通过对甲基化敏感的AFLP标记分析辣椒种子在萌发过程中的DNA甲基化
探讨辣椒资源的系统位置与进化关系-园艺学论文-农学论文
探讨辣椒资源的系统位置与进化关系-园艺学论文-农学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——辣椒属（Capsicum）主要有5 个栽培种（邹学校，2009），即一年生辣椒（C. annuum）、中华辣椒（C. chinense）、浆果状椒（C. baccatum）、灌木状椒（C. frutescens）和茸毛椒（C. pubescens），其中一年生辣椒是分化最多、栽培最广的 1 个种，而中华辣椒是亚马逊地区栽培最为广泛的1 个种。
另外，辣椒属还有许多近缘野生种，其中有部分已被利用，如茸毛椒。
国内外科技人员在辣椒种质资源分子鉴定方面进行了全面的研究，取得了一些阶段性成果。
Lefebvre 等（2001）采用AFLP 和RAPD 标记以及结合表型数据对辣椒自交系开展遗传多样性研究。
陈学军等（2007）通过RAPD 和ISSR 对辣椒属的5 个栽培种13 份资源进行了研究，能将一年生辣椒与其他 4 个栽培种区分开来。
Sanatombi 等（2010）采用RAPD 的标记对印度曼尼普尔邦7 个当地品种开展了种质资源鉴别工作，结果表明7 个品种分别属于一年生辣椒、中华辣椒和灌木状椒。
李永平等（2011）利用RAPD 分子标记技术对辣椒种质资源遗传多样性进行分析，结果将供试的90份种质分为 5 大类群。
陈学军等（2012）采用SRAP 和SSR 标记对中国灌木辣椒开展了遗传多样性研究。
孟金贵等（2012）应用ISSR 标记开展了涮辣与辣椒属5 个栽培种亲缘关系的研究。
上述研究为辣椒遗传育种及产业化发展奠定了基础。
在核基因组研究中，利用核糖体DNA 内转录间隔区（Internal Transcribed Spacer，rDNAITS 区）序列对药用植物菲兰（Lee et al.，2006）、红山茶（田敏等，2008）、石斛（栗丹等，2012）、桑（陈仁芳等，2010）、扁桃（邱蓉等，2012）等进行鉴定和系统进化分析。
精品解析：重庆市2023-2024学年高二下学期3月月考生物试题(原卷版)
A.胰岛素和胰岛素受体B.淀粉酶和葡萄糖
C.氨基酸和mRNAD.神经递质和神经递质受体
（3）在TRPV1的发现历程中，研究者利用大鼠能够感知疼痛的神经元为材料，提取细胞中的总RNA，通过逆转录得到____________，将扩增的基因片段构建成表达载体，分别导入辣椒素______（选填“敏感”或“不敏感”）细胞，再经辣椒素处理后，通过特定技术手段，确定了可被辣椒素激活的TRPV1。
3.目前将目的基因导入动物细胞最常用、最有效的方法是（ ）
A.显微注射法B.农杆菌转化法
C.基因枪法D.花粉管通道法
4.关于“DNA片段的扩增及电泳鉴定”实验，下列相关叙述正确的是（）
A.PCR仪实质上就是一台能自动调控温度的仪器，但在使用时需根据扩增的DNA片段以及引物的情况人工设定合适的温度
B.PCR反应体系中的10倍浓缩的扩增缓冲液中含有 、4种脱氧核糖核苷酸等成分
B.胎盘干细胞是由囊胚期滋养层细胞分化而来的，滋养层细胞沿透明带内壁排列
C.在纯化培养时用胰蛋白酶破坏细胞膜蛋白以解除细胞之间的接触抑制
D.胎盘干细胞可在治疗性克隆中用于做DNA鉴定和性别鉴定
2.关于杂交瘤细胞的叙述不正确的是（ ）
A.有双亲细胞的遗传物质B.不能无限增殖
C.可产生分泌特异性抗体D.可体内外培养获得单抗
C.为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头、蒸馏水和移液器等在使用前都必须进行高压灭菌处理
D.电泳时，电泳缓冲液不能没过凝胶以免凝胶加样孔中的电泳样液流出
5.科学家将含有人溶菌酶基因 表达载体注射到鸡胚中获得转基因鸡，目的蛋白在输卵管细胞中特异表达，并能在鸡蛋中收集。下列说法错误的是（）
甲基化的检测方法
甲基化的检测方法
甲基化是DNA分子上的一种化学修饰，可以影响基因的表达和细胞功能。
目前常用的甲基化检测方法主要包括以下几种：
1. 甲基化特异性PCR（MSP）：该方法利用DNA甲基化与未甲基化DNA的不同性质，设计特异性引物进行PCR扩增，从而区分甲基化和未甲基化DNA序列。
2. 甲基化特异性限制性内切酶消化（MSRE）：该方法利用某些限制性内切酶能够识别和切割甲基化的DNA序列，未甲基化的DNA序列则不会被切割。
通过PCR扩增和酶切消化后的DNA片段的比较，可以确定DNA的甲基化状态。
3. 甲基化敏感性扩增片段长度多态性（MS-AFLP）：该方法结合了甲基化敏感性消化和扩增片段长度多态性技术，通过比较不同条件下DNA的电泳图谱，可以检测DNA上的甲基化差异。
4. 甲基化敏感性DNA芯片：基于微阵列技术，利用甲基化敏感的酶或甲基结合蛋白与样品中的甲基化DNA发生特异性结合，然后利用荧光标记的方法检测结合程度，从而实现快速和高通量的甲基化检测。
5. 甲基化测序：基于高通量测序技术，通过甲基化特异性捕获、测序和数据分析，可以获得全基因组的甲基化谱图，从而全面了解基因组中的甲基化变化。
这些方法各有优缺点，选择合适的方法取决于研究目的、样本特点和实验条件等因素。
dna甲基化的植物学意义及其研究方法
dna甲基化的植物学意义及其研究方法
1DNA甲基化的植物学意义
DNA甲基化是DNA序列中的一种修饰，它是一种体细胞基因表达的重要的表达调节机制。
它是植物中的一种常见的修饰，在绿色植物（如燕麦，水稻，小麦等）以及一些单细胞生物（如拟南芥、水绿藻等）中，DNA甲基化也是一种常见的表达调节机制。
DNA甲基化调控植物生长发育和分化，这是植物生命过程的关键时刻，它的调控对植物的形态和抗逆能力具有重要意义。
DNA甲基化也是绿色植物遗传信息传递和遗传多样性形成的基本途径之一，它具有非常重要的生物学意义。
2DNA甲基化的研究方法
研究DNA甲基化有几种方法，其中最常见的是高通量测序技术，它是一种检测DNA甲基化状态的新技术。
它可以同时检测DNA甲基化的所有氨基酸位点，准确定量，可以为植物遗传调控机制的基因发掘提供基础数据。
mC-IDAR（methylcheck-based-immuno-dilution-arby）技术也能检测DNA甲基化，它是基于抗体还原酶技术，利用荧光酶特异性反应技术定量DNA甲基化。
另外通过多种策略来提高芯片技术的通量检测能力，通过基于元件的定量芯片技术中的比较序列格式实现甲基化的全基因序列准确定量，能够同时用来分析多个受体的DNA甲基化状态。
以上就是DNA甲基化在植物学中的意义及其研究方法的介绍，通过上述技术的应用，我们可以更好地理解植物遗传调控机制，为植物相关研究提供有价值的基础数据。
甲基化的检测方法
甲基化的检测方法
甲基化是指DNA分子上的一种化学修饰，可以影响基因的转录和表达。
因此，检测DNA甲基化状态对于研究基因表达、发育和疾病具有重要意义。
常见的甲基化检测方法包括：
1. 甲基化特异性PCR（MSP）：利用甲基化和非甲基化DNA序列的区别，设计特异性引物进行PCR扩增，通过条带图谱或定量PCR分析甲基化水平。
2. 甲基化敏感限制酶消化：利用甲基化与非甲基化DNA序列对限制酶的敏感性不同，进行消化后进行凝胶电泳或定量PCR分析。
3. 甲基化特异性测序：利用甲基化和非甲基化DNA序列的差别，通过测序技术分析DNA甲基化状态。
4. 甲基化特异性抗体免疫沉淀（MeDIP）：利用甲基化特异性抗体将甲基化DNA 片段富集后进行测序或PCR分析。
这些方法能够快速准确地检测DNA甲基化状态，为研究和诊断提供重要的数据支持。
甲基化检测方式
甲基化检测方式概述：甲基化是指DNA分子上甲基基团的添加，它是一种重要的表观遗传修饰方式。
甲基化修饰可以影响DNA的结构和功能，对基因的表达起到关键的调控作用。
因此，研究甲基化的检测方式对于理解基因表达调控机制、生物学过程以及疾病的发生发展具有重要意义。
本文将介绍几种常用的甲基化检测方式。
1. 甲基化特异性限制酶消化：甲基化特异性限制酶是一类能够识别DNA甲基化位点并在非甲基化位点切割的酶。
通过对DNA样品进行甲基化特异性限制酶消化，可以将甲基化和非甲基化位点区分开来。
消化后的DNA片段可以通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离和检测。
这种方法简单、快速，适用于大规模样品的筛查。
2. 甲基化特异性PCR：甲基化特异性PCR是一种通过PCR技术检测DNA甲基化状态的方法。
它利用特异性引物，只能在非甲基化位点附近的区域扩增目标序列，而在甲基化位点附近的区域无法扩增。
通过PCR产物的降解、凝胶电泳或者测序等方法，可以判断目标序列是否被甲基化。
这种方法对样品的纯度要求较高，但是可以检测单个CpG位点的甲基化状态。
3. 甲基化敏感的高通量测序：甲基化敏感的高通量测序是一种通过测序技术检测DNA甲基化状态的方法。
它利用特殊的酶或化学处理方法，可以将甲基化和非甲基化的DNA片段区分开来，然后通过高通量测序技术对甲基化位点进行测序。
这种方法可以同时检测全基因组的甲基化状态，具有高通量、高分辨率的特点，对于大规模甲基化调控的研究非常有价值。
4. 甲基化芯片：甲基化芯片是一种基于DNA杂交原理检测DNA甲基化状态的方法。
它利用DNA芯片上固定的甲基化和非甲基化的DNA探针与待测样品中的DNA进行杂交反应，然后通过检测芯片上的荧光信号来判断甲基化位点的状态。
甲基化芯片具有高通量、高灵敏度的特点，可以同时检测大量的甲基化位点。
总结：甲基化检测是研究DNA表观遗传修饰的重要手段。
通过甲基化特异性限制酶消化、甲基化特异性PCR、甲基化敏感的高通量测序和甲基化芯片等方式，可以检测DNA的甲基化状态。
AFLP分子标记技术
•二、AFLP的基本原理是什么？•三、AFLP的实验过程怎样？•四、AFLP的应用研究如何？•五、对AFLP的评价分子标记的历史：•第一代分子标记技术RFLP（Restriction Fragment Length Polymorphism，限制性片段长度多态性）•第二代分子标记技术RAPD（Random Amplified PolymorphicDNA，随机扩增多态性DNA）AFLP（AmplifiedFragmentLengthPolymorphism，扩增片断长度多态性）•事实上，还有很多分子标记技术像SSR、ISSR、SRAP（相关序列扩增多态性）另外，还有现在号称为第三代分子标记的SNP（单核苷酸多态性)等AFLP的基本原理•基因组DNA经两种限制性内切酶酶切，形成分子量大小不等的随机限制性酶切片段，将特定的人工合成的短的双链接头连在这些片段的两端，形成一个带接头的特异片段，通过接头序列和PCR引物3ˊ端选择性碱基的识别，对特异性片段进行预扩增和选择性扩增。
最后只有那些两端序列能与选择性碱基配对的限制性酶切片段才能被扩增；最后将选择性扩增产物在高分辨率的变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳，寻找多态性扩增片段。
AFLP的实验流程•模板制备DNA的提取（SDS法和CTAB法）酶切连接PCR扩增(PCR AMPLIFIED )预扩增(Pre-amplified)选择性扩增(Elective amplified)DNA的提取（SDS法和CTAB法）•SDS是Sodium dodecyl sulfate的缩写称为十二烷基磺酸钠，•CTAB是Cetyltrimethyl ammoniumbromide的缩写十六烷基三甲基溴化氨，•两种都是去污剂，它们都能破坏细胞膜使膜蛋白变性沉淀，故而使核酸释放出来，另外，它还能保护DNA不受内源核酸酶的降解。
酶切•为了使酶切片段大小分布均匀，一般采用两个限制性内切酶，一个用6个碱基识别位点的限制性内切酶(常用EcoRI,、PstI或SacI)，另一个用4个碱基识别位点的限制性内切酶(常用MseI、TaqI)。
辣椒耐热基因的AFLP分析
辣椒耐热基因的AFLP分析作者：何铁光等来源：《长江蔬菜·学术版》2014年第02期摘要：用辣椒耐热自交系A11和热敏自交系B22配置杂交组合，通过高温胁迫处理鉴定其F2代分离群体的耐热性。
从123对Taq I/Ase I引物组合中筛选出6对多态性好的引物对F2代耐热、热敏植株进行AFLP分析，共扩增出约11 400条清晰条带，其中2条为稳定的差异，初步获得了2个与辣椒耐热性状相关的AFLP分子标记。
研究有助于开展辣椒耐热基因的分子标记辅助选择工作，提高辣椒育种效率和水平，并为分离和克隆辣椒耐热相关功能基因奠定基础。
关键词：辣椒；耐热基因；AFLP分析中图分类号：Q785；S641.3 文献标识码：A 文章编号：1001-3547（2014）04-0024-03辣椒（Capsicum annuum L.）原产于中南美洲，属于茄科（Solanaceac）辣椒属（Capsicum）。
辣椒是重要蔬菜作物，在世界各地广泛栽培，因其营养丰富、富含维生素C等营养物质而深受人们喜爱[1]。
我国是世界辣椒种植面积最大的国家，国内的种植面积仅次于大白菜，属于第二大蔬菜作物。
近年来，辣椒在华南地区也有了较大的种植面积，但广西、海南等省份地处热带、亚热带地区，四季高温多雨，对辣椒的生长发育造成了极大的影响，当气温高于35℃时，辣椒开花及结实均受到了明显的影响，大大降低了辣椒的品质和产量。
近10多a来，已有不少学者对高温胁迫下辣椒的植株形态、生理生化指标进行了研究，但从分子水平系统研究辣椒耐热特性的报道较少[2～6]。
本研究以辣椒耐热高代自交系A11与辣椒热敏高代自交系B22杂交的F2代植株为材料，进行了耐高温胁迫后，选择耐热和热敏的植株进行AFLP分析，寻找与辣椒耐热性状相关的分子标记，为辣椒耐热相关功能基因的克隆分析及进行分子标记辅助育种提供基础。
1 材料与方法1.1 试验材料植物材料为辣椒耐热高代自交系A11与辣椒热敏高代自交系B22杂交的F2代植株，采用大棚栽培和人工气候箱盆栽方式种植。
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以在排序凝胶中定位于不同位置。 我们的数据对（ 辣椒） 种子萌发时 ＤＮＡ 甲基化
的逐步消失的解释也得到事实的印证： 在植物中， 核基因组胞嘧啶甲基化， 在发育过程中是发挥着有 基因表达调节器的重要作用（ Ｓｉｒｏｋｙ 等 １９９８） ， 而在 特定的基因区或附近的甲基化能够抑制这些基因 的表达， 而人工清除基因甲基化则是反作用的结果 （ Ｇｒｕｎａｕ 等 ２００１） 。
材料与方法 每 ４８ｈ 从正在萌发的 Ｆ１ 代辣椒 种子 （ 品种为
Ｃｏｒｎｏ ｄｉ Ｔｏｒｏ） 的胚组织中提取 ＤＮＡ。本试验连续两 次进行 ＰＣＲ， 以选择性地扩增 ＥｃｏＲＩ－ ＨＰａＩＩ （ Ｈ） 和 ＥｃｏＲＩ－ ＭｓｐＩ（Ｍ）ＤＮＡ 片断。预选扩增（ 即第一次 ＰＣＲ） 采用适用于 ＥｃｏＲＩ 和 ＨｐａＩＩＭｓｐＩ 的引物进行， 它们各 有一个单选择基（ Ｅ＋Ａ； ＨＭ＋Ｔ） 。选择性扩增（ 第二次 ＰＣＲ） 用表 １ 所列的 １２ 个引物组合进行。
本文结果表明， 本技术可以高效地大规模检测 萌发种子的胞嘧啶甲基化。而该技术分离和扩增 ＭＳＡＰ 片断的能力， 将使直接鉴定不同萌发过程中 起重大作用的序列（ 或基因） 成为可能。
（ 林一水 译）
（ 上接 ４３ 页）
４ 问题与改进
辣椒由传统的自然晒干转化为人工烘烤之后， 其椒干商品质量和出口成品率得到很大提高。但因 专业化的技术烘烤变成一家一户的人工干制， 操作 人员缺乏基本的技术培训， 烘房结构和性能不良， 以及片面追求高速高温烘烤， 致使烘烤过程中椒干 质量劣变问题普遍出现， 应引起重视和改进。
（Ａ） 两个胞嘧啶都全部甲基化 ＥｃｏＲⅠ
ＨｐａⅡ和 ＭｓｐⅠ
被 ＥｃｏＲⅠ－ ＨｐａⅡ 或 ＥｃｏＲⅠ－ ＭｓｐⅠ消化
（Ｂ）没 有 甲 基 化
ＥｃｏＲⅠ
ＥｃｏＲⅠ／ＨｐａⅡ 片 断 ＥｃｏＲⅠ／ＭｓｐⅠ 片 断 ＨｐａⅡ和 ＭｓｐⅠ ＨｐａⅡ和 ＭｓｐⅠ
（ Ａ）两 个 胞 嘧 啶 都 完 全 甲 基 化 （ Ｂ）没 有 甲 基 化
干种子 ２ｄ
４ｄ
６ｄ
８ｄ
引物组合
Ｈ Ｍ Ｈ ＭＨ Ｍ Ｈ ＭＨ Ｍ
ａ
Ｅ２／ＨＭ１
ｂ
Ｅ１／ＨＭ２
ｃ
Ｅ１／ＨＭ１
ｄ
Ｅ４／ＨＭ３
ｅ
Ｅ４／ＨＭ３
ｆ
Ｅ２／ＨＭ２
图 １ 利用 ＭＳ ＡＰ 技术在辣椒干种子和萌发种子上 得到的 ＡＦＬＰ 图谱
Ｈ 通 道 ： 被 ＥＣｏＲＩ－ ＨｐａⅡ 消 化 后 得 到 的 片 断 ； Ｍ 通 道 ： 被 ＥＣｏＲＩ－ ＭｓｐＩ 消化后得到的片断； ａ： 在萌发中甲基化状态没有 变化的片断； ｂ： 被 Ｈ 和 Ｍ 消化后， 在干种子中可以发现的片 断 ， 在 不 同 的 萌 发 过 程 中 消 失 （ ＣＩ 型 ） ； ｃ￣ｄ： 在 干 种 子 中 未 曾 发现的片断， 在不同的萌发阶段中， 被 Ｈ 和 Ｍ 消化后出现 （ ＤＩ 型 ） ； ｅ￣ｆ： 这 些 片 断 表 示 在 萌 发 过 程 中 ， 甲 基 化 状 态 的 两 种变化（ 即条带的出现和消失）
ＭＳＡＰ 技术的基础是利用同裂酶 ＨｐａＩＩ 和 ＭｓｐＩ 的识别序列对甲基化的敏感性不同。这两种酶都能 识别四核苷酸序列 ５’－ ＣＣＧＧ， 但它们的作用受到该 外或内胞嘧啶残留物甲基化状态的影响。当该两个 胞嘧啶中有一个或两个都完成甲基化时（ 即两条链 均甲基化了） ， ＨｐａＩＩ 没有活性， 但它将该甲基化的 序 列 一 劈 两 半 （ 仅 一 链 甲 基 化 ） ， 而 ＭｓｐＩ 则 将 半 甲 基化或全甲基化的 Ｃ５ｍＣＧＧ，而不是 ５ｍＣＣＧＧ 劈开（ 麦 克兰德等 １９９４） 。
４．１ 变焦 果实变焦灼、发黑（ 炭化椒） 。干燥时注 意倒换烘盘位置； 防止跑烟走火； 干燥后期温度不
要超过６０℃。 ４．２ 色泽暗褐 这是高温高湿下形成的长时不通风 排湿所致。入烘房前认真挑选果实， 将霉变辣椒剔 除后入烘房； 严格控制温度， 适时通风排湿。 ４．３ 发霉和掉柄 烘干时温度低， 湿度大， 易引起霉 菌繁殖； 发汗时间过长， 或有时不发汗也会引起发 霉和掉柄。应严格执行标准化的人工烘烤技术规 程， 始终保持 烘房 ５０～５５℃适温， 连 续 通 风 排 湿 ， 严 禁高温高湿高速烘干， 要适时发汗。
８２
Ｅ＋ＡＧＴ／ＨＭ＋ＴＴＣ
７７
总数
９３６
类型Ⅰ
１４ ７ １１ １０ ６ ８ １５ １２ １０ １８ ９ １１ １３１
类型Ⅱ
３１ １９ ２６ ２９ ４２ ３１ ２６ ２０ ２２ ３２ ２７ ２３ ３２８
注 ： 第 一 类 ＣｌａｓｓⅠ： 仅 被 ＥｃｏＲＩ 和 ＨｐａⅡ消 化 ， 而 不 是 被 ＥｃｏＲＩ 和 ＭｓＰＩ消化（ 或与之相反） 后发现的条带， 它们在干 种子和萌发种子中都不表现多态性； 第二类 ＣｌａｓｓⅡ： 在不同萌发阶段显示多态性的条带
－
１２
Ｄ３ －
＋
８ ２４５
注 ： ＊２１５ 个 点 中 的 ４９ 个 点 表 示 甲 基 化 的 第 二 种 变 化 ， 即
在萌发的不同阶段中， 相应的条带消失； Ｈ 柱： 表示被
ＥＣｏＲＩ 和 ＨｐａⅡ消 化 后 的 甲 基 化 类 型 ； Ｍ 柱 ： 表 示 被
ＥＣｏＲＩ 和 ＭｓｐＩ消化后的甲基化类型；记号下的＋、－ 号 分
５’－ ＣＣＧＧ 点处 ＤＮＡ 甲基化的结果， 但并未表现出 萌发过程中的甲基化的重大变化（ 图 １ａ， 表 １） ； （ ２） 在萌发的不同阶段里出现的多态性 （ 即 ９３６ 条中的 ３２８ 条） ， 这些条带是 ＤＮＡ 甲基化变化的结果 （ 图 １ｂ￣ｆ， 表 １） 。
ＤＮＡ 甲基化的变化主要表现为： （ １） 干种子中 没有发现的片断， 由于被 Ｈ 消化， 在萌发的某一过 程中出现， 即 ３２８ 条多态带中的 ２１５ 条（ 图谱 Ｄ１， 表 ２） ； （ ２） 干种子由 Ｈ 和 Ｍ 消化后出现的条带， 在萌 发的某一过程中不再出现， 即 ３２８ 条多态带里的 ４４
ＨＭ ＨＭ
被 ＥｃｏＲⅠ－ ＨｐａⅡ ＥｃｏＲⅠ／ＨｐａⅡ片断 ＨｐａⅡ／ＨｐａⅡ片断 或 ＥｃｏＲⅠ－ ＭｓｐⅠ消化 ＥｃｏＲⅠ／ＭｓｐⅠ片断 ＭｓｐⅠ／ＭｓｐⅠ片断
图 ２ 在 ５’－ ＣＣＧＧ 点甲基化被清除的结果
（ Ａ） 当内外两个胞嘧啶都完全甲基化时， 由 ＨＰａⅡ和 ＭｓｐⅠ都 生 成 了“大 ”片 断 ； （ Ｂ） 当ＨｐａⅡ／ＭｓｐⅠ限 制 点 没 有 甲 基 化 时 ， ＨＰａⅡ和 ＭｓｐⅠ都能（ 酶） 切， 并生成“短”片断
结果与讨论 对 ＡＦＬＰ 图谱进行比较， 表明有两种主要的多
态性： （ １） 即总是在被 Ｈ、而不是 Ｍ（ 或者相反） 消化 后出现的条带 （ ９３６ 条中有 １３１ 条） ， 这些条带是在
４４
辣椒杂志（ 季刊）
２００６ 年第 １ 期
◆国外瞭望◆
表 １ １２ 个引物组合扩增后发生的条带数
引物组合
总带数
靠 近 ＥｃｏＲＩ 已 经 甲 基 化 了 的 ５’－ ＣＣＧＧ 识 别 点 ， 当 ＭｓｐＩ 或 ＨｐａＩＩ 或两者同时都到达时， 这一现象可能 出现（ 图 ２） 。据 Ｘｕ 等人（ ２０００） 和 Ｒｅｙｎａ－ Ｌｏｐｅｚ 等人 （ １９９７） 报道， 范围在 ５０￣１５００ｂｐ 的短片断， ＡＦＬＰ 的
针对辣椒 ５ 个不同的基因组（ 即干种子和萌发 了 ２ｄ、４ｄ、６ｄ 和 ８ｄ 的种子） ， 对 １０ 条通道里由 引物 组合产生的 ＡＦＬＰ 图谱进行了比较， 这 ５ 个基因组
各被一对酶 ＥｃｏＲＩ／ＨｐａＩＩ（ 通道 Ｈ） 或 ＥｃｏＲＩ／ＭｓｐＩ（通 道 Ｍ） 中的一个所限制（ 图 １） 。
萌发种子
Ｅ＋ＡＡＣ／ＨＭ＋ＴＡＡ ８７ Ｅ＋ＡＡＣ／ＨＭ＋ＴＣＣ ５０
Ｅ＋ＡＡＣ／ＨＭ＋ＴＴＣ
９２
Ｅ＋Ａ２
Ｅ＋ＡＣＧ／ＨＭ＋ＴＴＣ
８１
Ｅ＋ＡＣＴ／ＨＭ＋ＴＡＡ ９８
Ｅ＋ＡＣＴ／ＨＭ＋ＴＣＣ
７１
Ｅ＋ＡＣＴ／ＨＭ＋ＴＴＣ
６０
Ｅ＋ＡＧＴ／ＨＭ＋ＴＡＡ ８８
Ｅ＋ＡＧＴ／ＨＭ＋ＴＣＣ
４６
引言 植物的 ＤＮＡ 甲基化与很多外（ 后生） 遗传现象
有关， 在植物各种发育与分化过程中， 调节机制的 变化亦是其中之一（ 仑德等 １９９５； 芬内干等 １９９３） 。
本文报道的是在辣椒种子萌发过程中， 利用甲敏 扩增多态性（ ＭＡＳＰ） — ——这是一种与 ＡＦＬＰ 相匹配的 技术— ——来分析辣椒胞嘧啶甲基化的初步结果。
别表示片断出现与否。在干种子中发现的（ 甲基化） 四
种类型， 分别以 Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ 表示， 而每个类别的 ＡＦＬＰ
图案的三种变化， 则以递增的数字区分 （ 即 Ａ 类分为
Ａ１、Ａ２、Ａ３ 三种类……） ；观察到的条带数亦列于表中。
条（ 图谱 Ｃ１， 表 ２） 。 甲 基 化 的 消 除 倾 向 于 生 成 短 的 片 断 — ——那 个
◆国外瞭望 ◆
２００６ 年第 １ 期
辣椒杂志（ 季刊）
通过对甲基化敏感的 ＡＦＬＰ 标记分 析 辣椒种子在萌发过程中的 ＤＮＡ 甲基化
Ｅ·柏迪斯 Ａ·艾克夸揣 Ｃ·可米罗 （ 意大利 Ｔｕｒｉｎ 大学植物遗传育种学院）
关键词 ＤＮＡ 甲基化； 同裂酶； ＡＦＬＰ； 甲（ 基化） 敏（ 感） 扩增多态性（ ＭＳＡＰ） ； 辣椒（ Ｃ．ａｎｎｕｕｍ Ｌ）
４５
◆国外瞭望 ◆
２００６ 年第 １ 期
辣椒杂志（ 季刊）
扩增更为有效， 或在排序凝胶中更容易检测出来。 在萌发过程中， 产生 ｄｅ ｎｏｖｏ（即 ２１５） 片 断的频