ａ（ ｒｃｏｅｂｓｈｓｈｔ ａ ｏａｅＡ） 达 下调 。结论 发 现 部 分 去 背根 大 鼠脊 髓 存 在 两个 明 Ｆｕｔｓ—ｉ ｏｐ ａ ｌ ｌｓ 表 ｐ ｅ ｄ 显差异表达的蛋 白质 ， 结果提示 ， 两个差异表达的蛋 白质可能与痛觉传入机制有关。 关 键 词 部 分 背根神 经 节切 除 ； 向 电泳 ； 白质 组 双 蛋 蛋 白质是 一 切 生命 活 动 的物 质 基 础 ， 白质 组 ２０ ２ ｇ清 洁级 ， 蛋 ５ ｇ± ０ ， 由昆 明 医 学 院动 物 实 验 中心 提 学研究 是 生命 科 学 进 入 后 基 因组 时代 的标 志 之一 。 供 。随 机分 为两 组 （ 每组 ８只 ） 手 术 组用 ２ 的戊 ， ％ 研 究正 常 细 胞 和 异 常 细 胞 之 间 蛋 白质 水 平 上 的差 巴 比妥腹 腔注 射 麻 醉 （ Ｄ大 鼠 ） 俯 卧 位 固 定 ， 规 Ｓ ， 常 别 ， 疾病 的治疗 和药物 的筛 选 有 重要 意 义 ， 对 也是 蛋 消毒 备 皮 后 ， 次 切 开皮 肤 、 膜 、 肉 、 上 韧 带 ， 依 筋 肌 棘 白质组 在 应用 上 最 具 前 景 的方 面 。 目前 ， 索 与痛 分 离横 突外 侧 的肌 肉 ， 楚 的暴 露 棘 突 和 横 突 。用 探 清 觉 传导 有 关 的机 制 是 神 经 生 物 学 领 域 研究 的一 止 血 钳小 心 咬去 椎 间孔处 上 、 关 节 突骨 片 ， 下 用虹 膜 个 热点 。以前 的大 多 数研 究 ， 单 因素 角 度分 析 了 剪 剪 除双侧 的 Ｌ一４ Ｌ 背 根 节 ， 留 Ｌ 从 ， 和 Ｌ 保 背根 节 。 部 分 去背 根术 后 脊髓 及其 背 根 神经 节 内神 经 营养 因 对照组手术切开暴露背根神经节 ， 但不作切除处理。 子 及相 关 蛋 白 的表 达 变 化 ｊ 部分 去 背根 损 伤 后 术后 常规 护理 ， 续注射 青霉 素 ３ ，０万 ｕ ｄ 防 止 。 连 ｄ２ ／， 术后 感 染 。 的痛觉 传 导是 一个 复 杂 的 过 程 ， 能 涉 及 多 因素 综 可 合 作用 。本 研 究采 用 双 向 电 泳 和 质 谱 分 析 技 术 ， 探 １ ２ 样 品的制 备 ． 讨 部分 背 根切 断 大 鼠脊 髓 蛋 白质 差 异 表 达 ， 了解 以 部 分背 根 切 除 术 后 １ｄ， 选 手 术 组 和对 照 组 ４ 挑 差 异表 达 的蛋 白质 与 痛 觉 传 人 的关 系 ， 临床 抑 制 状 态好 大 鼠各 ５只 ， ２ 的戊 巴 比妥 腹 腔 注射 麻 为 用 ％ 疼 痛传 人 提供 实验 依据 。 醉后 ， 出 腰 段 脊 髓 （ 当 于 椎 骨 的 Ｔ Ｌ ） 取 相 。用 １ 材料 与 方 法 ４ 预冷 的双蒸 水 漂 洗 脊 髓 组 织 中 的 血 渍 ， ０ ２ ℃ 每 ．ｇ １ １ 部 分 去 背根 大 鼠模 型 的 制作 ． 样 品加 入 ｌ 样 品 裂 解 液 （ ｍ ｌ１ 素 ， ｍｏ １硫 ｍｌ ７ ｏ／ 尿 ２ ｌ ／ 健 康雄 性 Ｓ ｒｇｅＤ ｗｅ（ Ｄ） 鼠 １ ｐａｕ —ａ ｌ Ｓ 大 ｙ ６只 ， 重 脲 ，％ Ｃ Ａ Ｓ Ｐ Ｓ ） 用玻 璃 匀 浆器 手动 研 磨 ， 体 ４ Ｈ Ｐ ，Ｍ Ｆ ， 直
一种大鼠腰膨大背根神经节取材的改良方法
一种大鼠腰膨大背根神经节取材的改良方法崔媛媛;王兰;赵璇;徐浩;张婷;史娟【摘要】Objective To investigate an improved method of effective extracting dorsal root ganglion (DRG) of lumbar enlargement inrats.Methods We compared the efficiency of two methods to remove DRG.The tradi-tional one is through directly exposing foramen intervertebrale followed by disecting the DRG.The improved one is to expose and pull sciatic nverve thereby removing DRGs.Results By the traditional method,we successfully ob-tained 3.07±1.28 complete DRGs among six ones of lumbar enlargement (L4 ,L5 ,L6 segments,both sides)in each rat.The averaged time spent for each ganglion is 5.6±1.18min.Employing the improved method raised the num-ber of complete DRGs to 4.33±1.11 whereas shortened the time spent for each to1.73±0.88 min.There was sta-tistical significance between the two groups (P<0.05).Conclusion The improved methodis more effective to ex-tract complete DRGs and to get high-quality tissue for further morp and molecular biological experiments.%目的：探讨一种简便、快速、完整取出大鼠腰膨大背根神经节(dorsal root ganglia,DRG)的改良方法。
高纯度大鼠胚胎背根神经节神经元的培养与鉴定
高纯度大鼠胚胎背根神经节神经元的培养与鉴定韩创业;赵春节;刘锦愉;杨劲松【摘要】目的:建立一种取材容易、存活时间长、纯度高的原代大鼠胚胎背根神经节神经元(DRGn)的培养模型.方法:在解剖显微镜下取得胎鼠背根神经节(DRG),通过胰蛋白酶消化,使用Neurobasal (NB)培养基联合抗有丝分裂药物纯化等方法获得DRGn.采用神经丝蛋白免疫细胞化学染色法和hoechst染核鉴定并测定DRGn的纯度.结果:原代培养的DRGn在含有神经生长因子(NGF)的NB培养基中生长良好,存活时间可达45 d,纯度可达到95％以上.结论:该培养模型简单易行,培养稳定,可获得大量高纯度和存活时间长的DRGn.【期刊名称】《广西医科大学学报》【年(卷),期】2014(031)003【总页数】4页(P358-361)【关键词】背根神经节神经元;原代培养;大鼠胚胎【作者】韩创业;赵春节;刘锦愉;杨劲松【作者单位】广西医科大学第一附属医院脊柱骨病科南宁 530021;广西医科大学第一附属医院脊柱骨病科南宁 530021;广西医科大学第一附属医院脊柱骨病科南宁 530021;广西医科大学第一附属医院脊柱骨病科南宁 530021【正文语种】中文【中图分类】R-33体外培养可使相互独立的神经元和神经胶质细胞在与体内环境相似的条件下生长。
随着相对纯化的细胞再次共培养，可进一步研究神经元的生长、神经元——神经胶质细胞的相互作用，特别是髓鞘形成等。
在体内，背根神经节神经元（DRGn）的轴突主要从中枢神经系统（CNS）和外周神经系统（PNS）伸展出来，在中枢（少突胶质细胞）和外周（雪旺细胞）神经胶质细胞的诱导下逐渐形成髓鞘。
与此同时，体外培养的DRGn在加入神经生长因子（NGF）后将会有较长的生命周期。
因此，共同培养纯化的DRGn和成髓鞘细胞（如雪旺氏细胞或少突胶质细胞）是一种较为理想的用于研究髓鞘形成的方法，但神经细胞分化成熟后不再具备分裂能力，其体外培养对培养体系要求较高，培养具有较大的困难。
背根神经节摘取方法的研究
论著
中外医疗 200 8 NO. 20
CHI NA F OREI GN MEDI CAL TREATMENT
背根神经节摘取方法的研究①
陈海亮 1 黄飞 2* 张璐萍 2 赵冬梅2 孙毅2 王利民2 吴立华 1 ( 1. 滨州医学院2006级临床专业3班; 2. 滨州医学院解剖教研室 256603)
【摘要】目的 探讨有效摘取新生大鼠背根神经节( DRG) 的方法, 为实验取材奠定基础。方法 新生第 1 天 Wi s t ar 大鼠, 分别采取单
独摘取和连同脊髓同时摘取的方法提取DRG神经元, 比较两种取材方法获取DRG所需的时间和摘取数量。 结果 用单独摘取的方式
获得的DRG神经元数量为( 27±1. 15) 个, 耗时( 26. 85±1. 11) mi n, 连同脊髓同时提取的方式获取的DRG神经元数量为( 21. 29±1. 38)
1. 2006 Cl ini cal pr of essi onal t hr ee classes of Bi nzhou Medi cal col lege; 2. Depar t ment of Anatomy, Bi nzhou Medical Coll ege, Bi nzhou 256603,
个, 耗时( 19. 64 ±1. 03) mi n, 两者比较有显著差异( P ＜ 0. 01) 。两种方法获得的神经元均可以用于细胞培养。结论 采用上述两种
胚胎大鼠背根神经节摘取方法的研究
神经 节 数 量 相 对 较 少 本 研 究 探 索 了一 种 快 速 简 便 、 用 性 实 更 强 、 果 更佳 的背 根 神 经 节 摘 取 方 法 ， 神 经 元 的 体 外 培 效 为
节 ， 个 神经 节 平 均 用 时 ０ ７ 士０ Ｏ ｎ 两 种 方法 间 的 上 述 各 项 指 标 比较 ， 异 均 有 统 计 学 意 义 （ ＜ ｏ ０ ） 每 ．９ ． １ｍｉ， 差 Ｐ ． １ 。结 论 直 接 固 定 打 开椎 管 法能 在 更 短 时 问 内 获 得 更 多 数 量 的 背根 神经 节 ， 作 简单 ， 为 细胞 培养 奠定 良好 的基 础 。 操 可 【 关键 词 】 背 根 神 经 节 ； 椎 管 ； 摘 取
以传 统 方法 和新 方 法 各 对 ２ ５只胚 胎 大 鼠摘 取 背 根 神 经节 。 １２ ２ 传 统方 法 摘 取 胚 胎 大 鼠背 根 神 经节 ．． 剪 除胚 胎 鼠的
头部 、 四肢 以 及 腹 部 ， 取 胚 胎 鼠的 脊柱 ， 后将 脊 柱 放 入 培 获 然 养 皿 内 ， 体 视 显 微 镜 下 打 开椎 管 及 摘 取 神 经 节 。首 先 去 除 在
＊ 国 家 自然 科 学 基 金项 目（０ ７ ４ ６ ； 家“ 五 ” 技 攻 关 项 目 ３７ ２ ０ ） 国 十 科
（ ０ ４ Ａ７ ０ ８ — ０ ； 国 家 “十 一 五 ” 科 技 支 撑 计 划 ２ ０ Ｂ ２ Ａ１ ２）
（０ ７ ２ ０ ＢＡＩ ８ ２ １ Ｂ１ ）
１ 首 都 医科 大学 附 属 北京 同仁 医 院 北 京 市 耳 鼻 咽 喉 科 研 究 所
大鼠DRG
玻璃微电极是用玻璃管毛胚经微电极拉制 器（Narishige 公司，PP-83）二步拉制尖端 为1～1.5 μm 而成，电极冲灌电极内液，入 细胞外液后电阻为2.5～3.5 MΩ。补偿液接 电位，调节三维操纵器（Narishige公司， MN-3 和MO-203） 使电极尖端移向细胞表 面，对单个DRG 神经元进行封接。当封接 电阻达1 000 MΩ 以上后，补偿快电容，并 施加负压吸破细胞膜，后给予慢电容和漏 电容补偿，形成全细胞记录模式。幻灯片 5
四、讨论 利用膜片钳技术探讨神经系统疾病发生的电生理特征及其药物作用 时，作为研究对象的DRG 神经元要求具有呼吸活性、细胞膜完整、 平滑、清洁度好，大小适中，利于玻璃微电极对细胞进行高阻抗封接 等特性。从本研究得到的经验是； 1、在显微外科条件下解剖大鼠DRG，实验需要解剖显微镜，显微 外科钳、镊和显微外科剪，要尽量在无菌环境下进行每一个步骤。 2、在夹持DRG 时，千万不要夹持DRG 膨大部分，应夹持DRG 两 端， 以免损伤DRG 神经元的分离成果。由于DRG 所处的节段不同， 大小、形态略有差异，颈膨大和腰膨大处神经节长约1.4~1.6 mm，厚 约0.8 mm[6]，容易辨认，如果对神经节所在节段没有特别要求，多选 择此处，便于实验者掌握和控制。
3.2 DRG 神经元的动作电位特征 在DRG 细胞上记录的动作电位都是典型的， 均具有从0期到4 期，呈正立锐角三角形态 （n=8）（图2（a）），与记录正常心室肌 细胞动作电位的形态相比[5]，DRG 细胞的 动作电位没有心肌细胞动作电位所特有的2 相平台期（图2（b））。征 当对DRG 细胞进行INA记录时， 可见内向性电流在60MV 开始激活，-30 MV 达到最大值，然后开始减小， 最大电流密度为（-62.04±4.45） PA/PF（图3（A））。 给予TTX（30 ΜMOL/L）作用细胞5 MIN，可见各钳制 电压下的电流均显著减小，最大电流密度为（7.32±2.23）PA/PF（与对照组相比P<0.01，N=8)（图3 （B）），证明本实验所记录的内向性电流为INA。在 TTX 作用之后，改用记录钠通道的细胞外液冲灌细胞， 发现最大电流密度又恢复到接近用药前的水平，变为 （-54.23±2.87）PA/PF（与对照组相比，P>0.05， N=12）（图3（C）），表明TTX 对DRG 神经元细胞 的INA的抑制作用是可逆的。
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５９６ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｕｄｉｏｌｏｇｙａｎｄＳｐｅｅｃｈＰａｔｈｏｌｏｇｙ２０１０．Ｖｏｌ１８．Ｎｏ．６・技术与方法・
胚胎大鼠背根神经节摘取方法的研究’
王士杰１黄畸辉１雷雳１王鸿１范尔钟’李颖
【摘要】目的探讨一种简便、快速、高效摘取胚胎大鼠背根神经节的方法。
方法分别采用先剪除头部、四肢、腹部，后打开椎管的传统方法和直接固定打开椎管的方法摘取胚胎大鼠背根神经节，计算两种方法的用时和获得的神经节数量，并进行统计学比较。
结果采用传统方法，每只胎鼠平均用时２９．２０±１．６１ｍｉｎ，平均获得２０．４０±１．１７个神经节，每分钟可获得０．６８士０．０２个神经节，每个神经节平均用时１．４４±０．０１ｍｉｎ；采用直接固定打开椎管法，每只胎鼠平均用时２４．１０士１．６３ｍｉｎ，平均获得３０．５０２＝０．９７个神经节，每分钟可获得１．２３士０．０３个神经节，每个神经节平均用时０．７９±０．０１ｍｉｎ，两种方法间的上述各项指标比较，差异均有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０１）。
结论直接固定打开椎管法能在更短时间内获得更多数量的背根神经节，操作简单，可为细胞培养奠定良好的基础。
【关键词】背根神经节；椎管；摘取
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６—７２９９．２０１０．０６．０２２
【中图分类号】Ｒ７６４．４【文献标识码】Ａ【文章编号】１００６—７２９９（２０１０）０６—０５９６－－０２
背根神经节（ｄｏｒｓａｌｒｏｏｔｇａｎｇｌｉｏｎ，ＤＲＧ）又称脊神经节，是躯体和内脏感觉的初级中枢，富含感觉神经元…。
动物实验研究结果表明［ｚ］，将背根神经元植人耳蜗后，可以替代受损的感觉上皮并与螺旋神经节细胞形成连接，具有初步的传导功能，这为临床治疗感音神经性聋带来了希望。
但采用文献报道［３。
１的传统摘取方法，操作难度相对较大，获取神经节数鼍相对较少。
本研究探索了一种快速简便、实用性更强、效果更佳的背根神经节摘取方法，为神经元的体外培养和耳蜗移植研究奠定基础，现介绍如下。
１材料与方法
１．１手术器械与动物Ｏｌｙｍｐｕｓ体视显微镜１台、组织镊１把、组织剪１把、蚊式钳１把、游丝镊２把、眼科剪一把、直径１０ｃｍ培养皿１个、与培养皿面积相符的硅胶１块、注射针头４个、怀孕１７～１８天的Ｗｉｓｔａｒ大鼠４只（共有胚胎大鼠５０只）。
１．２方法
１．２．１胚胎大鼠的获取将怀孕１７～１８天的Ｗｉｓｔａｒ大鼠放入装有乙醚的容器中进行麻醉。
待麻醉成功后颈椎脱臼快速致死。
在大鼠下腹部“Ｔ”型剪开皮肤及皮下组织，含有胚胎的“Ｙ”型子宫显露，剪开子宫及胎膜。
取出胚胎大鼠。
实验分次进行．共使用４只孕鼠。
获得了５０只胚胎大鼠。
分别以传统方法和新方法各对２５只胚胎大鼠摘取背根神经节。
１．２．２传统方法摘取胚胎大鼠背根神经节剪除胚胎鼠的头部、四肢以及腹部，获取胚胎鼠的脊柱，然后将脊柱放入培养皿内，在体视显微镜下打开椎管及摘取神经节。
首先去除
＊国家自然科学基金项目（３０７７２４０６）；国家。
十五”科技攻关项目（２００４ＢＡ７２０Ａ１８—０２）；国家。
十一五”科技支撑计划（２００７ＢＡｌｌ８８１２）
ｌ首都医科大学附属北京同ｆ二医院北京市耳鼻咽喉科研究所
耳鼻咽喉头颈科学教育部重点实验室（首都医科大学）（北京
１００００５）
通讯作者：黄丽辉（Ｅｍａｉｌ：ｈｌｉｈｕｉ８９＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｒｎ）脊柱背侧的皮肤及皮下组织，显露椎骨。
然后用游丝镊轻轻逐个离断椎弓，暴露椎管及脊髓。
最后小心牵起脊髓，神经节从椎问孔被带出，然后逐个摘取（图１）。
圈ｌ传统方法摘取背根神经节方框内为背根神经节，黑色箭头所指为脊髓，黄箭头所指为椎骨
图２直接固定打开椎管取出脊矗后蓝箭头所指为神经节．黄箭头所指为椎骨
１．２．３直接固定打开椎管法摘取胚胎大鼠背根神经节将胚胎鼠按俯卧位直接放于培养皿内的硅胶上，用注射针头固定其四肢。
首先用眼科剪沿胚胎大鼠的背部正中线剪开皮肤（从尾椎至颈椎），用游丝镊小心向两侧分离皮肤，使椎骨暴露，椎管轮廓清晰可见。
然后将胚胎鼠移至体视硅微镜下，用眼科剪沿椎管走向从尾椎至颈椎剪开椎骨，使脊髓充分暴露。
然后用游丝镊轻轻将脊髓取出，清理剩余的脊膜组织，再用眼科剪修剪椎骨。
扩大开口，使圆形或椭圆形神经节完全暴露。
最后用游丝镊从椎间孔内将神经节逐个取出（图２）。
１．２．４统计学方法分别计算两种方法的用时和摘取的神经节数量。
用ＳＰＳＳ统计软件。
以ｔ检验分析两组之间的差异，Ｐ＜Ｏ．０５为有显著性差异。
２结果
两种方法摘取每只胎鼠平均用时、每只胎鼠平均获得的神经节数量、每分钟获得的神经节数星和每个神经节用时见表１，町见直接固定打开椎管法摘取每只胎鼠的平均用时及摘取每个神经节平均用时比传统方法短，每只胎鼠获得的神经节数量及每分钟获得的神经节数量多于传统方法，差异有
统计学意义（Ｐ＜０．０１）。