细胞重组与克隆技术
克隆技术在生物医药研发中的应用
克隆技术在生物医药研发中的应用克隆技术是指利用DNA重组技术和细胞培养技术，从一个个体中获得一个或多个基因，再将其导入另一种基因组细胞中，使之能够表达所需蛋白质的一种技术。
克隆技术可以在生物医药领域中发挥重要作用，包括疾病诊断、治疗以及药物研发等方面。
本文将探讨克隆技术在生物医药研发中的应用。
一、克隆技术在制备蛋白质药物中的应用蛋白质药物是以蛋白质为主要靶向药物，如肿瘤靶向治疗药物、血液凝固因子替代治疗药物、免疫调节蛋白、酶替代治疗药物等。
蛋白质药物的制备需要通过基因工程技术将人类源或自然源中的基因进行克隆，之后在实验室中将其与真核细胞或质粒载体整合，制备出可量产的蛋白质药物。
克隆技术可以更为准确地获取目标蛋白质的基因序列，从而制备出更为纯净、高效的蛋白质药物。
二、克隆技术在切除病毒中的应用疫苗是预防疾病传染的一种重要手段。
而一些疾病病毒在重组DNA技术反复的地存储和传染中发生恶性突变，在繁殖中产生了大量的突变子病毒。
其病毒表面抗原变异后，质子基基因的序列也发生了变异。
因此，生产用于疫苗克隆，研究和开发新的切除病毒疫苗对生物医学研究和应用发挥了很大的作用。
三、克隆技术在疾病基因诊断中的应用许多疾病都是由基因突变引起的，对这些基因进行克隆再序列化可以确定导致疾病的突变，并且能够对相关的家族成员进行基因诊断，有效预防该疾病。
四、克隆技术在实现个性化医学中的应用克隆技术可以针对个体不同的基因序列，为每个人提供个性化医学治疗。
个性化医学是根据每个人的遗传信息、生活方式和临床表现等因素，量身定制治疗方案。
在克隆技术的帮助下，医生可以过基因序列信息有效地制定个性化治疗方案，为每个病人提供最佳治疗效果。
五、克隆技术发展的前景和挑战克隆技术的广泛应用是生物医药研发和临床治疗的重要进展。
未来，克隆技术的应用将进一步完善和创新，包括基因治疗、药物免疫疗法、干细胞研究、智能化和大数据挖掘等。
不过，克隆技术在实践中的应用也面临着挑战。
细胞重组技术及克隆
Ⅲ.细胞核移植：常用的核移植方法有两 种，即胞质内注射和透明带下注射。胞质 内注射是用一个外径5～8μm 的注核针吸 取供体核后直接注射进卵母细胞胞质内的 方法。透明带下注射则是把供体细胞核注 射在透明带与卵母细胞之间的卵周隙中， 核移植后用电刺激进行细胞融合。
直接注射法制作重组胚过程
Ⅳ.激活：卵母细胞的激活涉及的因素 很多，无论是受精引起的卵母细胞激活 还是人工的激活，都会引起卵母细胞发 生一系列的反应，这些反应是胚胎发育 所必需的。其激活原理是通过电刺激、 钙离子载体等方法，使卵母细胞从MII 期中解放出来，并转到“受精”的状态
近年来我国核移植技术的发展
克隆的层次
A.分子水平上的-----基因克隆 重组载体通过宿主细胞的无性繁殖使目的基因扩增， 再用某探针选取、钓取目的基因。 B.细胞水平上的------细胞系的培养（制备单克隆 抗体） 单克隆抗体：利用动物细胞融合技术将骨髓瘤细胞和 能产生抗体的B淋巴细胞融合得到杂交瘤细胞，再去 培养，筛选到杂交瘤细胞系。 C.在个体水平上------繁殖出生物个体 不通过两性细胞的结合，从一个单一的细胞繁殖出生 物个体。即细胞 ------- 个体
Ⅰ.促进生物学基础问题的研究 Ⅱ.加速良种繁育，保护濒危动物 Ⅲ.培育转基因克隆动物，生产生物 药品 Ⅳ.与基因和干细胞技术结合，开展 治疗性克隆
14.3 动物克隆技术的意义及展 望
治疗性克隆
长期以来，围绕克隆的争论主要在两种 目的不同的克隆研究之间展开，也就是 生殖性克隆和治疗性克隆。生殖性克隆 是指克隆出一个完整的人，大多数国家 和地区都旗帜鲜明地予以反对。然而对 于治疗性克隆这种以治病救人为目的的 研究，虽然有着比较高的支持率，但也 存在着不同的声音。
基因克隆和DNA重组技术的研究及其在生物学研究中的应用
基因克隆和DNA重组技术的研究及其在生物学研究中的应用随着科技的飞速发展，生物学研究中的一些关键技术也不断得到改进和创新。
其中，基因克隆和DNA重组技术就是其中十分重要的一个领域。
本文将会介绍这两个技术的原理、发展、应用以及未来的发展趋势。
1. 基因克隆技术基因克隆技术是指将一个寄生菌体中的一个特定基因从其它基因中分离出来，并利用适当的手段使其在受体茎链上扩增复制。
它首先出现的应用是将该基因植入到胰岛素原DNA序列之中，使它在大肠杆菌中扩增，然后纯化蛋白并检测其活性。
现在，基因克隆技术已经被广泛地用于生物学、医学领域的研究和应用。
基因克隆技术的原理是基于DNA分子的剪接和连接。
其基本流程包括：（1）获得DNA模板；（2）通过PCR扩增目标DNA序列；（3）利用限制性内切酶对目标PCR产物进行限制性酶切；（4）将目标DNA序列嫁合到一个载体上，用于在宿主细胞中扩增并表达该DNA序列。
2. DNA重组技术DNA重组技术是指将两种不同的DNA片段通过重组方法组合成一个新的DNA，目的是获得有用的新型DNA分子或蛋白质。
DNA重组技术的基本原理是通过限制性内切酶将两条不同的DNA分子的特定区域剪切下来，然后在适当的条件下使这两个特定的区域相互配对，形成一个新的DNA分子。
经过一系列的扩增和融合，最终得到具有新功能或新性质的DNA分子。
3. 基因克隆和DNA重组技术在生物学研究中的应用自从1973年基因克隆技术的诞生以来，这个领域已经广泛地应用于生物学的研究中。
一些主要的应用领域包括：(1) 基因定位基因定位是指通过分子方式确定某个基因位点的位置，可以在基因治疗、疾病诊断和预防等方面发挥至关重要的作用。
(2) 生产重组DNA分子和蛋白质基因克隆和DNA重组技术被广泛地用于制造带有特定功能的重组DNA分子和蛋白质。
这些分子被用于基因治疗、药物研发、疾病预防和诊断等。
(3) 生产转基因植物转基因植物是指通过把一种或多种外来基因人工引入到植物体内，从而克服传统育种技术所面临的限制，以获得具有特定特性的植物。
生物技术中的分子克隆和重组技术
生物技术中的分子克隆和重组技术生物技术在现代科技中占据了非常重要的位置。
其中，分子克隆和重组技术被广泛应用于生物医疗、农业生产和环境保护等领域。
本文旨在介绍分子克隆和重组技术的基本原理、应用和未来发展。
一、分子克隆的基本原理分子克隆是指从一个生物体或者细胞中复制一份染色体片段或者基因，并将其植入到另一个生物体或者细胞中，使其获得原始生物体的一部分或者所有遗传信息。
分子克隆的基本原理分为四个步骤：DNA的限制性内切酶消化、DNA的连接、转化和筛选。
DNA的限制性内切酶消化是指利用限制性内切酶来切割DNA分子，得到所需的DNA片段。
限制性内切酶是一种可以切割特定核苷酸序列的酶类，通过引入特定的限制性内切酶，可以将目标DNA分子切割成为片段。
这个步骤是分子克隆的第一个关键步骤。
DNA的连接是指将限制性内切酶切割后的DNA片段连接起来，形成一个完整的DNA分子。
这里需要使用DNA连接酶来连接DNA片段。
连接酶是一种可以连接DNA两个断裂末端的酶类，通过引入连接酶，可以将切割后的DNA片段粘连起来。
转化是指将连接好的DNA分子上传入到细胞中，使其被细胞利用。
这个过程需要借助转化体系，通过改变外部环境，使得细胞对DNA分子进行摄入和吸收。
筛选是指利用特定的筛选技术，筛选并鉴定细胞中是否含有目标DNA分子。
这个步骤是分子克隆的最后一步，也是最重要的一步。
通过筛选过程可以确定目标DNA分子是否成功地被细胞摄入和表达。
二、重组技术的基本原理重组技术是指将两个或者多个DNA分子原件进行重组，以产生新的基因或者新的蛋白质等分子。
重组技术是通过DNA重组、蛋白质重组等技术实现的。
DNA重组的基本原理分为三个步骤：DNA切割、高清净度电泳分离和重组。
DNA切割是指对DNA分子进行切割，以获得所需的DNA片段。
使用不同的限制性内切酶，可以得到不同的DNA片段，这是重组技术的基础过程。
高清净度电泳分离是指将切割后的DNA分子进行电泳分离，以将所需的DNA片段从其他DNA放子中分离出来。
重组DNA-分子克隆技术
重组DNA技术 Recombinant DNA Techniques
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主要内容
CONTENTS
基本知识
实验流程
实验操作
01
相关问题
02
03
04
克隆与克隆化
01
克隆：指同一副本或拷贝的集合
02
克隆化：获取同一拷贝的过程称为克隆化。
03
分子克隆：为某一研究目的，从众多不同的分子群体中分离的某一感兴趣分子，继而经无性繁殖（扩增）产生的很多相同分子的集合。
粘端连接
CCGG CCGG
GGCC GGCC
CGG C
C GGC
CGG C
C GGC
08
上幸存并形成菌落。
09
标志补救：若克隆的基因能够在宿主菌
01
表达，且表达产物与宿主菌的营养缺陷
02
互补，那么就可以利用营养突变菌株进
03
行筛选，这就是标志补救筛选。
04
01
挑取单菌落，于液体培养基中培养；
03
对质粒进行限制性内切酶酶切；
05
根据酶切产物的大小，鉴定阳性克隆。
02
收集菌体，提取纯化质粒；
在有模板DNA、引物及dNTP存在时，向
DNA合成体系中引入热稳定的Taq DNA聚
合酶。反应体系经变性、退火及扩增循环
自动。反复进行感兴趣DNA片段的酶促合
成，使目的基因按指数增长。
变性、退火、延伸三步曲
变性：双链DNA解链成为单链DNA
退火：部分引物与模板的单链DNA的特定互
补部位相配对和结合
04
琼脂糖凝胶电泳检测；
酶切和电泳
挑取平板上生长的单菌落直接进行PCR；
克隆技术知识点总结
克隆技术知识点总结克隆技术是现代生物技术领域中的重要分支，通过对细胞或生物体进行复制，可以获得与原始个体遗传信息相同的克隆个体。
本文将从克隆技术的定义、分类、应用，以及伦理道德等方面对克隆技术的知识点进行总结。
一、克隆技术的定义克隆技术是指通过人工手段复制或产生与原始个体遗传信息相同的生物个体。
克隆技术可以分为两种形式：基因克隆和生物体克隆。
基因克隆是指通过重组DNA技术获得具有相同遗传信息的DNA分子，而生物体克隆则是通过复制细胞或胚胎来获得与原始个体相同基因组的生物个体。
二、克隆技术的分类根据克隆技术的不同方法和手段，可以将其分为以下几种类型：1. 重组DNA技术克隆：通过将目标基因插入到载体DNA中，进而将其转化到宿主细胞中，使得宿主细胞表达目标基因并进行大量复制。
2. 基因工程克隆：通过DNA分子的重组和转化，将外源基因导入到受体生物体中，使得受体生物体表达和遗传外源基因。
3. 细胞克隆：通过体细胞核移植或分裂的方法，复制出与原始细胞基因相同的细胞，实现细胞的无性繁殖和扩增。
4. 动物体克隆：通过体细胞核移植等方法，复制出与原始生物体基因相同的生物个体。
5. 植物体克隆：通过组织培养、离体培养等方法，将植物组织进行分裂和再生，得到与原始植株基因相同的新个体。
三、克隆技术的应用克隆技术在各个领域都有广泛的应用。
以下是其中一些主要领域的应用：1. 医学研究：克隆技术在医学研究中可以用于制备大量含有特定基因的重组蛋白，用于疾病的诊断和治疗研究。
2. 农业领域：通过克隆技术可以获得优良农作物的纯合株系，提高农作物的产量和抗病虫害能力。
3. 物种保护：对于濒危物种而言，克隆技术可以通过细胞克隆或动物体克隆的方式，复制出与原始物种基因完全相同的个体，以保护珍稀物种。
4. 药物研发：通过克隆技术可以制备大量含有特定基因的动物模型，用于药物研发和毒性测试。
5. 人类生育领域：体细胞核移植技术为不育夫妇带来了希望，使得他们可以通过克隆技术获得自己的后代。
克隆技术原理及其应用
克隆技术原理及其应用克隆技术，简称为克隆，是一种生物技术，旨在复制出完全一模一样的生物体或组织。
这种技术应用广泛，它不仅可以用来复制植物和动物的基因，还可以用来扩大种群数量、繁殖珍贵稀有物种，甚至用来治疗疾病。
本文将展开介绍克隆技术原理和其应用方式。
一、克隆技术原理克隆技术分为两种方法：一是生殖细胞核移植法，这种方法通俗理解即为“克隆”，而是同源染色体转移法。
1. 生殖细胞核移植法生殖细胞核移植法是现实中普遍运用的一种技术。
简单的讲，生殖细胞核移植法主要分三个步骤：第一步: 先从体细胞中获取细胞核。
第二步: 从一只已经发育成熟的生殖细胞（即卵细胞）中除去自身的细胞核，再将已经获取到的细胞核植入其中。
第三步: 将重组好的卵细胞植入一只“代孕母牛”体内，让其发育变成一只成熟的生殖体，从而完成了克隆的过程。
2. 同源染色体转移法同源染色体转移法通常运用在细菌基因工程等领域。
这种方法主要是将自由状态的脱氧核糖核酸（DNA）插入到宿主的染色体上，从而实现了新的表达。
同时，这种方法也一定程度上旨在和探究細胞自身的基因调查。
二、克隆技术的应用克隆技术作为一种新兴技术，应用的范围非常广阔，以下是一些克隆技术的应用场景：1. 种群扩大方式珍稀物种的保护已经成为当代社会关注的热点。
例如，在繁殖熊猫方面，现在应用比较普遍的就是克隆技术。
利用动物体细胞核移植完成动物体的克隆，可扩大珍稀物种的数量。
2. 农业领域在农业领域中，应用的场景也是非常丰富多彩的，比如克隆技术可以帮助种植业提高商品作物和食物的产量。
克隆技术还可以改良牛、猪、鸡等经济动物，进一步提高农业产品的质量和生产效率。
3. 神经退行性疾病治疗克隆技术的应用还可以解决许多人类疾病的预防和治疗，如心脏病、糖尿病、神经退行性疾病等更为严重的疾病。
一些实验结果显示，利用病人自己的细胞进行进行植入操作，可以显著地改善这些疾病。
4. 基因工程克隆技术还可以在基因工程领域裡作出贡献。
基因重组技术和克隆技术的发展与应用研究
基因重组技术和克隆技术的发展与应用研究近年来，随着科学技术的不断进步，基因重组技术和克隆技术已经成为生物学界研究的热点之一。
在这篇文章中，我们将讨论它们的发展与应用研究。
一、基因重组技术的发展基因重组技术是在体外将两种或两种以上基因进行拼接，形成一个全新的基因。
它的发展可以追溯到20世纪70年代，当时，科学家们已经开始了基础研究，试图理解基因的构成、功能及调控机制，这些工作为后来的基因重组技术的发展打下了基础。
在此基础上，80年代至90年代，随着DNA测序技术的快速发展，基因重组技术得以实现。
同时，PCR技术、DNA克隆技术、人工合成DNA等多项技术的发明与发展，使得基因重组技术得到了进一步的发展。
现在，基因重组技术应用范围已经十分广泛。
它可以用于生物医药领域，在药物研发、药物检测和制备等方面起到重要作用。
此外，基因重组技术也可以用于农业领域中，如通过基因重组技术改良水稻品种，使其更快速、更高产。
基因重组技术还可以用于生态领域中，如改良工业酵母，帮助减少环境污染等。
二、克隆技术的发展克隆技术是指采用体细胞核移植等方式，将一个细胞的核移植到另一个细胞中，从而实现生命的复制。
克隆技术的发展也要追溯到20世纪70年代，当时科学家们尝试将蛋白质与核酸进行分离，以便研究生物体的遗传信息和调控机制。
80年代至90年代，克隆技术得到了快速的发展。
1984年，英国的研究人员首次在体外培养出了哺乳动物胚胎细胞，这标志着克隆技术的实现。
1996年，达荷尔成为人类历史上第一个成功克隆的羊，给人们留下了深刻印象。
20世纪末至21世纪初，克隆技术又迎来了一个新的发展时期，不仅产生了更多种植、动物等各类复制实验，还引起了广泛的伦理与道德争议。
如今，在医药领域，克隆技术已经成为一种广为使用的技术，如利用蛋白质克隆技术制备药物，克隆出具有药用价值的动物等。
在农业领域中，克隆技术可以用于繁殖优良畜禽种类；在生态领域中，克隆技术可以用于保护濒危动植物等。
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8.14细胞重建
细胞重建的概念是我国贝时璋院士提出的。 定义：体内已经存在的某种物质，可以由细胞质，甚
至细胞外的某种基质为基地，通过自组织、自装配过 程，一步步地形成完整的细胞。 早在20世纪30年代，贝教授在一种甲壳类动物—南京 丰年虫的二倍体雌虫卵母细胞中首次发现了细胞重建 的现象。 细胞重建的发现，证明细胞分裂不是细胞繁殖的唯一 途径，它可能是现代生物体内对地球细胞起源的反映， 是简单的生命形态进化为细胞的漫长过程的一个缩影， 有助于对生命进化过程的阐述
8.13细胞核移植
核移植起始于用微吸管对阿米巴等原生动物进 行的核操作。
在1952年，美国人罗伯特·布里格斯和T·J·金， 首先利用两栖类卵细胞建立细胞核移植技术。 由于两栖类的蛙卵数量较多，体积较大，容易 获得，操作方便。
1958—1962年，英国剑桥大学的约翰·格登教 授和麦金尼尔利用瓜蟾原肠内胚层细胞核移植， 培育出可育的非洲瓜蟾。
首先是核移植过程中要分离得到供体细胞和作 为受体细胞的卵细胞 。
其次要取处在适当发育阶段及细胞周期的受体 和供体细胞，受体细胞和供体细胞处于细胞周 期中的同一时期 ，核移植成功的几率最大。
受体细胞在细胞周期中所处的时间对转核实验 成功与否的影响要大于供体细胞所处的时间的 影响，一般取G2期进行核移植的效果都较好。
重于泰山，轻于鸿毛。01:21:4501:21:4501:21Thursday, November 05, 2020
安全在于心细，事故出在麻痹。20.11.520.11.501:21:4501:21:45November 5, 2020
加强自身建设，增强个人的休养。2020年11月5日上 午1时21分20.11.520.11.5
另外，细胞诱导分裂成熟的因子（MPF）的活 性有关。
克隆的伦理
克隆羊的诞生也从理论上，表明了人类 可以自身进行无性繁殖的可能性。如果 克隆技术应用于人类，必将对人类社会 的基本组织单位——家庭产生很大的冲 击，同时也一定会直接威胁人类社会现 有的法律、伦理和道德。多个国家政府 已经明确宣布政府科研基金决不会支持 任何将克隆技术应用于人类的研究。
量胞质并围有质膜的结构。 胞质杂种细胞：将胞质体和另一完整细胞融合得到的
细胞。 杂种细胞：核体与完整细胞融合。 重组细胞：核体与另一种细胞的胞质体融合。
利用细胞融合技术得到的重组细胞
1、2、3亲本细胞 4、6核体 5、7胞质体 8、9杂种细胞 10重组细胞 11胞质杂种细胞 ⅠPEG介导 ⅡHAT培养基筛选
非洲爪蟾制作
我国的研究
中国的细胞核移植技术工作，开始于本世纪50 年代，主要是在两栖类和鱼类上进行的， 从 1961年开始，童第周等以金鱼和鳑鲏鱼为材料， 进行鱼类不同亚科间的细胞核移植获得成功， 用以研究杂交细胞核于纯种细胞核在发育功能 上的差异，以及细胞质对细胞核的影响。 1978年，将黑斑蛙成体红细胞的细胞核移入去 核的未受精卵内，卵子最后发育成正常的蝌蚪。
鉴别与意义
利用双重标记法鉴别杂种细胞的真伪，可以采 用两个具有不同缺陷型的细胞作标志，或用3H －胸腺嘧啶核苷作核标记，并使其吞入不同颗 粒的乳胶作为胞质标志，或者用3H－亮氨酸等 标记氨基酸作为胞质标记，也可用红绿荧光的 聚乙烯颗粒标记重组细胞。
意义：胞质杂种细胞是不同种系之间的一种真 正的新型细胞，在适宜的条件下能成功的生存 下去，它在物种的品种改良、医学及农业的各 个方面将产生重大的影响。
8.12微细胞核移植
微细胞：只有一条或几条染色体和一薄 层细胞质，外面包裹一层完整的细胞质 膜的核质体。利用秋水仙素先将细胞阻 断在染色体中期，然后培养，再用细胞 松弛素B处理得到。 以微细胞作供体， 通过与遗传性完整的受体细胞融合，可 以将微细胞内所含有的几条染色体转移 到受体细胞中去。
ห้องสมุดไป่ตู้
微 细 胞 杂 种 细 胞 的 制 作 过 程
8.1细胞重组
8.11胞质杂种 8.12微细胞核移植 8.13核移植 8.14细胞重建
8.11胞质杂种
胞质体（cytoplast）：除去细胞核后由膜包裹的无核 细胞，由细胞松弛素B处理后，经离心得到。
1972年，Prescott借助细胞松弛素的和高速离心得到 核体（karyoplast）：由胞质体分离出来的核，带有少
核移植小鼠
克隆
克隆（clone）是指遗传上完全相同的分 子、细胞或来自同一祖先的生物个体的 无性繁殖群体，也指通过克隆方式生产 克隆群体的过程或手段。 从理论上讲， 任何一个具有核的细胞都含有其生物体 基因组的全部基因，因此都可以克隆。
多 莉 的 诞 生
克隆步骤上
克隆步骤下
克隆动物成功与否的关键性问题
加强做责任心，责任到人，责任到位 才是长 久的发 展。20.11.520.11.5Thursday, November 05, 2020
人生得意须尽欢，莫使金樽空对月。01:21:4501:21:4501:2111/5/2020 1:21:45 AM
安全象只弓，不拉它就松，要想保安 全，常 把弓弦 绷。20.11.501:21:4501:21Nov-205-N ov-20
追求至善凭技术开拓市场，凭管理增 创效益 ，凭服 务树立 形象。2020年11月5日 星期四 上午1时21分45秒01:21:4520.11.5
专业精神和专业素养，进一步提升离 退休工 作的质 量和水 平。2020年11月上午1时21分 20.11.501:21N ovember 5, 2020
时间是人类发展的空间。2020年11月5日星期 四1时21分45秒01:21:455 November 2020
细胞重组与克隆技术
细胞拆合：把完整细胞的细胞核与细胞 质用特殊的方法分离开来，或把细胞核 从细胞质中吸取出来，或用紫外线等把 细胞中的核杀死，然后再把同种或异种 的细胞核和细胞质重新组合起来，培育 新的细胞或新的生物个体。
细胞重组：细胞融合技术与细胞核质分 离技术结合，在融合介质作用下，使胞 质体与完整细胞合并，重新构成胞质杂 种细胞的过程。
哺乳动物核移植
，哺乳类的移核实验必须在一种很精密的仪器——显 微操作仪下才能进行。
最早用来做移核试验的哺乳动物是小鼠。 1977年，美国缅因州巴尔港的杰克逊实验室用“亚无
性繁殖”的方式，培育出7只单亲小鼠。 1981年1月，美国《科学》杂志封面刊登3只小鼠的照
片，他们将囊胚内细胞团细胞的核移入去核的受精卵 中，经培养移核卵发育至囊胚期，再将胚胎植入同步 孕鼠的子宫内，最后产下两雌一雄仔鼠，并发育成了 可育的个体。
科学，你是国力的灵魂；同时又是社 会发展 的标志 。上午1时21分 45秒上 午1时21分01:21:4520.11.5
每天都是美好的一天，新的一天开启 。20.11.520.11.501:2101:21:4501:21:45Nov- 20
人生不是自发的自我发展，而是一长 串机缘 。事件 和决定 ，这些 机缘、 事件和 决定在 它们实 现的当 时是取 决于我 们的意 志的。2020年11月5日 星期四 1时21分45秒 Thursday, November 05, 2020
感情上的亲密，发展友谊；钱财上的 亲密， 破坏友 谊。20.11.52020年11月5日星 期四1时21分45秒20.11.5
谢谢大家！