乳酸对粪肠球菌的抑菌作用及作用机制
粪肠球菌生产技术
粪肠球菌生产技术乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。
凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。
这是一群相当庞杂的细菌，目前至少可分为18个属，共有200多种。
除极少数外，其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。
一、生物学形态：粪链球菌又叫粪肠球菌，其菌体形态为链球或球状，菌体直径大小0．3 μm～0．7μm ，二、菌落形态：在肉汤琼脂平板上形成的菌落圆形、乳白色，表面凸起湿润，有光泽，边缘整齐三、显微镜下形态革兰氏阳性菌，大多数成双或短链状排列，通常不运动，无芽孢。
四、生理特性：(1)粪链球菌分泌的乳酸为L型乳酸，又称为自然乳酸，可全被动物吸收利用。
乳酸杆菌分泌的乳酸L型和D型都有，但D型则不能被动物吸收利用。
在动物的肠道里，粪链球菌可在肠内形成生物薄膜附着在肠道粘膜上，可以在肠道内发育、生长、繁殖，繁殖时问很短，19min分裂一次。
粪链球菌还可把部分蛋白质分解成酰胺和氨基酸，把大部分的碳水化合物的无氮浸出物转化为乳酸，而且能使饲料里的纤维变软，所以饲料的转化吸收率就比较高。
粪链球菌分解的这些特殊营养成分弥补了常规饵料的营养缺陷，对各种养殖动物幼体起到了十分重要的营养强化和促生长作用。
(2)粪链球菌产生的抗菌物质大多是肽或蛋白质，被称为细菌素。
粪链球菌可分泌两类细菌素，一类仅只是对相关的菌有抑制作用，抗菌谱较窄，可阻碍病原微生物接触肠粘膜细胞；另一类具有广谱抗菌活性，它们对致病菌如：沙门氏菌、致贺氏病和假单孢菌都有很好的抑制作用。
所以，长期在饲料中添加粪链球菌可以减少养殖动物肠炎等疾病的发生。
粪链球菌在生长和代谢过程中产生对养殖动物有益的营养物质，如乳酸、氨基酸、维生素、酶及抑菌物质。
在畜禽养殖过程中，添加了粪链球菌不仅有利于提高饲料的消化率，同时也相应降低了排泄物中的氨态氮的浓度，减少了排泄物的不消化物，改善了饲养环境，减少了污染，既有防腐作用又增加饲料的风味，促进养殖动物的食欲。
粪链球菌是什么
粪链球菌是什么
一、粪链球菌是什么二、粪链球菌的检验三、粪链球菌作用机理
粪链球菌是什么1、粪链球菌是什么
根据最新分类原则,粪链球菌又叫粪肠球菌。
应用C多糖抗原,根据兰氏血清学分类,可将链球菌分成许多群。
粪链球菌属于D群。
粪肠球菌是革兰氏阳性,过氧化氢阴性球菌,是人和动物肠道内主要菌群之 ,其能产生天然抗生素,有利于机体健康 ;同时还能产生细菌素等抑菌物质,抑制大肠杆菌和沙门氏菌等病原菌的生长,改善肠道微环境 ;还能抑制肠道内产尿素酶细菌和腐败菌的繁殖,减少肠道尿素酶和内毒素的含量,使血液中氨和内毒素的含量下降。
粪肠球菌作为一种益生菌,在医学和食品工程领域得到广泛应用。
另外,肠球菌为消化道内正常存在的一类微生物,在肠黏膜具有较强的耐受和定植能力,并且是一种兼性厌氧的乳酸菌,与厌氧、培养保存条件苛刻的双歧杆菌相比,更适合于生产和应用。
2、粪链球菌的生理特性
2.1、粪链球菌分泌的乳酸为L型乳酸, 又称为自然乳酸或生理乳酸, 可完全被动物吸收利用。
2.2、粪链球菌产生的抗菌物质大多是肽或蛋白质,被称为细菌素。
粪链球菌可分泌两类细菌素, 一类仅只是对相关的菌有抑制作用, 抗菌谱较窄, 可阻碍病原微生物接触肠粘膜细胞;另一类具有广谱抗菌活性, 它们对致病菌如: 沙门氏菌、致辞贺氏病和假单孢菌都有很好的抑制作用。
2.3、饲料中添加粪链球菌可减少养殖中有机物质排泄量,有较地减少水质污染。
在水产养殖水体中,添加了粪链球菌不仅有利于提高饲料的。
乳酸链球菌素抑菌原理
乳酸链球菌素抑菌原理
乳酸链球菌素，又称为乳链菌肽（Nisin），是由乳酸链球菌发酵产生的一种天然生物抗菌肽。
它具有广谱抗菌作用，能够有效抑制大部分革兰氏阳性菌及其芽孢的生长和繁殖，特别是对常见的金黄色葡萄球菌、溶血链球菌、肉毒杆菌等细菌抑制作用明显。
因此，乳酸链球菌素被广泛应用于食品行业作为防腐剂。
乳酸链球菌素的抑菌原理主要基于其对细胞膜的干扰作用。
乳酸链球菌素能够吸附到细胞膜上，并在细胞膜上形成孔洞，导致细胞内的物质泄漏和胞外水分子的进入。
这种作用会引起细胞自溶，养分流失和膜电位下降，最终导致致病菌和腐败菌细胞的死亡。
值得注意的是，乳酸链球菌素对革兰氏阴性菌、酵母和霉菌没有抑制作用，专门针对革兰氏阳性菌，特别是细菌芽孢。
此外，在人体肠道内，乳酸链球菌素很快被胰凝乳蛋白酶水解成氨基酸，不会对人体肠道内正常菌群产生不良影响，也不会产生如其他抗菌素所出现的抗性问题或交叉抗性。
因此，乳酸链球菌素被认为是一种高效、无毒、安全、无副作用的天然食品防腐剂。
乳酸链球菌素在乳制品、罐头制品、鱼类制品和酒精饮料等食品中得到了广泛应用，以确保食品的卫生质量和延长保质期。
同时，由于其安全性和有效性，乳酸链球菌素也被认为是未来食品防腐剂的重要发展方向之一。
乳酸菌的原理和应用有哪些
乳酸菌的原理和应用有哪些1. 乳酸菌的原理乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的细菌，主要以乳酸发酵为代谢特征。
乳酸菌通过发酵糖类产生乳酸，将可消化的物质转化为有机酸，从而抑制有害菌的生长。
以下是乳酸菌的原理：1.1 产酸作用乳酸菌具有产酸的能力，能够将碳水化合物（如葡萄糖）通过发酵转化为乳酸。
乳酸的产生使环境变得酸性，从而抑制了一些有害菌和微生物的生长。
此外，乳酸还能提高认识成熟度、降低胃酸的pH值，起到保护胃壁的作用。
1.2 竞争作用乳酸菌在消化道内与其他微生物竞争营养和生存空间，从而起到抑制有害菌生长的作用。
它们通过占据黏膜表面，使有害菌无法附着并定殖，防止其繁殖滋生。
1.3 抗菌作用乳酸菌不仅能够通过产酸和竞争作用抑制有害菌的生长，还能产生一些抗菌物质，如抗菌酶和抗菌多肽，具有抑制致病菌生长的能力。
2. 乳酸菌的应用乳酸菌广泛应用于食品、饮料和保健品等领域，以下是乳酸菌的一些主要应用：2.1 发酵食品的生产乳酸菌是许多发酵食品的关键成分，如酸奶、酸豆奶、酸味黄油和酸黄瓜等。
乳酸菌能够将乳糖转化为乳酸，使食品呈现出酸性风味，提高食品的风味性和品质。
2.2 益生菌制剂乳酸菌被广泛应用于制备益生菌制剂。
益生菌制剂是指蕴含活性益生菌的产品，能够改善肠道菌群平衡，增强免疫力，改善消化系统功能。
乳酸菌制剂适用于各个年龄段的人群，包括婴儿、儿童、成年人和老年人。
2.3 护肤品乳酸菌被应用于各类护肤品中。
乳酸菌可调节皮肤的酸碱平衡，维持皮肤的自然PH值，有助于改善皮肤保湿、提亮肤色等功效。
乳酸菌护肤品通常以发酵产生的乳酸菌液、乳酸菌提取物等作为活性成分。
2.4 环保领域乳酸菌还可应用于环保领域。
例如，乳酸菌可利用纤维素等有机废弃物进行发酵产乳酸，进一步制备可降解的塑料和生物柴油，减少对环境的污染。
2.5 医药领域乳酸菌在医药领域应用广泛。
乳酸菌能调节肠道菌群平衡，改善肠道健康，对于防治腹泻、便秘等疾病有一定的疗效。
粪肠球菌
粪肠球菌
产品特点
1.菌种严格筛选
产品所用菌种来源于健康的幼龄动物，针对饲用微生态制剂的要求进行严格筛选，保证产品活力高、抗逆性强，在动物肠道内定植力好，增殖迅速。
2.微囊包被
乳酸菌经独特的微囊包被处理，保证菌体在贮存运输过程中的稳定性和造粒过程中的耐热性，保证菌体能顺利到达肠道作用位点迅速释放并定植。
3.领先的工艺
产品采用国际先进的液态深层发酵工艺和低温干燥制剂工艺，确保产品活性高、稳定性好、无杂菌污染。
作用机制：
1.补充肠道有益菌，抑制有害菌：
添加乳酸菌能够快速促进其它有益菌生长，通过产生细菌素、有机酸、过氧化氢、占位等作用能够有效抑制肠道大肠杆菌、沙门氏菌和产气荚膜梭菌等有害菌的生长繁殖。
2.促进肠绒毛发育和粘膜修复，促进动物生长：
乳酸菌能够合成有机酸、B族维生素和有益的细胞因子。
特别是幼龄阶段，增加肠道绒毛数量，增加绒毛长度，增加肠道吸收面积，提高动物生产性能。
3.提高动物免疫功能：
参与皮肤和粘膜免疫，刺激免疫系统，巩固动物机体三大免疫防线。
4.与药物协同增效：。
粪肠球菌的作用机制及其在养猪业中的应用
粪肠球菌的作用机制及其在养猪业中的应用杨培培刘虎传郝海玉刘开东戴正浩（山东省青岛市畜牧兽医研究所266100）中图分类号：S855.1+1 文献标识码：A 文章编号：1007-1733(2020)04-0074-02粪肠球菌是人类和动物体内的正常菌群之一，也是仔猪生产中常用的益生菌之一，有维持猪肠道菌群平衡、增强肠道屏障功能、增强机体免疫力等多种益生功效。
本文主要对粪肠球菌作用机制及其在养猪生产中的应用进行综述。
1 粪肠球菌的作用机制1.1 调节肠道菌群平衡肠道微生物与宿主之间相互作用，形成一个相互依赖、相互制约和相对稳定的微生态体系。
若肠道菌群平衡受到破坏，导致乳酸菌等有益菌数量降低，大肠杆菌等有害菌数量增加，进而导致出现各种疾病。
Lee等[1]研究发现，粪肠球菌能通过调节肠道黏液成分来抑制致病菌的黏附，同时也能够刺激机体免疫系统来降低大肠杆菌的黏附能力。
粪肠球菌能够产生细菌素、有机酸和挥发性脂肪酸等多种物质，调节肠道内环境[2]。
1.2 增强肠道上皮屏障功能肠道上皮是病原微生物入侵的一道重要防线，也是一道重要的免疫屏障，抑制病原菌及内毒素通过肠道粘膜进入机体。
粪肠球菌能够在动物肠道内形成生物薄膜附着在动物肠道粘膜上，进行正常发育、生长和繁殖，形成乳酸菌屏障，抵御外来毒素和致病菌侵入，这是芽孢杆菌和酵母菌等所没有的功能[3]。
Chichlowskietai等[4]研究发现，粪肠球菌有利于杯状细胞的生长和成熟，杯状细胞分泌的黏液素能促进机体黏附蛋白的分泌，提高菌的黏附力，从而抑制毒素对肠道上皮细胞的侵害。
1.3 增强机体免疫能力 粪肠球菌能够显著增强巨嗜细胞的活性，促进免疫器官的发育，提高动物的免疫反应能力，促进抗体的产生及细胞因子的分泌，从而增强机体的免疫力[5]。
Gill等[6]研究也表明粪肠球菌和嗜酸乳酸杆菌能明显提高脾脏细胞对T细胞与B细胞的增殖反应能力，增加血液中抗体和INF-γ的含量。
乳酸菌抑菌机制论文素材
乳酸菌抑菌机制论文素材1. 引言乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的细菌，它们被广泛应用于食品工业、农业和医药领域。
乳酸菌具有抑制病原微生物生长的能力，然而，其抑菌机制尚不完全清楚。
本文旨在综述乳酸菌抑菌机制的研究进展，为进一步揭示乳酸菌抗菌作用提供理论依据。
2. 乳酸菌的分类和特性乳酸菌是一类革兰氏阳性菌，主要产生乳酸，并具有以下特性：耐低pH值、耐胆盐、产生抗菌物质、调节肠道菌群、增强免疫力等。
根据不同的分类标准，乳酸菌可分为乳酸杆菌属、双歧杆菌属、嗜热链球菌属等。
3. 乳酸菌的抑菌机制3.1 产生有益抑菌物质乳酸菌通过产生有益抑菌物质来抑制病原微生物的生长。
其中，乳酸是最重要的抗菌物质之一。
乳酸降低环境pH值，使得病原微生物难以生存和繁殖。
此外，乳酸还能通过改变病原微生物的细胞膜结构，导致其死亡。
3.2 竞争性排除乳酸菌在生长过程中占据肠道或其他生态环境的位置，通过与病原微生物竞争营养物质和附着位点，阻断病原微生物的生长和繁殖。
此外，乳酸菌还能产生抗菌酶，如乳酸菌的干扰素，能够降低病原菌的毒力。
3.3 调节免疫功能乳酸菌能够通过调节机体的免疫功能，增强机体对病原微生物的抵抗力。
乳酸菌可以激活巨噬细胞和自然杀伤细胞，促进免疫球蛋白的产生，并提高肠道黏膜屏障的免疫功能。
4. 乳酸菌抑菌机制的研究方法4.1 体外实验体外实验是研究乳酸菌抑菌机制的常用方法之一。
通过将乳酸菌与病原微生物共同培养于培养基中，观察乳酸菌对病原微生物生长的影响，并通过测定抑菌物质的浓度、pH值等参数，来进一步了解乳酸菌的作用机制。
4.2 分子生物学分析分子生物学方法如PCR、基因克隆和基因敲除技术等，可用于研究乳酸菌抑菌机制中的关键基因和代谢途径。
通过研究乳酸菌的基因组和转录组变化，可以揭示乳酸菌在抑制病原微生物生长中的关键分子过程。
5. 乳酸菌抑菌机制的应用乳酸菌作为一种安全、有效的抗菌剂，广泛应用于食品工业、农业和医药领域。
粪肠球菌的作用及功能主治
粪肠球菌的作用及功能主治粪肠球菌的介绍粪肠球菌（Fusobacterium nucleatum）是一种常见的肠道细菌，被广泛存在于人类的口腔和胃肠道中。
它属于厌氧菌，可以在缺氧环境中存活和繁殖。
粪肠球菌以其特殊的形态和功能，在人类身体中扮演着重要的角色。
粪肠球菌的主要功能粪肠球菌在人体内发挥以下主要功能：1.消化食物：粪肠球菌参与食物的消化，特别是对于纤维素的分解和吸收具有重要作用。
它可以分解纤维素和其他复杂多糖，产生有益的短链脂肪酸，如丙酸、丁酸和乳酸等，为人体提供能量和营养物质。
2.调节免疫系统：粪肠球菌参与调控人体的免疫系统，维持肠道免疫的平衡。
它能够与肠道黏膜上的免疫细胞相互作用，促进免疫细胞的成熟和功能的调节，增强肠道的抵抗力，预防炎症和感染。
3.保持肠道平衡：粪肠球菌与其他肠道菌群一起维持肠道的微生态平衡。
它可以抑制一些有害菌的生长，防止其过度繁殖，从而保护肠道健康。
此外，粪肠球菌还可以与其他益生菌相互作用，促进其生长和功能，进一步增强肠道的益菌群落。
4.抗肿瘤作用：最近的研究表明，粪肠球菌可能具有一定的抗肿瘤活性。
它可以诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤细胞的增殖，对一些肿瘤类型具有一定的杀伤效果。
这一发现为粪肠球菌在肿瘤治疗中的潜在应用提供了新的思路。
粪肠球菌的功能主治粪肠球菌的多种功能使其具备一定的功能主治能力，主要包括以下方面：1.促进肠道健康：粪肠球菌可以促进肠道的蠕动，减少便秘和消化不良等症状。
它还能够减少肠道内有害菌的数量，预防肠道感染和炎症。
2.增强免疫力：粪肠球菌可以调节人体免疫系统的平衡，增强免疫力，预防感冒、流感和其他感染性疾病。
3.改善口腔健康：粪肠球菌存在于口腔中，与口腔健康密切相关。
它可以抑制一些致病菌的生长，减少口腔感染和龋齿的发生。
4.调节肠道菌群：粪肠球菌可以与其他肠道菌群相互作用，维持肠道微生态的平衡。
它能够促进有益菌的生长，减少有害菌的数量，预防肠道菌群失调导致的相关疾病。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
乳酸对粪肠球菌的抑菌作用及作用机制王凤婷;靳盼盼;刘芳;孙芝兰;吴海虹;王道营;许晓曦;徐为民【摘要】目前乳酸常被用来控制食品中腐败菌的生长,但是有关其对食品优势腐败菌抑菌机制方面的研究较少.本试验以一株从肉制品中分离得到的腐败菌粪肠球菌R612-Z1为目标菌株,研究乳酸对其的杀菌效果及作用机制.结果表明,各浓度(0.25%、0.50%、1.00%)的乳酸均有杀菌效果而且作用明显,通过激光共聚焦显微镜及流式细胞仪检测发现,处理后细胞膜通透性增强.扫描电镜及腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)浓度的测定结果说明,胞内物质流出聚集在细胞外侧,胞外ATP浓度和核酸类物质浓度明显上升,膜电势快速升高.因此,乳酸通过破坏粪肠球菌的细胞壁,增加细胞膜通透性,改变细胞内外电势,导致内容物流出,从而达到杀菌效果.%Lactic acid(LA) is widely used to control the growth of contaminating bacteria in food,but there are few reports about the antibacterial mechanism of it. The antimicrobial activity of LA against a dominated spoilage bacterium, Enterococcus faecalis R612-Z1,isolated from water-boiled salted duck was studied. The results showed that all the selected concentrations of LA (0.25%,0.50%, 1.00%) had obvious bactericidal action. The permeability of cell membranes was increased for the bacterial cells treated with 1.00% LA, which was detected using the laser scanning confocal microscope and flow cytometry. The intracellular substances were leaked according to the results of scanning electron micrographs and the detection of extracellular ATP and UV-absorbing materials. The membrane potentials were found to be increased. There-fore,the antibacterial effect of LA on E. faecalis was mainly completed by the massive leakage of intracellular component,which was caused by damaging the cell membrane and membrane potential.【期刊名称】《江苏农业学报》【年(卷),期】2018(034)001【总页数】7页(P200-206)【关键词】粪肠球菌;乳酸;抑菌机理【作者】王凤婷;靳盼盼;刘芳;孙芝兰;吴海虹;王道营;许晓曦;徐为民【作者单位】江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;东北农业大学食品学院,黑龙江哈尔滨150030;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;东北农业大学食品学院,黑龙江哈尔滨150030;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;东北农业大学食品学院,黑龙江哈尔滨150030;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014【正文语种】中文【中图分类】TS201.3食品的安全、质量及营养价值是人们密切关注的问题[1]。
食品在收获、加工、运输、储藏过程中容易变质[2]，产生有害物质或滋生新的致病菌[3]危害人体健康。
肠球菌存在于人或动物消化道内，特定条件下会成为病原体引发感染性疾病[4]，人感染会引起泌尿系统感染、心内膜炎、伤口感染等，动物感染会引发脑炎、关节炎等[5]。
粪肠球菌(Enterococcus faecalis)为肠球菌属革兰氏阳性菌，属于消化道内正常菌群，但污染食品后会引发疾病发生，作为食源性致病菌已在生的猪肉、鸡肉、牛肉及其他动物源食品中检出[6-7]。
由于抗生素的大量使用，粪肠球菌已经对其产生耐药性，因此在临床治疗中有一定难度[8]。
吴悠[9]等使用齐墩果酸和二甲基亚砜有效抑制了粪肠球菌的生长，Tong等[10]研究了多西环素、枸橼酸和去污剂组成的混合物(MTAD)与乳酸链球菌素(Nisin)复配对粪肠球菌的抑菌机理。
在肉类和家禽加工厂中使用最普遍的消毒剂即为有机酸[11]，乳酸作为三大有机酸之一[12]，能够参与人体正常的代谢[13]，在达到杀菌目的的同时不对人体产生危害。
乳酸具有很强的防腐保鲜功能，可作为食品添加剂用于果酒、饮料、肉类、食品等的加工中，具有调节pH、抑菌、调味、保持色泽等作用[14]。
乳酸并非食物[15]，广泛存在于发酵类食品中[16]，如酸奶、干酪、泡菜等。
国内外有很多关于乳酸菌及其细菌类产物抑菌特性及机理的报道[17-18]，但关于乳酸抑菌效果及机理的研究较少。
本研究拟以一株从肉制品中分离得到的粪肠球菌为试验菌株，研究乳酸对其的杀菌作用及机理，以期为今后以乳酸为基础杀菌剂和保鲜剂的研究提供依据。
1 材料与方法1.1 材料与试剂所用菌株为粪肠球菌(Enterococcus faecalis R612-Z1)，由江苏省农业科学院农产品加工研究所保存。
试验用的脑心浸液肉汤(BHI)培养基购自北京陆桥生物公司。
乳酸购自天津科密欧生物技术公司，荧光探针羧基荧光素双乙酸酯[5(6)-cFDA]和3,3-Dipropylthiadicarbocyanine iodide[DiSC3(5)]均购自Sigma公司，碘化丙啶(PI)购自生工生物工程公司，腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)检测试剂盒购自碧云天公司。
1.2 仪器与设备所用仪器和设备主要有Accuri C6流式细胞仪(BD公司产品)，PE(Ultra View VOX)转盘式激光共聚焦显微镜(铂金埃尔默公司产品)，EVO-LS10扫描电子显微镜(蔡司公司产品)和BioPhotometer plus核酸蛋白测定仪(Eppendorf公司产品)。
1.3 方法1.3.1 菌株培养将冻存管中的粪肠球菌R612-Z1接种于新鲜的BHI培养基中，37 ℃、200 r/min培养，待生长至对数期时再次转接于新鲜培养基中，重复3次，备用。
1.3.2 细菌活性试验按培养基体积1.00%接种活化后的粪肠球菌R612-Z1菌液于BHI液体培养基中，37 ℃摇床培养到OD600值为1.0时，取20 ml菌液分别置于不同的离心管中，4 ℃下6 000 g离心10 min，收集菌体沉淀，然后在各管中分别加入相同体积的乳酸溶液，其浓度分别为0.25%、0.50%、1.00%。
将菌悬液放入摇床中，分别在0 min、10 min、30 min、60 min、120 min、180 min取样，使用0.1 mol/L PBS缓冲液按照10倍递增稀释法[19]稀释样品至相应浓度，取100 μl均匀涂布于BHI固体平板上，37 ℃培养24 h，记录菌数。
1.3.3 扫描电镜按培养基体积1.0%接种活化后的粪肠球菌R612-Z1菌液于BHI液体培养基中，在37 ℃摇床中培养至对数期，4 ℃下6 000 g离心10 min，收集菌体沉淀，用0.01 mol/L PBS缓冲液(pH 7.4)洗涤，去掉上清，加入同体积且质量浓度为1.0%的乳酸，以只加入相同体积PBS缓冲液为对照。
37 ℃处理2 h，4 ℃下6 000 g离心10 min，收集菌体沉淀，再用PBS缓冲液洗涤3次，除净上清，4 ℃下用2.5%的戊二醛固定12 h[20]。
在扫描电子显微镜下观察菌体表面形态的变化。
1.3.4 细胞膜渗透性试验1.3.4.1 激光共聚焦显微镜检测使用羧基荧光素双乙酸酯[5(6)-cFDA]和碘化丙啶(PI)来区分活细胞与死细胞[21]。
取对数期的菌液在4 ℃下6 000 g离心10 min，收集菌体沉淀，用0.85%NaCl溶液洗涤菌泥后，其中一份加入同体积质量浓度为1.00%的乳酸，另一份加入同体积生理盐水的菌悬液作为对照，室温下处理2 h，每15 min振荡1次。
收集菌泥重新悬浮在500 μl的生理盐水中，加入荧光探针cFDA(终浓度为100 μmol/L)，避光保存10 min，然后加入PI(终浓度为30μmol/L)，避光反应10 min。
混合液离心后用500 μl生理盐水悬浮菌泥，取3 μl 菌液到载玻片上，加上盖玻片，置于激光扫描共聚焦显微镜下观察并拍照。
1.3.4.2 胞外ATP及紫外吸收物质的检测取对数期的菌液在4 ℃下6 000 g离心10 min，收集菌泥，使用0.01 mol/L PBS缓冲液(pH 7.4)洗涤3次，将菌泥悬浮在质量浓度为1%的乳酸溶液中，25 ℃下处理，分别在0 min、10 min、30 min、60 min、120 min、180 min取样。
将样品于4 ℃、10 000 g下离心1 min，取上清测定其胞外小分子ATP浓度和紫外吸收物质(主要为核酸和蛋白质等)浓度的变化。
按照ATP测定试剂盒说明书测定样品中ATP的含量，先测出ATP浓度与荧光值的标准曲线，然后在样品中加入ATP检测试剂，混合均匀后通过测定其化学发光值来确定ATP的浓度[22]。
紫外吸收物质的浓度以紫外分光光度计测定的OD260值来表示。
1.3.5 流式细胞仪使用方法1.3.4.1中处理好的菌液，依次用cFDA和PI染色[23]，于4 ℃下6 000 g离心10 min，收集菌体，除去多余的荧光探针后，重悬于0.01 mol/L PBS缓冲液中。
在检测过程中以低速率(1 s 400～600个)收集50 000个细胞，分别在525 nm和620 nm处检测样品绿色荧光和红色荧光，然后转化为数字信号。
通过分析每个区域细胞的百分比来确定粪肠球菌的损伤程度。