水产品中氯霉素的快速检测 胶体金免疫层析法(KJ201905)
附件5
水产品中氯霉素的快速检测
胶体金免疫层析法
（KJ201905）
1 范围
本方法规定了水产品中氯霉素的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于水产品中氯霉素的快速测定。
2 原理
本方法的测定以竞争抑制免疫层析原理为基础。
样品中的氯霉素经有机试剂提取，固相萃取小柱净化，浓缩复溶后，氯霉素与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和微孔膜检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。
通过检测线与控制线颜色深浅比较，对样品中氯霉素含量进行定性判定。
3 试剂和材料
除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的二级水。
3.1 试剂
3.1.1 正己烷。
3.1.2 丙酮。
3.1.3 乙酸乙酯。
3.1.4乙腈
3.1.5磷酸二氢钠，NaH2PO4·2H2O。
3.1.6磷酸氢二钠，Na2HPO4·12H2O。
3.1.7 氯化钠
3.1.8 复溶液：称取0.12 g磷酸二氢钠(3.1.5)置于100 mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，制成溶液A；称取磷酸氢二钠7.16 g (3.1.6)置于100 mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，制成溶液B。
取溶液A 2.8 mL、溶液B 7.2 mL、氯化钠(3.1.7)0.85 g，用水溶解并稀释至100 mL，得磷酸盐缓冲液，即为复溶液。
3.1.9丙酮-正己烷（1+9）：丙酮（3.1.2）、正己烷（3.1.1）按体积比1：9混匀。
3.1.10丙酮-正己烷（6+4）：丙酮（3.1.2）、正己烷（3.1.1）按体积比6：4混匀。
3.2 标准物质
氯霉素标准物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分之式、相对分子质量见表1，纯度≥98.6%。
注：或等同可溯源物质。
3.3标准溶液配制
3.3.1 氯霉素标准储备液（1 mg/mL）：精密称取氯霉素标准物质（3.2）10 mg，置于10 mL容量瓶中，用乙腈（3.1.4）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1 mg/mL的氯霉素标准储备液。
4℃避光保存，有效期6个月。
3.3.2 氯霉素标准中间液A（10 μg/mL）：精密量取氯霉素标准储备液（1 mg/mL）（3.3.1）0.1 mL，置于10 mL 容量瓶中，用乙腈（3.1.4）稀释至刻度，摇匀，制成10 μg/mL的氯霉素标准中间液A。
4℃避光保存，有效期3个月。
3.3.3 氯霉素标准工作液（0.01 μg/mL）：精密移取氯霉素标准中间液A（10 μg/mL）（3.3.2）0.01 mL分别置于10 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.01 μg/mL的氯霉素标准工作液。
临用新配。
3.4材料
3.4.1固相萃取小柱：Cleanert Silica，200 mg/6mL。
LOT：0170198。
3.4.2免疫胶体金试剂盒（在2～30℃、干燥阴凉条件下保存，在产品有效期内使用）。
3.4.2.1 金标微孔。
3.4.2.2 试纸条或检测卡。
4 仪器和设备
4.1 移液器：200 μL、1 mL和5 mL。
4.2 涡旋混合器。
4.3 离心机：转速≥4000 r/min。
4.4 电子天平：感量分别为0.01 mg和0.01 g。
4.5 样品浓缩仪：如有需要。
4.6 环境条件：温度：15～25℃，相对湿度：≤60%。
5分析步骤
5.1试样制备
取具有代表性样品约500 g，充分粉碎混匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样和留样，密封，标记，于常温保存。
5.2试样提取和净化
准确称取试样6 g（精确至0.01 g）置于50 mL具塞离心管中，依次加入1 mL水和8 mL乙酸乙酯（3.1.3），涡旋提取5 min，以4000 r/min离心5 min。
转移全部乙酸乙酯层于50 mL具塞离心管中，加入正己烷25 mL，氯化钠1 g涡旋混匀，4000 r/min 离心1 min，上清液待净化。
5 mL丙酮-正己烷（1+9）（3.1.9）淋洗LC-Si硅胶小柱，弃去淋洗液，将待净化溶液转移到固相萃取小柱上，弃去流出液，用5 mL丙酮-正己烷（6+4）（3.1.10）洗脱，收集洗脱液，洗脱液于40℃氮气吹干，精密加入600 µL复溶液（3.1.8），涡旋混合1 min，作为待测液。
5.3 测定步骤
5.3.1 检测卡与金标微孔测定步骤
吸取150 µL样品待测液于反应微孔（3.4.2.1）中，抽吸5～10次使混合均匀，室温温育3 min；温育结束后，将金标微孔中溶液滴加到检测卡（3.4.2.2）上的加样孔中，室温温育5～8 min，对结果进行判定。
5.3.2 试纸条与金标微孔测定步骤
吸取150 µL样品待测液于反应微孔（3.4.2.1）中，抽吸5～10次使混合均匀，室温温育3 min；
温育结束后，将检测试纸条（3.4.2.2）吸水海绵端垂直向下插入反应微孔中，室温温育3 min，从微孔中取出试纸条，去掉试纸条下端的吸水海绵，并于5 min内进行结果判定。
5.3.3 检测卡测定步骤
吸取150 µL样品待测液滴加到检测卡（3.4.2.2）上的加样孔中，室温温育5～8 min，对结果进行判定。
5.4质控试验
每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。
5.4.1 空白试验
称取空白试样，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。
5.4.2 加标质控试验
准确称取空白样品6 g或适量（精确至0.01 g）置于15 mL具塞离心管中，加入180 μL氯霉素标准工作液（0.01 μg/mL）（3.3.3），使氯霉素浓度为0.3 μg/kg，一式2份，按照 5.2和5.3步骤与样品同法操作。
6 结果判定要求
通过对比控制线和检测线的颜色深浅进行结果判定。
由于长时间放置会引起检测线颜色的变化，需在规定时间内进行结果判定。
目视结果判读依据如图1所示。
6.1 无效
控制线（C线）不显色，表明不正确操作或试纸条/检测卡无效。
6.2 阳性结果
检测线（T线）不显色或检测线（T线）颜色比控制线（C线）颜色浅，表明样品中氯霉素含量高于方法检测限，判定为阳性。
6.3 阴性结果
检测线（T线）颜色比控制线（C线）颜色深或者检测线（T线）颜色与控制线（C线）颜色相当，表明样品中氯霉素含量低于方法检测限，判定为阴性。
6.4质量控制要求
空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。
7 结论
如被测样品中氯霉素检测结果为阳性时，应采用确证方法进行确证检测。
8 性能指标
8.1 检测限
氯霉素为0.1 μg/kg。
8.2 灵敏度
灵敏度应≥98%。
8.3 特异性
特异性应≥90%。
8.4 假阴性率
假阴性率应≤1%。
8.5 假阳性率
假阳性率应≤10%。
注：性能指标计算方法见附录A
9其他
本方法所述试剂、试剂盒信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不做限定。
方法使用者在使用替代试剂、试剂盒或操作步骤前，须对其进行考察，应满足本方法规定的各项性能指标。
本方法参比标准为GB/T 22338-2008 动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定(包括所有
修改单)。
附录A
定性方法性能计算表
本方法负责起草单位：山西省食品药品检验所。
验证单位：陕西省食品药品检验所、广东省药品检验所、四川省食品药品检验检测院。
主要起草人：李倩、阎安婷、陈煜、杨国伟。
水产品中氯霉素残留检测方法
水产品中氯霉素残留检测方法氯霉素（Chloramphenicol，简称CAP）是一种广谱抗菌药物，在水产品中的残留对人体健康具有潜在风险。
因此，准确快速地检测水产品中的氯霉素残留是非常重要的。
目前，常用的氯霉素残留检测方法包括高效液相色谱法、液相色谱-质谱法、酶联免疫吸附测定法等。
高效液相色谱法（HPLC）是目前最常用的氯霉素残留检测方法之一、它利用色谱柱进行分离，通过比色法或荧光法进行检测。
具体步骤如下：首先，将待测样品进行提取，常用的提取剂包括乙腈、甲醇等。
然后，将提取液通过色谱柱进行分离，同时通过流动相的携带进行样品的洗脱。
最后，通过比色法或荧光法对洗脱液进行检测和定量。
HPLC方法具有准确、灵敏、高效的优点，但是需要较昂贵的设备和试剂，并且操作复杂，对操作人员的技术要求较高。
液相色谱-质谱法（LC-MS）是一种结合了液相色谱和质谱的分析技术，可以实现对氯霉素残留的准确定量和结构鉴定。
与HPLC相比，LC-MS具有更高的灵敏度和特异性。
它可以通过质谱仪对分离出的化合物进行分析，从而实现对氯霉素残留的快速检测。
然而，LC-MS方法需要昂贵的设备和试剂，并且需要经验丰富的操作人员进行操作。
酶联免疫吸附测定法（ELISA）是一种基于免疫学原理的检测方法，可以实现对氯霉素残留的高效筛查。
ELISA方法的原理是将待检样品与特异性抗体结合，然后通过酶标记二抗进行检测。
具体步骤如下：首先，将待测样品和抗体溶液进行孵育，使得残留的氯霉素与抗体结合。
然后，通过酶标记的二抗与结合的复合物发生反应，产生可观测的信号。
最后，通过比色法或发光法对信号进行检测和定量。
ELISA方法具有灵敏度高、操作简便、成本低等优点，但是其结果可能受到其他因素的干扰，需要进一步的确认。
综上所述，水产品中氯霉素残留的检测方法有高效液相色谱法、液相色谱-质谱法和酶联免疫吸附测定法。
这些方法各有优缺点，选择适合的检测方法需要根据实际情况进行评估和决策。
胶体金免疫层析产品快速测定水产品中的氯霉素残留
胶体金免疫层析产品快速测定水产品中的氯霉素残留
王媛;钱蓓蕾;于慧娟;蔡友琼;黄冬梅
【期刊名称】《中国渔业质量与标准》
【年(卷),期】2013(003)001
【摘要】分析比较了3种测定水产品中氯霉素残留的商品化胶体金快速检测产品,其灵敏度、精密度、符合性和稳定性均能满足目前对氯霉素监控的限量要求.胶体金免疫产品操作简单、结果准确、重复性好,适合水产品中氯霉素残留的现场筛选.【总页数】5页(P82-86)
【作者】王媛;钱蓓蕾;于慧娟;蔡友琼;黄冬梅
【作者单位】中国水产科学研究院东海水产研究所,上海200090;中国水产科学研究院东海水产研究所,上海200090;中国水产科学研究院东海水产研究所,上海200090;中国水产科学研究院东海水产研究所,上海200090;中国水产科学研究院东海水产研究所,上海200090
【正文语种】中文
【中图分类】S94
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胶体金免疫层析方法快速检测食品中氯霉素的残留研究
论文作者签名：＿＿＿＿＿
论文导师签名：＿＿＿＿＿ 日 期： 年 月 日
广东药学院硕士研究生学位论文
序言
1. 氯霉素残留检测研究发展
氯霉素(Chloramphenicol，CAP)是由 Ehrlich 等在 1947 年首次从微生物代谢物中 分离的一种广谱抗生素。目前可用人工方法合成，已广泛用于动物各种传染性疾病的 治疗[1]。氯霉素对革兰阳性、阴性细菌均有抑制作用，且对后者的作用较强。其中对 伤寒杆菌、流感杆菌、副流感杆菌和百日咳杆菌的作用比其他抗生素强，对立克次体 感染如斑疹伤寒也有效，但对革兰阳性球菌的作用不及青霉素和四环素。
广东药学院 硕士学位论文 胶体金免疫层析方法快速检测食品中氯霉素的残留研究 姓名：徐欢 申请学位级别：硕士 专业：中药学 指导教师：田素娟
20100501
广东药学院硕士研究生学位论文
胶体金免疫层析方法快速检测食品中氯霉素的残留研究
徐欢(中药学) 导师:田素娟 教授
摘要
目的：氯霉素作为一种高效广谱的抗生素，广泛用于动物各种传染性疾病的治疗，但 是因其毒副作用较强，许多国家和地区相继禁止或严格限制使用氯霉素，传统的氯霉 素残留分析方法需要昂贵的仪器和专业技术人员，且周期长、成本高，不能满足现场 和快速检测的要求。因此，建立高效、灵敏、经济的氯霉素残留分析方法是很有必要 的。胶体金免疫层析试纸条检测法是利用抗原和抗体的特异性结合反应对微量抗原或 抗体进行测定的方法，本论文旨在研制氯霉素免疫胶体金层析试纸条，应用于畜产品 中氯霉素残留的快速检测，具有重要的现实意义和极高的商业开发价值。 方法：通过体外扩大培养杂交瘤细胞，将细胞接种到小鼠体内，采用体内诱生法制备 出含抗氯霉素特异性单克隆抗体的腹水。腹水经辛酸-硫酸铵法、亲和柱层析法进行纯 化。纯化后用全抗原对三株单抗从蛋白浓度、效价以及交叉反应等指标进行质量鉴定； 采用柠檬酸三钠还原法制备了不同粒径的胶体金，将具有氯霉素特异性的免疫胶体金 均匀灌注在 BT50 型玻璃纤维膜，烘干后即为胶体金垫。经比较试验选用 Whatman 公 司的 AE98Fast 硝酸纤维素膜作为层析膜；控制线采用 20 倍稀释的羊抗鼠 IgG；用浓 度为 1mg/mL 的氯霉素包被原（CAP-BSA）喷涂检测线，最后组装成试纸条。 结果：选取 4D10 作为制备探针抗体，其蛋白浓度为 2.89mg/mL，经 ELISA 法测定抗 体效价为 1：1.024×106，利用改良竞争 ELISA 法测定单抗与各抗生素的交叉反应，抗 氯霉素单克隆抗体(CAP-McAb)与氯霉素琥珀酸钠有交叉反应而与青霉素、链霉素、 磺胺二甲嘧啶、甲砜霉素等抗生素无交叉反应，与各抗生素、类似物的交叉率均小于 0.01%，具有较高的特异性和亲和力。通过紫外分析和外观观察试验确定了胶体金标 记抗体的最适蛋白质浓度为 48µg/mL，最适 pH 在 8.2 左右。用制得的免疫层析试纸 条检测已知的含有氯霉素的样品，灵敏度为 100ng/mL，在其灵敏度范围内重现性为 100%，试纸条在 5min 左右出现清晰的条带。 结论：对制备的氯霉素的免疫胶体金层析试纸条的验证试验表明，该试纸条检测时间
水产品中氯霉素残留检测方法
FOOD INDUSTRY ·127水产品中氯霉素残留检测方法 李梓建 广东省汕头市食品检验检测中心 广东省汕头市质量计量监督检测所氯霉素是一种广谱抗生素，对很多不同种类的微生物均起显著作用。
近年来，在水产品养殖和运输过程中违规使用氯霉素的现象屡见不鲜，问题日益突出，严重威胁到了人民群众的健康。
本文简述了水产品中氯霉素残留的多种检测方法，包括色谱分析法、微生物法、免疫分析法以及生物传感器、生物芯片等新型检测技术，并对其优缺点进行了比较分析，以期为水产品中氯霉素残留检测提供参考。
最后本文还对氯霉素残留检测方法的发展趋势进行了展望。
氯霉素（ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ，ｃｈｌｏｒｏｍｙｃｅｔｉｎ）是白色或无色的针状或片状结晶，由委内瑞拉链丝菌产生的抗生素。
大卫·戈特利布于１９４７年从南美洲委内瑞拉的土壤内的委内瑞拉链霉菌成功分离，并于１９４９年合成并引入临床试验。
它属于抑菌性广谱抗生素，也是世界上首种完全由合成方法大量制造的广谱抗生素，对很多不同种类的微生物均起显著作用。
但是，由于它对造血系统有严重不良反应，需要慎重使用。
检测方法分析的必要性水产品营养丰富，品种繁多且风味各异，深受老百姓的喜爱，需求量也是与日俱增，这在很大程度上促进了我国水产品养殖业规模的发展。
然而，伴随着发展而来的是越来越多的抗生素类药物被应用其中，由于部分养殖户和商家不遵守国家有关规定及未合理使用药物，造成抗生素在水产品中残留居高不下。
其中，氯霉素药物的违规使用更是屡见不鲜，甚至让水产品成为食品安全的重灾区之一。
由于氯霉素药物存在严重的毒副作用，能够抑制骨髓造血功能、引发再生障碍贫血、粒状白细缺乏症和新生儿、早产儿灰色综合症等，美国、欧盟、日本等很多国家都禁止其在动物源性食品中检出。
依据中华人民共和国农业部公告第２３５号中《动物性食品中兽药最高残留限量》（发布日期：２００２年１２月２４日）的规定，氯霉素为禁止使用的药物，在动物性食品中不得检出。
浅谈水产品中氯霉素的快速测定
浅谈水产品中氯霉素的快速测定
蒙君丽;刘阁兴
【期刊名称】《河北渔业》
【年(卷),期】2009(0)1
【摘要】氯霉素（Chloramphenicol，CAP），是一种有效的广谱抗生素，常用
于动物各种传染性疾病的治疗，对多种病原菌有较强的抑制作用，曾在水产养殖业中得到广泛应用，同时也带来了水产品中氯霉素残留的严重问题。
氯霉素存在严重的毒副作用，能抑制人体骨髓造血功能，引起人类的再生障碍性贫血、粒状白细胞缺乏症、新生儿、早产儿灰色综合症等疾病，低浓度的药物残留还会诱发致病菌的耐药性，因此氯霉素残留问题已引起国际组织和世界上许多国家和地区的高度重视，【总页数】2页(P40-41)
【作者】蒙君丽;刘阁兴
【作者单位】唐山市水产技术推广站,河北,唐山,063000;丰南区发展改革局,河北,丰南,063300
【正文语种】中文
【中图分类】S9
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水产品中氯霉素残留胶体金免疫层析法快速检测技术
性结果 ，表明不含氯霉素或者氯霉素残 留量低于检
出限 （ ４０ ． ３ ￣ ｔ ｇ ／ ｋ ｇ ） 。 ６ ． ３ 阳性结 果
（ ２ ） 用 塑 料 吸管 将无 气 泡 的待检 样 品垂直 滴 加 ３滴 （ 约 Ｉ Ｏ ０ ￣ Ｌ ） 于加样 孔 中 ， 具体 见 图 ｌ 。
０ ． ２ ｍＬ下 层溶 液 ， 为 待检样 品 。
５ ． ３ 测 定
待 检试 样 检 测 线 （ Ｔ线 ） 出现红 色 条 带 ， 且 颜 色 比控制 线 （ ｃ线 ） 深（ 如图 ４ ） 或一样 深 （ 如图 ５ ） ， 为 阴
（ １ ） 从包装袋中取出氯霉素胶体金免疫层析试
剂板 ， 置于平 整 的台面 上待测 。检 测试 剂板 取 出后 ，
试 样提 取液作 为 空 白对 照 ， 加 样方 法 同样 品 。 （ ４ ） 加样 后 开 始计 时 ， 结果应在 ３ ５ ｍｉ ｎ读 取 ， 其 他 时间判读 无效 。
４ 仪 器 设 备
氯霉素残留胶体金免疫层析法快速检测技术适
用的主要仪器设备为 ： 电子天平 （ 感量 ０ ． ０ １ ｇ ） 、 小型
２ ０ １ ６年 第 ６期 一
均质器 、 离心机 （ 最大转速 Ｉ ＞４ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍ ｉ ｎ ） 、 氮 气 吹 干 仪 或空 气 吹干仪 。
待 检试 样 检 测 线 （ Ｔ线 ） 出现红 色 条 带 ， 但 颜 色 比控制 线 （ Ｃ线 ） 浅（ 如图 ６ ） ， 或 检测 线 （ Ｔ线 ） 未 出现 红 色 条带 （ 如图 ７ ） ， 为 阳性 结果 ， 表示 样 品 中氯霉 素
（ ３ ） 每批样品需做 １ 孑 Ｌ 空 白对照 ， 以复溶液代替
水产品中氯霉素残留快速检测产品的质量分析和评价
（ ．中国水产科 学研 究院 质量与标 准研 究 中心 北京 １０４ ；．国家水产 品质 量监督检验 中心 青岛 ２６ ７ １ ０ １ １２ ６ ０ １）
摘要： 为推动快速检测产 品在水产 品药物残留监管领域 的应用 ， 立 了一套 “ 样检测 式” 物残 留快速检测 产品筛 建 盲 药 选评价方法 ， ４种市售 的国产氯霉素胶体 金快 速检测产品 的假 阳性率 、 对 假阴性率 、 出率等指标进行 验证。验证结 检 果显示 ， 仅有 １ 种产 品能 １０ ０ ％准确检测出 ６ ８个鱼糜样 品中是否残 留氯霉素 ， １种产 品的假 阳性率 达 ３ ％ ， 有 ５ ２种产 品的最低检 测浓 度值与商标标识最低检 出限不相符 ， 明产 品的质量 参差不齐 。胶 体金快速 检测产 品作 为质量安全 说
监管工具 ， 投入使用前 ， 必要 对其 最低 检 出 限、 阳性 率 、 阴性率 等参 数进 行验 证 。［ 国渔业 质量 与标 准 ， 在 有 假 假 中
２ １ ，（ ） ５ ０ ２ ２ ３ ：５—６ ］ １
关键词 ： 氯霉素 ； 胶体 金快速检测产 品； 分析评价 ； 最低检 出限 ； 阳性率 ； 阴性率 假 假 中图分 类号 ：９ ￥４ 文献标 志码 ： Ａ 文章 编号 ： ０ ５—１３ （０ ２ ０ ０ ５ ０ ２９ ８３ ２ １ ）３— ０５— ７
要 卜 。 目前 ， Ｊ 国外 已经 有 相 当 成 熟 的 商 品 化 试 纸条 ， 如美 国 的 Ｃ ｒｍ Ｓｉ ｃ ｎ． 司研 发 的一 系 ｈａ ｃｅ ｅＩｃ 公 ｎ 列 用 于 检 测 牛 奶 中各 种 抗 生 素 的 免 疫 纸 层 析 胶 体
金 试 纸 条 Ｒ Ｓ 系列 ，但 用于 检测 水 产 品 中禁 用 兽 ＯＡ 药 及 有 毒有 害 物 质残 留的试 纸 条 产 品 尚不 多 见 。 由于 免 疫胶 体 金 快 速 检 测 产 品 尚属 新 兴 行 业 ， 于 用 检 测 水 产 品 中兽 药 及 有 毒 有 害 物 质 残 留 的 产 品 技
水产品肌肉组织中氯霉素残留量检测方法的对比分析
水产品肌肉组织中氯霉素残留量检测方法的对比分析引言：氯霉素是一种广谱抗生素，常用于水产养殖中的疾病治疗和预防。
然而，由于氯霉素在人体中可以引起苯甘氮类药物引起的无异位脂肪移植症，因此世界各国都对水产品中的氯霉素残留量有严格的限制。
针对水产品肌肉组织中氯霉素残留量的测试，现有许多不同的方法和技术。
本文将对其中一些常用的方法进行对比分析，并评估它们的优缺点。
方法一：高效液相色谱法（HPLC）检测氯霉素残留量HPLC是一种常用的分离和定量分析方法，可以快速准确地检测氯霉素残留量。
该方法通过将水产品肌肉组织样品提取液经过色谱分离，利用紫外或荧光探测器测量不同物质的峰值面积，从而定量检测氯霉素的含量。
该方法的优点是操作简便、准确性高，可以同时检测多种氯霉素类药物。
然而，HPLC方法的缺点是设备昂贵、操作复杂，对操作人员的技术要求较高。
方法二：酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测氯霉素残留量ELISA是一种常用的生物学分析方法，可以通过酶标记的抗体与目标物质结合来检测氯霉素残留量。
该方法操作简便，具有高通量性和准确性。
ELISA方法的优点是对样品处理较少，检测时间短，适用于大批量样品分析。
然而，ELISA方法的缺点是可能存在交叉反应和假阳性结果，对操作人员技术要求较高。
此外，ELISA方法只能定性或半定量检测氯霉素残留量，不能提供准确的定量结果。
方法三：气相色谱质谱联用法（GC-MS）检测氯霉素残留量GC-MS是一种常用的分析方法，可以通过将水产品肌肉组织样品提取液经过气相色谱分离，然后利用质谱检测器对不同物质进行鉴定和定量。
GC-MS方法准确性高，可以进行定量检测，具有良好的选择性和灵敏性。
然而，GC-MS方法的缺点是操作复杂，需要较长的分析时间，设备昂贵，对操作人员的技术要求较高。
综合对比分析：从操作简便性、准确性、成本和设备要求等方面考虑，HPLC方法适合进行氯霉素残留量的定量检测。
而ELISA方法适合进行大批量样品的快速筛查，但不能提供准确的定量结果。
DB1301_T281-2018水产品中氯霉素的快速检测荧光免疫层析法
ICS67.050B 50 DB1301 石家庄市地方标准DB 1301/T 281—2018水产品中氯霉素的快速检测荧光免疫层析法Determination of chloramphenicol in aquatic products—Fluorescence immunochromatography2018-05-18发布2018-07-20实施前言本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准由石家庄市农业畜牧局提出。
本标准起草单位：石家庄市畜产品质量监测中心。
本标准主要起草人: 李云、赵义良、宋瑞、刘松雁、张梦雪、张彩云、桂蕴、武治云。
水产品中氯霉素的快速检测荧光免疫层析法1 范围本标准规定了水产品中氯霉素（Chloroamphenicol，CAP）的荧光免疫层析快速检测方法。
本标准适用于水产品中氯霉素的快速筛选检测，本方法的检出限为0.1μg/kg。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
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凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 原理本法应用竞争抑制免疫层析原理。
样品中残留的氯霉素经乙酸乙酯提取、正己烷净化后，样品溶液中的氯霉素与铕乳胶标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素膜检测线上氯霉素-BSA 偶联物的结合，使检测线荧光强度低于控制线荧光强度或检测线无荧光。
4 试剂和材料除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。
4.1 浓盐酸(HCl)。
4.2 氯化钠（NaCl）。
4.3 氯化钾（KCl）。
4.4 磷酸氢二钠（Na2HPO4）。
4.5 磷酸二氢钾（KH2PO4）。
4.6 乙酸乙酯（C4H8O2）。
4.7 正己烷（C6H14）。
4.8 甲醇（CH4O）。
4.9 吐温-20（C58H114O26）。
水产品有机有害物的检测—氯霉素的测定
氯霉素 简介
一
随着生活水平的提高，人们对食品安全要求更为严格， 尤其是各种药物在动物中的应用，因为药品残留已成为威 胁人体健康的重要因素。对水产品氯霉素药物残留进行检 测，是提高其食用安全性的重要措施，对保证人体健康具 有重要意义。就我国水产品行业发展现状来看，氯霉素已 成为禁用药物，如果不对其残留量进行检测，将会直接影 响水产品的食用性，一旦出现因为药物残留过量导致出现 安全事故，必定会造成市场萎缩，不利于行业的持续发展， 对我国渔业健康发展有重要影响。
检测原理
二
提取原理
样品中的氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考在 碱性条件下,用乙酸乙酯提取，提取液旋 转蒸干后,残渣用水溶解,经正己烷液液分 配脱脂，
定量方法
1.液相色谱串联电喷雾质谱仪测定 2.内标峰面积法定量。
三
1.提取过程：
提取步骤
称取均质试样5g式样，加入内标
15mL乙酸乙酯 0.45mL氨水 5g硫酸 钠均质提取，4000r/min 离心5min
清洗刀头，重复提取两次，
合并全部上清液至50 mL比色管中， 用乙酸乙酯定容至50 mL
提取步骤
三
2.净化过程：
① 取10mL提取液与25mL鸡心瓶中 ② 45℃下旋转浓缩至干 ③ 3mL水复溶 ④ 3mL正己烷液液分配 ⑤ 水围：
范围
① 本标准规定了可食动物肌肉、肝脏、鱼和虾 中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的液 相色谱-串联质谱测定方法。
② 适用于可食动物肌肉、肝脏、鱼和虾中氯霉 素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的测定。
③ 其中标准方法的检出限：氯霉素为0.1 μg/kg， 甲砜霉素和氟甲砜霉素1.0 μg/kg
氯霉素 简介