补中益气汤含药血清干预TGF_介_省略_49细胞MMP_9表达影响的研究_郭倩
补中益气汤含药血清对A549／DDP细胞PI3 K、AKT、S urvivin表达的影响
补中益气汤含药血清对A549／DDP细胞PI3 K、AKT、Survivin表达的影响于丹;于宁;易佳丽;唐莹;刘春英【期刊名称】《中国生化药物杂志》【年(卷),期】2014(000)003【摘要】目的：观察补中益气汤含药血清对肺腺癌耐顺铂细胞株（A549/DDP）磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3 kinase， PI3K）、丝/苏氨酸蛋白激酶（protein kinase B，AKT）、生存素（Survivin）蛋白表达的影响，探讨其作用机制。
方法制备中剂量补中益气汤含药血清（0.576 g/mL），将A549/DDP细胞分成4组：空白血清组、最佳含药血清组、LY294002组、最佳含药血清组＋LY294002组（即联合组）。
采用免疫细胞化学和免疫蛋白印迹法（western blot）方法检测PI3K、AKT和Survivin蛋白的表达。
结果最佳含药血清组和联合组PI3K、AKT、Survivin蛋白的表达显著低于空白血清组（P＜0.05），联合组PI3K、AKT、Survivin蛋白减少的更加明显，但与最佳含药血清组相比无统计学差异；LY294002组Survivin蛋白的表达明显低于空白血清对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。
结论补中益气汤含药血清作用于PI3K/AKT信号转导通路，能降低肺腺癌顺铂耐药细胞株PI3K、AKT、Survivin蛋白的表达，提高A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。
%Objective To observe the effect of Buzhong Yiqi Decoction medicated serum on PI3K、AKT、survivin in lung adenocarcinoma A549/DDP cells,and explore its functional mechanism.Methods Buzhong Yiqi Decoction medicated serum of middle dosage (0.576 g/mL)were prepared,and A549/DDP cells were divided intofour groups:blank serum group,the best containing medicine serum group and LY294002 group (blockers group), the best containing medicine serum +LY294002 group (combination group).The protein expression of PI3K,AKT and Survivin were detected by Immunocytochemistry and Westernblot.Results Compare with blank serum group,the protein expression ofPI3K、AKT and Survivin in best containing medicine serum and combination group were significantly lower(P<0.05 ),and the later was more lower,but there was no significant differences between best containing medicine serum and combination group.The expression of survivin in LY294002 group were significantly lower than blank serum group(P<0.05 ).Conclusion Buzhong Yiqi Decoction can reduce the protein expression of PI3K,AKT and surviving,increase the sensitivity of A549/DDP to DDP through PI3K/AKT signal transduction pathway.【总页数】4页(P4-7)【作者】于丹;于宁;易佳丽;唐莹;刘春英【作者单位】辽宁中医药大学基础医学院，辽宁沈阳 110032;辽宁中医药大学第一临床学院，辽宁沈阳 110032;辽宁卫生职业技术学院教务处，辽宁沈阳110101;辽宁中医药大学基础医学院，辽宁沈阳 110032;辽宁中医药大学基础医学院，辽宁沈阳 110032【正文语种】中文【中图分类】R734.2【相关文献】1.补中益气汤含药血清对人肺腺癌A549/DDP细胞耐药作用的影响 [J], 刘亚莉;王莹;易佳丽;史妍婷;刘春英2.补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞生长周期作用的影响 [J], 井欢;唐莹;于丹;刘春英3.补中益气汤含药血清对A549／DDP细胞药物泵P-gp及LRP蛋白表达的影响[J], 李璐璐;于丹;王莹;井欢;刘春英4.补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞PI3K/AKT信号转导通路影响的实验研究 [J], 刘亚莉;易佳丽;王莹;井欢;刘春英5.补中益气汤含药血清联合siRNA对肺腺癌A549/DDP细胞的LRP表达影响 [J], 李璐璐;迟寿军;王莹;井欢;刘春英因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
补中益气汤含药血清经GSK-3β
补中益气汤含药血清经GSK-3β补中益气汤是传统中药方，由人参、黄芪、白术、茯苓、甘草、大枣组成。
该方具有补中益气、健脾胃、补血养心等功效，被广泛用于治疗脾虚体弱、气血两虚、心脾不交等病症。
最近的研究表明，补中益气汤中的一些药物可以抑制炎症反应、减轻氧化应激和调节细胞凋亡等作用，因此其具有潜在的抗炎、抗氧化和抗肿瘤活性。
在这里，我们将介绍该药方含药血清对GSK-3β的影响及其相关机制的研究。
GSK-3β是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，在许多生理和病理过程中具有重要作用。
它参与多个信号通路的调节，如Wnt、insulin和PI3K/Akt等，控制细胞增殖、分化、凋亡、糖代谢和蛋白合成等过程。
此外，GSK-3β的过度活化与多种神经系统疾病、炎症性疾病和代谢性疾病有关。
因此，探索有效的GSK-3β抑制剂已成为药物开发的热点领域之一。
前期的研究表明，补中益气汤可以调控多个信号通路，包括PI3K/Akt和Wnt等。
然而，这个药方对GSK-3β的影响尚不清楚。
为此，本研究旨在评估该药方对GSK-3β活性的影响，并探究其可能的作用机制。
通过液相色谱法分离出补中益气汤中的化合物并鉴定，结果显示该方中含有多种生物活性成分，其中大枣是主要成分之一。
随后，本研究制备了补中益气汤的含药血清，并用含药血清评估了它对GSK-3β活性的影响。
结果显示，含药血清可以显著抑制GSK-3β活性，且剂量依赖性增加。
接下来，本研究分析了补中益气汤含药血清对GSK-3β信号通路的影响。
我们发现，含药血清抑制GSK-3β活性后，可以增加β-catenin的稳定性，同时激活Wnt信号通路。
此外，含药血清还可以抑制TNF-α诱导的NF-κB活性和IL-6的产生，并减轻ROS生成和细胞凋亡。
这些结果表明，补中益气汤含药血清可以通过抑制GSK-3β活性，激活Wnt信号通路，并减轻炎症和氧化应激反应，从而产生多种保护细胞的作用。
总之，补中益气汤是一种常用的中药方，其含药血清可以抑制GSK-3β活性，激活Wnt信号通路，并减轻炎症和氧化应激反应。
补中益气汤的现代研究进展_施旭光
2012Vol.13No.3补中益气汤由金元时期著名医家李东垣创立，首载于《内外伤辨惑论》，由李氏根据《内经》中“损者益之”之旨而制定，全方由黄芪、炙甘草、人参、当归、橘皮、升麻、柴胡、白术组成。
该方是李东垣研究脾胃学说的代表之作，体现了治劳倦内伤之法，也是补中益气法、甘温除热法、益气升阳法的代表方。
补中益气汤原主要用于治疗脾胃气虚证、中气下陷证和气虚发热证。
目前被广泛应用于临床各科，且疗效显著。
对于该方的研究，除传统的理论研究、临床研究外，近年来，广大学者先后应用先进的药理、化学、计算机等新技术对该方进行了更深入的研究，现综述如下。
1药理研究1.1免疫调节作用罗晶等［1］研究补中益气汤对脾虚小鼠免疫功能的调节，验证中医脾与淋巴免疫的相关性。
结果发现补中益气汤能使脾虚小鼠的T 淋巴细胞增殖能力和IL-2产生量均有明显提高。
而且，补中益气汤可抑制炎性细胞因子的产生，低剂量时对IL-4、IL-6的Th2系细胞因子抑制作用更强，这可能与其能减少CD 4+阳性细胞、抑制辅助T 细胞向组织浸润从而起到抗炎作用有关。
补中益气汤增加DHEA-S 作用可使IL-2增加，IL-2可诱导T 细胞增殖及杀伤T 细胞活性等。
黄秋萍［2］研究表明，高剂量补中益气汤能明显提高脾虚小鼠NK 活性、IL-2活性和IFN-γ活性，并可使它们恢复至接近正常水平（P >0.05）；整方和拆方均能协同ConA 明显提高脾虚小鼠IL-2活性，并均使之恢复至接近正常水平。
结果提示，补中益气汤中各药通过良好的配伍关系达到全面调节机体免疫功能作用，而非简单的相加作用。
1.2抗肿瘤江蔚新等［3］研究指出，补中益气汤对EAC 小鼠癌细胞膜LPO 生成的抑制作用，实际上反映出的本质是对其自由基的抑制作用，补中益气汤这种对肿瘤组织中自由基的抑制作用可能是补中益气汤抑制小鼠EAC 的机理之一。
另外有学者提出，提高机体免疫力可能是补中益气汤抗肿瘤、抗感染等生物活性的机制之一。
补中益气汤治疗老年肌少症的临床疗效及对C反应蛋白的影响
补中益气汤治疗老年肌少症的临床疗效及对C反应蛋白的影响【摘要】本研究旨在探讨补中益气汤在治疗老年肌少症中的作用及其对C 反应蛋白的影响。
补中益气汤是一种传统中药方，据说具有调节气血的作用。
通过临床观察结果发现，补中益气汤可以显著改善老年肌少症患者的症状，提高其生活质量。
与此补中益气汤也对C反应蛋白水平有一定影响，提示可能存在一定的关联。
对补中益气汤具体机制的探讨有助于揭示其治疗作用的原理。
未来的研究可以更深入地探讨C 反应蛋白与老年肌少症之间的关系，并进一步验证补中益气汤在治疗这一疾病中的有效性。
这些研究成果有望为老年肌少症的治疗提供新的思路和方法。
【关键词】老年肌少症、补中益气汤、C反应蛋白、临床疗效、机制探讨、治疗作用、影响、观察结果、变化情况、关系、研究展望。
1. 引言1.1 研究背景老年肌少症是老年人常见的一种疾病，其主要特征是身体肌肉减少、力量下降、运动能力减退等。
该病症会影响老年人的生活质量，甚至增加了跌倒和骨折的风险。
目前，治疗老年肌少症的方法并不多，药物治疗效果也有限。
补中益气汤是一种传统中医药方，具有补益中气、增强体力的作用。
多年来，补中益气汤在中医临床中被广泛应用于治疗虚弱体质、慢性疲劳、肌肉无力等疾病。
一些临床研究也表明，补中益气汤对于老年肌少症具有一定的治疗作用，能够改善患者的肌肉量、力量和功能。
关于补中益气汤治疗老年肌少症的具体机制以及对C反应蛋白的影响尚不清楚。
本研究旨在探讨补中益气汤在治疗老年肌少症中的作用机制，并观察其对C反应蛋白水平的影响。
通过本研究的进行，我们希望能够为老年肌少症的治疗提供新的思路和方法，同时为中医药在老年疾病治疗中的应用提供理论支持。
1.2 研究目的老年肌少症是一种常见的老年疾病，其主要特征是肌肉体积减少、力量和功能减退。
目前尚无有效的治疗方法，因此需要探索新的治疗策略。
本研究旨在通过观察补中益气汤在治疗老年肌少症中的疗效和C 反应蛋白的影响，为老年肌少症的临床治疗提供新的思路和方法。
补阳还五汤含药血清对TGF-β1诱导的人肺动脉内皮细胞Dll4Notch4信号的调控作用
特发性肺纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis，IPF）是一种病因不明的好发于中老年人群的以刺激性干咳和进行性呼吸困难为主要症状的慢性、进行性、纤维化性间质性肺疾病，其肺功能提示限制性通气功能障碍及弥散功能下降，由于缺乏有效的治疗方法，很多患者在确诊后3至5年内死亡[1-3]。
随着人口老龄化，该病发病率越来越高，严重威胁人类健康和生命，因此寻求有效的治疗方法是当前面临的一项极具挑战性的课题。
有研究表明，内皮间质转化（endothelial-to-mesenchymal transition，EndMT）是IPF发生发展的重要机制，在这一过程中，包括Dll4/ Notch4等在内的Notch信号通路参与了EndMT[4-5]。
补阳还五汤是清·王清任《医林改错》中补气活血通络的经典名方，被广泛用于IPF的治疗，且取得了较好的疗效[6-7]。
课题组前期研究表明，补阳还五汤能够通过干预EndMT来防治IPF[8]，我们推测这一过程与调控Dll4/Notch4信号传导有关。
因此，本研究基于血清药理学方法，观察补阳还五汤含药血清对TGF-β1诱导的人肺动脉内皮细胞Dll4/Notch4信号的影响，以期进一步阐明该方防治IPF的作用机制，为临床防治本病提供实验依据。
1 实验材料1.1 药物 黄芪、当归、赤芍、地龙、川芎、桃仁、西红花均购自贵阳同仁堂药房，经贵州中医药大学药学院孙庆文教授鉴定为正品。
1.2 动物 健康8周龄新西兰兔10只，体重2～2.5 kg，由仪征安立卯生物科技有限公司提供，许可证号SYXK（苏）2016-0005。
1.3 细胞株 HPAEC细胞，由广州吉妮欧生物科技有限公司提供，培养于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中，常规传代培养。
1.4 主要试剂与仪器 TGF-β1（美国Peprotech 公司，批号041316-1）；RPMI-1640培养基，胎牛血清，青霉素/链霉素，胰酶（美国Hyclone公司，批号分别为AC135526825、AC105264991、AC101511834、AC114002159）；DAPT（美国MCE 公司，批号11982）；Trizol试剂盒，逆转录试剂盒，SYBR® Premix Ex Taq（日本Takara公司，批号补阳还五汤含药血清对TGF-β1诱导的人肺动脉内皮细胞Dll4/Notch4信号的调控作用渠景连赵惠亮杨邯捷郭永胜（贵州中医药大学，贵州贵阳550025）doi：10.19844/ki.1672-397X.2021.01.023摘要 目的：观察补阳还五汤含药血清对转化生长因子（TGF）-β1诱导的人肺动脉内皮细胞（HPAEC）Dll4/ Notch4信号的调控作用。
补中益气汤实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景补中益气汤，源自金元时期著名医家李东垣所著的《内外伤辨惑论》，是中医经典方剂之一。
该方以黄芪、人参、炙甘草等为主要成分，具有补益中气、升阳举陷的功效，广泛应用于治疗脾胃气虚、气虚下陷等病症。
本研究旨在通过实验验证补中益气汤的药理作用，为临床应用提供科学依据。
二、实验目的1. 验证补中益气汤对脾胃气虚模型动物的治疗效果。
2. 探讨补中益气汤对脾胃气虚模型动物相关生理指标的影响。
3. 分析补中益气汤的药效成分及其作用机制。
三、实验材料1. 实验动物：清洁级SD大鼠，体重180-220g，雌雄各半。
2. 药物：补中益气汤（由黄芪、人参、炙甘草、白术、当归身、陈皮、柴胡、升麻等组成，按临床常用剂量比例配伍）。
3. 试剂：胃蛋白酶、淀粉酶、血清酶联免疫吸附试剂盒等。
4. 仪器：电子天平、离心机、酶标仪、显微镜等。
四、实验方法1. 建立脾胃气虚模型：采用强迫游泳法建立脾胃气虚大鼠模型，连续游泳30分钟，直至大鼠出现疲劳、无力、皮毛蓬松等症状。
2. 分组：将大鼠随机分为模型组、补中益气汤低剂量组、补中益气汤中剂量组、补中益气汤高剂量组和正常对照组，每组10只。
3. 给药：除正常对照组外，其余各组大鼠按体重给予相应剂量的补中益气汤，连续给药14天。
4. 观察指标：（1）一般观察：观察大鼠的精神状态、活动能力、皮毛、饮食、二便等情况。
（2）血清指标：采用酶联免疫吸附法检测血清胃蛋白酶、淀粉酶水平。
（3）组织学观察：取大鼠胃、脾组织，进行苏木精-伊红染色，观察组织形态学变化。
五、实验结果1. 一般观察：给药后，模型组大鼠精神萎靡、活动能力下降、皮毛蓬松、食欲不振、二便溏薄；补中益气汤各组大鼠症状逐渐减轻，活动能力增强，皮毛光亮，食欲好转。
2. 血清指标：模型组大鼠血清胃蛋白酶、淀粉酶水平显著升高，与正常对照组相比差异具有统计学意义；补中益气汤各组大鼠血清胃蛋白酶、淀粉酶水平均有所下降，其中中剂量组和高剂量组与模型组相比差异具有统计学意义。
补中益气汤的文献学研究
补中益气汤的文献学研究补中益气汤的文献学研究引言：中医药是我国优秀的传统医学体系之一，其中汤剂是中药治疗常用的一种方法。
补中益气汤是一种被广泛应用于中医临床实践中的汤剂，具有补益中气、调和脏腑、增强机体自身免疫力等功效。
本文将从现有中文文献中对补中益气汤的文献学研究进行探讨和汇总，旨在深入了解该汤剂的历史渊源、配伍原则、临床应用以及研究进展。
一、历史渊源：补中益气汤最早出自《伤寒杂病论》一书，作者为东汉末年的著名医家张仲景。
在该书中，张仲景详细描述了该方剂的组方和应用方法，并指出该方可用于中气虚损、脾胃虚弱等症状的治疗。
随后，补中益气汤在历代医家的传承与发展中逐渐成为了中医临床实践中常用的方剂之一。
二、配伍原则：补中益气汤的基本组方为人参、白术、茯苓、党参、甘草。
其中，人参具有补气、益神、固脱的作用；白术具有健脾开胃、温中止泻的功效；茯苓能健脾益气、利水消肿；党参则能益气健脾、补中安神；甘草则起到调和配伍的作用。
这些药物通过相互配伍，发挥协同作用，调和脏腑功能，从而实现补中益气的效果。
三、临床应用：补中益气汤广泛应用于中医临床实践中，主要用于治疗中气不足、脾胃虚弱等症状。
例如，对于虚寒型胃炎、功能性消化不良等疾病，补中益气汤可起到增强胃肠功能的作用，改善患者的消化吸收机能。
同时，在康复期的疾病中，该方可帮助提高患者的体质，增强机体免疫力，促进疾病康复。
四、研究进展：目前，对补中益气汤的研究主要集中在方剂的优化、药理机制以及临床应用效果等方面。
其中，一些研究发现，补中益气汤可通过改善患者的中气虚弱状况，提升机体免疫力，降低炎症反应，对某些免疫系统相关疾病有一定的治疗作用。
此外，还有研究证实，该方剂能改善患者血液循环状态，增强机体抗氧化能力，减轻氧化应激反应对机体造成的伤害。
结论：补中益气汤作为一种传统汤剂，在中医临床实践中具有广泛的应用。
通过对现有文献的梳理和研究，我们更加深入地认识了补中益气汤的历史渊源、配伍原则、临床应用以及研究进展。
补中益气汤：标准配方解析
补中益气汤：标准配方解析摘要本文旨在深入探讨补中益气汤的标准配方，以及其背后的科学原理。
我们将从多个角度分析这一古老的中医药方剂，包括其主要成分、制作方法、适用人群和可能的副作用等。
我们还将通过数据驱动的方法，对补中益气汤的效果进行量化评估，以期为读者提供更全面、更深入的理解。
一、补中益气汤的主要成分补中益气汤是一种常见的中药方剂，主要由以下几种成分组成：人参、黄芪、白术、甘草、大枣和生姜。
这些成分在中医理论中各有其独特的药理作用，共同构成了补中益气汤的主要功效。
1. 人参：人参是补中益气汤的主要成分之一，具有补气固表、生津止渴的功效。
在中医理论中，人参被认为能够增强人体的免疫力，提高身体的抗病能力。
2. 黄芪：黄芪也是补中益气汤的重要成分，具有补气固表、利尿消肿的功效。
在中医理论中，黄芪被认为能够增强人体的新陈代谢，提高身体的抗疲劳能力。
3. 白术：白术是补中益气汤的另一种重要成分，具有健脾燥湿、利水渗湿的功效。
在中医理论中，白术被认为能够调节人体的消化系统，改善脾胃功能。
4. 甘草：甘草是补中益气汤的常用佐药，具有和中止痛、清热解毒的功效。
在中医理论中，甘草被认为能够调和各种药物的作用，减少药物的副作用。
5. 大枣：大枣是补中益气汤的常用佐药，具有补中益气、养血安神的功效。
在中医理论中，大枣被认为能够补充人体的营养，提高身体的抗病能力。
6. 生姜：生姜是补中益气汤的常用佐药，具有发汗解表、温中止呕的功效。
在中医理论中，生姜被认为能够促进人体的血液循环，提高身体的抗寒能力。
二、补中益气汤的制作方法补中益气汤的制作方法相对简单，主要包括以下几个步骤：1. 将人参、黄芪、白术、甘草、大枣和生姜按照一定的比例混合在一起。
2. 加入适量的水，将混合物煮沸。
3. 煮沸后，将火候调至小火，继续煮约30分钟。
4. 煮好后，将药液过滤出来，待其冷却后即可饮用。
三、补中益气汤的适用人群补中益气汤主要适用于以下几种人群：1. 体质虚弱的人：这类人常常感到身体乏力，容易疲劳，对疾病的抵抗力较弱。
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DOIʒ10．13192/j．issn．1000-1719．2015．10．070补中益气汤含药血清干预TGF －β介导的A549细胞MMP －9表达影响的研究郭倩，唐莹，李璐璐，刘春英（辽宁中医药大学，辽宁沈阳110032）摘要：目的：利用补中益气汤含药血清干预TGF －β介导的肺腺癌A549细胞，观察A549细胞中MMP －9的表达变化，探讨补中益气汤在肺癌EMT 中侵袭和转移过程中的作用。
方法：体外培养A549细胞，用TGF －β进行干预，MTT 法检测补中益气汤含药血清对A549细胞的抑制率，免疫细胞化学方法、Western blot 和实时荧光定量PCＲ等方法检测MMP －9在蛋白及基因水平上的表达。
结果：TGF －β干预后，MMP －9的表达量上调（P ＜0．05），与TGF －β诱导组相比，补中益气汤高、中、低剂量含药血清组可提高对A549细胞的抑制率（IＲ）（P ＜0．01），且能减少MMP －9在mＲNA 和蛋白水平上的表达（P ＜0．05）。
结论：MMP －9能作为肺癌EMT 过程中有无侵袭转移的良好预测指标，且补中益气汤能够有效降低MMP －9在蛋白及基因水平上的表达，进而抑制A549细胞的侵袭转移，从而逆转EMT 。
关键词：补中益气汤；肺腺癌A549细胞；MMP －9；侵袭；转移；EMT中图分类号：Ｒ285．5文献标志码：A文章编号：1000-1719（2015）10-1999-04Effect of Serum Containing Buzhong Yiqi Decoction on MMP －9of HumanLung Adenocarcinoma Cells A 549Mediated by TGF －βGUO Qian ，TANG Ying ，LI Lulu ，LIU Chunying（Liaoning University of Traditional Chinese Medicine ，Shenyang 110032，Liaoning ，China ）Abstract ：Objective ：To observe the MMP －9of human lung adenocarcinoma cells A549expression changes and to explorethe effect of serum containing Buzhong Yiqi Decoction in invasion and metastasis of lung adenocarcinoma cells A549by using Buzhong Yiqi Decoction to interven the human lung adenocarcinoma cells A549mediated by TGF －β．Methods ：Inhibition rate of Buzhong Yiqi Decoction on MMP －9of human lung adenocarcinoma cells A549mediated by TGF －βwas observed by MTT as-say．Cellular immunofluorescence ，Western blot and real time PCＲwere used to assay the protein expression of MMP －9．Ｒesults ：After induced by TGF －β，the expression of MMP －9up －regulated （P ＜0．05）．Compared with TGF －βinduced group ，high ，middle and low dose groups of serum Buzhong Yiqi Decoction can improve the inhibition rate （IＲ）of Buzhong Yiqi Decoction on Intergrin β1of human lung adenocarcinoma cells A549mediated by TGF －βsignificantly （P ＜0．01）and decrease the protein and mＲNA expression of MMP －9（P ＜0．05）．Conclusion ：MMP －9can judge the invasion and metastasis of A549as a prediction in-dex．Buzhong Yiqi Decoction can down －regulate the protein and mＲNA expression on MMP －9of human lung adenocarcinoma cells A549mediated by TGF －βand reserve the invasion and metastasis and reverse the EMT．Key words ：Buzhong Yiqi Decoction ；human lung adenocarcinoma cells A549；MMP －9；invasion ；metastasis ；EMT 收稿日期：2015－04－13基金项目：国家自然科学基金项目（81473569）作者简介：郭倩（1990－），女，山东人，硕士研究生，研究方向：中药抗肿瘤作用及其机制研究。
通讯作者：刘春英，女，教授，博士研究生导师，博士，研究方向：中药抗肿瘤作用及其机制研究，E －mail ：1781313365@qq．com 。
晚期肺癌患者的发病率和死亡率呈日渐增长的趋势，研究表明，该现象与肺癌的侵袭和转移有着密不可分的关系［1］。
近年来有研究发现，上皮间质转化（epi-thelial －mesenchymal transition ，EMT ）是肺癌侵袭转移的一个重要原因。
EMT 使细胞生物学行为发生改变，获得了更高的迁移与侵袭、抗凋亡等间质表型［2］。
基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase ，MMPs ）是一类锌离子依赖的细胞外蛋白水解酶，其中肺癌转移相关蛋白（metastasis related proteins ，MMP －9）是降解Ⅳ型胶原最主要的酶，能破坏天然屏障基底膜，促进肿瘤细胞的浸润和转移［3－5］。
尽管目前对肺癌的治疗手段日趋先进，恶性肿瘤的侵袭和转移仍是一个极其复杂的病理过程。
本研究通过TGF －β进行干预，运用补中益气汤含药血清作用于A549细胞，观察MMP －9与细胞EMT 过程中侵袭和转移之间的关系，并探讨其可能的作用与机制。
1材料与方法1.1材料1.1.1细胞株人肺腺癌A549细胞株购于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库。
1.1.2动物SPF 级SD 大鼠体重（250ʃ20）g ，购于沈阳万类生物有限公司。
1.1.3主要试剂ＲPMI1640培养基（NVL0333）购于沈阳科硕，胎牛血清（SV30087.02）购于Hyclone 公司，兔抗人MMP －9（D603H ）购于Cell Signaling Technolo-gy公司，山羊抗兔IgG（H+L）（SA00001－2）购于Pro-teintech，兔抗人β－actin（BS0061Ｒ）、WIP组织细胞裂解液（C－0013）、BCA蛋白浓度试剂盒（24P00150）均购于北京博奥森，TGF－β（100－21）购于PEPＲO-TECH，细胞免疫组化试剂盒（KIT9710）购于迈新生物，MTT试剂盒（M1020）购于Solarbio，补中益气汤饮片购于辽宁中医药大学附属医院门诊部。
1.2方法1.2.1制备含药血清根据《方剂学》新世纪版中规定补中益气汤的用药剂量［6］。
黄芪18g，甘草9g，人参6g，当归3g，橘皮6g，升麻6g，柴胡6g，白术9g，并通过“人和动物之间按体表面积折算的等效剂量比值表”计算出大鼠等效剂量，按照药物浓度1.418g·mL－1（生药）常规煎煮。
40只SD大鼠按照随机对照方法分为4组：补中益气汤高剂量含药血清组、补中益气汤中剂量含药血清组、补中益气汤低剂量含药血清组和空白血清组，分别以生药量11.34g·kg－1（1.418 g·mL－1，2mL）、5.67g·kg－1（0.709g·mL－1，2 mL）、2.84g·kg－1（0.354g·mL－1，2mL）和生理盐水8mL·kg－1（2mL）灌胃，连续灌胃3d，1次/d，末次灌胃1h后，腹主动脉取血。
离心，3500r·min－1，5min，取上清。
56ħ水浴锅灭菌30min，超净台0.22μm滤器滤菌，－20ħ保存备用。
1.2.2细胞培养将A549细胞接种在25cm2培养瓶中，用含10%胎牛血清、青霉素和链霉素各100U·mL－1的ＲPMI1640培养液中，于37ħ，5%CO2培养箱中培养。
2 3天待细胞长到瓶底面积的80%左右密度，用胰蛋白酶消化，以1ʒ3进行细胞传代。
实验用细胞待长到70%，用无血清培养基饥饿4h，分别更换空白血清和高、中、低剂量含药血清，用质量浓度为10ng ·mL－1的TGF－β诱导48h，进行后续实验。
1.2.3实验分组将A549细胞以1.0ˑ106/瓶接种于25cm2培养瓶，分组为：空白血清组、TGF－β诱导组、补中益气汤高剂量含药血清组+TGF－β、补中益气汤中剂量含药血清+TGF－β组和补中益气汤低剂量含药血清+TGF－β组。
空白血清与补中益气汤高、中、低剂量含药血清体积分数均为10%。
1.2.4MTT法检测补中益气汤含药血清对TGF－β诱导的A549细胞的抑制率收集对数期A549细胞，调整细胞悬液浓度为3000 10000个/孔，接种到96孔板中，A549细胞分组为：空白血清组、TGF－β诱导组、补中益气汤高剂量、中剂量、低剂量含药血清+ TGF－β组、空白对照组（未加细胞，加空白培养液）及细胞对照组（只加细胞悬液，不加药物），每组设4个复孔，细胞贴壁后，用无血清培养基饥饿4h，分别加入相应受试化合物，37ħ，5%CO2培养箱内继续培养48 h后，加入90μL新鲜培养液和10μL MTT溶液作用4 h，小心弃上清，每孔加入110μL Formazan溶解液，置摇床低速振荡10min，酶标仪在波长490nm处测每孔的吸光度（A），取平均值。