葡萄的脱毒与快繁-植物组织培养
葡萄幼嫩茎叶切块组织快繁脱毒技术
葡萄栽培与酿酒 V IT I CUL TURE &ENOLOG Y 1997(2) 本文于1996-12-25收到。
葡萄幼嫩茎叶切块组织快繁脱毒技术牛建新 蒋迪军 冯建荣 杨芳琴(石河子大学农学院园林系,832003) 摘 要 以葡萄幼嫩茎尖、茎叶切块组织为外植体,以改良M S 为基本培养基,附加不同浓度的细胞分裂素和生长素。
诱导茎尖,茎叶切块组织,经愈伤组织形成丛生芽,获得大量愈伤组织再生植株,经指示植物鉴定,脱除了病毒。
葡萄体细胞组织培养技术是大规模繁殖葡萄去病植株的重要手段[1]。
近几年来,在葡萄外植体选择和培养技术方面已做了大量工作[2,3,4]。
迄今为止,除利用花药培养[5],获得数例再生植株外,国内关于体细胞产生愈伤组织并诱导分化成苗的工作尚很少。
我们以葡萄器官为外植体,取幼嫩茎尖碎片接种于改良的M S 培养基中,经愈伤组织途径诱导出了脱毒再生植株。
为葡萄优良品种无病毒苗工厂化快速繁殖以及基因转化,奠定了良好基础。
1 材料与方法1.1 供试材料:无核白、里扎马特、燕山等葡萄品种。
1.2 试验方法1.2.1 外植体表面灭菌、切割、接种。
取上述品种带毒株的新梢4c m ,除去叶片,用自来水冲洗5m in ,洗去表面污物,再用蒸馏水洗1次,用75%酒精浸3-5s ,立即用无菌水洗三次,再以0.1%升汞浸6-8m in ,最后用无菌水冲洗4次,第一次1-2m in ,第二次5m in ,第三、四次各8m in ,并以无菌滤纸吸干供试材料水分,用无菌剪刀剪下0.1-1c m 的梢尖并剪碎,然后将碎片接种到预先配好的培养基中。
1.2.2 培养基 以改良M S 为基本培养基,附加不同浓度的6-BA (0-2m g L )和I AA 或I BA (0-1m g L ),组成数种培养基,代号为:愈伤组织诱导培养基为P 1-P 5、P 9、P 13,诱导不定芽培养基为P 1、P 3、P 9-P 13,丛生芽伸长培养基为P 9-0、P 9-8,其中P 9-5=P 13。
葡萄脱毒及无毒苗木快速繁育技术
葡萄脱毒及无毒苗木快速繁育技术郭西智;顾红;陈锦永;张威远;张洋;程大伟【摘要】葡萄病毒病被称为葡萄的“癌症”,在我国葡萄生产中普遍存在.目前,我国葡萄苗木繁育多采用枝条直接扦插方式,以农户分散经营为主,苗木市场比较混乱,易带来葡萄病毒积累和重复感染,对生产的危害日益严重.针对目前无病毒良种苗木繁育体系不健全,良种繁育场生产的良种苗木远远不能满足生产的需要,而选用无病毒苗木是防控葡萄病毒病发生的根本途径.本文详细介绍了葡萄无病毒原种的选择、葡萄病毒病的常用检测方法、带毒苗的主要脱除方法、以及无毒苗木的繁育体系及技术流程.【期刊名称】《中外葡萄与葡萄酒》【年(卷),期】2016(000)001【总页数】4页(P27-30)【关键词】葡萄;病毒病;检测;脱毒;快繁【作者】郭西智;顾红;陈锦永;张威远;张洋;程大伟【作者单位】中国农业科学院郑州果树研究所/中国农业科学院果树生长发育与品质控制重点开放实验室,郑州450009;中国农业科学院郑州果树研究所/中国农业科学院果树生长发育与品质控制重点开放实验室,郑州450009;中国农业科学院郑州果树研究所/中国农业科学院果树生长发育与品质控制重点开放实验室,郑州450009;中国农业科学院郑州果树研究所/中国农业科学院果树生长发育与品质控制重点开放实验室,郑州450009;中国农业科学院郑州果树研究所/中国农业科学院果树生长发育与品质控制重点开放实验室,郑州450009;中国农业科学院郑州果树研究所/中国农业科学院果树生长发育与品质控制重点开放实验室,郑州450009【正文语种】中文葡萄病毒病是世界性病害，凡是有葡萄栽培的地区都有病毒病存在。
现已知侵染葡萄的病毒种类达60多种[1]，国内已报道过的葡萄病毒类病害有11 种[2]，其中扇叶病、卷叶病、栓皮病和斑点病等分布广、危害重[3]。
葡萄被病毒浸染后，会造成减少产量、延迟成熟、降低含糖量、影响着色和风味，有的甚至使树势衰弱、落叶乃至死亡。
组培脱毒技术在新疆葡萄快繁育苗中的应用
培 养室 的温 度 控 制在 ２ ＋ ｏ ５ ２Ｃ，并 用 双 管 ４ Ｗ ０ 日光灯 照射 １ｈｄ ２／。
１２１ 外植 体 消毒 、 种 － ． 接
取 “ 香 无 核 ” 新 梢 ， 去 叶 片 ， 留 ３ ４ｍ 紫 的 除 保 －ｃ
的单 芽 茎段 ， 用 自来水 冲洗 １ｍ ｎ 用 蒸馏 水 洗涤 先 ０ ｉ， １ ，在 超净 工作 台上 用 ７ ％酒精 浸 泡一 下 ，再 用 次 ０
０１ ．％Ｌ汞 分 别 浸泡 ３ ５ ７ ９ １ ｍ ｎ 、 、 、 、 Ｉ ｉ ，然 后 用无 菌 水 冲 洗 ４ ５次 ， 以无 菌 滤 纸 吸 干 水 分 ， ～ 并 置于 双 目解 剖镜 下 ， 无菌镊 子 和解剖 针剥 离幼 叶和 叶原基 ， 用 切
天 １～ ０ 夜 间 ８ １ ℃； ８ ２ ℃， ～ ０ 叶菜类 的 苗 白天 １－ ５ ０ １ ℃，
夜间 ３４ － ％。
６９ 病 虫 害 防 治 ．
秧 苗达 到壮 苗标准后 及 时 出苗 。秧 苗包 装容器
应 有一 定强 度 ， 选用 纸箱 、 可 木条箱 或 塑料箱 。远距
离 运输 装苗 量不 易过大 ， 运输 过程 中应采 取控 温 、 保 湿、 防风 、 阳等措 施保 护秧苗 。秧 苗运 输 的适 宜温 遮
除 ， 喷药 防治 ； 苗定植 喷 药预 防病害发 生 。 并 秧
６１ 成 苗 标 准 ．０
平盘 和穴盘 用完后 要 清除基 质 等残 留物 ，可 用 ５１的水 和次氯 酸钠溶 液浸 泡 。 理后 在荫 凉处用 薄 ： 处 膜 密 封 ２ ｈ 再用 清水 冲洗 干净 并 放在 荫 凉处 凉干 ， ４， 然 后储 藏在无 鼠害 、 害 、 虫 干燥 的库房 里备用 。
葡萄茎尖培养脱毒与快繁技术研究
葡萄茎尖培养脱毒与快繁技术研究
本文通过对葡萄病毒病进行脱毒技术探讨以及脱毒后快繁技术研究,建立了简便易行、高效的葡萄茎尖培养脱毒技术体系,通过对夏黑无核葡萄进行扦插基质的筛选,从而筛选出适宜葡萄生长的基质,为无病毒苗的炼苗移栽提供最适宜的基质。
探索出葡萄脱毒后快速繁殖无病毒苗的技术。
主要取得了以下研究成果：(1)研究了茎尖培养、热处理、化学处理以及热处理与化学处理结合4种脱毒方法,热处理结合茎尖培养比单独茎尖培养脱毒效果更好,其中变温热处理比恒温热处理的脱毒成活率和脱毒率高,热处理与化学处理结合脱毒综合效率率最高,但成活率低,操作时间长,茎尖的生长发育较其他的脱毒方法慢。
最适的脱毒方法为变温热处理结合茎尖培养脱毒。
(2)确定了最佳的灭菌处理方案是葡萄单芽茎段灭菌效果最好的是1mol/L 盐酸30s+1%次氯酸钠20min处理；筛选出了夏黑无核、金手指、户太8号、金星无核、甬优一号、红宝石无核六个品种葡萄的最佳初代培养、继代培养、生根培养以及茎尖培养的培养基,建立了六个品种葡萄的组培快繁体系。
(3)河沙：食用菌渣：草炭(3：2：1)混合对夏黑无核葡萄扦插苗质量的综合效果最优,单一基质河沙中扦插的苗木质量最差,在带病毒病枝条扦插保存时以及无病毒苗炼苗移栽时,应选择河沙：食用菌渣：草炭(3：2：1)的基质配方。
葡萄的组培快繁技术
葡萄的组织培养技术湖北第二师范学院1.葡萄外植体的采集和消毒1.1外植体是从植物体上分离下来的用于离体培养的材料。
在该组织培养中，用的培养材料是茎尖，通常切块在0.5厘米左右，如果为培养无病毒苗而采用的培养材料通常仅取茎尖的分生组织部分，其长度在0.1毫米以下。
葡萄脱毒过程中，外植体的大小与脱毒率高低成相关性。
所以选取外植体的大小适宜在葡萄脱毒过程中应要掌握好.葡萄在茎尖培养中，光的效果通常要比暗培养好。
一般多采用光培养的方式，试管苗培养适宜的温度是25+/-2度1.2防止外植体带菌1.2.1选择好外植体采集时期和采集部位1.2.1.1外植体采集以春秋为宜；1.2.1.2优先选择地上部分作为外植体；1.2.1.3阴雨天勿采，晴天下午采集；1.2.1.4采前喷杀虫剂、杀菌剂或套塑料袋。
1.2.2室内或无菌条件下进行预培养。
1.2.3外植体严格灭菌灭菌效果实验多次灭菌和交替灭菌1.3培养材料的消毒1.3.1先将材料用流水冲洗干净，最后一遍用蒸馏水冲洗，再用无菌纱布或吸水将材料上的水分吸干，并用消毒刀片切成小块。
1.3.2在无菌坏境中将材料放入70％洒精中浸泡30－60秒。
1.3.3再将材料移入漂白粉的饱和液或0.01％升汞水消毒10分钟。
1.3.4取出后用无菌水冲洗三、四次。
1.4制备外植体将已消毒的材料，用无菌刀、剪、镊等，在无菌的环境下，剥去芽的鳞片、嫩枝的外皮和种皮胚乳等，叶片则不需剥皮。
“然后切成0.2－0.5厘米厚的小片，这就是外植体。
2.培养基的成分及制备2.1培养基的成分组织培养过程中，外植体生长所需的营养和生长因子，主要是由培养基供应的。
因此，培养基中应包括植物生长必需的16种营养元素和某些生理活性物质。
所有这些物质，可概括为5大类：2.1.1无机营养物培养基的各种盐类中均含有氮、磷、钾、钙、镁、硫、铁、硼、锰、铜、锌、钼、氯。
无机氮可以两种形式供应，即硝态氮和铵态氮。
有些培养基以硝态氮为主，另一些以铵态氮为主，多数二者兼而有之。
常见植物的脱毒与快速繁殖技术
《常见植物的脱毒与快速繁殖技术》一、常见植物培养方式：1、草莓脱毒苗的培养方式主要有微茎尖培养和花粉培养两种。
2、马铃薯病毒鉴定的方法主要有指示植物法、症状鉴定法。
3、通过组织培养获得微型薯的技术关键有两个：单茎节扩大繁殖；微型薯诱导。
4、在葡萄栽培架式，棚架是应用最广泛的类型。
5、草莓脱毒苗的培养方式主要有微茎尖培养和花粉培养两种。
6、菊花生根能力比较强，有两种方法：嫩茎试管生根；无根嫩茎的扦插。
7、菊花的继代增殖有多种技术，多数是诱导愈伤组织产生丛生芽而获得大量的试管苗。
8、百合经茎尖培养脱毒、鉴定合格后，可通过两种继代增殖方式：①经愈伤组织增殖；②诱导分化不定芽。
二、提问：对马铃薯脱毒苗的培养大致分几个阶段？各阶段是怎样操作的？马铃薯茎尖培养脱毒程序：①取材；②消毒；③接种；④培养基；⑤病毒鉴定。
影响脱毒效果的因素：外植体大小；茎尖所处部位；病毒种类及复合感染。
简述苹果花粉培养的过程。
①选取适期花蕾；②花蕾预处理和消毒；③诱导胚状体形成；④诱导生根；⑤移栽。
苹果的栽培管理过程中应注意哪几个问题？①育苗技术；②土壤改良；③施肥方法；④灌溉时期；⑤整形和修剪技术。
草莓无毒苗的繁殖程序分哪几步？草莓无毒苗的繁殖程序可以发为五步，即鉴定出无毒苗、原种种苗培养、原种种苗繁殖、良种种苗繁殖和生产用苗繁殖。
蝴蝶兰怎样用花梗组织培养方法繁殖?蝴蝶兰脱毒：花梗侧芽的消毒与培养——茎尖培养——原球茎诱导——继代培养——原球茎增殖——生根炼苗。
通过原球茎增殖的方法，可大大提高繁殖速度，实现蝴蝶兰生产的工厂化育苗。
香石竹的茎尖脱毒培养操作技术。
香石竹的茎尖脱毒培养操作技术：一般结合热处理：将带毒植株进行盆栽，放入人工控制箱内，采用38-40℃高温处理6-8周，再切1mm 大小的茎尖培养。
说明甘薯脱毒快繁技术的工艺流程。
（1）脱毒：优良品种母株选择；材料消毒；茎尖剥离；茎尖培养；茎尖苗的初级快繁；脱毒鉴定。
（2）快繁：脱毒苗的快繁；原原种的繁育；原种的繁育；种薯的繁育三、甘薯脱毒试管苗栽培管理注意哪些问题？培育壮苗；适当炼苗；精心移栽；控制湿、温、光等条件；适时定植；严防病虫害。
植物组织培养中的快繁与脱毒技术及其应用
植物组织培养是一种重要的生物技术，它能够实现植物的快速繁殖、脱毒和基因转化。
在植物学研究和植物育种领域，植物组织培养技术的应用非常广泛。
本文将深入探讨植物组织培养中的快繁与脱毒技术及其应用，以帮助读者更深入地理解这一重要领域。
1. 快繁技术在植物组织培养中，快繁技术是指利用植物体的一小部分组织或细胞，通过体外条件培养，实现植物的快速繁殖。
这种技术可以大大提高繁殖速度，缩短繁殖周期，是进行新种质创制、遗传改良和疫病防治的重要手段。
快繁技术的主要方法包括离体培养、愈伤组织培养和微繁殖等。
1.1 离体培养离体培养是将植物体表层（如幼叶、幼茎）或内部组织（如胚乳、子叶）分离出来，移入含有适当营养盐和植物生长调节物的培养基中培养。
通过控制培养条件和添加合适的植物生长激素，可以诱导组织分化和再生形成新植株。
1.2 愈伤组织培养愈伤组织是植物在受到外界刺激或损伤后，经过细胞分裂和组织再生形成的一种未分化的组织。
愈伤组织培养是利用这种特殊组织进行快速繁殖的一种方法，通过控制培养条件和添加植物生长调节物，可以诱导愈伤组织再生形成新植株。
1.3 微繁殖微繁殖是利用植物的微小芽或胚珠进行快速繁殖的方法。
通过培养条件的控制和植物激素的添加，可以诱导微小芽或胚珠快速生长并形成新植株。
2. 脱毒技术在植物组织培养中，由于植物体内可能携带病毒、细菌等病原体，因此会影响到组织培养的效果。
脱毒技术是为了解决这一问题而出现的一种重要技术。
脱毒技术能够有效地清除植物体内的病原体，提高组织培养的成功率和繁殖效率。
2.1 生物脱毒生物脱毒是利用生物制剂对植物体内的病原体进行清除的方法。
通过培养环境中添加含有特定菌株或真菌的生物剂，可以促进植物体内病原体的清除和组织的健康再生。
2.2 生理脱毒生理脱毒是利用植物自身的生理代谢特性进行脱毒的方法。
通过调节培养条件和添加特定的营养物质，可以激活植物的生理代谢活性，加速病原体的清除和组织的再生。
植物组织培养脱毒快繁技术的综述
植物组织培养脱毒快繁技术的综述李西雁（广西职业技术学院农业技术工程系2002级应用生物技术专业）摘要：脱除病毒是植物组织培养深入探讨研究中的一个技术难题。
本文结合在桂林莱茵生物科技股份有限公司的实践情况，简要介绍植物组织培养的基本原理和方法，综述植物脱除病毒的热处理、茎尖培养和抗病毒药剂三种方法的原理、发展史和技术方法，并介绍了几种常用的病毒检测方法。
本文以马铃薯为例，重点介绍了利用热处理加茎尖组织培养法获得马铃薯脱毒苗的具体技术方法，脱毒率可达100%。
同时还对植物组织培养脱毒快繁技术的应用前景作了分析。
关键词：茎尖培养，组织培养，快繁脱毒技术，病毒检测，应用前景1 植物组织培养研究概况1.1 研究简史自从1943年怀特（White）提出植物细胞“全能性”（Totipotency）学说及诸多后学者（Steward，1958，Guha和Marteshwari，1964）相继证实后，引发植物组织和细胞培养快繁技术的勃然兴起。
我国的专家学者在20世纪70年代后也在此领域做了大量的研究和开发工作，创造了很多新方法、新技术，提出不少新成果，开拓了植物组织培养快繁技术的新局面[1]。
目前采用组织培养脱病毒快繁及离体快繁生产株苗的技术已发展相当成熟[2]。
脱毒株苗具有无杂菌、适应能力较强、繁育较快、质量优、抗性好、分蘖性强、繁殖系数高、大批量生产、周年供应、便于运输等优点，已得到有关专家的鉴定及高度评价和种植试验区、种植产区果农的认可。
例如脱毒马铃薯、脱毒红薯、脱毒生姜、脱毒大蒜、脱毒草莓、脱毒苗木、脱毒花卉等等，已成为现代农民致富的新宠[2]。
1.2 植物组织培养和脱毒快繁的定义植物组织培养（Plant tissue culture）是指在无菌的条件下，将离体的植物（根、茎、叶、花、果实、种子等）、组织（形成层、花药组织、胚乳、皮层等）、细胞（体细胞和生殖细胞）以及原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，使其长成完整的植株。
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小结：
葡 萄 的 脱 毒 与 快 繁 形态特征和生物学习性 选材接种 培养基 葡萄的组织培养 苗分化 根分化 脱毒 脱毒与快繁 快繁 热处理脱毒 茎尖培养脱毒 无病毒苗的鉴定 材料与消毒 培养条件 生长与分化 生根培养 试管苗的驯化与移栽
• 用抗血清法、电子显微镜检测法、ELISA法 或指示植物进行病毒鉴定，以确保脱毒后 的试管苗不含病毒。
（二）快繁
• 1、材料与消毒 • 取经过脱毒的枝条稍1~2cm，用5%的次 氯酸钠aq消毒2~3min，用无菌水冲洗3次， 再在0.1%升汞aq中浸泡2min，用无菌水冲 洗4次。把芽放在解剖镜下，无菌条件下， 去除幼叶和叶原基，使生长点暴露。用刀 切下含有1~2个叶原基，大小为0.2~0.3mm 的生长点接种于培养基上。
Hale Waihona Puke 3、生长与分化• 接种成活的茎尖在一个月左右开始分化出 芽和侧芽，两个月左右形成芽丛，即可进 行大量增殖。每月继代一次，每个芽丛切 成10个。
4、生根培养
• 剪取2~3cm长的无根幼苗，插于上述培养 基上，1~2周内幼苗生根，一个月形成发达 的根系，同时长出5~6片新叶，生根率达 90%以上。
5、试管苗的驯化与移栽
（3）将感染材料的修面芽插入健康指示植物的蔓 中，然后在38℃的环境中保持2个月，以后取出枝 条和接种芽继续生长。
2、茎尖培养脱毒
• 在25℃，相对湿度80%，每日16h的长日照 条件下水培生成新芽，剥离切取带1~3个叶 原基0.2~0.3mm茎尖进行立体培养，即可 获得脱毒苗。
3、无病毒苗的鉴定
2、培养条件
• 培养基 • 茎尖分化与继代培养培养基：1/2MS+6-BA 0.5mg/L+LH100mg/L+NAA0.01mg/L+GA0.2mg /L,2%蔗糖，0.6%琼脂，PH=5.8 • 生根培养基： 1/2MS+IAA0.4mg/L+NAA0.05mg/L • 温度：25±2℃ • 光照：1000lx，16小时
一、形态特征和生物学习性
葡萄属落叶木质藤本植物，葡萄地 上部分的茎细。节上具有卷须，可向上 攀援。叶近圆型或卵型，3～5裂。 葡萄原产于温带地区，不太抗寒。 葡萄的根系抗寒力很弱，在－5～－7℃ 时即受冻。
二、葡萄的组织培养
1、选材接种：从生长旺盛的葡萄新梢顶端取1～2 ㎝的茎尖,消毒,分离出约2mm长的茎尖，接种到 培养基上。 2、培养基：MS培养基，再添加6-BA 1～2mg/L， NAA0.01mg/L，LH100mg/L，蔗糖2%，琼脂0.6%， 而B5培养基愈伤组织化严重，茎尖生长不好。 3、苗分化：6-BA0.5mg/L，同时添加GA30.2，黑 暗处理可促进幼茎的伸成，提高成苗率。 4、根分化：将苗转入 MS+IAA 0.4mg/L+NAA 0.05mg/L 培养基中进行生根。
三、脱毒与快繁
（一）脱毒 葡萄受到26种病毒的危害,主要有卷 叶病毒、栓皮病毒、扇叶病毒、黄脉病毒 和斑点病毒等。由于病毒的危害，葡萄的 长势减弱，产量降低，果实的糖分含量减 少，风味变劣。
葡萄卷叶病是危害最大的病毒病。
1、热处理脱毒：
（1）将材料置于38℃，CO21200mg/L的人工空气 侯箱内。经30min处理，较易从枝条尖端或休眠芽 中除去扇叶病毒。其他病毒较难消除。 （2）直接将葡萄蔓浸泡在50℃的 温水中10～ 20min，可以治疗皮尔斯病。