丙型肝炎病毒IgG抗体定量测定作业指导书
丙型肝炎病毒IgG抗体定量测定作业指导书一、目的：规范丙型肝炎病毒IgG抗体测定的标准操作程序，确保丙型肝炎病毒IgG抗体测定的结果准确有效。
二、适用范围：在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的丙型肝炎病毒IgG抗体。
三、临床意义丙型肝炎是一种广泛流行的病毒性疾病，据 WHO调查，全世界估计有1.7亿人感染丙型肝炎病毒 (HCV)，在不同的国家慢性丙型肝炎病毒感染的流行病学统计是在 0.5％～20％，我国一般人群抗 HCV阳性率为3.2％。
而急性丙型肝炎绝大多数都会形成有慢性感染的过程，慢性丙型肝炎病毒感染是肝硬化和肝癌的主要原因之一[1,2]。
丙型肝炎的诊断有赖于 HCV抗体的血清学检定及病毒学检测。
HCV抗体阳性代表机体对病毒感染的应答，一般在感染 1～2月后出现抗体，急性和慢性丙型肝炎的区别在于 HCV核心 IgG量的差异，慢性病人的 IgG抗体水平比急性的要高些，并且通常有更长的免疫活性。
通过自然恢复或经治疗清除病毒的急性丙型肝炎患者，IgG会在几年之后消失或低于检测下限而无法检出[3]。
临床上也应注意到一些血液透析、免疫功能缺陷和自身免疫性疾病患者可出现抗-HCV假阳性，可以采用抗-HCV RIBA或HCV RNA检测确认，有助于确诊这些患者是否合并感染HCV。
四、方法原理本试剂盒采用间接法原理进行检测。
以HCV抗原包被磁微粒，辣根过氧化物酶标记的抗人IgG制备酶结合物，通过免疫反应形成抗原－抗体－酶标记抗体复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与HCV IgG抗体的含量成正比。
五、标本的采集与处理5. 1. 采用正确医用技术收集血清样本（详见标准血液标本前处理流程）。
5.2. 样本中勿添加叠氮钠作为防腐剂。
5.3.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。
5.4. 样本处理、收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2～8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。
使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。
六、标本拒收标准1）严重溶血、脂血 2）标本标识不明七、仪器与材料7.1.仪器：适用于Lucy2、Lumo、AutoLumoA2000化学发光检测仪。
7.2.试剂：AutoLumo A2000专用丙型肝炎病毒IgG抗体试剂7.2.1.试剂准备：本试剂为即用型试剂，可以直接放在仪器上。
7.2.2.试剂盒于2～8℃储存，有效期12个月。
7.2.3.试剂盒应防止冷冻，避免强光照射。
7.2.4.试剂盒开启使用后，2～8℃保存可使用1个月。
7.2.5.试剂盒可适应1周内常温运输，运输过程中应轻拿轻放，避免重压，防止雨雪淋湿和阳光曝晒。
7.2.6.试剂机载稳定性7.2.6.1.试剂包（磁微粒混悬液、酶结合物、样品稀释液）竖直向上存放，在2～10℃环境下冷藏保存2小时后，才可上机使用。
首次使用后，机载或在2～10℃环境下稳定期为28天。
7.2.6.2.校准品开瓶后保存于2～8℃，稳定期可维持1个月；若需使用更长时间，应根据需要进行分装，于-20℃冻存（可以保存2个月），但应避免反复冻融。
7.2.6.3.试剂在2～8℃保存可稳定至标签上所标示的有效期。
7.3.质控液：推荐使用安图配套质控品或第三方质控品BioRAD QC八、检验方法8.1.消耗品检查：8.1.1.根据仪器说明装载或检查消耗品是否充足。
8.1.2.参考相应的仪器系统操作说明。
8.2.试剂包装载：8.2.1.试剂包首次上机前，轻轻地倒转试剂包多次以混合新试剂包内的成分，避免产生气泡。
不要倒转已经打开的试剂包。
8.2.2.仪器通过扫描试剂包条码自动获得测试所需的参数。
8.2.3.如果特殊情况下仪器无法识别条码，可以手工输入。
8.2.4.参考相应的仪器系统操作说明。
8.3.测试：8.3.1.将样本容器放置在仪器配套样本架中，每次测试样本量为10µl。
8.3.2.装载样本架，在仪器软件界面中输入样本信息。
8.3.3.选择“运行”开始测试，系统自动进行试验操作。
8.3.4.参考相应的仪器系统操作说明。
8.4. 定Cutoff值8.4.1. 仪器通过扫描条码卡自动获取测试所需的参数。
8.4.2.如果特殊情况下仪器无法识别条码卡，可以手工输入。
8.4.3.将阴阳性对照转移至样本容器，放置在仪器配套样本架中。
8.4.4. 装载样本架，在仪器软件界面中输入Cutoff值信息。
8.4.5. 选择“运行”开始测试，生成Cutoff值。
8.4.6.Cutoff值有效期为28天。
8.4.7. 参考相应的仪器系统操作说明。
8.4.8.出现以下情况需要重新生成Cutoff值：8.4.8.1. 质控结果经重复测定后仍然超出范围；8.4.8.2.试剂盒或发光底物液的批号更改；8.4.8.3.超出Cutoff值有效期限；8.4.8.4.仪器重要部件更换或维修。
8.5. 质控：8.5.1.使用至少两个分析物水平的质控品进行质控。
8.5.2.出现以下情况需要进行质控：8.5.2.1.测试试剂盒使用超过24小时；8.5.2.2.更换新的试剂盒；8.5.2.3.重新生成Cutoff值；8.5.2.4.停机。
8.5.3.各实验室需根据自身情况建立适合本实验室的可接受范围，以确保合适的测试性能。
8.5.4.质控值应落在规定的范围内，如出现失控，应采取纠正措施。
九、参考范围9.1. Cutoff值=阳性对照孔平均发光值*0.4。
仪器操作时，自动计算并保存每批试剂的Cutoff值。
9.2. 待测样本发光值＜Cutoff值时，检测呈阴性反应。
9.3. 待测样本发光值≥Cutoff值时，检测呈阳性反应，建议动态观察或用其他方法复查。
9.4. 有效性判断：阳性对照孔平均发光值/阴性对照孔平均发光值应大于10,否则应重新试验。
十、检验结果的解释10.1.检测为阴性的样本，提示未感染或未产生足以检测到的抗体。
10.2.阳性判断值附近的可疑样本，建议重新测定，动态观察。
10.3.由于方法学或免疫特异性等原因，使用不同生产商的试剂对同一份样本进行检测可能会得到不同的检测结果，因此不同试剂检测所得结果不应直接相互比较，以免造成错误的医学解释，建议实验室在发给临床医生的检测报告注明所用试剂特征。
系列监测中如果改变试剂类型，则应进行额外的连续性检测并与原有试剂结果进行平行比较以重新确定基线值。
十一、检验方法的局限性11.1. 本产品检测结果仅供临床参考，不应作为临床诊治的唯一依据，对患者的临床管理应结合其症状/体征、病史、其他实验室检查、治疗反应及流行病学等信息综合考虑。
11.2.本品用于血清或血浆样本的测定，用于其他体液样本测定的可靠性尚未得到充分确认。
11.3.样本中的异嗜性抗体或类风湿因子可能会干扰检测结果，必须结合患者病史，临床检查和其他临床资料来综合评估检测结果。
11.4.免疫功能受损或接受免疫抑制治疗的患者，如人类免疫缺陷病毒（HIV）感染患者或器官移植后接受免疫抑制治疗的患者，其血清学抗体检测的参考价值有限，可能会导致错误的医学解释。
11.5.发生严重溶血、脂血、浑浊或被微生物严重污染的样本用于测定可能会造成不正确的结果，避免使用此类样本。
十二、产品性能特征12.1.阴性符合率：符合中国食品药品检定研究院阴性参考品的要求；12.2.阳性符合率：符合中国食品药品检定研究院阳性参考品的要求；12.3.精密性：符合中国食品药品检定研究院精密性参考品的要求；12.4.最低检出限：符合中国食品药品检定研究院灵敏度参考品的要求；12.5.干扰物质：5mg/mL血红蛋白、0.4mg/mL胆红素和50mg/mL甘油三酯对本试剂盒检测结果无显著影响；甲肝抗体、乙肝表面抗体、戊肝抗体、HIV、梅毒、ANA、类风湿因子、EB病毒、TOX、RV、CMV、HSV1以及HSV2抗体阳性样本对检测结果无显著影响。
12.6.抗凝剂的影响：使用EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝剂对检测结果无显著影响。
12.7.合率100% ，阴性符合率：99.71%，总符合率：99.81%。
十三、参考文献1. SARRAZIN C.Diagnosis of hepatitis C:update 2001[J]Journal of Gastroenterology andHepatology,2004.19:S88-S93.2. 中华医学会肝病学分会、传染病与寄生虫病学分会.丙型肝炎防治指南[J].中华肝脏杂志.2004.12:194-1983. NIKOLAEVA LI,BLOKHINA NP,TSURIKOVA NN,etal.Virusspecific antibody titres in different phases ofhepatitis C virus infection[J]. ViralHepat,2002,9:429-437。
血清丙型肝炎病毒抗体检测作业指导书
血清丙型肝炎病毒抗体检测作业指导书（ELISA）原理在微孔条上预包被丙型肝炎病毒（HCV）重组嵌合抗原，采用ELISA法检测丙型肝炎病毒抗体。
样品加入已有样品稀释液的包被抗原反应孔，在随后的温育过程中，若样品中含特异抗体，则该抗体与包被抗原形成抗原抗体复合物被吸附到固相，再加入酶标记的第二，最终形成抗原-抗体-酶标二抗复合物，洗涤除去未结合的游离酶，加入显色剂后显色。
标本采集2.1 采集前病人准备：受检者应空腹2.2 标本种类：血清或血浆2.3 标本要求：采集病人静脉血2ml，室温放置不超过4小时，分离血清备用。
标本储存：2-8°C保存不应超过1周，-20°C不应超过3个月，-70°C长期保存，应避免反复冻融。
标本运输：密封，室温运输。
标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
试剂6.1 试剂名称：丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒6.2 试剂生产厂家：河南华美生物工程有限公司。
6.3 包装规格：96Test/Kit6.4 试剂盒组成：包被反应板，样品稀释液，酶标记抗体，阳性对照血清，阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，密封袋。
6.5 试剂储存条件及有效期：2-8°C避光保存，有效期6个月。
仪器设备7.1 仪器名称：自动酶标仪7.2 仪器厂家：KHB7.3 仪器型号：ST360操作步骤8.1 平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25°C），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
8.2 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。
8.3 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。
8.4 加样品稀释液：用加样器在微孔反应条板孔中加入样品稀释液，每孔100μl，空下四孔准备加对照。
8.5 加标本和留空白：将每份待检标本各10μl分别加入已有样品稀释液的各孔中，留下一孔不加标本作空白对照，标好位置。
丙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书
丙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书1.目的采用PCR技术、实时荧光探针技术，用于临床血清或血浆标本中的丙型肝炎病毒核酸的定性检测，适用于丙型肝炎病毒感染的辅助诊断。
2.范围适用于丙型肝炎病毒核酸定量检测。
3. 职责操作人员：负责标本制备检测、仪器操作、报告发送。
专业组组长：负责本组耗材的请购，监督本组标本检测、仪器操作、报告发送、质控管理等各方面工作。
实验室主任：负责监督和指导实验室各方面工作。
4. 原理采用荧光PCR技术，以丙型肝炎病毒基因编码区的高度保守区为靶区域，设计特异性引物及荧光探针，进行一步法RT-PCR扩增，并检测荧光信号，仪器软件系统自动绘制出实时扩增曲线，根据阈循环值(CT)实现对未知样本的检测。
另外，本试剂盒带有内标物质，用于对核酸提取的整个过程进行监控，减少假阴性结果的出现。
5. 样本要求适用标本类型：血清标本采集用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血 2 ml，注入无菌的真空采血管中（未加抗凝剂），室温（22-25℃）放置30-60min血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500rpm离心5min；吸取上层血清，转移至灭菌离心管。
标本保存和运送所采集的标本可立即用于测试或长期保存于-70℃，也可保存于-20℃待测，保存期为3个月，标本应避免反复冻融。
标本运送采用干冰（或者冰袋）保持低温，运输时间不应超过4天。
拒收标本：拒绝重度溶血样本、肝素抗凝的血浆。
6. 仪器和试剂设备AB7500核酸扩增仪、恒温金属浴、生物安全柜、低温离心机等。
试剂生产厂家：中山大学达安基因股份有限公司产品标准批号：YZB/国 7271-2013最低检出量：最低检出量为500 IU/ml试剂各组分见表1：表1 试剂盒组分表7. 操作步骤试剂准备（试剂储存和准备区）进入试剂准备区，打开通风设备，按照消毒清洁程序擦拭实验台面，并在检验流程记录表上做相应记录。
PCR反应液配制取出HCV反应液A、HCV反应液AB，室温溶化后振荡混匀，8000rpm离心数秒后使用。
丙型肝炎病毒抗体测定SOP
丙型肝炎病毒抗体测定标准操作程序（）【目的】指导免疫项目丙型肝炎病毒抗体的测定。
【适用仪器】酶标仪36O、洗板机36W等。
【该变动程序】本标准操作程序的改动，可由任一使用本的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。
【方法原理】法：用特异性抗原包被酶联板，待检血清中的抗抗体与包被抗原反应，再与酶标结合，形成抗原-抗体-酶标抗体复合物，加底物（）显色，在酶标仪上测定后根据值判定有无抗体的存在。
【标本要求】种类：血清、血浆。
【试剂】试剂盒：样品稀释液、阴性和阳性对照、浓缩洗液、酶标抗体、底物液A、底物液B、终止液。
保存条件及有效期：28℃储存。
自生产日期起，有效期半年。
【质控品】试剂盒中的阴性和阳性对照、省临检中心下发的，依说明书4–8℃冷藏。
【操作步骤】1．加生物素试剂：每次试验设空白对照1孔；阴性对照3孔，阳性对照2孔，分别加入阴、阳性对照10微升。
除空白孔外，其余孔加入50微升生物素试剂。
2．加样：分别在相应孔中加入待测样本、阴性对照和阳性对照各50微升，空白孔除外。
3．温育：振荡混匀，盖上封板膜，置37±1℃温育60分钟。
4．洗涤：用洗板机洗板，重复洗5次后拍干。
5．加酶:空白对照孔不加酶标记物，其余孔加入酶标记物100微升。
6．温育：振荡混匀，盖上封板膜，置37±1℃温育30分钟。
7．洗涤：用洗板机洗板，重复洗5次后拍干。
8．显色：每孔加入底物缓冲液50微升，再加入底物液50微升，振荡混匀，盖上封板膜，置37±1℃温育30分钟。
9．终止：每孔加入终止液50微升，混匀。
10.用酶标仪读值，零置酶标仪450或双波长450630下测定值。
结果判定1．阴、阳性对照和被检样品的值减去空白对照值即为计算值。
2．试剂空白需<0.08，阴性对照孔值≤0.1，阳性对照孔值≥0.8。
3．临界值（值）的设定：值=0.12+阴性对照均值4．被检样品的值>=临界值应判为抗体阳性反应，<临界值为阴性反应。
PCR定量丙肝RNA作业指导书
丙型肝炎病毒(H C V)核酸扩增(PCR)荧光定量检测标准操作程序一、目的：明确丙肝病毒核酸定量检测的操作规程，指导检验人员正确进行丙肝病毒核酸定量的检测,保证检测结果及时可靠。
二、范围：适用于进行丙肝病毒核酸定量检测的检验人员。
三、职责：实验操作人员应严格按操作规程进行实验。
四、检测原理：本试剂盒从血清或血浆中提取HCV RNA，在逆转录酶作用下将RNA逆转录为HCV cDNA，在引物的指导下，以四种脱氧核苷酸为底物，通过耐热DNA聚合酶的酶促作用，对cDNA进行体外扩增，用Taqman探针法检测扩增产物。
通过标准曲线，即可计算出被检物的含量。
五、试剂：1. 来源：上海复星HCV核酸扩增荧光定量检测试剂盒〕。
2. 规格：32人份/盒。
3. 试剂盒组成：3.1 病毒RNA提取试剂：用于从血清或血浆中提取HCV RNA。
裂解液 4ml×1瓶含有硫氰酸胍的溶液助沉剂1瓶含有助沉剂的冻干粉末去抑制剂1瓶含有去抑制剂的冻干粉末洗涤液A 14ml×1瓶含有硫氰酸胍的溶液洗涤液B 4ml×1瓶含有Tris的溶液洗脱液1×2支含0.04% NaN3的灭菌双蒸水（无RNase）核酸提取柱32支×1包含连接套管3.2 核酸扩增（PCR）―荧光检测试剂：RT―PCR试剂PCR主反应液 250ul×1支含有一对引物和dNTP的溶液酶混合物 180ul×1支含有Taq酶、逆转录酶和RNA酶抑制剂的溶液荧光探针20ul×1支含有荧光探针的溶液250ul×1支阴性对照含有0.05% NaN的HCV RNA阴性的混和人血清3强阳性对照 250ul×1支含有约2×106 IU/ml的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA弱阳性对照 250ul×1支含有约2×104 IU/ml的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA工作标准品1 250ul×1支含有适量的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA工作标准品2 250ul×1支含有适量的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA工作标准品3 250ul×1支含有适量的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA工作标准品4 250ul×1支含有适量的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA工作标准品①～④的参数和强、弱阳性对照的定值允许范围根据批号不同而不同。
丙型肝炎病毒抗体IgG (抗-HCV·IgG)标准操作程序SOP文件
4、加酶：除空白对照孔外，每孔加入2滴酶标记物，轻轻振荡封板后，置37℃水浴15分钟。
5、洗涤：同步骤3。
6、显色：每孔加底物液A、B各1滴，轻拍混匀后，置37℃水浴15分钟。
7，每孔加终止液50ul。
2、试剂用前先平衡至室温。含血球的标本易出现假阳性，应避免使用。
3、未用完的板条应及时封存于易封袋中。
4、滴加试剂前，应将滴瓶翻转数次混匀。滴加时瓶身应保持垂直。
5、若浓缩洗涤出现结晶，可于37℃放置至溶解。洗涤要充分，各孔均须加满，防止孔口内游离酶不能洗净。
6、本试剂盒应视为为有传染性物质，请按传染病实验室规程操作
临界值（C.O.）=0.140+阴性对照平均OD值；
样本OD值＞临界值,为抗-HCV·IgG阳性;否则为阴性。
注：阴性对照孔OD值小于0.05时，按0.05计算；大于0.05时，按实际值计算。
[质量控制]
每批检测同步进行质控品测定，绘制室内质控图。其它按室内质量控制管理规定进行。
[参考范围]
酶联免疫吸附试验：阴性
[临床意义]:
（1）在输血后患肝炎有80－90%的病人是丙型肝炎，其中大部分为阳性。
（2）在乙型肝炎患者中，特别是经常使用血制品（血浆、全血）的病人可以引起丙肝病毒的合并感染，使疾病转为慢性化、肝硬化或者肝癌。所以对乙型肝炎的复发病人或是慢性肝炎病人要进行HCV－Ab的检测。
[注意事项]
1、不同批号的试剂不可混用。
ＡＢＣＤ医院
免疫实验室
文件编号：
ABCD-SOP-01-15
丙型肝炎病毒抗体IgG(抗-HCV·IgG)
丙型肝炎病毒IgG抗体定量测定作业指导书
丙型肝炎病毒IgG抗体定量测定作业指导书一、目的：规范丙型肝炎病毒IgG抗体测定的标准操作程序，确保丙型肝炎病毒IgG抗体测定的结果准确有效。
二、适用范围：在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的丙型肝炎病毒IgG抗体。
三、临床意义丙型肝炎是一种广泛流行的病毒性疾病，据 WHO调查，全世界估计有1.7亿人感染丙型肝炎病毒 (HCV)，在不同的国家慢性丙型肝炎病毒感染的流行病学统计是在 0.5％～20％，我国一般人群抗 HCV阳性率为3.2％。
而急性丙型肝炎绝大多数都会形成有慢性感染的过程，慢性丙型肝炎病毒感染是肝硬化和肝癌的主要原因之一[1,2]。
丙型肝炎的诊断有赖于 HCV抗体的血清学检定及病毒学检测。
HCV抗体阳性代表机体对病毒感染的应答，一般在感染 1～2月后出现抗体，急性和慢性丙型肝炎的区别在于 HCV核心 IgG量的差异，慢性病人的 IgG抗体水平比急性的要高些，并且通常有更长的免疫活性。
通过自然恢复或经治疗清除病毒的急性丙型肝炎患者，IgG会在几年之后消失或低于检测下限而无法检出[3]。
临床上也应注意到一些血液透析、免疫功能缺陷和自身免疫性疾病患者可出现抗-HCV假阳性，可以采用抗-HCV RIBA或HCV RNA检测确认，有助于确诊这些患者是否合并感染HCV。
四、方法原理本试剂盒采用间接法原理进行检测。
以HCV抗原包被磁微粒，辣根过氧化物酶标记的抗人IgG制备酶结合物，通过免疫反应形成抗原－抗体－酶标记抗体复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与HCV IgG抗体的含量成正比。
五、标本的采集与处理5. 1. 采用正确医用技术收集血清样本（详见标准血液标本前处理流程）。
5.2. 样本中勿添加叠氮钠作为防腐剂。
5.3.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。
5.4. 样本处理、收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2～8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。
抗体效价测定操作规程
抗体效价测定操作规程 Hessen was revised in January 2021抗体效价测定操作规程操作步骤：一．IgG类1.IgG类抗体效价滴定，须取适量血清200μL加等体积2—Me溶液混合，封口，置37℃水浴箱作用60分钟，先稀释血清：200L病人血清600L生理盐水备用，排列6支试管按顺序编号。
第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L，在第一管和第二管中各加入稀释血清200L，第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。
这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256。
2.加红细胞悬液（自配红细胞悬液同反定型试剂）每管各加2％相应红细胞悬液200L，混匀。
（如待检血清抗体为抗A，则加入A型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗B，则加入B型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗A又有抗B，则倍量稀释两份血清，一份加入A型标准红细胞悬液，另一份加入B型标准红细胞悬液；）3.先直接观察离心结果，之后在每管分别加入凝聚胺试剂盒中的R1液3d，混合30S均匀后，在各加R2液2滴，操作方法同凝聚胺交叉配血法，然后判读结果。
通常以肉眼观察到的第一个“±”的凝集管作为判断的终点，终点血清稀释度的倒数为效价（Titer），或称滴度。
二．IgM1.血清连续倍量稀释法先稀释血清：100L病人血清+700L生理盐水备用，排列6支试管按顺序编号。
第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L，第一管和第二管中各加入稀释血清200L，第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。
这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256。
丙型肝炎病毒抗体检测说明书
丙型肝炎病毒抗体检测试剂（胶体金法）说明书【产品名称】通用名称：丙型肝炎病毒抗体检测试剂（胶体金法）【包装规格】条型单人份：50人份/盒；板型单人份:40人份/盒。
【预期用途】本产品用于定性检测人血清.血浆样本中的丙型肝炎病毒（HCV）抗体。
丙型肝炎病毒是一种很小的.具有包膜的单股正链RNA病毒，是主要引起非肠道传播的非甲非乙型肝炎病毒，据文献报道，90%以上非肠道传播的非甲非乙型肝炎（NANBH）和25%以上急性散发性肝炎均为HCV感染所致，且35-50%的非甲非乙型肝炎发展为慢性肝炎，与肝癌的发生相关。
HCV主要传播通过血源传播，此外还可以其他方式如通过母婴垂直传播，家庭日常接触和性传播等。
【检验原理】本试剂采用高度特异性的抗体抗原反应原理及胶体金标记免疫层析分析技术，试剂含有被预先固定于膜上检测区（T）的包被用HCV重组抗原。
检测时，样本滴入试剂加样处于预包被的胶体金颗粒结合的标记用HCV重组抗原反应。
然后，混合物再毛细效应下向上层析。
如是阳性，标记用HCV重组抗原金标粒子在层析过程中先于样本中的HCV重组抗体结合，随后结合物会被固定在膜上的包被用HCV重组抗原结合，在检测区内（T）会出现一条紫红色条带。
这条带是包被用HCV重组抗原-HCV抗体-标记用HCV重组抗原金标粒子的复合物在膜上结合形成的。
如是阴性，则检测区内（T）将没有紫红色条带。
无论HCV抗体是否存在于样本血样中，一条紫红色条带都会出现在质控区内（C）.质控区内（C）所显现的紫红色条带是判定是否有足够样本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂内控标准。
【主要组成成分】丙型肝炎病毒抗体检测试剂：包被用HCV重组抗原，标记用HCV重组抗原。
羊抗鼠IgG，硝酸纤维素膜，玻璃纤维；缓冲液：成份为氯化钠，磷酸氢二钠，磷酸二氢钠；25ul吸管检测记录表各组份的包装数量如下：说明：不同批号试剂中各组份不能够互换使用，以免产生错误结果。
检验时另需准备样本收集容器和计时器。
丙型肝炎病毒抗体(胶体金法)标准操作规程
丙型肝炎病毒抗体(胶体金法)标准操作规程1.检验目的用于体外定性检测人血清或血浆样本中的丙型肝炎病毒(HCV)抗体。
2.检验程序的原理和方法采用胶体金免疫层析技术，应用间接法原理定性检测人血清(浆)HCV抗体。
在玻璃纤维素膜上预包被金标鼠抗人IgG抗体(anti-IgGAb),在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被重组丙肝混合抗原(Core、NS3、NS4、NS5,源自大肠杆菌)和人IgG 抗体(丙种球蛋白)。
检测阳性样本时，血清样本中HCV-Ab与胶体金标记鼠抗人IgG 抗体结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的抗原结合形成“Au-anti-IgGAb-HCVAb-HCVAg”夹心物而凝聚显色，游离金标鼠抗人IgG抗体则在对照线处与人IgG抗体结合而富集显色。
阴性标本则仅在对照线处显色，15分钟内观察结果即可。
3.性能特征3.1用国家参考品测定，产品性能应符合以下要求。
3.1.1阴性参考品符合率：对20份阴性参考品进行检测，要求在15分钟内全部显示阴性结果。
3.1.2阳性参考品符合率：对20份阳性参考品进行检测，要求在15分钟内全部显示阳性结果。
3.1.3最低检出量：灵敏度1号1:8进行检测，要求在15分钟内显示阳性结果。
灵敏度2号1:64进行检测，要求在15分钟内显示阳性结果。
3.1.4精密性：用精密性参考品平行检测10次，均在15分钟内显示出清晰可辨的检测线，且显色深度无显著差别。
3.1.5稳定性：试剂盒置37℃20天，阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密性均应符合要求。
3.2乙肝、人类免疫缺陷病毒(HIV)、甲肝、庚肝、戊肝、类风湿因子(RF)、红斑狼疮等各种类型的标本不会对测试产生干扰。
3.3胆红素(342.0μmol/L)、胆固醇(20.7mmol/L)、血红蛋白(5.0g/L)、甘油三酯(28.2mmol/L)),不影响检测结果。
丙型肝炎病毒抗体检测(酶联免疫法)
丙型肝炎病毒抗体检测（酶联免疫法）1、原理：本法采用间接法酶联免疫吸附试验原理。
在微孔条上预包被基因重组HCV结构和非结构区，配以酶标记IgG抗体及TMB显色等其他试剂，检测人血清或血浆中的丙型肝炎病毒抗体。
2、标本采集与处理?2.1 受检者准备：对于体检对象抽血前保持平时的饮食习惯，采血前应禁食4-6小时。
2.2静脉采血：除非是卧床病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，因此影响测定水平。
故在采血前至少应静坐５分钟。
一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过１分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3采血管：一般采用血清做检验，可以用一般洁净的塑料管或玻璃试管作为容器。
2.4标本处理：血液标本应尽快地送实验室。
本试剂使用样品为人血清或血浆，含EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂的样品可用于本实验。
2.5标本接收：接收标本时应检查标本是否符合要求(要求密封、无溶血、无杂物)、所用试管是否正确、试管是否填写完整、并问讯采血日期，对不合格标本应退回重采，并填写记录。
2.6标本储存：样品中应无微生物，可在2-8o c储存1周，长期储存应低温冻存，避免反复冻融。
3、试剂与仪器：?3.1测定试剂：3.1.1生产厂商：北京万泰生物药业股份有限公司3.1.23.1.3包装：96T×13.1.3试剂配置：浓缩洗涤液 50ml×1瓶样品稀释液 12ml×1瓶HCV酶标板 8×12孔或12×8孔HCV酶标试剂 12 ml×1瓶 HCV阳性对照 0.2ml×1支 HCV阴性对照 0.2ml×1支底物液A、B液各6ml×1瓶终止液 6ml×1瓶自封袋 1个封版膜 2张说明书 1份3．2测定仪器：3.2.1酶标仪：上海安泰model MT-8583.2.2洗板机： ANALYTECH 8284、操作步骤：4．1配液：浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。