DP103--离心柱型--质粒小提试剂盒
质粒小提sop
1.仪器设备 名称Heal Force 其林贝尔 仪器制造 湖南平方科技
货号 Neofuge TS-8S TG16 –WS
2.试剂 名称 蛋白胨 酵母提取物 NaCl
氨苄青霉素钠 硫酸卡那霉素
甘油
厂商 Oxoid Oxoid 国药 Addin Addin 国药
货号 Lp0042 Lp0041 10019318 A105483-100g K103025-100g 10010618
3. 质粒小提操作方法 （1）取培养过夜的菌液8000rpm离心3min。 （2）弃上清，用枪吸取残留的液体，使细胞沉淀尽可能干燥。 （3）菌体沉淀重悬浮于250μl溶液P1中(用枪反复吹匀)。 （4）加入250μl溶液P2(盖紧管口，温和颠倒离心管数次，以混匀内容物(千万不要振荡)， 静置5 min。 （5）加入350μl溶液P3，盖紧管口，温和颠倒离心管数次，使沉淀混匀。12000rpm离心 10分钟。 （6）上清液移入吸附柱管中（提前用平衡液BL平衡），吸附1-2min，12000g离心1min， 重复此步骤一次。 （7）弃上清，向柱中加入500ulPW漂洗液，12000rpm离心1分钟，重复此步骤一次。 （8）弃上清，空管子在12000rpm离心3分钟。 （9）将吸附柱盖子打开，放入烘箱静置3min，同时预热一管水备用。 （ 10 ） 取 新 的 1.5mlEP 管 ， 在 吸 附 柱 的 膜 中 间 加 入 50ul 预 热 的 水 ， 静 置 吸 附 2min ， 12000rpm离心3分钟。
高纯质粒小量提取试剂盒(柱离心型)
高纯质粒小量提取试剂盒（柱离心型）(Plasmid Minispin HP Kit Ver.2)产品说明：本试剂盒在常规柱离心质粒提取技术的基础上，改进了硅基质膜材料和试剂配方，使质粒DNA获得高效、专一吸附。
经过两步洗涤，可清除蛋白质、基因组DNA、RNA和其他杂质。
新增基质平衡液处理步骤，可进一步提高硅胶膜的DNA吸附能力，获得稳定的质粒产量。
适合于从1~3 ml培养液中提取质粒DNA。
高拷贝菌液可获得质粒DNA约5~30 μg，可应用于各种常规实验如酶切、PCR、测序、连接、转化和体外转录等操作，并可用于细胞转染工作。
产品内容与储存方法：名称数量保存条件Buffer P1（重悬液）20 ml RTBuffer P2（裂解液）20 ml RTBuffer P3（结合液）30 ml RTBuffer PE（平衡液）30 ml RTBuffer PWT （洗涤液T）* 30 ml RTBuffer PW （洗涤液）** 20 ml RTElution Buffer（洗脱液）10 ml RT离心柱及套管100套RTRNase A 20 mg/ml 0.1 ml -20℃试剂盒可作100次质粒小量提取。
常温运输，室温保存。
RNase A于-20℃保存，首次使用时加入Buffer P1中混匀，置4℃保存。
*Buffer PWT（洗涤液T）在首次使用时加入异丙醇30 ml混匀。
**Buffer PW（洗涤液）在首次使用时加入无水乙醇80 ml混匀。
有效期1年。
所需其它试剂：使用者需准备加入洗涤液的无水乙醇和异丙醇。
操作方法：1)收菌：取过夜培养菌1~3 ml菌液，装入1.5ml 或2ml离心管中，12,000 x g于室温离心2 min沉淀菌体，完全弃除上清。
2)重悬：加入200 µl Buffer P1，充分混悬震荡菌体沉淀10~15 sec，使其完全分散开，至无絮块存在。
3)裂解：加入200 µl Buffer P2，轻轻颠倒离心管3~5次，室温放置2~3 min，使细菌完全裂解，溶液透明。
高纯度质粒小提试剂盒使用说明书
高纯度质粒小提试剂盒 Pure Mini Plasmid Kit(目录号：HS0103)产品包装试剂盒成分 50 preps Buffer P1 15 ml Buffer P2 15 ml Buffer P3 20 ml Buffer PD 30 ml RNase A(10 mg/ml)150 ul Buffer PW 60 ml Buffer EB 10 ml Spin Columns PA 50个 Collection Tubes (2 ml)50个（注意：使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀，2 ~ 8℃保存）保存条件本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。
若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。
单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。
加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存，可稳定保存6个月。
产品简介本试剂盒用于高纯度质粒DNA 的小量制备与纯化。
菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心柱硅胶膜（Spin Columns PA ）吸附。
通过去蛋白液（Buffer PD ）和漂洗液（Buffer PW ）的清洗可去除蛋白及其他杂质，在低盐、高pH 条件下洗脱，最后得到高纯度的质粒DNA 。
北京厚生博泰科技有限公司Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug的高纯度质粒DNA，可在30 min之内完成提取任务。
所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。
产品特点1. 快速：步骤少，操作简便，节约时间。
2. 简便：离心吸附柱不需要预平衡，漂洗液Buffer PW 和去蛋白液Buffer PD不需要另加乙醇，即开即用。
树脂型质粒DNA小量提取试剂盒操作说明
树脂型™质粒DNA小量提取试剂盒操作方法1. 将3~5ml菌液13,000rpm离心30秒收集沉淀（菌体）。
如果用1.5ml或2ml离心管则需反复离心2~3次。
2. 倒掉上清，将沉淀（菌体）完全悬浮于100µl悬浮液（溶液I）中。
上清要尽可能去除干净，可用滤纸吸干。
沉淀要用混旋器完全悬浮，否则将直接导致下一步的裂解不彻底，进而影响质粒DNA的产量和纯度。
3. 加入150µl裂解液（溶液II），轻柔地颠倒混匀10次左右，溶液逐渐变得粘稠、清亮。
不可用混旋器剧烈振荡，否则会使质粒DNA断裂；裂解时间不宜超过5分钟，否则会造成染色体DNA的污染及质粒DNA的产率降低。
4.加入150µl中和液（溶液III），轻柔地颠倒混匀10次左右。
此时可见到白色絮状的染色体DNA及细菌碎片。
5. 13,000rpm离心8~10分钟，将上清液小心转入一个新的1.5ml离心管中，加入0.4ml纯化树脂（使用前充分混匀），颠倒混匀3分钟。
此步是通过离心去除染色体DNA及细菌碎片，并使处于高盐状态下的质粒DNA与纯化树脂结合。
6.将纯化树脂及上清液的混和物吸入离心纯化柱中，13,000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液。
7.将离心纯化柱重新套入废液收集管中，加入600µl 80%异丙醇（或80%乙醇），13,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。
如果离心纯化柱底部残留有异丙醇（或乙醇），可用滤纸吸干，否则将影响以后的酶促反应。
此步是洗涤质粒DNA中混有的杂质及盐类。
8.重复第7步1~2次，尽可能将杂质去除。
9.取出离心纯化柱，将其套入一个干净的1.5ml离心管，开盖放置2~3分钟，将残留的异丙醇或乙醇挥发干净。
加入50µl TE缓冲液（若用于测序，则加50µl超纯水）于纯化树脂上，不能粘在管壁上。
室温下放置3分钟后，13,000rpm离心1分钟。
此步是将纯化树脂上的DNA洗脱下来。
质粒小量提取试剂盒说明书
质粒小量提取试剂盒说明书货号：D1100规格：50T/100T保存：常温保存，复检期一年。
（注：RNase A以附件形式发货，收到未使用前请-20℃保存）试剂盒内容：试剂盒组成D1100-50T D1100-100TRNase A300ul500ul溶液Ⅰ15ml30ml溶液Ⅱ15ml30ml溶液Ⅲ20ml40ml漂洗液15ml15ml×2洗脱液15ml30ml吸附柱50个100个收集管50个100个说明书1份1份产品说明：本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的原理特异性提取质粒DNA。
离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。
使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。
溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA （将试剂盒中提供的RNaseA全部加入），混匀，置于2-8℃保存。
如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
操作步骤:1、取1-5ml细菌培养物，12000rpm离心1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入250ul溶液Ⅰ(请先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或旋涡振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入250ul溶液Ⅱ，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
注意：混匀一定要温和，以免污染细菌基因组DNA，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要超过5min，以免质粒受到破坏。
4、向离心管中加入350ul溶液Ⅲ，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。
12000rpm离心10min，用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中，尽量不要吸出沉淀。
质粒大量提取试剂盒(离心柱型)操作方法及步骤说明书
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://Plasmid Maxi Kit质粒大量快速提取试剂盒目录号：PL11试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存10次(PL1101)RNaseA（10mg/ml）－20℃750µl溶液P1 4℃77 ml溶液P2 室温77 ml溶液N3 室温77 ml漂洗液WB 室温25 ml X 2第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温20 ml吸附柱DC 室温10个收集管（50ml）室温10个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.第一次使用时，将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后（终浓度100μg/ml）置于4℃保存。
如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量RNA残留，在溶液P1中补加RNase A即可。
2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。
快速、方便，从150-300ml大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中，可快速提取0.2-1.5mg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达80 %左右。
3.获得的质粒产量高、超螺旋比例高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
质粒小提试剂盒提取质粒
质粒小提试剂盒提取质粒
（1）柱平衡步骤：向吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中）加入500μL的平衡液BL，12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中；
（2）取1-5ml过夜培养的菌液，加入离心管中，使用常规台式离心机，12,000rpm离心1分钟，尽量吸除上清；
（3）向留有菌体沉淀的离心管中加入250μL溶液P1（先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀；
（4）向离心管中加入250μL溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解；
（5）向离心管中加入350μL溶液P3，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时将出现白色絮状沉淀。
12,000rpm离心10分钟，此时在离心管中底部形成沉淀；
（6）将上一步收集的上清液用移液器转移到吸附柱CP3中，注意尽量不要吸出沉淀。
12,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中；
（7）向吸附柱CP3中加入600μL漂洗液PW（先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中；
（8）重复操作步骤（8）；
（9）将吸附柱CP3放入收集管中，12,000rpm离心2分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液除去；
（10）将吸附柱CP3置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位滴加50-100μL洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，12,000rpm离心2分钟将质粒溶液收集到离心管中。
高纯度质粒小量提取试剂盒 说明书
大班数学活动教案：拼图教案1. 教学背景学生年龄：4-5岁学生已具备的知识和技能：会数数、认识一到十的数字、知道形状与颜色的区别2. 教学目标2.1 知识目标1.学生能把简单的拼图拼好，并准确地说出拼图所属的几何形状。
2.学生能通过拼图，巩固对一到十个数字的认识。
2.2 技能目标1.提升学生的动手能力，能够按照图示，拼好拼图。
2.培养学生的观察能力，能够观察拼图的几何形状和数字，准确地做出判断。
2.3 情感目标1.养成学生对数学活动的兴趣，让学生体验到学习数学的快乐。
2.培养学生的合作意识，学生能够在小组内合作完成拼图。
3. 教学过程3.1 导入环节教师问学生：“你们在家里会玩拼图吗？”学生回答时，教师让学生展示一下自己的拼图，然后教师说：“好的，今天我们就来学习大一点的拼图，准备好了吗？”3.2 活动环节一：拼图过程1.分组：教师将学生分成小组，每组三到四名学生。
2.活动准备：教师为每个小组提供一份数字拼图图纸，和相应的拼图，每张图纸上有一到十个数字和图形，学生需要根据图纸上的数字和图形拼出对应的图片。
3.活动过程：教师告诉学生，现在开始拼图，让学生自由组合句子，优美表达以及敢于发言。
学生在拼图过程中，要注意拼图的位置和相互之间的关系，有效进行小组合作，完成自己的任务。
3.3 活动环节二：讲解数字与形状教师在学生完成拼图后，根据每个组完成拼图的情况，问学生完成拼图的过程，并带学生回顾每个数字都对应的几何形状，如数字一对应的图形是直线，数字五对应的图形是五边形等。
3.4 活动环节三：游戏比赛教师让每个小组选一名代表出来，分别进行拼图比赛，以时间最短和完成度最高的小组为胜者，并为获胜小组颁发奖励。
4. 教学反思这次的数学活动，让学生在拼图的过程中，不仅锻炼了学生的动手能力和观察力，还让学生对数字和几何形状有了更深刻的认识。
同时，我们也培养了学生的合作意识，让他们感受到集体的力量。
在今后的数学活动中，我们将进一步发扬数学活动的魅力，让学生在活动中感受到更多的乐趣。
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3. 向留有菌体沉淀的离心管中加入 250 µl 溶液 P1（请先检查是否已加入 RNaseA），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀。 注意：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
蛋白液 PD。
技术支持：010-59822661/2665
操作步骤：
1. 柱平衡步骤：向吸附柱 CP3 中（吸附柱放入收集管中）加入 500µl 的平衡液 BL，12,000 rpm (~13,400×g ) 离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱 重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）
5. 向离心管中加入 350 µl 溶液 P3，立即温和地上下翻转 6–8 次，充分混匀，此 时将出现白色絮状沉淀。12,000 rpm (~13,400×g )离心 10 分钟，此时在离心 管底部形成沉淀。 注意：P3 加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色 沉淀，可再次离心后取上清。
1-5ml
6-30ug
pTZ，pUC, pBS, pGM-T
注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1． 溶液 P1 在使用前先加入 RNaseA（将试剂盒中提供的 RNaseA 全部加入）， 混匀，置于 2–8℃保存。
2． 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在漂洗液 PW 中加入无水乙醇。
DP103-03 (200 次) 600 µl 120ml
60 ml 60 ml 80 ml 120ml 50 ml 30 ml 200 个 200 个 1份
储存条件：
本试剂盒在室温(15-25℃)干燥条件下，可保存 1 年；更长时间的保存可置于 2-8℃。若溶液产生沉淀，应在使用前置于 37℃下溶解沉淀。单独包装的 RNase A 在室温可稳定保存 1 年以上。加入 RNase A 后的溶液 P1 应置于 2–8℃保存，可 稳定保存半年。
4. 向离心管中加入 250 µl 溶液 P2，温和地上下翻转 6－8 次使菌体充分裂解。 注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免打断基因组 DNA，造成提取的质粒 中混有基因组 DNA 片断。此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过 5 分 钟，以免质粒受到破坏。如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底， 应减少菌体量。
使用本试剂盒提取的质粒 DNA 可适用于各种常规操作，包括。
提取得率：
质粒类型 菌液量
得率
质粒
pBR322, pACYC 及其衍生载体，
低拷贝
1-5ml
3-12ug pSC101 及其衍生载体，SuperCos,
pWE15
高拷贝
11. 将吸附柱 CP3 置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位滴加 50-100 µl 洗脱缓冲液 EB，室温放置 2 分钟，12,000 rpm (~13,400×g) 离心 1 分钟将 质粒溶液收集到离心管中。 注意： 洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其 pH 值 在 7.0-8.5 范围内(可以用 NaOH 将水的 pH 值调到此范围)，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率。 洗脱缓冲液体积不应少于 50 µl，体积过小影响回收效率。且 DNA 产物应保 存在-20℃，以防 DNA 降解。
低拷贝或大质粒（>10 kb）提取
如果所提质粒为低拷贝质粒或大于 10kb 的大质粒，应加大菌体使用量，使用 5-10 ml 过夜培养物，同时按照比例增加 P1、P2、P3 的用量，洗脱缓冲液 EB 应 在 65－70℃水浴预热，在吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率。 其它步骤相同。
本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。
（离心柱型） 目录号：DP103 试剂盒内容：
试剂盒组成
RNaseA (10 mg/ml) 平衡液 BL 溶液 P1 溶液 P2 溶液 P3
去蛋白液 PD 漂洗液 PW 洗脱缓冲液 EB 吸附柱 CP3 收集管(2 ml)
说明书
DP103-02 (50 次) 150 µl 30ml 15 ml 15 ml 20 ml 30 ml 15 ml 15 ml 50 个 50 个 1份
TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD. Order: 010-59822688 Technical: 010-59822661/2665 Toll-free: 800-990-6057
版本号: PP080822
TIANprep Байду номын сангаасini Plasmid Kit 质粒小提试剂盒
3． 使用前请先检查平衡液 BL、溶液 P2 和 P3 是否出现浑浊，如有混浊现象， 可在 37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
4． 注意不要直接接触溶液 P2 和 P3，使用后应立即盖紧盖子。
5． 所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心，速度为 12,000 rpm (~13,400×g )。
产品简介：
本试剂盒采用碱裂解法裂解细菌，再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地
结合溶液中的DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，高
效、专一吸附DNA。以下操作步骤适用于提取1-5 ml过夜培养的大肠杆菌，质粒提
取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件，细胞的裂解，质粒拷贝数，质粒的稳
定性，抗生素等因素有关。
10. 将吸附柱 CP3 放入收集管中, 12,000 rpm (~13,400×g) 离心 2 分钟，目的是 将吸附柱中残余的漂洗液去除。 注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR 等）实验。为 确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱 CP3 开盖，置于室温放置 数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
6． 提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。
7． 实验前使用平衡液处理吸附柱，可以最大限度激活硅基质膜，提高得率。 8． 用平衡液处理过的柱子最好当天使用，放置时间过长会影响效果。 9． 去蛋白液 PD 可以有效去除残留的蛋白污染，当宿主菌为 endA（+ TG1、BL21、
HB101、ET12567、JM 系列）等核酸酶含量较高的菌株时，强烈推荐使用去
6. 将上一步收集的上清液用移液器转移到吸附柱 CP3 中 （吸附柱放入收集管 中），注意尽量不要吸出沉淀。12,000 rpm (~13,400×g)离心 30-60 秒，倒掉 收集管中的废液，将吸附柱 CP3 放入收集管中。
7. 可 选 步 骤 ： 向 吸 附 柱 CP3 中 加 入 500 µl 去 蛋 白液 PD ， 12,000 rpm (~13,400×g )离心 30–60 秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱 CP3 重新放回 收集管中。 如果宿主菌是 end A+宿主菌（TG1，BL21， HB101，JM 系列， ET12567 等），这些宿主菌含有大量的核酸酶，易降解质粒 DNA，推荐采用此步。 如果宿主菌是 endA-宿主菌（DH5α，TOP10 等），这步可省略。
订货电话：010-59822688
8. 向吸附柱 CP3 中加入 600 µl 漂洗液 PW（请先检查是否已加入无水乙醇）， 12,000 rpm (~13,400×g )离心 30-60 秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱 CP3 放入收集管中。
9. 向吸附柱 CP3 中加入 600 µl 漂洗液 PW，12,000 rpm (~13,400×g) 离心 30-60 秒，倒掉收集管中的废液。