鲢鱼骨胶原多肽螯合钙的制备研究_范鸿冰
以猪骨为原料制备多肽螯合钙的工艺研究的开题报告
以猪骨为原料制备多肽螯合钙的工艺研究的开题报告一、研究背景及意义猪骨是一种常见的食品加工副产品，含有大量的钙、磷等矿物质和胶原蛋白等蛋白质素材，尤其是其中富含的钙元素，是人体生长发育、骨骼健康所必需的，因此猪骨已成为人们重视的营养保健品之一。
同时钙离子在生物体内也有其独特的生理功能，包括骨骼形成、神经传导、肌肉收缩等。
近年来，随着人们对健康的关注和对天然营养品的需求增加，研究和开发从猪骨中提取出高效的钙质营养成分已成为热点领域。
而多肽螯合钙则是一种新型的钙质营养品，其将多肽与钙离子结合，提高了钙的生物利用率和稳定性，能更好地满足人体对钙的需求。
因此，本研究旨在利用猪骨为原料，通过酶解及纯化技术，将猪骨中的蛋白质提取出多肽，并将多肽与钙离子螯合，制备出多肽螯合钙，为开发猪骨资源提供一种利用途径，同时研究多肽螯合钙的性质和应用价值，对于提高人们的饮食营养水平和促进健康生活方式具有重要的科学意义。
二、研究内容及步骤本研究拟从以下几个方面进行：1.优化猪骨提取多肽酶解工艺，主要包括猪骨粉碎方法、酶的种类、酶解条件等。
2.纯化多肽产品，主要采用超滤、离子交换层析等技术对酶解产物进行分离纯化，得到多肽产品。
3.螯合钙离子，利用化学方法，将多肽与钙离子进行化学结合，制备出多肽螯合钙。
4.对多肽螯合钙的物理化学性质进行分析和表征，主要包括元素分析、峰分析等。
5.对多肽螯合钙的生物活性进行测试，主要包括生物利用率测定、体外模型测试等。
三、预期成果1.优化猪骨提取多肽酶解工艺，高效快捷地一步提取出多肽。
2.制备出多肽螯合钙，并进行物理化学性质和生物活性的分析和测试。
3.探索多肽螯合钙的应用价值，为其进一步的研发提供理论基础和技术支撑。
四、研究意义1. 有助于开发猪骨资源，降低资源浪费，提高资源利用率。
2. 为人们提供一种天然、健康、高效的钙质营养品，对于提高人们的饮食营养水平和促进健康生活方式具有重要的科学意义。
3. 对多肽螯合钙的制备工艺进行探索，对于类似多肽螯合物的生产研发提供参考和支持。
淡水鱼骨肉制备天然复合氨基酸肽螯合钙
3.4.3 产品试制
采用获得的较佳工 艺条件，以鮰鱼鱼排 和鲢鱼肉试制出天然 复合氨基酸肽螯合钙 产品样品，产品得率 为7.52%。
序号 支出项目 1 2 3 4 办公费 邮电费 国内差旅费
计划支出（元） 已经支出（元） 500 100 500 0 0 480.5 1605.1
专业材料购置费 1400
3.2 鱼肉氨基酸 肽提取液提取工 艺的确定（以酶 种类、加酶量、 时间、温度、pH 做单因素实验）
100.00% 80.00%
DH/%
100.00% 80.00%
DH/%
60.00% 40.00% 20.00% 0.00% 0 1000 2000 3000 4000
60.00% 40.00%20.00%源自5合计2500
2085.6
在整个实验过程中，我们有实验进展顺利的开心，
也有实验不顺的挫折感，但一路走来，在老师和大家的
一起努力下，我门获益匪浅：学会了正视实验的态度， 学会了合作，学会了思考和解决问题的信心等等。这是 一次很好的经历和学习的机会，我们将进一步提高自我， 锻炼自我，完善自我，争取做的更好！
DH/%
80.00% 78.00%
76.00%
74.00% 72.00% 70.00% 4 6 PH 8 10
温度/℃
3.3 鱼肉氨基酸肽提取液提取工艺的确定（以提 取温度、时间、加酶量、PH进行L16(45)正交试验） 由极差分析可知，影响白鲢鱼肉酶解的因素主次顺序 为：D>A>B>C（即：PH>酶解温度>酶解时间>加酶量。 白鲢鱼肉酶解的最佳工艺条件为A3B4C2D1 ,即 酶解PH=4 中性酶加酶量2500U/g（0.3126g） 酶解温度50℃ 酶解时间6h 此极差分析结果与直接分析结果一致。
鱼骨钙肽螯合物的制备和性质
1.前言1.1 鳕鱼的基本成分及研究现状随着我国渔业捕捞与养殖产业的不断发展，水产品的产量逐年增加。
我国渔业养殖产量约占全球养殖产量的70%，是世界上国家中唯一养殖产量超过捕捞量的国家。
据统计，2008年我国淡水产品的总产量就高达2000多万吨，较去年增长了3.12%[1]。
水产品产量逐年增加的同时产生的下脚料如鱼头、鱼骨等也越来越多。
目前我国对下脚料的利用方面主要集中于水解蛋白、鱼露等方面，如何高效地利用水产品下脚料成为了当今热门研究的一个重要方面，也是推进科学发展观、建设高效节能社会的一项重要举措。
鳕形目鱼类作为一种分布及其广泛的鱼类，在各大洋均有分布。
这种鱼类生活主要生活在深海中下层以及底层，属于冷水性鱼类的范畴[2]。
其中鳕科和无须鳕科中有需要中重要的经济鱼类，具有较高的经济价值。
鳕鱼是我国远洋捕捞的重要捕捞鱼种之一，每年的捕捞量超过10万吨，本研究以鳕鱼骨为原料，对其进行高效利用，有望开发一种高效胶原蛋白提取工艺及高效钙补充剂，推进深海鱼的综合开发利用。
1.2 胶原蛋白1.2.1 胶原蛋白的概述胶原蛋白的定义是：一种结构蛋白，主要存在于细胞外基质（ECM），结构中含有由α链组成的一个或数个三螺旋结构区域，即胶原域[3]。
胶原蛋白作为一种生物组织结构蛋白，是生物机体结缔组织和间质组织主要的纤维组织成分，也是哺乳动物体内含量最多、分布最广的一类功能性蛋白，占蛋白总量的25%左右。
在许多海洋生物体内，胶原蛋白占总蛋白含量高达80%以上。
有支撑保护机体、结合及形成界隔等作用，还具有转导信号、运输细胞因子和生长因子等功能。
胶原蛋白作为在食品、医药、组织工程、化妆品等领域被广泛研究的重要蛋白质，具有优良的生物相容性，易生物降解性，低抗原性的特性使得其在人体更易被人体吸收，同时能促进细胞的成活生长，促进血小板的凝结等[4]。
1.2.2 胶原蛋白的分类表1-1 胶原蛋白的类别、组成及其在组织中的分布（Gelse et al.，2003）[3] Table 1-1 Composition and distribution of various collagen types其中成纤维胶原蛋白含量最丰富，分布最广泛。
鮟鱇鱼骨胶原多肽螯合钙的工艺优化
食品研究与开发F ood Research And Development圆园18年11月第39卷第21期DOI ：10.3969/j.issn.1005-6521.2018.21.022基金项目：水产动物遗传育种中心上海市协同创新中心（ZF1206）；上海市科委工程中心建设（11DZ2280300）作者简介：何云（1990—），女（汉），硕士研究生，研究方向：水产品加工。
*通信作者：包建强（1963—），男（汉），教授，研究方向：食品冷冻。
鮟鱇鱼骨胶原多肽螯合钙的工艺优化何云，汪有先，赵淑静，包建强*（上海海洋大学食品学院，上海201306）摘要：为减少水产品加工过程中副产物对环境的污染与资源的浪费、提高水产品的附加值，对鮟鱇鱼骨制备胶原多肽螯合钙的工艺进行优化。
以鮟鱇鱼骨为原料，在适宜条件下制备小分子胶原多肽，并与鱼骨钙提取液进行螯合，制成胶原多肽螯合钙，分别考察螯合温度、鱼骨胶原多肽与鱼骨浸提液的质量比、时间、pH 值对螯合率和螯合物中钙含量的影响。
根据单因素试验结果，对胶原多肽螯合钙工艺进行四因素三水平正交试验，得到鮟鱇鱼骨胶原多肽螯合钙的最佳工艺参数为螯合温度30℃、时间50min 、鮟鱇鱼鱼骨胶原多肽与钙浸提液质量比2∶1、pH 6，此条件下的螯合率和螯合物中的钙含量分别为98.00%和21.29%。
对螯合钙进行氨基酸组成成分分析，其中，具备典型的胶原多肽氨基酸的含量占总氨基酸含量的17.37%。
关键词：鮟鱇鱼骨；胶原多肽；螯合钙；氨基酸分析Process Optimization of Calcium Chelate Collagen Peptide Chelate of Lophius litulon BoneHE Yun ，WANG You-xian ，ZHAO Shu-jing ，BAO Jian-qiang *（College of Food Science ，Shanghai Ocean University ，Shanghai 201306，China ）Abstract ：In order to reduce the environmental pollution and waste of by-products during the process of aquatic products processing and to increase the added value of aquatic products ，the process of preparation collagen chelate calcium chelate of Lophius litulon bone was studied.Collagen peptide chelated calcium was preparedunder the suitable conditions with the fish bones as raw materials ，and the effects of temperature ，mass ratio offish collagen peptide to fish bone extract ，time ，pH on chelating rate and calcium content in chelate impact.According to the results of single factor test ，the collagen peptide chelating calcium process was carried out three leves orthogonal experiment of four factors ，and the optimum technological parameters of calciumchelation for collagen peptide were obtained at 30℃for 50min.The ratio of calcium chelate to Ca 2+and Ca 2+inthe chelating solution was 2∶1and pH 6，respectively ，and the content of calcium in the chelate was 98.00%and 21.29%，respectively.The chelated calcium amino acid composition analysis ，in which ，with a typicalcollagen polypeptide amino acid content of 17.37%of the total amino acid content.Key words ：Lophius litulon bone ；collagen peptides ；chelated calcium ；amino acid analysis引文格式：何云，汪有先，赵淑静，等.鮟鱇鱼骨胶原多肽螯合钙的工艺优化[J].食品研究与开发，2018，39（21）：133-138HE Yun ，WANG Youxian ，ZHAO Shujing ，et al.Process Optimization of Calcium Chelate Collagen Peptide Chelate of Lophius litulon Bone[J].Food Research and Development ，2018，39（21）：133-138鮟鱇鱼（Lophius litulon ），俗称结巴鱼、哈蟆鱼、海哈蟆、琵琶鱼等，属冷温性底层鱼类，常栖伏海底，于世界各大海洋均有分布，如大西洋、太平洋和印度洋。
鳗鱼骨胶原肽钙螯合物的制备及其稳定性和Caco-2吸收特性
鳗鱼骨胶原肽钙螯合物的制备及其稳定性和Caco-2吸收特性钱跃威，徐瀚麟，吕奇晏，陈智超，滕慧，陈雷*（福建农林大学食品科学学院，福建福州350002）摘 要：结合胃蛋白酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶制备具有高钙结合能力的鳗鱼胶原蛋白肽（eel bone collagen peptide，EBCP）。
通过优化确定制备EBCP-Ca的最佳条件为40 ℃、pH 7.5、40 min、多肽与钙质量比5∶1，此条件下钙螯合率达80%以上。
荧光光谱、傅里叶变换红外光谱和扫描电子显微镜检测结果表明，胶原蛋白肽的羧基和氨基氮原子可能会螯合钙，从而形成EBCP-Ca。
EBCP-Ca可在不同温度、pH值条件下保持稳定性并进行模拟胃肠道消化，同时EBCP-Ca对Caco-2细胞呈现低毒性作用。
另外，使用Caco-2细胞单层模型验证EBCP-Ca在体外的钙摄取率，研究EBCP-Ca浓度和培养时间对Caco-2细胞钙离子质量浓度和碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，AKP）活性的影响。
结果表明，EBCP-Ca能提高AKP活性，进而有利于促进人体胃肠道中钙的吸收。
该研究为开发新的钙补充剂和鳗鱼骨的高价值利用提供了一定科学依据。
关键词：鳗鱼骨；骨钙结合肽；稳定性；细胞吸收Preparation and Stability of Calcium-Chelating Peptide and Its Absorption Characteristics in Caco-2 Cells QIAN Yuewei, XU Hanlin, LÜ Qiyan, CHEN Zhichao, TENG Hui, CHEN Lei*(College of Food Science, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China) Abstract: In this study, pepsin, trypsin, and chymotrypsin were used in combination to prepare eel bone collagen peptide (EBCP) with high calcium-binding ability. The optimal preparation conditions of EBCP-calcium chelate that provided maximum calcium chelation rate of over 80% were determined as follows: 40 ℃, pH 7.5, 40 min, and mass ratio of peptide to calcium 5:1. Fluorescence, Fourier transform infrared (FTIR) spectroscopy and scanning electron microscopic (SEM) observation indicated that the carboxyl and amino nitrogen atoms of EBCP could chelate calcium to form EBCP-Ca. EBCP-Ca was stable toward temperature, pH and simulated gastrointestinal digestion. In addition, this chelate exhibited low toxicity to mouse Caco-2 cells. In addition, the Caco-2 cell monolayer model was used to evaluate the calcium uptake-promoting activity of EBCP-Ca in vitro. The effects of EBCP-Ca concentration and culture time on the calcium content and alkaline phosphatase (AKP) activity in Caco-2 cells were investigated. It was demonstrated that EBCP-Ca enhanced the AKP activity, thereby promoting the absorption of calcium in the human gastrointestinal tract. This research provides a scientific basis for the development of new calcium supplements and the high-value utilization of eel bones.Keywords: eel bone; calcium-binding peptide; stability; cell absorptionDOI:10.7506/spkx1002-6630-20200706-078中图分类号：TS254.9 文献标志码：A 文章编号：1002-6630（2020）24-0001-08引文格式：钱跃威, 徐瀚麟, 吕奇晏, 等. 鳗鱼骨胶原肽钙螯合物的制备及其稳定性和Caco-2吸收特性[J]. 食品科学, 2020, 41(24): 1-8. DOI:10.7506/spkx1002-6630-20200706-078. QIAN Yuewei, XU Hanlin, LÜ Qiyan, et al. Preparation and stability of calcium-chelating peptide and its absorption characteristics in Caco-2 cells[J]. Food Science, 2020, 41(24): 1-8. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/ spkx1002-6630-20200706-078. 收稿日期：2020-07-06基金项目：国家自然科学基金青年科学基金项目（31801459）第一作者简介：钱跃威（1996—）（ORCID: 0000-0001-9263-0568），男，硕士，研究方向为分子营养学。
一种鳄鱼骨胶原螯合钙的制备方法[发明专利]
![一种鳄鱼骨胶原螯合钙的制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/3c4920f45ebfc77da26925c52cc58bd63186938a.png)
(10)申请公布号(43)申请公布日 (21)申请号 201510306828.4(22)申请日 2015.06.05A61K 38/39(2006.01)C12P 21/06(2006.01)A23L 1/29(2006.01)A61P 3/02(2006.01)(71)申请人杨志华地址430000 湖北省武汉市武昌区友谊大道特一号友谊国际1-3-601(72)发明人郑正炯 吴颖 江丽 张田骏(74)专利代理机构武汉开元知识产权代理有限公司 42104代理人陈懿(54)发明名称一种鳄鱼骨胶原螯合钙的制备方法(57)摘要本发明公开了一种鳄鱼骨胶原螯合钙的制备方法，包括以下工艺步骤：步骤一、取材；步骤二、冷冻；步骤三、常温处理；步骤四、蒸煮；步骤五、微波处理；步骤六、粉碎；步骤七、超微粉碎；步骤八、第一次酶解；步骤九、第二次复合酶解；步骤十、将通过先后二次酶解后的物料置入离心机内进行分离；步骤十一、浓缩再经喷雾干燥后得到骨胶原蛋白肽粉；步骤十二、将分离后的所述骨粉取出进行酸解提取骨钙粉；步骤十三、离心得骨钙粉；步骤十四、进行水浴螯合；步骤十五、取得粉末状鳄鱼骨胶原螯合钙。
本发明胶原螯合钙质量高，可广泛应用于医药、食品、保健等领域。
(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书2页 说明书5页(10)申请公布号CN 104958756 A (43)申请公布日2015.10.07C N 104958756A1.一种鳄鱼骨胶原螯合钙的制备方法，其特征在于：所述的胶原螯合钙的制备方法，包括以下工艺步骤：步骤一、取材，取鳄鱼骨材且除去骨间带有的血、肉、结缔组织，但保留骨上的筋和软骨，再用40～50℃温水清洗；步骤二、冷冻，将上述清洗过的鳄鱼骨材置入冰柜中冷冻，温度为-30℃以下，冷冻时间为40～60小时；步骤三、常温处理，从所述冰柜中取出鳄鱼骨材，使其恢复到室温20～25℃；步骤四、蒸煮，经常温处理的鳄鱼骨材再经130～150℃的高温、0.169MPa～0.375MPa 的高压蒸煮1～3小时；步骤五、微波处理，将上述蒸煮后的鳄鱼骨材取出，待恢复到常温后置入微波炉内，经微波低温间隙处理20～30分钟，低温为60～100℃；步骤六、粉碎，将微波处理干燥后的鳄鱼骨材置入粉碎机内粉碎，粉碎后最大颗粒不超过1.5立方厘米；步骤七、超微粉碎，经上述粉碎后的鳄鱼骨材再进行超微粉碎，粉碎后颗粒在600目以下；步骤八、第一次酶解，将上述粉碎后的鳄鱼骨材置入水浴锅内，调节锅温为35～37℃，PH7.5～8，在所述锅内加入碱性蛋白酶，其加入质量为所述鳄鱼骨材的1.5％，酶解1.5～2小时之后再沸水灭活十分钟；步骤九、第二次复合酶解，完成所述的第一次酶解后将水浴锅内温度调节到50～55℃，PH7.0～7.5，在水浴锅内再加入骨胶原酶、风味复合酶、其加入质量各为所述鳄鱼骨材的0.5％，酶解2～2.25小时之后，沸水灭活十分钟；步骤十、将通过先后二次酶解后的物料置入离心机内进行分离，取得两部分物料，即第一部分为上清小分子胶原蛋白液，第二部分为沉淀物即骨粉；步骤十一、将所述的另一部分上清小分子胶原蛋白液取出进行浓缩，再经喷雾干燥后即得到骨胶原蛋白肽粉；步骤十二、将分离后的所述骨粉取出进行酸解提取骨钙粉，其提取的程序是：首先在骨粉中加入1.5～2倍骨粉体积的蒸馏水，再加入骨粉体积的10％的柠檬酸和骨粉体积的8％的乳酸、调节温度为95～110℃，提取时间为2小时；步骤十三、经所述步骤十二酸解后得到的液体通过加等倍水稀释，调PH酸碱中和至中性，再一次置入离心机内离心得沉淀物即为骨钙粉；步骤十四、取所述的骨胶原蛋白肽粉和骨钙粉，并按骨胶原蛋白肽粉与骨钙粉之比为1:0.4或1:1配制，进行水浴螯合；步骤十五、经所述步骤十四螯合后的物资通过无水乙醇沉淀，离心去上清，除去游离钙，再经喷雾干燥，即取得粉末状鳄鱼骨胶原螯合钙。
白鲢鱼骨胶原多肽螯合钙的工艺优化
白鲢鱼骨胶原多肽螯合钙的工艺优化刘闪;刘良忠;李小娜;刘亮;王燕【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2014(035)010【摘要】为减少淡水鱼加工过程中副产物对环境的污染和资源的浪费、提高淡水鱼的附加值,对白鲢鱼骨制备胶原多肽螯合钙的工艺进行研究.以白鲢鱼骨和氯化钙为原料,在一定条件下制备胶原多肽螯合钙,考察温度、鱼骨胶原多肽与氯化钙的质量比、时间、pH值对螯合率和螯合物中钙含量的影响.根据单因素试验结果,对胶原多肽螯合钙工艺进行四因子二次正交旋转设计优化,得到鱼骨胶原多肽螯合钙的最佳工艺参数为温度42℃、时间38 rmin、鱼骨胶原多肽与氯化钙的质量比2.1∶1、pH 6.8,此条件下的螯合率和螯合物中的钙含量分别为80.4％和12.1％.对螯合钙进行氨基酸组成成分分析,其总氨基酸含量为61.03％,且具备典型的胶原蛋白氨基酸组成特征.红外光谱扫描和电镜扫描观察表明:钙离子与胶原多肽发生了螯合反应,结合方式有离子结合、配位结合和吸附作用.【总页数】6页(P76-81)【作者】刘闪;刘良忠;李小娜;刘亮;王燕【作者单位】武汉轻工大学食品科学与工程学院,武汉市水产品加工工程技术研究中心,湖北武汉 430023;武汉轻工大学食品科学与工程学院,武汉市水产品加工工程技术研究中心,湖北武汉 430023;武汉轻工大学食品科学与工程学院,武汉市水产品加工工程技术研究中心,湖北武汉 430023;武汉轻工大学食品科学与工程学院,武汉市水产品加工工程技术研究中心,湖北武汉 430023;武汉轻工大学食品科学与工程学院,武汉市水产品加工工程技术研究中心,湖北武汉 430023【正文语种】中文【中图分类】TS201.2【相关文献】1.钙螯合羊骨胶原多肽的制备及表征分析 [J], 韩克光;甄守艳;范华;高文伟;樊玮鑫;吴锁柱;霍乃蕊2.钙螯合羊骨胶原多肽抑制骨质疏松发生的RANK/RANKL/OPG信号机制 [J], 韩克光;霍乃蕊;常泓;申勇涛;原恺;范华;陈静;金淑秀;古少鹏;田文霞;张鼎3.鲢鱼骨胶原多肽螯合钙的制备研究 [J], 范鸿冰;汪之颖;刘鹏;徐萍;罗永康4.鲢鱼骨胶原多肽螯合钙的制备研究 [J], 范鸿冰;汪之颖;刘鹏;徐萍;罗永康;5.鮟鱇鱼骨胶原多肽螯合钙的工艺优化 [J], 何云;汪有先;赵淑静;包建强因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
[鱼回]鱼骨胶原多肽的制备工艺研究
[鱼回]鱼骨胶原多肽的制备工艺研究孟昌伟;陆剑锋;宫子慧;林琳;叶应旺;姜绍通【期刊名称】《肉类工业》【年(卷),期】2011(000)009【摘要】鱼骨中胶原蛋白含量丰富，本研究采用碱性蛋白酶和风味蛋白酶对鲴鱼骨进行分步酶解制备骨胶原多肽。
通过单因素和正交优化实验，确定碱性蛋白酶水解鲴鱼骨胶原蛋白的最佳工艺条件为：料液比（w／v）4：50，酶解温度45％，加酶量4％，pH值8，酶解时间3h，在此条件下，水解度达到39．49％。
风味蛋白酶分步酶解的最佳工艺条件为酶解温度50％，加酶量4％，pH值7．5，酶解时间3h，在此条件下，水解度达到47．2％，水解产物的风味在一定程度上也得到了改善。
【总页数】5页(P35-39)【作者】孟昌伟;陆剑锋;宫子慧;林琳;叶应旺;姜绍通【作者单位】合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽合肥230009;合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽合肥230009;合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽合肥230009;合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽合肥230009;合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽合肥230009;合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽合肥230009【正文语种】中文【中图分类】TS59【相关文献】1.鲢鱼骨胶原多肽螯合钙的制备研究 [J], 范鸿冰;汪之颖;刘鹏;徐萍;罗永康2.鲢鱼骨胶原多肽螯合钙的制备研究 [J], 范鸿冰;汪之颖;刘鹏;徐萍;罗永康;3.斑点叉尾(鱼回)鱼骨制取胶原蛋白和骨粉的试验研究 [J], 吴缇;陈舜胜4.斑点叉尾(鲴)鱼骨胶原多肽螯合钙的制备及其特征 [J], 陆剑锋;孟昌伟;李进;宫子慧;林琳;叶应旺;姜绍通5.鲢鱼骨胶原多肽的制备及其抗氧化活性研究 [J], 李军; 罗娟; 涂宗财; 张露因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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第10卷第2期2014年4月南方水产科学South China Fisheries Science Vol.10，No.2Apr.，2014doi ：10.3969/j.issn.2095－0780.2014.02.011收稿日期：2013-10-03；修回日期：2013-12-10资助项目：现代农业产业技术体系建设专项资金（CAＲS-46-24）作者简介：范鸿冰（1991－），男，硕士研究生，从事水产品加工研究。
E-mail ：fanhongbingcau@ 通信作者：罗永康（1964－），男，教授，博导，从事水产品贮藏与加工研究。
E-mail ：luoyongkang@ 鲢鱼骨胶原多肽螯合钙的制备研究范鸿冰1，汪之颖1，刘鹏2，徐萍2，罗永康1（1.中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京100083； 2.山东翰龙生物科技有限公司，山东滨州256600）摘要：文章探讨了以鲢（Hypophthalmichthys molitrix ）鱼骨为原料，采用风味蛋白酶酶解制备骨胶原多肽水解液，剩余骨渣经乳酸提取制备骨粉酸解液（钙液），研究其通过螯合制备鲢鱼骨胶原多肽螯合钙的工艺条件。
分析了酶解时间对鲢鱼骨蛋白酶解产物产品品质和功能特性（溶解性和热稳定性）的影响以及采用乳酸提取鲢鱼骨中钙时提取温度对钙溶出率的影响，并以螯合率为指标，考察pH 、时间、温度和多肽液与钙液体积比对螯合反应的影响。
结果表明，在温度50ħ，按原料鱼排质量0.09%加入风味蛋白酶酶解30min 制备出的鲢鱼骨胶原多肽具有良好的产品品质和功能特性；乳酸提钙时提取温度对钙溶出率没有显著性影响（P ＞0.05）；在pH 8、温度25ħ条件下，多肽液与钙液体积比1ʒ1反应40min 得到的鲢鱼骨胶原蛋白螯合钙螯合率最高（85.24%）。
关键词：鲢；鱼骨；多肽水解液；乳酸钙液；螯合；多肽螯合钙中图分类号：S 986.1文献标志码：A文章编号：2095－0780－（2014）02－0072－08Preparation and research of collagen polypeptide chelatedcalcium from fishbone of silver carpFAN Hongbing 1，WANG Zhiying 1，LIU Peng 2，XU Ping 2，LUO Yongkang 1（1.College of Food Science and Nutritional Engineering ，China Agricultural University ，Beijing 100083，China ；2.Shandong Hanlong Biological Technology Co .，Ltd .，Binzhou 256600，China ）Abstract ：We investigated the technological parameters in preparation of collagen polypeptide chelated calcium （CPCC ）from fish-bone of silver carp （Hypophthalmichthys molitrix ）which were chelated by collagen polypeptide hydrolysates （CPH ），hydrolyzed by flavourzyme and calcium extract （CE ），and extracted with lactic acid from fishbone to explore the effect of hydrolysis time on the quality and functional properties （solubility and heat stability ）of CPH and effect of extraction temperature on the concentration of calcium of CE ，as well as influence of chelation parameters （pH ，time ，temperature and volume ratio of CPH to CE ）on the che-late rate of CPCC.The optimal quality and functional properties for preparation of CPH were obtained when the fish was hydrolyzed at 50ħfor 30min by flavourzyme with an addition of 0.09%of the weight of fishbone.Extraction temperature of lactic acid had no significant effect on the concentration of calcium of CE （P ＞0.05）.The optimal parameters for chelation of CPCC were determined as ：pH 8，25ħ，40min and the volume ratio of CPH to CE 1ʒ1，under which the chelation rate reached 85.24%.Key words ：silver carp ；fishbone ；polypeptide hydrolysate ；calcium extract ；chelate ；polypeptide chelated calcium淡水鱼作为一种高蛋白低脂肪营养丰富的健康食品，已经逐渐成为中国居民日常饮食结构中的重要组成部分。
2012年中国淡水产品总产量约2874ˑ104t ，比上年增长6.65%［1］。
多年来渔业的蓬勃发展不断对其加工技术提出新的要求，但就目前来看，淡水鱼加工技术相对还比较薄弱。
淡水鱼加第2期范鸿冰等：鲢鱼骨胶原多肽螯合钙的制备研究73工过程中去除可食部分，鱼鳍、鱼内脏、鱼骨等部位往往被视为废弃物丢弃，或仅作为肥料、饲料，造成淡水鱼资源的极大浪费。
废弃鱼骨在总废弃物占有较大比例，因此加强对鱼骨资源的开发，实现鱼骨的有效利用，不仅有助于降低生产成本，提高渔业产品的附加值，同时还有利于减少环境污染。
鱼骨自身含有大量的胶原蛋白和钙（Ca）、磷（P）、锌（Zn）、铁（Fe）等矿物质元素［2］，是开发鱼类蛋白多肽及补钙产品的良好资源。
鱼骨作为一种优良的天然钙源，Ca与P近似2ʒ1，满足人体对钙磷吸收比例的需要［2－3］。
GILDBEＲG等［4］、甄润英等［5］和杨露等［6］分别利用蛋白酶处理在鳕（Gadus morhua）、鲶鱼（Silurus asotus）和马面鲀（Navodon septentionalis）鱼骨中提取骨胶原蛋白或制备具有较高生物活性的骨胶原多肽。
鱼骨中钙的提取主要通过高温煅烧法、有机酸提取法、螯合法等方法［7－10］，制备出主成分为碳酸钙、乳酸钙及螯合钙等多种补钙制剂。
梁春辉等［11］通过比较碳酸钙、葡萄糖酸钙和胶原多肽螯合钙3种补钙制剂对生长期小鼠的壮骨作用发现，胶原多肽螯合钙补钙效果显著优于其他补钙制剂。
然而，目前胶原多肽螯合钙制备过程中的钙源多为无机钙源［氯化钙（CaCl2）等］［9，12］，因此需要更多地开展从鱼骨自身提取的有机钙源用于制备胶原多肽螯合钙的工艺研究。
在中国，鲢（Hypophthalmichthys molitrix）属大宗淡水养殖鱼类，肉薄、刺多，泥土与鱼腥味不易去除，因此销售价格较低。
鲢作为一种高产低值淡水鱼，具有较高的应用和开发价值。
笔者试验以新鲜鲢鱼骨为原料，经破碎、高温蒸煮等前处理，采用风味蛋白酶对其进行酶解制备鱼骨蛋白多肽，后沉淀经乳酸活化制备钙液，将二者进行螯合制备鲢鱼骨胶原多肽螯合钙，通过优化鲢鱼骨胶原多肽螯合钙制备过程工艺参数，制备出既补充氨基酸又补充钙的综合补充制剂。
1材料与方法1.1试验材料新鲜鲢购于北京小月河水产市场，活运至实验室。
1.2主要仪器及试剂微量移液器（德国Eppendorf公司出品）；DS-1高速组织捣碎机（上海标准模型厂出品）；FE20梅特勒-托利多实验室pH计［梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司出品］；TGL-16A台式高速冷冻离心机（上海安亭科技仪器厂出品）；UNICO-2007分光光度计（美国Unic公司出品）；FD-1PF 冷冻干燥机（北京德天佑科技发展有限公司出品）；三硝基苯磺酸（TNBS），美国Sigma公司出品；风味蛋白酶，广西南宁庞博生物工程有限公司出品；乙二胺四乙酸二钠（EDTA）、柠檬酸钠、乳酸等均为分析纯。
1.3试验方法1.3.1鲢鱼骨蛋白酶解产物的制备工艺鲢→击毙→去鳞去内脏去头→冲洗→去两侧肉→鱼排→剁块→加水、高温蒸煮（121ħ、15min）→纱布过滤、冲洗→鱼骨样→粉碎、匀浆→与去离子水混合［质量体积比1ʒ1（g·mL－1）］→调温度、于自然pH 加入风味蛋白酶（50ħ，加酶量按鱼排质量0.09%计）→灭酶（95ħ，10min）→离心（8000r·min－1，5min）→去上层脂肪→取上清液→骨胶原多肽液→冷冻干燥→鲢鱼鱼骨蛋白酶解产物。
1.3.2鲢鱼骨和螯合钙基本组成成分测定粗脂肪质量分数测定采用索氏抽提法（GB/T 5009.6-2003）；水分质量分数测定采用直接干燥法（GB5009.3-2010）；灰分质量分数测定采用550ħ灼烧法（GB5009.4-2010）；蛋白质质量分数测定采用凯氏定氮法（GB5009.5-2010）；钙质量分数测定采用EDTA滴定法（GB/T5009.92-2003）。
1.3.3水解度的测定采用三硝基苯磺酸法（trinitribenzenesulfonic，TNBS）［13－14］。
取0.01g冻干酶解产物样品，用质量分数为1%的十二烷基硫酸钠（SDS）溶液稀释至一定浓度（使样品溶液含有的氨基基团浓度为0.25ˑ10－32.5ˑ10－3 mol·L－1）。
取0.25mL的样品溶液混2.00mL pH 8.2磷酸缓冲溶液和2.00mL0.1%TNBS溶液，于50ħ暗室中反应60min后立即加入4.00mL 0.1mol·L－1HCl终止反应，室温下放置30min后在420nm下测其吸光值。
采用0 2.5ˑ10－3 mol·L－1L-亮氨酸作标准曲线。