低背景银染试剂盒
DNA和蛋白银染步骤(独门绝技--有图)
DNA银染一、银染试剂500ml/瓶(双蒸水稀释)1、固定液：50ml乙醇2、前处理液（敏化液）：5ml HNO33、染色液：0.5g 硝酸银（避光配制）4、显色液：无水Na2CO3 12.5g 甲醛200ul 加水至500ml5、终止液：50ml 冰醋酸二、银染步骤（摇床设置52rpm左右）1、准备好放有双蒸水的塑料盒，将电泳后的变性胶放入盒中在摇床上轻摇1min；2、凝胶固定：倒掉盒中的水，加入100ml左右的固定液，摇床上缓缓摇动10min；3、洗胶：弃固定液，用双蒸水洗2次，每次30S；4、凝胶氧化：弃双蒸水，加入100ml左右前处理液氧化6min；5、洗胶：弃前处理液，用双蒸水洗2次每次10S；6、凝胶染色：弃双蒸水，加入100ml左右的染色液避光摇20min；7、洗胶：弃染色液，用双蒸水洗1次10S；8、凝胶显色：加入100ml显色液摇到看到清晰的条带为止；9、终止：弃显色液，迅速加入终止液100ml左右，摇2-3min；10、洗胶：弃终止液，用双蒸水洗2次每次1min。
三、变性聚丙酰胺凝胶的配制（两块、使用1.0BioRad胶板）1.2%的凝胶可以跑微卫星，和基因组DNA1、尿素：7.2g2、30%聚丙酰胺，4.68ml3、10×TBE，1.5ml (Tris碱108g；硼酸55g；EDTA 40ml 0.5mol/L,Ph=8.0；加水至1L)4、30%AP，35ul5、TEMED,4ul四、下图：左为果蝇正常基因组DNA与损伤后基因组DNA；右为果蝇微卫星电泳12h Treatment24h TreatmentMCT 0 5 10 200 5 10 20Protein银染一、银染试剂500ml/瓶(双蒸水稀释)1、固定液：200ml甲醇，50ml冰醋酸2、前处理液（敏化液）：150ml 乙醇，34g醋酸钠，1g硫代硫酸钠（使用前加入）3、染色液：1.25g 硝酸银（避光配制）4、显色液：无水Na2CO3 12.5g 甲醛200ul 加水至500ml5终止液：2g甘氨酸二、银染步骤（摇床设置52rpm左右）1、凝胶固定：准备好放有双蒸水的塑料盒，将电泳后的变性胶放入盒中，加入100ml左右的固定液，摇床上缓缓摇动30min；2、洗胶：弃固定液，用双蒸水洗2次，每次1min；3、凝胶氧化：弃双蒸水，加入100ml左右前处理液氧化30min；4、洗胶：弃前处理液，用双蒸水洗3次每次5min；5、凝胶染色：弃双蒸水，加入100ml左右的染色液避光摇20min；6、洗胶：弃染色液，用双蒸水洗2次每次5min；7、凝胶显色：加入100ml显色液摇到看到清晰的条带为止；8、终止：弃显色液，迅速加入终止液100ml左右，摇10min；9、洗胶：弃终止液，用双蒸水洗2次每次5min。
SimplePAGE Bis-Tris体系变性预制胶 用户操作手册（第2.0版）说明书
产品综合介绍基本信息产品特点储存温度兼容电泳槽BiS-TRIS体系预制胶 产品编号及相关参数 简要说明电泳操作说明 蛋白分离图谱注意事项常见问题解答电泳相关产品目录Protein Markers产品综合简介基本信息预制胶板尺寸：长10.0 cm，宽 8.0 cm，厚度为4.7 mm预制胶尺寸：长8.0 cm，宽 7.0 cm，厚度为1 mm疏齿孔：11 孔/ 15 孔最大上样量：50 µl（11孔）/ 30 µl（15 孔）推荐上样量：30 µl（11孔）/ 20 µl（15 孔），蛋白Marker：5~10 µl兼容电泳槽Bio-Rad Mini-PROTEAN (II/3 /Tetra System)（需按照如下方法改造）Bio-Rad电泳槽中绿色U型密封条两端凸起为正面。
如图所示，将密封条拉出并反转，正面（凸起）朝里，重新装回电泳槽中，并把密封圈周边压实（防止发生漏液）。
Hoefer Mighty Small (SE 250/ SE 260/ SE 280)Life Technology Novex Mini-Cell （需增加特制挡板，如需挡板可联系生工技术支持申请）北京六一DYCZ-25E、DYCZ-24K、DYCZ-24KS、DYCZ-24KF君意东方JY-SCZ2+天能VE180生工通用型迷你垂直电泳槽Cat. No.: G500310-0001产品特点即开即用——无需自行配置各种试剂及灌胶操作。
高安全性——无需接触有毒有害试剂。
节约时间——简单易用，无需预电泳，全程恒压最快40 min内完成电泳实验。
高分辨率——蛋白条带均一性好，分辨率高。
条带均匀——特殊的镀膜设计，大大降低边缘效应，条带分布更加均匀。
稳定性高——全自动化灌胶技术，大大降低批间差异。
兼容性高——适用于市面大多数小型Mini电泳槽。
储存温度常温运输，收到后于2~8°C冷藏保存，不可冻存，以免凝胶发生冻裂，保质期一年。
基本银染和微波快速银染步骤-中文翻译
基本的银染步骤：（90min）材料：超纯水（>18 megohm/cm全程）、塑料染色托盘、摇床、塑料搅拌棒、10mL 一次性管、干净的玻璃杯、量筒、30%乙醇、100%乙醇、固定液（40%乙醇、10%乙酸）注意事项：1.在拿胶前确定用去离子水清洗橡胶手套。
2.用干净的容器，并标明银染专用。
3.当摇动时，确保容器大小可使胶在里面自由移动，染色时溶液能完全沫过胶面。
4.在拿胶或换溶液时，避免徒手摸胶或用金属物品接触，及避免对胶施加压力。
5.用有铁氟龙图层的棒和干净的玻璃容器准备试剂。
6.避免试剂交叉污染。
7.用新鲜配置的溶液。
样品含有高浓度的DTT：如果你的样品含有高浓度的DTT （>50mM）,银染时可能导致条带拖尾和黄色背景。
为避免拖尾按照下面的方法还原和烷基化样品：1. 用新鲜配制的DTT还原你的样品到终浓度为17mM，并在70℃加热10min.2. 用新鲜配制的碘乙酰胺烷基化你的样品到终浓度为35mM，并在70℃加热10min.3. 加不含DTT的SDS样品buffer到还原和烷基化后的样品中。
进行电泳，并按手册进行银染。
在开始之前：用试剂盒中的试剂准备如下溶液用于银染：程序：下面的程序用于8*8厘米预制胶，1.0mm厚。
如果要染两块小胶或1.0mm厚的大胶（18*18），保证孵育时间，将所有溶液的体积加倍。
注意：如果你的胶的尺寸和上面提到的不一样，你可能必须通过调整孵育时间和溶液体积来选择银染策略。
所有的孵育应该在一个旋转摇床上进行，以1圈/秒的速度在室温下进行。
确保每个胶有100ml的溶液。
1. 电泳后，将胶取出至合适尺寸的银染托盘内，用超纯水简单的清洗一下。
2. 用100ml固定液在摇床上缓慢旋转，固定胶20min。
如果你用的是Tricine 胶，那么就固定1小时。
注意：如果没有足够的时间完成银染程序，胶可以在固定液中存放一夜。
长时间的固定在某些情况下可能会改善灵敏度和背景。
PAGE凝胶快速银染试剂盒使用说明
PAGE凝胶快速银染试剂盒使用说明货号:G7210规格:1L保存:室温(15℃-25℃)干燥保存，复检期12个月。
试剂盒内容：G7210染色液A200ml染色液B1ml染色液C100ml显色液D100ml试剂E2g注：1L规格指可配制的银染液的体积，实际使用次数根据PAGE胶大小不同而不同。
产品说明:蛋白质条带的银染是基于蛋白质中各种基团（如琉基、碳基等）与银的结合，然后用还原剂如甲醛在碱性环境下使Ag+还原成银颗粒，可把蛋白电泳带染成黑褐色。
它主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳染色。
其灵敏度比考马斯亮蓝高，PAGE凝胶快速银染试剂盒整个过程操作简单，灵敏度高，能检测到10ng以下的蛋白条带。
操作步骤:一、染色液配制(无水乙醇自备)需要配制的染色液体积根据PAGE胶的大小而定，一般的mini-PAGE胶需要20-30mL。
配制用的器皿清洗干净后用去离子水涮洗，染色液须用去离子水配制，现用现配。
如果配制的溶液体积不是100mL，可以按比例改变各成分用量。
1.固定液：取40ml无水乙醇，10ml染色液A加去离子水至100ml，混匀；2.敏化液：取30ml无水乙醇，10ml染色液C加去离子水至100ml，混匀；3.银染液：称取0.12g试剂E，用50ml去离子水溶解，加入10ul染色液B混匀，加去离子水至100ml现用现配。
4.显色液：10ml显色液D和30ul染色液B加入去离子水至100ml，混匀，现用现配。
5.终止液：取5ml染色液A加去离子水稀释至100ml，现用现配。
二、染色：1.PAGE电泳结束后，将PAGE蛋白胶转移至玻璃平皿或搪瓷盘中，用固定液固定30min。
2.将PAGE胶转移至敏化液中，使染液没过PAGE胶，室温作用30min。
可置于摇床上缓慢摇晃3.弃去敏化液，用去离子水漂洗三次，每次10min。
4.将PAGE胶转移至银染液中，使染液没过PAGE胶，室温摇晃40min。
5.将PAGE胶转移至显色液中，使显色液没过PAGE胶，室温摇晃，该显色一般在10min 左右。
质谱银染的试剂
质谱银染的试剂
质谱银染是一种在质谱分析中用于增强蛋白质或肽段的检测灵敏度的方法。
通常使用的质谱银染试剂是银离子的溶液，它会与蛋白质或肽段中的氨基酸残基反应，形成银颗粒，从而增强质谱信号。
以下是一种常用的质谱银染试剂的制备步骤：
1.制备酸性银溶液：
o将银硝酸（AgNO₃）溶解在蒸馏水中，得到
酸性的银溶液。
2.加入酸：
o向银溶液中加入一些酸，通常是甲酸
（HCOOH）或乙酸（CH₃COOH），以调整溶
液的酸性。
酸性条件有助于促使银离子与蛋
白质发生反应。
3.加入还原剂：
o添加一种还原剂，如脱氢乙酸（HCHO）或亚
硫酸氢钠（NaHSO₃），以还原银离子为银颗
粒。
4.反应蛋白质或肽：
o将待检样品中的蛋白质或肽与银离子反应，
形成银沉淀。
5.洗涤：
o将反应后的样品进行洗涤，去除未反应的试
剂和其他杂质。
6.干燥：
o将样品干燥，以得到质谱银染后的样品。
使用质谱银染的优势在于其增强了质谱信号，使得低丰度的蛋白质或肽段更容易被检测到。
然而，该方法可能对某些质谱仪器的灵敏度产生影响，因此在使用时需要谨慎优化条件。
银染
银染操作步骤1.固定：电泳结束后，取凝胶放入约100ml固定液中，在摇床上室温摇动20分钟，摇动速度为60-70rpm。
固定40分钟以上甚至过夜可以进一步降低背景。
固定液的配制：依次加入50ml乙醇、10ml乙酸和40ml MilliQ级纯水或双蒸水，混匀后即成100ml 固定液，可大量配制室温存放。
2. 30%乙醇洗涤：弃固定液，加入100ml 30%乙醇，在摇床上室温摇动10分钟，摇动速度为60-70rpm。
30%乙醇的配制：70ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入30ml乙醇，混匀后即成100ml 30% 乙醇。
3.水洗涤：（洗2次）弃30%乙醇，加入200ml MilliQ级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动10分钟，摇动速度为60-70rpm。
4.增敏：（辅染）现配现用弃水，加入100ml银染增敏液(1X)，在摇床上室温摇动2分钟，摇动速度为60-70rpm。
银染增敏液(1X)的配制：99ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入1ml银染增敏液(100X)，混匀后即为银染增敏液(1X)。
银染增敏液(1X)配制后需在2小时内使用。
银染增敏液(100X)的配制：即2.8%硫代硫酸钠溶液，需用黑袋包裹避光保存。
5.水洗涤(共2次)：弃原有溶液，加入200ml MilliQ级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动1分钟，摇动速度为60-70rpm。
弃水，再加入200ml MilliQ级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动1分钟，摇动速度为60-70rpm。
6.银染：弃水，加入100ml银溶液(1X)，在摇床上室温摇动10分钟，摇动速度为60-70rpm。
银溶液(1X)的配制：99ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入1ml银溶液(100X)，混匀后即为银溶液(1X)。
银溶液(1X)配制后需在2小时内使用，最好是现配现用。
银溶液（100 X）的配制：称取5g硝酸银，加水溶解并稀释至500ml，摇匀即得1%的硝酸银溶液，需用黑袋包裹避光保存。
康威银染试剂盒说明书
2. 整个银染过程需在摇床上进行。
3. 需自备乙醇，冰醋酸。
操作步骤
以下操作步骤中各溶液的用量以大小为10x10 cm、厚度为1.0 mm的凝胶为例。对于大型凝胶，各溶液的使用量需按 凝胶体积的比列放大。
1. 电泳完成后，用超纯水洗胶 2 次，每次洗涤 5 分钟。
2. 固定：将凝胶浸泡在ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ25 ml 的固定液中，固定液充分覆盖胶。放于摇床上室温摇动 15 分钟。更换固定液，重复一次。
250 ml
Silver Stain Developer
250 ml
Protocol
1
产品简介
本试剂盒采用高灵敏度的银染染料，可应用于变性胶及非变性胶的染色。具有目的条带清晰、背景低，操作时间可灵活 控制的优点。另外，本试剂盒增加了一步短时敏化作用步骤，可明显降低背景及提升目的条带的亮度。
注意事项
1. 操作时请使用去离子水和洁净的玻璃或塑料器皿，须戴一次性手套进行操作。
Protein Silver Stain Kit 蛋白银染试剂盒
Cat. No. CW2012 保存：室 温
Version 11102010
组分说明
Cat. No. Number of preps
CW2012 10
Silver Stain Sensitizer（500×） 1 ml
Silver Stain
11. 用终止液洗去凝胶上的 Silver Stain Developer 后，将凝胶浸泡在新的终止液中反应 10 分钟。
应用实例：
上样量： 10 5 2.5 1.25 0.63 0.32 0.1 （μl）
样品为中分子量蛋白Marker（CW0142）
8. 配制终止液：5%冰醋酸。 9. 用超纯水快速洗胶 3 次，每次洗涤 20 秒。 10. 立即将洗好的凝胶浸没在 Silver Stain Developer 中，室温孵育 2-3 分钟，直至蛋白条带显示清晰。
快速银染试剂盒
银溶液(1X)的配制：
99ml MilliQ 级纯水或双蒸水中加入 1ml 银溶液(100X)，混匀后即为银溶液(1X)。银溶
液(1X)配制后需在 2 小时内使用。
2、水洗涤：
弃原有溶液，加入 100ml MilliQ 级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动 1-1.5 分钟，摇
动速度为 60-70rpm。
2、需自备乙醇、冰醋酸及 MilliQ 级纯水或双蒸水。
3、下述使用说明中各种溶液的使用量适用于大小为 8×10cm 厚度为 0.75-1mm 的凝胶。
对于更大的凝胶，各种溶液的使用量需按凝胶面积的比例放大，对于更厚的凝胶，作用时间
需按照厚度的比例适当延长。
4、本说明书所指的常温温为 20-25℃，操作温度较低时由于溶液的扩散能力下降，各
快速银染试剂盒
产品编号 BL620A
产品名称 快速银染试剂盒
规格 25 T
产品简介：
快速银染试剂盒(Fast Silver Stain Kit)是一种快速简单、可用于 SDS-PAGE 或非变性
PAGE 等蛋白银染的试剂盒。本试剂盒也可以用于 2D 凝胶的银染，并且染色后兼容后续的质
谱检测。本试剂盒只需约 90 分钟内可以完成凝胶的银染。对于 BSA 蛋白，检测灵敏度可以
（3）凝胶中原有的缓冲液等未在固定步骤中去除干净。一方面需确保固定的时间和固 定液的用量，另一方面对于不是最常用的 Bis-Tris 缓冲的凝胶需要更长的固定时间以充分 去除凝胶中的原有缓冲成分，以降低背景。
（4）水的纯度太低。需使用大于 16 MΩ·cm 的高纯度水。 2、 蛋白条带非常浅： （1）蛋白的半胱氨酸(Cysteine)残基的含量特别低或几乎没有。半胱氨酸残基的存在 对于银染非常重要，半胱氨酸残基的含量过低会导致检测灵敏度下降。 （2）银染后水洗涤时间过长。在银溶液染色时需严格控制水洗涤的时间，水洗涤的时 间不能超过 1.5 分钟，否则会导致过多的银离子被洗去，导致检测灵敏度下降。 （3）样量不足。本试剂盒检测 BSA 的灵敏度可以达到 0.3ng，对于不同的蛋白检测灵 敏度可能不同。对于一些蛋白可能需要大于 1ng 的蛋白量才能被检测到。 （4）固定步骤后的洗涤不够充分。导致少量乙酸残留，影响后续检测。确保 30%乙醇 洗涤和水洗涤的用量和时间，可以适当延长洗涤时间。 3、凝胶上出现小点或或其它非蛋白的痕迹： （1）凝胶没有充分被溶液浸没。请注意选择大小合适的容器，并加入足量的各种溶液， 同时需保持适当的混匀速度确保凝胶可以被溶液浸没。 （2）用于银染的容器没有充分洗涤干净。容器需先用洗涤剂充分洗涤，随后用自来水 充分冲洗，最后用高纯度水再洗涤数次。该容器最好能专用于银染，并注意避免各种可能的 蛋白污染。为确保充分洗涤干净，对于耐硝酸的容器，例如玻璃容器，可以在上述洗涤剂及 自来水洗涤后用 50%硝酸洗涤，随后用高纯度水充分洗涤。 （3）指纹或其它压痕。请注意戴手套操作，切勿直接接触皮肤。操作时请注意尽量勿 挤压、折叠或摩擦凝胶。 （4）有金属物质接触凝胶。金属物质例如金属镊子等接触凝胶会出现非特异性痕迹。 4、在 60-70 kD 处出现一片模糊的蛋白染色背景： 皮肤上脱落的角蛋白(keratin)污染了蛋白样品。一方面需注意戴手套操作，另一方面 需注意盛放蛋白样品的容器盖子尽量不要敞开，甚至在取放蛋白样品时在超净台内进行以避 免可能的角蛋白污染。 5、在凝胶的顶端处出现黄色背景： （1）样品中 DTT 浓度很高。采用其它适当的还原试剂，或者在许可范围内适当减少 DTT 的用量。 （2）采用 Tris-Glycine-SDS 电泳体系。Tris-Glycine-SDS 电泳体系中的 Glycine 会 导致背景凝胶的顶端出现轻微的黄色背景。 6、银在染色器皿中出现沉淀： 染色器皿中可能含有残余的洗涤剂或上次银染时的残余试剂。需确保把染色器皿洗涤干 净。 保存条件： 常温保存，开封后一年有效。
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产品说明书 / Specification Sheet
低背景银染试剂盒
产品编号：BSP027
产品简介：
银染是灵敏度较高的一种染色法，是对各种凝胶中的蛋白质进行染色时最常用的方法。
它通过被还原银离子在蛋白质上形成黑色来指示蛋白区带的。
银染的灵敏度比考马斯亮蓝染色高100倍，可以检测低于0.5 ng的蛋白质。
本试剂盒在保证检测灵敏度的同时，还具有操作方便快速,背景几乎无色的优点，可在2小时内完成1块凝胶的银染，本试剂盒可以染10块小胶。
运输和保存条件：
室温条件下运输，收到后，将干粉，溶液B， D在2-8度的环境中避光保存；溶液A必须在室温下保存，在低温下放置时会产生白色沉淀，影响实验效果。
保质期半年。
产品组成：
本试剂由溶液A、溶液B、干粉、溶液D构成, 能够使用十次。
1、BSP027-1溶液A 2ml
2、BSP027-2溶液B 20x10ml
3、BSP027-3干粉1g
4、BSP027-4溶液D 2x100ml
注意:使用前将干粉用20ml的双蒸水溶解成10倍浓缩液C,再按照需要的体积,稀释为1倍浓度.
使用方法：
1、取出电泳后的聚丙烯酰胺凝胶，用蒸馏水冲洗凝胶,根据以下程序所需要的试剂量,取一定量的溶液B和
2、D用双蒸水稀释成1倍的溶液待用.
3、加入20ml蒸馏水，置于摇床上，震荡5min。
4、倾出蒸馏水，加入含50%乙醇和12%乙酸的溶液20ml和溶液A55ul，置于摇床上，震荡60min。
5、倾出溶液，加入20ml 50%的乙醇，置于摇床上，震荡5min，重复3次。
6、倾出50%的乙醇，加入20ml溶液B，置于摇床上，震荡1min。
7、倾出溶液B，加入20ml蒸馏水，置于摇床上，震荡1min，重复3次。
8、倾出蒸馏水，加入20ml溶液C和43 ul溶液A，置于摇床上，震荡20min。
9、倾出溶液C，加入20ml蒸馏水，置于摇床上，震荡1min. 重复2次.
10、倾出蒸馏水，加入20ml溶液D和28ul溶液A，缓慢摇动，直至蛋白质条带具有足够的显色强度（约2-3min）。
11、加入含50%乙醇和12%乙酸的溶液20ml，置于摇床上，震荡5min。
12、倾出液体，加入20ml蒸馏水，置于摇床上，震荡5min。
注意事项：
1、为防止杂质的干扰，操作时请注意尽量使用高纯度的水和洁净的玻璃器皿。
2、实验前，根据所染胶块的数量，取一定体积的各种溶液，用双蒸水稀释为一倍浓度后再使用。
3、过程中所加试剂量是针对80×60×1mm凝胶而定，若体积较大，可适当增加各溶液的体积。
4、若凝胶较厚或操作温度较低时，各步骤需适当延长时间。
5、染色及染色后的清洗，显色和终止的时间要控制好，否则胶的背景较深，反之银染灵敏度较低。
6、溶液A有一定的刺激性和毒性。
操作时须在化学通风橱中进行,并戴上一次性手套。
7、使用后，请旋紧瓶盖，防止溶液挥发和与空气的物质发生化学反应；本试剂只能够用于体外实验，不能
够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果，概不承担责任。
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