人过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)使用方法
PPARα在阿尔茨海默中的研究进展
PPARα在阿尔茨海默中的研究进展
姜厚娟;刘雨茜;武闯
【期刊名称】《科技视界》
【年(卷),期】2024(14)5
【摘要】老年性痴呆是一种进展性失能的疾病,对于这种疾病,目前尚无有效缓解的治疗方法。
过氧化物酶体的增殖体激活受体α(PPARα)在中枢作用显著。
在阿尔茨海默病(AD)的发病机理学说中,线粒体障碍学说占据一定地位,线粒体紊乱在衰老和神经退行性疾病中都起着至关重要的作用,PPAR激动剂可以增加线粒体的功能,增强线粒体的钙缓冲能力。
基于PPARα激动剂在AD领域的治疗的重要作用,对部分研究进展进行综述。
【总页数】4页(P14-17)
【作者】姜厚娟;刘雨茜;武闯
【作者单位】山东省临沭县妇幼保健院;厦门医学院厦门市中药生物工程重点实验室
【正文语种】中文
【中图分类】R74
【相关文献】
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2.透皮给药制剂在阿尔茨海默症中的研究进展
3.经颅直流电刺激技术在阿尔茨海默症治疗中的研究进展
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突方向离散度和密度成像在阿尔茨海默症中的研究进展5.线粒体功能障碍在阿尔茨海默症中的研究进展
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过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)在肝脏疾病中的作用及潜在意义
/ ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－５２５６．２０２３．０７．０３４过氧化物酶体增殖物激活受体（ＰＰＡＲ）在肝脏疾病中的作用及潜在意义冯帅霞，徐 莹，韩 涵上海中医药大学中药学院，上海２０１２０３通信作者：韩涵，ｐａｓｈａｎｈａｎ＠１２６．ｃｏｍ（ＯＲＣＩＤ：００００－０００１－６４５４－８７６Ｘ）；徐莹，ｘｕｙｉｎｇ．９１１＠１６３．ｃｏｍ（ＯＲＣＩＤ：００００－０００２－４６４５－３０９４）摘要：过氧化物酶体增殖物激活受体（ＰＰＡＲ）是细胞核雌激素受体家族成员，参与多种体内生理病理过程，在细胞代谢、炎症及癌症等方面发挥重要作用，目前已知ＰＰＡＲ受体分３种亚型，分别为α、β／δ和γ。
研究发现ＰＰＡＲ在肝脏中高度表达，广泛参与肝脏能量代谢、氧化应激、炎症等多种生理病理活动，与肝脏疾病的进展密切相关。
本文就ＰＰＡＲ在病毒性肝炎、代谢相关脂肪性肝病、胆汁淤积性肝病、肝纤维化、原发性肝癌等常见肝脏疾病中的作用及其在肝脏疾病治疗中的应用现状作一综述。
关键词：过氧化物酶体增殖物激活受体；肝疾病；炎症基金项目：国家自然科学基金（８２１７３９４６）；上海市自然科学基金（２１ＺＲ１４６０５００）；国家自然科学基金青年项目（８２００４１６２）；上海市青年科技英才扬帆计划（２０ｙｆ１４４９５００）Ｒｏｌｅａｎｄｐｏｔｅｎｔｉａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ－ａｃｔｉｖａｔｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒｓｉｎｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅｓＦＥＮＧＳｈｕａｉｘｉａ，ＸＵＹｉｎｇ，ＨＡＮＨａｎ．（ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＳｈａｎｇｈａｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０１２０３，Ｃｈｉｎａ）Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒｓ：ＨＡＮＨａｎ，ｐａｓｈａｎｈａｎ＠１２６．ｃｏｍ（ＯＲＣＩＤ：００００－０００１－６４５４－８７６Ｘ）；ＸＵＹｉｎｇ，ｘｕｙｉｎｇ．９１１＠１６３．ｃｏｍ（ＯＲＣＩＤ：００００－０００２－４６４５－３０９４）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ－ａｃｔｉｖａｔｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒｓ（ＰＰＡＲ）ａｒｅｍｅｍｂｅｒｓｏｆｔｈｅｎｕｃｌｅａｒｅｓｔｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒｆａｍｉｌｙ，ａｎｄｔｈｅｙａｒｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎａｖａｒｉｅｔｙｏｆｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓｅｓｉｎｔｈｅｈｕｍａｎｂｏｄｙａｎｄｐｌａｙｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｓｉｎｃｅｌｌｕｌａｒｍｅ ｔａｂｏｌｉｓｍ，ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，ａｎｄｃａｎｃｅｒ．Ａｔｐｒｅｓｅｎｔ，ｔｈｅｒｅａｒｅｔｈｒｅｅｋｎｏｗｎｓｕｂｔｙｐｅｓｏｆＰＰＡＲ，ｉ．ｅ．，α，β／δ，ａｎｄγ．ＳｔｕｄｉｅｓｈａｖｅｓｈｏｗｎｔｈａｔＰＰＡＲｓａｒｅｈｉｇｈｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｔｈｅｌｉｖｅｒａｎｄａｒｅｗｉｄｅｌｙｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｖａｒｉｏｕｓｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖ ｉｔｉｅｓｓｕｃｈａｓｌｉｖｅｒｅｎｅｒｇｙｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，ｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ，ａｎｄｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，ａｎｄｔｈｅｙａｒｅａｌｓｏｃｌｏｓｅｌｙａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｐｒｏｇｒｅｓ ｓｉｏｎｏｆｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅｓ．ＴｈｉｓａｒｔｉｃｌｅｒｅｖｉｅｗｓｔｈｅｒｏｌｅｏｆＰＰＡＲｉｎｃｏｍｍｏｎｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅｓｓｕｃｈａｓｖｉｒａｌｈｅｐａｔｉｔｉｓ，ｍｅｔａｂｏｌｉｃａｓｓｏｃｉ ａｔｅｄｆａｔｔｙｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅ，ｃｈｏｌｅｓｔａｔｉｃｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅ，ｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓ，ａｎｄｐｒｉｍａｒｙｌｉｖｅｒｃａｎｃｅｒ，ａｎｄｔｈｅｃｕｒｒｅｎｔｓｔａｔｕｓｏｆｔｈｅｉｒａｐｐｌｉ ｃａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＰｅｒｏｘｉｓｏｍｅＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ－ＡｃｔｉｖａｔｅｄＲｅｃｅｐｔｏｒｓ；ＬｉｖｅｒＤｉｓｅａｓｅｓ；ＩｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎＲｅｓｅａｒｃｈｆｕｎｄｉｎｇ：ＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎ（８２１７３９４６）；ＳｈａｎｇｈａｉＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ（２１ＺＲ１４６０５００）；ＹｏｕｔｈＰｒｏｊｅｃｔｏｆＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ（８２００４１６２）；ＳｈａｎｇｈａｉＹｏｕｔｈＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＴａｌｅｎｔｓＳａｉｌＰｒｏｇｒａｍ（２０ｙｆ１４４９５００）１ 过氧化物酶体增殖物激活受体（ＰＰＡＲ）的分类结构与其生理作用 ＰＰＡＲ是一种配体激活型转录因子，该受体主要分为Ｎ端区（Ａ／Ｂ区）、居中高度保守的ＤＮＡ结合区（Ｃ区）和Ｃ端的激素结合区（Ｅ区）。
过氧化物酶体增殖物激活受体
过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR) 是一类由配体激活的核转录因子,属Ⅱ型核受体超家族成员, 存在3种亚型，即PPARα、PPARδ、PPARγ，这三种亚型在结构上有一定的相似性，均含DNA结合区和配体结合区等。
PPAR与配体结合后被激活，与9-顺视黄酸类受体形成异二聚体，然后与靶基因的启动子上游的过氧化物酶体增殖物反应元件(peroxisome proliferator response element，PPRE)结合而发挥转录调控作用。
PPRE 由含相隔一个或两个核苷酸的重复序列AGGTCA组成。
与配体结合后，PPAR在DNA结合区发生变构，进而影响PPAR刺激靶基因转录的能力。
PPARδ几乎在所有组织中表达，浓度低于PPARα及PPARγ，直至最近以前尚未找到此一核受体的选择性配基。
PPARδ是代谢综合征（肥胖、胰岛素抵抗、高血压是与脂质紊乱有关的共同的病态表现）的一个新靶点。
有不少的研究表明：GW501516可作为PPARδ的特异激动剂用于研究。
参考网址：/cjh/2003/shownews.asp?id=156/conference/preview.php?kind_id=03&cat_name=ADA2001&title_id=59219 Regulation of Muscle Fiber Type and Running Endurance by PPARδplos biology，Volume 2 | Issue 10 | October 2004/plosonline/?request=get-document&doi=10.1371%2Fjournal.pbio.0020294NF-KB通路中的抑制剂好像有1.PDTC(pyrrolidine dithiocarbamate),是一种抗氧化剂，主要作用于IκB降解的上游环节（IκBα的磷酸化或IKK的活性水平），2.Gliotoxin 是一种免疫抑制剂，机制可能从多个环节阻断NF-KB的激活，如IκB的降解，NF-KB的核移位和与DNA的结合。
过氧化物酶体增殖物激活受体的作用
过氧化物酶体增殖物激活受体的作用
过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)是一类核受体，能够通过与类固醇、甘油三酯和血糖等物质结合，调节脂肪代谢和糖代谢。
PPARs有三种亚型：PPARα、PPARβ/δ和PPARγ，它们在不同组织中的表达量和功能有所不同。
PPARα主要参与脂肪氧化代谢，PPARγ参与脂肪细胞生成和糖代谢，而PPARβ/δ则在多种生理过程中发挥作用。
PPARs的激动剂有很多，其中包括一些药物和天然物质。
例如，类胰岛素增敏剂和降糖药物噻唑烷二酮类可以激活PPARγ，而肾上腺素能类药物和一些天然物质如芦丁和黄酮类物质可以激活PPARα。
PPARs的作用涉及到许多生理过程，包括脂肪酸氧化、胆固醇代谢、炎症反应、肿瘤生长和分化等。
因此，PPARs被认为是治疗肥胖症、心血管疾病、糖尿病、癌症等疾病的潜在靶点。
虽然PPARs的激动剂被广泛应用于临床治疗，但其作用机制仍有待深入研究。
未来的研究将继续探索PPARs在生理和病理过程中的作用机制，以及开发更安全、有效的PPARs激动剂。
- 1 -。
过氧化物酶增殖物激活受体(PPAR)a与脂质代谢
过氧化物酶增殖物激活受体（PPAR）ａ与脂质代谢——来源中国心血管网脂代谢紊乱是代谢综合征（MS）的重要组成部分，PPAR系统与脂代谢关系密切，尤以PPARα为重要。
PPAR是配体活化的受体超家族，也是一种核转录因子。
它包括三种亚型，即PPARα﹑PPARγ和PPARß/δ。
PPAR具有核受体超家族的共同特征，即具有DNA结合域(DBD)和配体结合域(LBD)。
PPAR与配体结合后，其DNA结合域发生变构，进而影响PPAR刺激靶基因转录的活性。
另一方面，与配体结合后PPAR再与9顺式维甲酸受体（retinoid X receptor，RXR）形成异二聚体。
PPAR/RXR异二聚体能被PPAR配体或RXR配体单独或协同激活，引起辅阻断物的解离和辅活化因子的结合，使相关基因启动子活性增加。
PPAR/RXR异二聚体与所调节的基因上游的过氧化物酶体增殖物反应元件（PPRE）结合发挥转录调控作用。
PPRE存在于许多与脂代谢和糖代谢有关的基因编码蛋白中。
近年的研究发现PPARα具有广泛的作用。
1 ：PPARａ促进乳糜微粒（CM）和极低密度脂蛋白的代谢(VLDL)。
脂蛋白脂酶（LPL）在CM和VLDL的代谢中有重要的作用。
ApoCⅡ是LPL不可缺少的激活剂，无ApoCⅡ时LPL 活性极低。
apoCⅢ能抑制LPL的活性。
研究发现现给予PPARα特异的激动剂后脂肪组织LPL 表达增加，已证实LPL启动子附近有一序列元件能与PPAR-RXR异二聚体结合，这表明PPAR ａ激动剂对LPL的作用是通过PPAR-RXR异二聚体介导的。
一些实验发现给予小鼠贝特类降脂药后，apoCⅡmRNA表达降低，同时apoCⅢmRNA降低，且后者的作用大于前者，即apoC Ⅲ/apoCⅡ比值降低，这将促进甘油三酯的水解。
2：PPARa促进脂肪酸氧化：（1）促进肉碱脂酰转移酶（CPT）的表达。
（2）促进脂酰辅酶A合成酶(ACS)的合成。
过氧化物酶体增殖物激活受体γ与相关疾病的研究进展
过氧化物酶体增殖物激活受体γ与相关疾病的研究进展过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）是一种核受体转录因子，已被广泛应用于糖尿病、肥胖症、心血管疾病和肿瘤等疾病的治疗研究中。
PPARγ在脂质与糖代谢、细胞增殖和分化等过程中起着重要作用。
近年来，研究发现PPARγ还与许多其他疾病有关，如神经退行性疾病、炎症性疾病、自身免疫疾病、肿瘤和感染性疾病。
通过深入了解PPARγ的功能和调控机制，可以为相关疾病的治疗提供新的思路和方法。
本文将针对PPARγ与相关疾病的研究进展进行综述。
一、PPARγ与糖尿病、肥胖症研究表明，PPARγ在调控葡萄糖代谢和胰岛素敏感性中起着关键作用，因此成为糖尿病和肥胖症的重要治疗靶点。
PPARγ激动剂被广泛应用于二型糖尿病的治疗，可以提高胰岛素敏感性，促进葡萄糖的利用和代谢，从而降低血糖水平。
PPARγ激动剂还可以促进脂肪细胞的分化和脂肪的储存，减少脂肪酸的流动，降低血脂水平，减轻肥胖症患者的症状。
二、PPARγ与心血管疾病PPARγ在心血管系统中的作用也备受关注。
研究表明，PPARγ激动剂可以抑制动脉粥样硬化的形成，减少血管内皮细胞的增殖和炎症反应，保护血管壁的完整性，降低动脉硬化和心血管疾病的发病风险。
PPARγ激动剂还有降低血液中胆固醇和三酰甘油的作用，可以改善血脂代谢，降低血压，减少心血管疾病的发生。
三、PPARγ与肿瘤近年来的研究表明，PPARγ在肿瘤的发生和发展中发挥着重要作用。
PPARγ激动剂可以抑制肿瘤细胞的增殖和转移，诱导肿瘤细胞凋亡，促进肿瘤细胞的分化，从而抑制肿瘤的生长和扩散。
PPARγ还可以调节肿瘤相关的炎症反应和血管生成，影响肿瘤的微环境，抑制肿瘤的发展。
PPARγ激动剂被认为有望成为肿瘤治疗的新靶点。
四、PPARγ与神经退行性疾病最新研究发现，PPARγ在神经保护和修复中也起着重要作用。
PPARγ激动剂可以抑制神经炎症和氧化应激反应，保护神经细胞免受损伤，促进神经干细胞的分化和再生，有望成为治疗神经退行性疾病的新药物。
相关蛋白过氧化物酶体的增殖体激活受体 alpha
相关蛋白过氧化物酶体的增殖体激活受体 alpha（原创版）目录一、过氧化物酶体增殖物激活受体 alpha 的概述二、过氧化物酶体增殖物激活受体 alpha 的功能与作用三、过氧化物酶体增殖物激活受体 alpha 的研究进展四、过氧化物酶体增殖物激活受体 alpha 的应用前景正文一、过氧化物酶体增殖物激活受体 alpha 的概述过氧化物酶体增殖物激活受体 alpha（PeroxisomeProliferator-Activated Receptor alpha，简称 PPARα）是一种由配体激活的核转录因子，属于过氧化物酶体增殖物激活受体家族的一员。
该受体在细胞内调控多种代谢过程，如糖代谢、脂代谢和能量代谢等，对维持机体正常生理功能具有重要作用。
二、过氧化物酶体增殖物激活受体 alpha 的功能与作用PPARα具有广泛的生物学功能，包括以下几个方面：1.调节糖代谢：PPARα能够促进胰岛素敏感性和葡萄糖摄取，降低血糖水平，从而预防和治疗糖尿病。
2.调节脂代谢：PPARα能够促进脂肪细胞分化，增加脂肪氧化，降低血脂水平，对防治高脂血症具有积极意义。
3.调节能量代谢：PPARα能够影响线粒体的生物发生和功能，促进氧化磷酸化，提高细胞能量代谢水平。
4.抗炎作用：PPARα能够抑制核因子-κB（NF-κB）的活化，减少炎症因子的释放，从而具有抗炎作用。
三、过氧化物酶体增殖物激活受体 alpha 的研究进展近年来，PPARα在多种疾病的防治方面的研究取得了显著进展。
例如，在糖尿病、肥胖症、心血管疾病、炎症性疾病等领域均有重要的研究报道。
此外，针对 PPARα的激活剂和拮抗剂的研究也在不断深入，为开发新型药物提供了可能性。
四、过氧化物酶体增殖物激活受体 alpha 的应用前景由于 PPARα在糖代谢、脂代谢和能量代谢等方面的重要作用，其在糖尿病、肥胖症等代谢性疾病的治疗中具有广泛的应用前景。
同时，PPAR α在抗炎、抗肿瘤等方面的作用也引起了科学家的关注，为其在多种疾病的防治中提供了可能性。
ppar信号通路
ppar信号通路PPAR信号通路是一种重要的细胞信号传导机制，它对于细胞的代谢调节、炎症反应以及基因表达起着关键作用。
本文将介绍PPAR信号通路的概念、结构与功能、调节机制以及在疾病治疗中的应用。
一、概念PPAR全称为过氧化物酶体增殖物活化受体（peroxisome proliferator-activated receptor），是一类核受体家族的成员。
它主要存在于胚胎组织、脂肪组织、肝脏、肌肉等器官和组织中。
PPAR信号通路是一种通过与配体结合而激活的信号传导通路，从而启动一系列的代谢和生理反应。
二、结构与功能PPAR信号通路主要由三个亚型组成：PPAR-α、PPAR-β/δ和PPAR-γ。
每个亚型都含有一个活性结构域（activation domain）、一个DNA结合结构域（DNA binding domain）和一个肽激活结构域（peptide activation domain）。
这些结构域的结合和相互作用形成了复杂而精密的信号转导网络。
PPAR-α主要参与脂肪酸氧化和脂质代谢的调节，它通过促进脂肪酸的摄取和氧化，提高机体的能量利用效率。
PPAR-β/δ主要参与细胞的生长和分化，它能够调节线粒体的功能和代谢。
PPAR-γ则广泛参与糖脂和脂肪的代谢，对于炎症反应、免疫调节、细胞增殖和存活起着重要作用。
三、调节机制PPAR信号通路的激活主要通过与特定的配体结合而实现。
常见的PPAR配体包括脂肪酸和脂质类化合物。
一旦配体结合到PPAR的DNA结合结构域上，PPAR会与共激活蛋白和其他转录因子相互作用，从而启动一系列的基因表达和代谢调控。
此外，PPAR信号通路的活性可以受到多种机制的调节。
包括转录后修饰、共激活蛋白的变化、反馈控制等。
这些调节机制使得PPAR信号通路能够精准地响应外界环境的变化。
四、在疾病治疗中的应用PPAR信号通路在许多疾病的治疗中都显示出重要的潜力。
例如，在糖尿病治疗中，PPAR-γ激动剂能够增加胰岛素敏感性，降低血糖水平。
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人过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)使用方法
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T
10ng/L - 320ng/L
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)水平。
用纯化的人过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)，再与HRP标记的过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)浓度。
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，
然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月。