如何选择流动相
流动相选择的原则
流动相选择的原则
流动相选择的原则有以下几点：
1. 可溶性原则：流动相中应该充分溶解被检化合物，以便充分发挥其色谱分离能力。
2. 极性原则：选择流动相的极性应与被检化合物的极性相似或相反，以增加化合物与固定相之间的相互作用，提高分离效果。
3. 适宜的流动性：流动相的流动性应适合具体的色谱系统，以保证在适当的时间内完成色谱分离。
4. 稳定性原则：流动相应具有稳定性，以克服在分离过程中出现在流动相中的各种不稳定因素。
5. 合理的表面张力：流动相应具有合理的表面张力，以减少结果的扰动，并保持流量恒定。
6. 纯度和成本原则：流动相的纯度应高，并且在成本允许的情况下，尽量采用低成本的物质。
液相色谱流动相的选择依据及使用注意事项
液相色谱（Liquid Chromatography, LC）是一种常用的分离和分析方法，它使用液体作为流动相，在不同组分之间进行分配和分离。
在液相色谱分析中，流动相是至关重要的，它直接影响分离效果、分析速度和结果准确度。
合理选择液相色谱流动相并注意使用时的一些问题是非常重要的。
一、液相色谱流动相的选择依据1. 样品的性质液相色谱中流动相的选择应考虑样品的性质，包括溶解性、稳定性、挥发性等。
对于极性样品，常使用极性溶剂作为流动相；对于不容易溶解的非极性样品，可以选择非极性溶剂作为流动相。
2. 柱子的选择不同的柱子需要选择不同的流动相，以保证分离效果。
对于反相色谱柱，一般使用的是乙腈或甲醇和水的混合物作为流动相；对于正相色谱柱，则需要选用不同的极性溶剂作为流动相。
3. 分离效果流动相的选择应考虑到所需的分离效果。
对于需要高分离效果的分析，流动相的组成和流速需要进行精细调控；对于一些不需要高分离效果的分析，可以适当简化流动相的组成，提高分析效率。
4. 色谱柱的保护对于某些对色谱柱有损害的物质，可以考虑在流动相中添加一些保护剂，以延长柱子的使用寿命。
二、使用注意事项1. 流动相的配制在使用液相色谱分析时，需要注意流动相的配制。
流动相的配制应准确、稳定，避免在实验中因流动相的质量问题导致结果失真。
2. 流速的控制流速的控制对于分析结果的准确性和重现性有着重要影响。
在选择流速时，需要根据分离效果的要求以及柱子的性能来进行合理的设定。
3. 流动相的贮存流动相在储存和使用过程中需要注意避免受到污染和氧化。
定期更换和清洗流动相的储存容器，保持流动相的纯净度和稳定性。
4. 流动相的回收在实验结束后，应注意对流动相进行回收和处理，避免对环境造成污染。
总结回顾：液相色谱分析中流动相的选择和使用是至关重要的。
合理选择流动相，可以提高分析的准确性和重现性；注意使用时的一些问题，可以延长柱子的使用寿命并保护环境。
需要根据样品的性质、柱子的选择以及分离效果来综合考虑流动相的配制和使用。
关于高效液相色谱仪流动相的选择如何呢
关于高效液相色谱仪流动相的选择如何呢高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于生命科学、化学、医药、环境等多个领域。
其中，流动相的选择对于色谱分离性能和分析结果的准确性有着重要的影响。
一、流动相的组成流动相是指用于在高效液相色谱仪中运载样品溶液，推动样品通过固定相柱的溶剂体系。
一般情况下，流动相由溶剂和缓冲剂组成。
溶剂用于将样品带入色谱柱，而缓冲剂则用于调整流动相的pH值。
在选择流动相的溶剂时，主要要考虑以下因素：1.溶剂极性：色谱柱的固定相特性和待分析的样品特性决定了所需的溶剂极性。
一般来说，溶剂可以选择非极性溶剂、极性溶剂或者两者的混合物，以适应不同的分析要求。
2.溶剂选择：常用的溶剂包括甲醇、乙醇、丙酮、乙腈等有机溶剂，以及水。
甲醇和乙腈是最常用的有机溶剂，由于它们的极性较低，因此溶解性广泛。
水是最常用的极性溶剂，可以提供更好的分离效果。
3.透过性：一些样品需要在其中一种溶剂中分离，因此选择适当的溶剂对于分析结果的准确性至关重要。
在选择缓冲剂时，需要考虑以下因素：1.pH值的调整：一些分析需要在特定的pH值下进行，需选择合适的缓冲剂，以维持所需的pH值。
2.缓冲能力：缓冲剂应具有良好的缓冲能力，以维持流动相的pH值的稳定性，避免pH值对分离效果的干扰。
3.溶解度：缓冲剂应具有较高的溶解度，以便在高浓度下使用，从而提供稳定的pH值。
二、常用的流动相系统1.等相流动相系统（Isocratic elution）：等相流动相系统是指流动相组成在整个分析过程中保持不变。
这种系统适用于分离度较差的样品，具有简单、稳定、易操作的特点。
2. 梯度流动相系统（Gradient elution）：梯度流动相系统是指在分析过程中，通过改变流动相组成来实现样品的分离。
这种系统适用于需要分离程度较高的样品，提供了更好的分离效果。
流动相的选择
流动相的选择•采用“HPLC” 级溶剂•避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂•对试样有适宜的溶解度•溶剂粘度要小•与检测器相匹配水的等级–纯化水–蒸馏水–去离子水因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高纯化水中去除了无机和有机的污染物溶剂的等级–HPLC级–优级纯–分析纯都经过蒸馏和0.45u的过滤(除纤维毛,未溶解的机械颗粒优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂HPLC级经过0.2u的过滤,且除去有紫外吸收的杂质溶剂的过滤滤膜类型：聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐。
醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶剂。
尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可以用于强酸，不适用于二甲基甲酰胺。
再生纤维素滤膜：蛋白吸收低，同样适用于水溶性样品和有机溶剂脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡气泡对测定的影响：1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形3）检测器中的气泡产生基线波动脱气的目的防止由气泡的产生引起的故障防止由溶解（在液体中的）气体量的变动引起的检测不稳定程度1）示差折射率检测器*使折射率变化2）UV检测器（200nm以下）*溶解氧气有吸收3）荧光检测器*溶解氧气有消光作用脱气的方法1. 超身波脱气法2. He清除法3. 使用氟树脂膜的减压脱气法梯度洗脱法梯度洗脱装置：高压梯度：用两台高压输液泵将两种溶剂输入低压梯度：在常压下将两种溶剂（或多元溶剂）混合，然后用高压输液泵将流动相输入到色谱柱中。
梯度洗脱：优点：可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测量和提高分离精度梯度洗脱法的注意点●溶剂的纯度要高，否则梯度洗脱的重现性差●梯度混合的溶剂互溶性要好●梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器（如紫外吸收检测器或荧光检测器），而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器（如示差折光检测器）●查看空白实验的数据。
●遵守分析周期。
简述液相色谱中流动相的选择
简述液相色谱中流动相的选择
液相色谱 (Liquid Chromatography, LC) 中的流动相，也叫做溶
剂或移动相，是指样品在色谱柱中流动的溶液。
液相色谱的分离效果受到流动相的选择和配比的影响，因此流动相的选择是液相色谱分离技术中十分重要的一环。
液相色谱中常用的流动相包括有机溶剂、水、酸、盐酸/氢氧
化钠、醋酸/乙酸盐以及缓冲液等。
不同类型的溶剂或混合溶
剂可以用来分离不同性质的化合物：
1. 极性化合物的分离一般采用水和一些极性有机溶剂（如甲醇、乙醇、乙腈等）的混合物作为流动相。
2. 非极性化合物的分离则需要使用非极性有机溶剂（如正己烷、甲苯、乙酸乙酯等）或者混合有机溶剂（如乙醚和正己烷的混合物）作为流动相。
3. 酸类化合物和有机酸类化合物的分离用含有少量酸的水溶液（如醋酸溶液等）作为流动相。
4. 离子性化合物的分离则需要使用缓冲液作为流动相。
如果需要可逆电渗析检测器，则流动相需要含有离子对。
需要注意的是，在选择流动相时，不仅要考虑其相容性、带电性、缓冲效应等因素，还要考虑其挥发性、毒性和成本等因素。
因此，流动相的选择应该根据需要的分离效果、性质、成本和实验条件等综合因素进行考虑和选择。
亲和色谱流动相选择
亲和色谱流动相选择
选择亲和色谱流动相的关键因素包括以下几个方面：
1. pH值：流动相的pH值对于亲和色谱的选择性有重要影响。
不同的亲和色谱介质对于pH值有不同的要求，需要根据具体
的实验材料来选择合适的pH值。
2. 缓冲剂的选择：缓冲剂可以影响流动相的离子强度和离子种类，从而影响样品与固定相的相互作用。
常用的缓冲剂包括Tris、MES、HEPES等。
3. 配平离子：在某些情况下，添加适量的金属离子、亚金属离子或其他离子可以增强某些亲和色谱介质的选择性和增强吸附效果。
4. 有机溶剂的选择：有机溶剂可以用来调节流动相的极性和溶解性，从而改变样品和固定相的相互作用。
常用的有机溶剂包括甲醇、乙醇等。
5. 温度：温度可以影响样品分子与固定相的相互作用力，从而影响色谱分离的选择性。
一些亲和色谱介质对于温度较为敏感，需要在适当的温度下进行实验。
综上所述，选择合适的亲和色谱流动相需要综合考虑这些因素，并对具体的实验材料进行优化。
流动相的选择技巧
流动相的选择技巧
一、关于流动相的选择
1.1合适的流动相类型
(1)气体：气体液体混合体可用于多组份溶剂及中等温度、中等压力的重金属的测定。
(2)液体：液体可以用于溶解有机物、金属离子和微量的有机物，以及溶质有特殊极性的物质，液体还可以溶解重金属、有机污染物等物质。
(3)溶液：液相色谱常用溶液来作为流动相，其中常用的溶剂有水和甲醇等，也可以使用乙醚、氯仿等极性溶剂，也可以使用正己烷、乙腈等非极性溶剂。
(4)固体杂质：固体杂质是液相色谱的主要流动相，固体杂质可以形成可溶性的悬液，可以促进待测试样品的分离和层析。
(5)介质：介质可以用于空气、水、酸和碱以及金属溶液中的分析。
(6)表面活性剂：表面活性剂可以用于增强溶剂效果，并可以用于高精度的分析。
1.2合理的流动相组合
流动相的组合非常重要，在多组份溶剂中，各组分的浓度是否合理及其组合是否正确是影响液相色谱试验结果的关键。
有些溶剂可以共存，但其相容性可能不高。
流动相的选择
1、对于一般的反相柱，用甲醇/水或乙腈/水作流动相。
甲醇/水作流动相时，如果得到的色谱图出的峰分的不完全，可以加大水的比例。
如果出的峰太靠后而分离效果又不错，可加大甲醇的比例，可使出峰变早。
对于一些难分离的物质，要选用乙腈/水作流动相。
2、秘诀1:由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
秘诀2:三倍规则：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。
这是一个聪明而又省力的办法。
调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。
秘诀3:粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。
3、含缓冲盐的流动相最好当天用完，不要留置过夜，用不完也要倒掉，这是为了保护好机子起见，流动相的保存期限与缓冲盐的浓度有关系，越浓越不宜保留，总之，我认为缓冲盐溶液都不宜保留超过24小时，HPLC用缓冲盐时,由于泵头内的缓冲盐溶液存在高压析盐现象,析出的细小盐粒非常坚硬,它附着在蓝宝石活塞杆上,随着蓝宝石活塞杆的往复运动,容易产生划痕,并磨损密封垫,造成漏液等故障现象。
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流动相的调节是搞液相分析最重要的环节，也是液相水平高低的度量，每一种液相都有影响它的主要因素，抓住主要因素，问题就容易解决。
欢迎大家讨论。
一则可以为新手传播知识，二则大家相互学习共同提高！先开个头：常用的是化学键合相色谱，分离中性化合较简单，主要是调节溶剂强度，可从有机相的比例合种类两个方面入手，例如：有机相占的比例大，出峰就早。
分离酸碱化合物就就复杂一点，增加了添加剂，明白了添加剂的作用，然后从溶剂，酸碱性，添加剂等方面入手。
问题就容易解决。
液相色谱采用键合硅胶可以分离绝大多数的分析物质，针对不同化学性质的单体采用不同的键合硅胶，现在有什么十八烷、氨基柱、氰基、苯基太多了，再加上不同流动相也就是加入不同的抑制剂可以测许多成分，比如：酸性的可以用十八烷加入酸，加缓冲盐；碱性物质可以加缓冲盐，以个人来讲用离子对的形式较多，并且效果也很好，现在分析生物碱是比较难做的，我现在就有一个难题，就说盐酸水苏碱吧，在低波长的吸收，UV是不行了，用蒸发光检测器，但是分离又成了问题，我试了十八烷，氨基柱、氰基、都不理想，并且用过日本的shodex（C18）柱PH9-10不好。
不好做呀，在郁闷中…………………如用反相色谱柱时，一般先改变有机相与水相的比例；再考虑改变pH值，酸性物质将pH值调低，碱性物质将pH值调高；如两者都无效，可考虑加入离子对试剂，如庚烷磺酸钠用于（碱性药物）我觉得溶剂过滤器抽滤时抽走一部分有机相使保留时间相差较大。
其实流动相的调节也是很难的，一个条件下来是非常的不易呀，从查文献到，条件成熟，有一次我做麻黄就是二个月呀，最后才定下来，现在的水苏碱又是一个大头，现在为什么生物碱这样的难做呢，柱前衍生我是考虑过，但对柱子是有影响的，同时处理也麻烦。
对于流动相的抽滤对测定是没什么影响的，一个稳定的条件，是不计较那一点损失的，如果抽滤对于测定的影响非常之大这个条件是不稳的。
现在的流动相在检验所比例是可调的，但酸碱不变，所以我个人认为在一定的比例范围内，耐用性一定要好。
有高手的话对我的水苏碱给一点意见一. 反相HPLC中的溶剂优化：1.首先应调整k’值：强溶剂→20％递减→选择合适的溶液强度，使得k’在1～20（tR：3～35min）。
一种方法是首先试用一种可能过强的流动相，在后面的试验中逐渐减小溶剂强度以增大k’。
当所有谱峰符合1＜k’＜20的范围时，从溶剂强度的观点来说，其流动相已接近最佳了。
(观察待分离组分的分离度)。
（反相色谱——溶剂极性弱洗脱能力强，组分k’减小）。
另一种方法是首次用梯度洗脱试验。
通过这一实验，有可能估计出使样品的k’值符合1＜k’＜20范围的大概溶剂成分。
2.改变选择性(á)：根据分子间作用力将溶剂分组。
不同组的溶剂选择性不同，根据溶剂分组改变溶剂种类即可改变选择性。
二. 离子对HPLC中的溶剂优化: 离子对色谱法是分离离子，或可电离的分子的一种色谱技术。
关于离子对色谱的机理，至今仍不十分明确，但己提出三种机理：离子对形成机理，离子交换机理，离子相互作用机理。
在以下讨论中，采用离子对形成机理。
①基本原理：有一色谱体系，固定相为非极性，如C18型键合相，流动相为水溶液，并在其中加入一种电荷与组分离子相反的离子B +，B+离子由于静电引力，与带负电的组分离子生成离子对，故称它为平衡离子或成对离子。
由于离子对具有疏水性，因而被非极性固定相(即有机相)提取。
组分离子的性质不同，它与平衡离子形成离子对的能力大小不同，以及离子对的极性不同，导致各组分离子在固定相中滞留的时间不同，因而各离子先后离开色谱柱，这就是离子对色谱法的基本原理。
以上这类色谱法称反相离子对色谱法。
能用离子对色谱法分离的样品种类很多。
它可以用于极性样品，如碱类、酸类、离子、以及带有可离解的多种官能团化合物的分离。
可用于生理体液的分析，如甾族化合物以及体液中药物的分析。
反相离子对色谱中流动相的影响小结：1.改变选择性：a.改变溶剂种类: 改变溶剂选择性的方法，类似于键合相色谱所介绍的原则。
选用不同选择性组别的溶剂，可使流动相的选择性得到明显改进。
b.改变pH: 组分离子与平衡离子的生成，离子对的形成，都与流动相的pH 值密切相关。
改变流动相的pH可以改变体系的选择性。
流动相的pH值应调节到能使不同组分有合适的离解度，而使提供平衡离子的化合物能完全离解。
要符合这一要求，只有使提供平衡离子的化合物在一个很宽的pH范围内保持完全离解，因此，只有强酸盐(高氯酸盐或烷基磺酸盐)和强碱盐(季铵盐)才满足此要求。
c.系统选择:使用一种有机溶剂(甲醇)；流动相的其它三种成分为pH=(和pH=的缓冲液以及另一种pH=、其中含有最大浓度(例如：200mM)的离子对试剂的缓冲液(D)。
以组合不一的缓冲液(B—D)进行七次实验，并变化甲醇(A)量以保持每次实验的k’值范围大致恒定。
三.正相HPLC中的溶剂优化①溶剂非极性溶剂：正己烷或FC-113（1,1,2-三氟-1,1,2-三氯乙烷）极性溶剂：非定位、碱性定位和非碱性定位按正相HPLC中谱峰间距效应分类的溶剂取代和定位是正相HPLC流动相选择性的主要来源②溶剂强度调节③选择性影响四、梯度洗脱梯度洗脱给色谱分离带来很大的方使，已成为高效液相色谱法不可缺少的部分。
所谓梯度洗脱，就是有两种(或两种以上)不同极性的溶剂，在分离过程中按一定程序连续地改变，以改变流动相的配比和极性。
通常用的流动相为二元的。
梯度期间，强溶剂B(如反相HPLC中的甲醇)的浓度增大。
在下述讨论中，我们将这种溶剂的浓度写作 B％。
梯度洗脱对分离一定种类的样品很理想。
可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测量和提高分离精度。
梯度洗脱对于复杂混合物、特别是保留值相差较大的混合物的分离是极为重要的手段。
因为这些样品的k’范围宽，不能用等度方法简单地处置。
１．梯度洗脱期间的平均k’值tR=tm(1+k’)VR=Vm(1+k’)=Vm+kVs我做液相时，为什么主峰总是出现肩峰？是柱效降低了还是制剂中的成分没有完全被分离出来？应该如何处理肩峰？出现上述情况的原因，可能大致考虑以下几个方面：一、就是组分影响，也就是有与主峰保留时间相近的组分峰（杂质峰）的存在；二、柱子柱效明显降低，是柱子要坏掉的先兆；三、主药在流动相中发生部分离解，使一部分主药的结构状态发生改变。
等。
解决方法，对应解之，即可。
（个人见解）各们讲的都很厉害啊，我是初学者不太了解。
但在操作中常要根据要分离的物质加适当的离子对试剂，而离子对试剂是如何选择的呢？我在做盐酸水苏碱时也遇到了楼上的问题，尝试了UV及ELSD，都不是很理想，最近看到有人用柱前衍生然后用UV，但自己没做过，不知效果怎样。
但出于检测方法应该越简单越好真想快点找个即简便又有效的方法。
我也在做盐酸水苏碱，用的是SCX（离子交换柱）柱，出峰时间在8——9分钟之间，样品经处理后基线分离的比较好，唯一不好的就是峰型有些拖尾。
因为它的流动项是缓冲溶液，所以调了一下配比，发现离子交换柱出峰并不象ODS柱那么有规律，随着pH的加大，峰对称性升高，峰宽减小，离子交换柱出峰有一明显波谷反而宽度增加，峰形变大。
盐酸水苏碱标准品峰对称性最多只能达到不过还是比ODS柱出峰要好针对做生物碱的朋友：1. 用常规的ODS柱会出现一个最普遍的问题是：峰很宽，拖尾很严重！原因：ODS柱有很多未键合的硅羟基，与N缔合造成。
解决方案：使用BDS柱，他是用碱钝化残余的硅羟基，很好的避免了拖尾现象！2. 用常规的SCX离子交换柱会出现一个普遍的问题是：重现性差，随流动相的pH值大小，Rt变化大！原因：所谓离子交换柱，就是阴阳正负离子的交换，由于流动相的离子浓度的变化，势必会影响交换平衡！解决方案：流动相用Buffer缓冲液！向各位老师请教，我做液相时出现了进空白，样品，原料都没有主峰的现象，过去做过这个，正常，请帮忙分析一下补充一下，以前配流动相是乙腈与盐混合过滤，再超声，这次是先滤盐，后滤乙腈，再超声，这一步应没问题吧我买的新的ODS碳18柱子,做白藜芦醇和它的苷,标样混标,出峰比较好.但是后几个点保留值提前,今天进样,发现有肩峰,但是保留时间基本一致.流动相是甲醇和水,40比60.怎么办呢hu_2104411 wrote:我买的新的ODS碳18柱子,做白藜芦醇和它的苷,标样混标,出峰比较好.但是后几个点保留值提前,今天进样,发现有肩峰,但是保留时间基本一致.流动相是甲醇和水,40比60.怎么办呢可能是柱子脏了，用异丙醇或者四氢呋喃冲洗一下，柱子现在的压力比最初使用时高多少？请问base-deactivated octadecylsilyl silica gel是什么柱？谢谢！to ：xinyiaa bds是填料经过碱基去活的ods,就是将硅胶表面的硅醇基碱性硅烷化,适合于弱碱性和弱酸性化合物.对于某些色谱的分离较好。
对于离子对色谱，有时不加离子对，分离也很好，峰的对称性也有很大改善，当然，其作用不止这些。
可以当作普通的ods用，但价格较贵。
我接触液相刚一个月，做硕士课题，用液相分离血中的ATP,ADP,AMP,NAD,NADH,NADPh,NADP 条件：*250，5um，流动相：磷酸钾缓冲液，l，,甲醇10% 流速min 跟文献上的一样可是我的ATP,ADP 出峰时间早了两分钟，而且两者根本分不开了，所有的原因都想到了可分离度还是很低。
另外，对标准品分离可以，但样品分不开，怎么解决呢？很郁闷，谢谢各位老师！。