酶工程实验试题及答案

1、酶的固定化方法：吸附法、包埋法、共价结合法、热处理法

2、提取酶的有机溶剂有：甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、异丙醇、

3、酶生产的主要方式：固体发酵、液体深层通气发酵、固定化细胞或固定化原生质体发酵

4、酶的抽提剂有：稀酸、稀碱、稀盐、稀有机溶剂等

5、测定酶蛋白含量的方法：

凯氏定氮法、双缩尿法、Folin 酚法、紫外法、色素结合法、BCA法、胶体金测定法

6、影响酶活力的主要因素：温度、PH、底物浓度、酶浓度、抑制剂、激活剂

7、包埋固定化酶的凝胶有：聚丙烯酰胺、聚丙烯醇、光敏树脂、琼脂、明胶、海藻酸钙

8、酶的回收率：是指直接测定的固定化酶的活力占固定化之前的活力的百分比。

9、纯化倍数：就是经过纯化后得到的比活力与纯化前比活力之间的比值。

10、盐析的原理：蛋白质溶液在一定浓度范围内，加入无机盐，随着盐浓度增大，蛋白质的溶解度增大，但当盐浓度增到一定限度后，蛋白质将从溶液中析出。

11、在酶的反应过程中如何确保酶的最适反应温度和最适pH值。

保证最适温度的方法：通过发酵罐的热交换设施，控制冷源或热源流量；通过曲室的通风和加热设备控制。保证最适pH的方法：加酸或加碱，加碳源或氮源物质。

12、在发酵产酶过程中的准备工作：

收集筛选菌种，菌种保藏，细胞活化，扩大培养，培养基的配置，对发酵条件的控制。

13、为什么在测酶活实验中要连续不断的测酶活和酶蛋白含量

因为酶的活性会受温度和PH值的影响

14、终止酶反应的方法：

1、迅速升高温度；

2、加入强酸、强碱、尿素、乙醇等变性剂；

3、加入酶抑制剂；

4、调节反应液pH值。

15、固定化的优点：

1、可反复使用，稳定性高；

2、易与底物和产物分开，便于分离纯化；

3、可实现连续生产，提高效率。

16、培养基的成分：碳源、氮源、无机盐、生长因素、水。

17、菌种保藏方法：

1、斜面低温保藏法

2、液体石蜡油保藏法

3、砂土管保藏法

4、真空冷冻干燥法

5、液氮超低温保藏法。

18、发酵产酶的操作过程：配置培养基、分装、灭菌（112℃—115℃，20min）、孢子悬液（将无菌水加入斜面培养基）、接种、培养（32℃，180r/min，培养72h）

19、测定酶活的方法：

1、在一定时间内，让适量的底物与酶在最适合条件下；

2、加入酶抑制剂或升高温度等方法快速终止酶反应；

3、加一定量的显色剂与底物反应，测定液体的吸光度；

4、根据吸光度值计算出酶活

20、壳聚糖酶如何筛选：采用透明圈法，透明圈法直观、方便、根据壳聚糖不溶于水，以壳聚糖为唯一碳源，培养基浑浊。如果有该酶存在，即可降解壳聚糖为壳寡糖，壳寡糖容易被分解吸收，所以形成透明圈，从而可筛选出产生壳聚糖酶的菌株21、产壳聚糖酶初筛平板有什么现象，为什么

会出现透明圈，其原因是根据壳聚糖不溶于水，以壳聚糖为唯一碳源，培养基浑浊。如果有该酶存在，即可降解壳聚糖为壳寡糖，壳寡糖容易被分解吸收，所以形成透明圈

22、酶反应器：

分批式搅拌罐反应器、连续流搅拌罐反应器、填充床反应器、流化床反应器、模型反应器、鼓泡塔反应器

23、对产酶的菌种的要求是： 1、产酶量高；2、繁殖快，发酵周期短；3、产酶稳定性好，不易退化，不易被感染；4、能够利用廉价的原料，容易培养和管理；5、安全可靠，非致病菌。

24、在使用离心机时应注意事项

25、尿酶提取过程中为什么要在冰浴中进行

在冰浴中进行可以使尿酶处于低温条件下，低温能降低酶的活性，但不破坏酶的活性，在适合的温度下可恢复酶的活力

26、填充床的制备及应用的要点

装柱——平衡——应用——检测

装柱：均匀、无裂缝、无气泡、平整；平衡：1—2倍柱床体积缓冲液；应用：3%尿素溶液；

检测：定性：纳氏试剂（黄色或棕红色沉淀）——定量：取20ml流出液，用0.05mol/L标准HCL滴定（加2—3滴混合指示剂）

PFR模型制作注意事项及应用：A、填装一定要均匀，运行时流速要稳定 B、PFR的液体流动方式有下向流、上向流或是循环流之分，工业上通常用上向流，可以避免下向流动的压力对摇床的影响，对反应产生气体的尤为注意

27、设计实验某蛋白的最适温度为50度，其最适pH范围在4.0-8.5，请设计实验测定其最适pH。

按下表格步骤进行操作

以PH值为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制实验曲线，得出最大吸光度值即为最适PH

28、H2O2__过氧化氢酶 H2O+O2，问如何测定过氧化氢酶其酶活力。

①将过氧化氢与蒸馏水混合，６０℃预热５ｍｉｎ

②加入适量的过氧化氢酶液，６０℃准确保温３ｍｉｎ，沸水浴灭活５ｍｉｎ

③加入ＤＮＳ和高锰酸钾溶液，沸水浴５ｍｉｎ（冷却）

④加入适量的蒸馏水，测Ａ540

⑤计算酶活，绘制标准曲线

29、测壳聚糖酶的酶活：（壳聚糖在壳聚糖酶的消化分解作用下产生还原糖，再用DNS法，使还原糖与DNS发生显色反应生成棕黄物质，再在520nm处测该物质的吸光度值来判断产壳聚糖酶菌量高低的菌液。）

步骤：①将1%标准壳聚糖溶液与pH5.6醋酸缓冲液混合，50℃预热5min

②加入适当稀释的酶液，50℃反应15min，然后沸水浴5min

③加入适量DNS，沸水浴5min，冷却

④加入适量蒸馏水，3500rpm/min，离心15min

⑤用分光光度计测OD520的值

⑥计算酶活，并绘制标准曲线

30、海藻酸钙凝胶的制备

①配置1000ml 3%海藻酸钠溶液（用PH7.0，缓冲液配置），200ml 5%氯化钙溶液（用蒸馏水配置）

②取0.6g湿尿酶，再加入80ml 3%海藻酸钠溶液，充分搅拌打散

③用注射器将上述溶液滴入氯化钙溶液中

④将制备的凝胶颗粒，用缓冲液充分洗净备用

31、从原料大豆中制备固定化尿酶的流程（写出原料处理、抽题方法、分离纯化方法、干燥和保存）

①5g浮石+2%HAC 浸泡2次倾去酸，用蒸馏水反复洗至中性、沥干

②称10g豆粉于锥形瓶，加入浮石——加50ml，32%丙酮——水浴10min——4层纱布过滤（滤渣用10ml丙酮再提一次）合并滤液离心36=500rpm、15min——取上清，用2%HAC调pH至4.9——4℃低温保存沉淀即尿酶

32、怎样制备溶菌酶33、色谱测酶的步骤

34、α—淀粉酶的制备过程，请写出原液的处理液，提取沉淀的方法，初提初步纯化的方法，如何保存。

α—淀粉酶是一种胞外酶，胞外酶的初步分离纯化通常是将发酵液经过预处理后采用过滤或离心的方法将酶液与菌体分离，然后在酶液中加入（NH4）2SO4盐析沉淀获得酶泥，最后干燥即可

A1、在实验中，我们通常采用什么方法保证酶促反应的最适温度和最适pH值？