植物组织总蛋白提取(粗提)
植物总蛋白提取演示教学
植物总蛋白提取精品文档一提取植物总蛋白（以植物花粉为例）：1.三氯乙酸法（TCA）/丙酮(acetone)提取花粉总蛋白质花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，用含10%TCA和1%DTT的acetone沉淀蛋白质，-20度 2个小时(必要时过夜)，4度 25000g离心20min后去上清，用含1%DTT的acetone溶液悬浮沉淀，-20度 1个小时,再次离心去上清，将真空干燥的沉淀在等电聚焦缓冲液中(8M urea，20mmDTT,4%CHAPS,2%ampholyte,PH:3-10) 20度震荡1小时，20度25000g离心20min，收集上清，沉淀再次用IEF缓冲液离心收集上清，可为后续试验做准备。
2．苯酚（phenol）提取法花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，添加1ml的phenol（tris 8.8 缓冲液）继续研磨5min,加提取缓冲液（0.1mol/L 8.8 Tr i s –HCl，5mmEDTA,20mmDTT,30%sucrose）。
将样本转移至离心管中，4度震荡30min，25000g离心10min，将上层的phenol层转移进另一个试管，将下边的水相层加1ml的phenol（tris 8.8 缓冲液）及提取缓冲液，震荡，离心，将再次收集到的phenol与前边收集的混合，加5倍体积的0.1 M ammonium acetate in 100%methanol，在-20度震荡沉淀蛋白质，必要时过夜，4度 25000g离心10min，将沉淀用0.1 M ammonium acetate in 100%methanol及80% acetone各洗两次, 含10mmDTT的80% acetone再洗一次，在每一步中蛋白沉淀都要完全重悬— -20度震荡30min，4度 25000g离心20min，洗剂完成后，沉淀真空干燥，IEF buffer提取蛋白质，如方法1。
植物蛋白质的提取和加工 ppt课件
便于灭酶脱腥 灭酶：专用加热处理器内，器内温度: 150-160℃，豆心
温度：100-110 ℃ 脱皮：撞击和摩擦脱皮 研磨：锤式粉碎机粗磨，辊磨精磨 筛理：过200目筛，筛下物
（1）首先用弱碱溶液浸泡低温脱溶豆粕，使可 溶性蛋白质、碳水化合物等溶解（而油脂和不 溶性糖类被排斥在溶液外）；
（2）利用离心机除去溶液中不能溶解的纤维及 残渣。
（3）在已经溶解的蛋白质溶液中，加入适量的酸液， 调节溶液的 pＨ值达到4.5，使大部分的蛋白质从溶 液中沉析出来,再离心除去乳清液。
（4）然后将酸沉析出的蛋白质凝聚体进行破碎、水洗、 中和、闪蒸灭菌后，再干燥脱除水分，制成高纯度的 大豆分离蛋白质。
精品资料
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• “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我 笨，没有学问无颜见爹娘 ……”
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营养价值：
1、水溶性
（1）水溶性是充分发挥大豆蛋白功能特性的先 决的条件。
（2）影响因素： pH值、离子强度、温度有关。
2、吸水性 （1）定义
大豆蛋白质的肽链结构中含有极性的侧链， 能够吸收水分并保留水分。 （2）影响因素 水分活度Aw：随Aw的增加吸水性增强， Aw=1.0时，大豆蛋白可吸水0.6g/g蛋白。 pH：大于或小于等电点4.5，吸水性会急剧增加。
一、生产原理
大豆浓缩蛋白质(SPC)主要是指以低温脱溶豆 粕为原料，除去粕中的可溶性糖分、灰分以 及其他可溶性的微量成分，使蛋白质的含量 从45％-50％提高到70％左右而获得的制品。
植物组织蛋白提取
蛋白提取方法：1、液氮研磨成粉2、转移粉末（0.1-0.3g）到2ml离心管中，加10%TCA/丙酮至满管，涡旋混匀；4°；16000g；离心3min；弃上清。
3、用含0.1M醋酸铵的甲醇加满离心管，混匀；4°；16000g离心3min；弃上清。
4、用丙酮加满离心管，涡旋混匀；4°；16000g离心3min；弃上清。
5、室温晾干，去除残余丙酮。
6、按0.4-0.8ml/0.1g比例的起始材料加SDS extraction buffer混匀30min；4°；16000g离心3min；保留上清。
加与上清等体积的苯酚（ph8.0）彻底混匀30min；4°；16000g离心3min；转移酚相，加与酚相等体积的水，水洗一次，保留酚相至一新的离心管中，加0.1M乙酸铵的甲醇至满管；-20°过夜；4°16000g 离心5min；小心地移除上清，可见沉淀。
7、用甲醇清洗沉淀一次，丙酮清洗至沉淀为白色（5-6次）每次混匀都要涡旋混匀如上离心。
将蛋白空气晾干（不要太干，丙酮挥发完即可否则蛋白干粉不好溶）。
溶液配比：1、TCA/丙酮（10%TCA；0.07%巯基乙醇）：10g TCA（三氯乙酸）70ul巯基乙醇丙酮定容至100ml2、丙酮（含0.07%巯基乙醇）：140ul巯基乙醇加入200ml丙酮中。
3、SDS extraction buffer：30%蔗糖；2%SDS；0.1M Tris-HCl(Ph8.0)5%巯基乙醇；即：30g蔗糖；2g SDS；5ml巯基乙醇；用[0.1M Tris-HCl(ph8.0)]定容至100ml。
4、0.1M Tris-HCl(ph8.0)：Tris:1.21g溶于80ml的超纯水，浓HCl调ph8.0，定容至100ml。
5、0.1M乙酸铵/甲醇：乙酸铵1.54g；甲醇定容至200ml。
6、甲醇7、Tris饱和的苯酚（ph8.0）。
一种植物总蛋白的提取方法及其专用提取液
一种植物总蛋白的提取方法及其专用提取液
高效蛋白提取是生物学研究中许多生物活性蛋白质的重要技术，同时是天然植物来源高效产出有效复合成制剂的有效技术。
近年来，微生物静电纺丝已成为一种快速、有效和经济的植物总蛋白提取方法，可以有效地提取出植物中的多种活性蛋白，并使其得到有效的应用。
专用总蛋白提取液由水、醇类和有机酸组成，使得植物蛋白质更容易溶解，有效降低蛋白质的结构及生物活性，从而可以获得植物总蛋白，并提高抽取特定集合体的活性蛋白。
此外，专用植物总蛋白提取液还可以采用无纤维素或低纤维素方法进一步提高植物总蛋白的抽取效率，节省时间成本。
专用提取液能够提取植物总蛋白，也有助于保护植物总蛋白，具有抗氧化特性和抗酶水解性，还可以促进蛋白质的活性和高纯度纯化。
同时，专用提取液具有高灵敏度、快速性和无毒性，因此几乎所有的植物级别都可以采用此种专用提取液提取总蛋白。
综上所述，静电纺丝专用植物总蛋白提取液具有许多独特的优点，包括快速、有效、低成本、抗酶水解性和抗氧化性，是生物学研究中活性蛋白质的一种重要技术，也是植物来源高效产出有效复合剂的一种有效技术。
夺取植物蛋白质的提取和加工技术
第九章植物蛋白质的提取和加工技术本章重点和学习目标了解植物蛋白的种类和主要特征，掌握主要蛋白的制取原理和加工方法；主要植物蛋白的性质和主要用途。
蛋白质是人类生命活动的重要物质基础。
随着世界人口的不断增长，蛋白质供给出现了严重不足。
为了解决这一问题，世界各国尤其是不发达国家和地区，积极采取措施，试图从可以得到的食物中获得有营养和廉价的蛋白质。
在世界范围的蛋白质资源供给中，大部分为植物蛋白，占蛋白质总量的70％，而动物蛋白仅占30％。
另外，具有经济性、营养性、功能性等优点的植物蛋白在建立健康的饮食结构方面所起的作用也越来越受人们重视。
本章将着重介绍各种植物蛋白的特点和相关的利用技术。
第一节植物蛋白质的基本特征食品中的蛋白质具有3个方面的特性，既营养性、加工特性及有益于人体健康的功能特性。
蛋白质的营养价值，主要是取决于其所含必需氨基酸是否平衡。
一般来说，动物蛋白质中的必需氨基酸比较平衡，而植物蛋白往往是赖氨酸、苏氨酸、色氨酸和蛋氨酸的含量相对不足。
谷物蛋白一般缺乏赖氨酸，而油料蛋白主要是蛋氨酸不足。
例如小麦蛋白主要是赖氨酸和苏氨酸不足；玉米蛋白主要是色氨酸和赖氨酸不足；棉子蛋白主要是蛋氨酸不足；花生蛋白主要是缺乏蛋氨酸；大豆蛋白除蛋氨酸和半胱氨酸含量稍低于FA0(联合国粮农组织)推荐值外，氨基酸组成基本平衡，接近于全价蛋白，是仅次于动物蛋白的理想蛋白质资源。
加工特性主要是指食品在加工过程中和加工后所表现出的物理性质，如物料或制品的保水性、乳化性、弹性和黏结性等。
这些物性指标是进行食品品质评价的重要内容。
植物性蛋白质，特别是油料蛋白质具有较好的加工特性，既可以单独制成食品，也可以与蔬菜或肉类等相组合加工成各种各样的食品。
它们在加工过程中，赋予制品保水性和保型性，防止加热调理收缩变形，使制品有较好的物性品质。
动物性蛋白质主要来源于肉、鱼、奶、蛋等食物，这些食物一方面由于价格较贵，另一方面由于肉制品含有较多的易导致心血管疾病的饱和脂肪酸和胆固醇，因而不利于健康。
植物蛋白质组研究技术
植物蛋白质组研究技术（内部使用）一、蛋白质提取方法：直接研磨法：将植物材料剪碎于加有一定量的样品缓冲液（材料g：缓冲液ml＝1:4）的预冷的研钵中，冰上进行研磨至匀浆。
4o C下15000 rpm离心15 min，上清夜即为蛋白质抽提液。
电泳前将该提取液在相同条件下再离心一次即可。
该方法适用于极幼嫩的植物组织或幼苗以及白化、黄化苗等。
TCA/丙酮沉淀法：A）植物组织在液氮中研磨成精细的粉末后加入10％TCA（丙酮为溶剂）在－20o C下沉淀1 h以上（可以过夜）。
溶液在4o C下15000 rpm离心15 min。
沉淀用丙酮清洗三次（至丙酮为无色止），相同条件下离心后，沉淀真空干燥（约5 min 即可）。
真空干燥后所得的干粉按每30 mg加1ml样品缓冲液进行溶解（室温下1 h以上）。
可以进行振荡或超声波助溶。
溶解后的样品4o C下15000 rpm离心15 min后取上清液即为蛋白质提取液。
B）植物组织在匀浆缓冲液中4o C下研磨至匀浆【样品于缓冲液之比（g/ml）随样品的不同而有所不同，一般幼嫩或含水量比较丰富的组织为1：3－4，而生理年龄较老的组织约为1：8－10】。
匀浆液4o C下15000 rpm离心15 min后取上清液，往上清中加入50％TCA（水为溶剂）至TCA浓度为10％，冰上沉淀30 min，相同条件下离心，沉淀用丙酮清洗3次，离心后真空干燥即可得蛋白干粉。
将蛋白干粉按所需的比例溶于样品缓冲液中（振荡助溶1 h）即可。
酚抽提法：植物组织在匀浆缓冲液中4o C下研磨至匀浆【样品于缓冲液之比（g/ml）随样品的不同而有所不同，一般幼嫩或含水量比较丰富的组织为1：3－4，而生理年龄较老的组织约为1：8－10】。
匀浆液4o C下15000 rpm离心15 min后取上清液，往上清夜中加入相同体积的Tris饱和酚（pH 8.0）上下倒置充分混匀后15000 rpm离心5－10 min。
植物蛋白的提取方法
植物蛋白的提取方法
植物蛋白啊，那可是个宝！你知道从植物中提取它都有哪些奇妙的方法吗？咱就拿大豆来说吧，那可是植物蛋白的丰富来源。
可以通过浸泡，让大豆吸饱水，就像人喝足了水一样精神饱满。
然后呢，把它们磨碎，哎呀，这就像是把宝藏给挖掘出来了。
还有啊，像花生，那也是提取植物蛋白的好材料呀！把花生炒熟了，香气扑鼻，然后再去提取蛋白，感觉就像是在烹饪一道美味的大餐。
再说说小麦，通过一些特别的工艺，也能从中获取珍贵的植物蛋白呢。
这就好像是在一堆麦粒中寻找闪闪发光的金子。
提取植物蛋白的过程可不简单呢，需要精心的操作和耐心的等待。
这就跟培养一个优秀的孩子一样，得花费好多心思。
难道不是吗？
在这个过程中，每一个步骤都很关键啊。
从选择合适的植物原料，到运用恰当的提取技术，就像走在一条充满挑战的道路上，但一旦成功，那收获可是满满的呀！想想看，得到了纯净的植物蛋白，那是多么让人兴奋的事情。
而且啊，植物蛋白对我们的身体有那么多好处，能提供能量，让我们活力四射。
这就如同给身体注入了一股强大的力量，让我们能够勇往直前。
不用 animal 蛋白，咱用植物蛋白也能打造出健康又美味的食物，这多厉害呀！这就好像我们有了一把神奇的钥匙，可以打开健康生活的大门。
所以呀，大家可别小看了植物蛋白的提取，这可是一项充满魅力和价值的事情呢！。
植物蛋白质提取方法总汇
植物蛋白质提取方法总汇植物蛋白质提取方法质质一、植物质质蛋白质提取方法、根据质品重量;质品加入提取液～可根据材料不同适加入,～准质提取液放在上。
当冰11g3.5ml、把质品放在质中用液磨～磨后加入提取液中在上置;研氮研研冰静小质,。
23-4 、用心机心离离?或?38000rpm40min411100rpm20min4 、提取上液～质品制质完成。
清4蛋白质提取液,300ml、;, 11Mtris-HClPH845ml、甘油;,2Glycerol75ml、聚乙质质质;吡咯,3Polyvinylpolypyrrordone6g质质方法质质～垂直板质泳,SDS-PAGE二、植物质质蛋白质提取方法质醋酸丙质淀法—沉、在液中磨片氮研叶1、加入质品质体倍的提取液在?的件下质夜～然后心;条离?以上小质,上。
弃清23-2048000rpm1 、加入等质的浴丙质;含体冰的质基乙醇,～质后心;匀离?以上小质,～然后空真30.07%β-48000rpm1干燥淀～质用。
沉、上质前加入裂解液～室放置温分质～使蛋白充分溶于裂解液中～然后心;离?以上小430158000rpm1质或更质质质以有淀质质准,～可质质保存在没沉?待用。
4、用法定量蛋白～然后可分放入装?质用。
5Brandford-80质品,提取液,含和的质基乙醇的丙质。
裂解液,尿素溶于质菌的10%TCA0.07%β-2.7g0.2gCHAPS3ml去子水中;质质质离体,～使用前再加入的。
5ml1MDTT65ul/ml 质质方法质质向质泳～质质少～子质度小的特点,然质向质泳也同质适用～只是质泳的质质质少,双离当条会减三、质质,质膜黏目的,质质凋亡相质蛋白的表达WESTERN BLOT质用提取蛋白质步质,TRIPURE含蛋白质上液中加入丙醇,;清异每用量,1.5ml1mlTRIPURE倒质混～置室匀温10min心,离～～度～上弃清12000 g10min4加入质酸胍,乙醇,;每用量,0.3M/952ml1mlTRIPURE振质～置室温20min心, 离～～度～上弃清7500g5 min4重质质酸胍,乙醇步次0.3M/952淀中加入沉,乙醇 1002ml充分振质混～置室匀温20 min心, 离～～度～上吹干淀弃清沉7500g5min4,溶解淀沉1SDS心,离～～度10000g10min4取上清度保存;或可直接用于,-20WESTERN BLOT存在的质质,加入,后淀不溶解～质是大的一质～沉很度心后又多了白色定～离沉质晶,质质度～1SDS4SDS含量才左右。