DNA的粗提取与鉴定操作
实验05DNA的粗提取与鉴定(原卷版)
专题05DNA 的粗提取与鉴定一、实验原理1．提取DNA的原理利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。
如：(1)DNA在酒精溶液中的溶解性：DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精。
(2)DNA在NaCl溶液中的溶解性：DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，它能溶于2 mol/L 的NaCl溶液。
2．鉴定DNA的原理在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。
二、方法步骤1．称取约30 g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10 mL研磨液，充分研磨。
2．去除滤液中的杂质方案一在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4 ℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液方案二直接将研磨液倒入塑料离心管中，在1 500 r/min的转速下离心5 min，再取上清液3．DNA方案一在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%)，静置2～3 min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA；用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分方案二将溶液倒入塑料离心管中，在10 000 r/min的转速下离心5 min，弃上清液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干4.DNA取两支20 mL的试管，各加入2 mol/L的NaCl溶液5 mL。
将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCl溶液中，再向两支试管中各加入4 mL的二苯胺试剂。
混合均匀后，将试管置于沸水中加热5 min，待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。
三、操作提示1．以血液为实验材料时，每100 mL血液中需要加入3 g柠檬酸钠，防止血液凝固。
2．加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。
四、关键点拨1．利用动物细胞提取DNA时，破碎细胞的方法：动物细胞无细胞壁，可直接使其吸水涨破。
2．不能选用哺乳动物成熟的红细胞作为实验材料，原因是哺乳动物成熟的红细胞无细胞核。
DNA的粗提取与鉴定(鸡血)
DNA 的粗提取与鉴定一、实验目的：初步掌握DNA 的粗提取和鉴定的方法。
二、实验原理：1．DNA 的溶解性：2．DNA 对酶、高温和洗涤剂的耐受性：蛋白酶能水解蛋白质，但对DNA 没有影响。
大多数蛋白质不能忍受60~80℃的高温，而DNA 在80℃以上才会变性。
洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA 没有影响。
3．DNA 的鉴定：（1）DNA+二苯胺→蓝色（沸水浴）（2）DNA+甲基绿→ 绿色三、实验材料：鸡血柠檬酸钠100mL+新鲜鸡血100mL ，离心取沉淀物 鸡血细胞液10mL+蒸馏水50mL （1：5） 2层纱布过滤，取滤液滤液+2mol/L 的NaCl 溶液40mL ，同一方向，缓慢，玻璃棒不能直插底部；2层纱布过滤，取滤液 约470mL 蒸馏水，直至丝状物不再析出圈，同一方向，缓慢，玻璃棒不能直插底部层纱布过滤，取黏稠物 2mol/L 的NaCl 溶液20mL ，过滤，2层纱布，取滤液 ，同一方向，缓慢，玻璃棒不能直插底部冷却的酒精50mL的NaCl 溶液5mL+DNA ，搅拌；再加二苯胺试剂5mL ，沸水浴5-15min 。
五、总结：六、注意事项：1、巧记：1次加冷酒精，2次加蒸馏水；3个NaCl溶液浓度，4次过滤； 5种溶液(柠檬酸钠溶液,酒精溶液,二苯胺试剂,2mol∕L NaCl 溶液,0.015 mol∕L NaCl溶液)；6次搅拌。
2、实验中为减少提取过程中DNA的损失，最好使用塑料的容器。
3、DNA的鉴定中应设计对照实验，以排除NaCl溶液对实验结果的影响。
4、若提取DNA时，玻璃棒不易卷起含DNA的丝状物，可以改用不尖锐的牙签，轻轻将丝状物缠绕其上。
5、若丝状物足够多，还可以增加一个实验：蛋白质+双缩脲试剂→紫色6、析出DNA时，应加蒸馏水的体积：根据M1V1=M2V2，溶液的总体积为V2= M1V1/ M2=约570mL。
DNA的粗提取与鉴定
DNA 的粗提取与鉴定
一、实验原理：
1、析出DNA 的原理：DNA 在NaCL 溶液中的溶解度是随着NaCL 浓度的变化而变化的，当NaCL 的物质的量浓度为0.14mol/L 时，DNA 的溶解度最低，高于或低于这一浓度溶解度都会增高。
如图：
2、提纯DNA 的原理：
DNA 不溶于冷酒精，而细胞中某些物质可溶于冷酒精。
3、鉴定原理：DNA 遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色。
二、方法步骤：
材料准备：常用鸡血细胞液
柠檬酸钠(抗凝剂)+鸡血−−−→静置或离心
血浆(弃去)+鸡血细胞液。
如图：
说明：①柠檬酸钠防止血液凝固。
②弃去上清液，是因为DNA 存在于血细胞中，血浆很少(没有)。
③用鸟类血细胞是因为鸟类成熟红细胞含DNA ，而哺乳动物成熟红细胞不含DNA ，所以不能用。
④本实验还可以用菜花或动物肝脏等作实验材料。
第一次在2中，使DNA与蛋白质分离
①两次加入高浓度NaCL
第二次在5中，DNA再溶解
第一次在1中，使细胞吸水涨破
②两次加入蒸馏水
第二次在3中，降低DNA的溶解度
第一次在1中，取滤液(含核物质)
③三次过滤第二次在4中，取黏稠物质
第三次在6中，取滤液
说明：在第一、三次取滤液时，纱布1—2层，第二次取黏稠物时纱布应多层。
④5次搅拌均要求超一个方向，轻缓，防止DNA断裂。
(二
璃制品表面带电荷，DNA中的磷酸基带相反的电荷，会被吸附于玻璃表面，减少DNA。
实验九DNA的粗提取与鉴定
【实验九】DNA的粗提取与鉴定陈小珺（江西省赣州市第三中学341000）1 教学建议在本实验的教学中，教师应注意以下几点。
1.1 实验材料必须准备充足。
本实验所用的实验材料是鸡血细胞液,由活鸡的鲜血经沉淀后获得。
每组(2个学生)需用5 mL 鸡血细胞液,则每班(50人)至少需要130 mL,而鸡血细胞液与鸡血的体积比为1:3,这样每班至少需要390 mL 鸡血细胞液。
宰杀1只中等大小的活鸡,一般可得120 mL 左右的鲜血,因此,1个班实验需要买4只活鸡。
也可以到市场售活鸡处去索取鸡血,但所带烧杯中必须提前放入抗凝剂。
（每100ml鸡血加入3g柠檬酸钠）1.2 盛放鸡血细胞液的容器,最好是塑料容器。
因为鸡血细胞破碎后释放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,由于细胞内DNA的含量本来就比较少,再被玻璃容器吸附去一部分,提取到的DNA就会更少。
1.3 获取较纯净的DNA的关键步骤。
1.3.1 充分搅拌鸡血细胞液：将鸡血细胞液与蒸馏水混合以后,必须用玻璃棒沿一个方向快速搅拌,使鸡血细胞加速破裂,并释放出DNA。
1.3.2沉淀DNA时必须用冷酒精：体积分数为95%的酒精在冰箱中至少存放24 h。
1.3.3正确搅拌含有悬浮物的溶液实验步骤3、5、7,都需要用玻璃棒搅拌。
教师应提醒学生注意,在进行步骤3、5时,玻璃棒不要直插烧杯底部,而且搅拌要轻缓,以便获得较完整的DNA 分子。
进行步骤7时,要将玻璃棒插入烧杯中溶液的中间,用手缓慢转动5 min。
2 实验原理的补充介绍2.1 DNA的释放本实验用鸡血细胞做实验材料有两个原因。
一是因为鸡血细胞核的DNA 含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破。
DNA位于鸡血细胞的细胞核中,正常情况下不会释放出来。
为了使DNA从细胞核中释放出来,实验中采用了向鸡血细胞液中加入蒸馏水并且搅拌的方法。
蒸馏水对于鸡血细胞来说,是一种低渗液体,水分可以大量进入血细胞内,使血细胞破裂。
DNA的粗提取与鉴定
二、实验原理 2.DNA的分离和提纯
DNA溶于2mol /L的NaCl溶液,但 不溶于冷酒精，细胞中的其它杂 质溶于冷酒精。
二、实验原理 3.DNA的鉴定
DNA与二苯胺作用生成蓝色沉 淀用来鉴定 DNA（沸水浴）
实验步骤
一、取材：香蕉去皮、洗洁精、食盐溶液、95％酒精等
二、DNA的释放、溶解、获取
实验材料
研磨提取粗提取、提纯恒 温 水 浴 加 热实验现象一
实验现象二及比较
作业： 1.如果选用实验材料是鸡的血细 胞，请写出实验操作步骤； 2.你做的实验现象是怎样的？请 分析或推测原因，并拟定证明你 的推测的进一步实验方案。
1.往研钵香蕉加入10mlNaCl溶液和少量的洗洁进行研磨； 2.用漏斗一层纱布过滤，取滤液； 3.往滤液中加入等量的95%的酒精，静置2--3分钟； 4.用玻棒卷起白色絮状物，用吸水红吸去水分后放入试 管，加入4ml 2mol /L的NaCl溶液充分溶解。
三、DNA的鉴定：找实验老师加4ml二苯胺溶液，在 恒温水浴锅加热2--3分钟，观察现象并分析实验结果。
一、实验目标 1.用15分钟左右的时间尝试对
香蕉组织中的DNA进行粗提取； 2.学会用二苯胺对粗提取的DNA
进行鉴定； 3.能对实验结果进行分析评价。
二、实验原理 1.DNA的释放 洗涤剂等去污剂可以溶解香
蕉细胞的细胞壁，破坏细胞膜， 同时也能使蛋白质变性。 （教材P55)洗涤剂能够瓦解细胞 膜,但对DNA没有影响。
dna的粗提取与鉴定
dna的粗提取与鉴定DNA的粗提取与鉴定一、粗提取粗提取的方法是通过物理和化学方法从一个或多个生物样品中提取DNA样品，通常是为了进行DNA分子生物学分析、基因组学以及其他科学研究。
1. 用拆解液拆解细胞使用拆解液拆解细胞是最常用的粗提取DNA技术。
主要使用的拆解液有Tris-EDTA（TE buffer）、Cetyltrimethyl ammonium bromide （CTAB）、Sarkosyl（SDS）和NaOH溶液等。
各种拆解液的比例和温度可以根据每个实验的要求进行调整。
2. 用磁珠或磁性分选器抽提也可以使用磁珠或磁性分选器来抽提DNA样品。
这种方法可以从多种生物样品中提取DNA，如血清、血浆、细胞粗提物以及血液细胞等。
磁珠抽提的原理是利用磁性珠子来吸附DNA样品，而磁性分选器则是利用磁场将DNA分离出来。
磁珠抽提的优点是简单快捷，缺点是提取的DNA质量不够高。
3. 改良的拆解方式一些改良的拆解方式可以用来考察某一特定细胞类型。
这些方法包括冷冻破碎、湿热破裂、极限温度破裂和化学破裂等。
这些技术可以有效地提高蛋白质和DNA的提取效率，但缺点是需要较高的技术要求，而且操作步骤较多，比较耗时。
二、DNA的鉴定DNA的鉴定是指用特定的方法和技术，明确某个DNA样品的鉴定。
常见的DNA鉴定技术有定性分析、定量分析和活性检测等。
1. 定性分析定性分析是指对DNA样品进行定性鉴定，识别出它们是哪种DNA，以确定其基本性质。
常用的定性分析方法有紫外光检测和酶切检测等。
紫外光检测是将DNA浓度调整至1μg/ml，然后放置在紫外光228纳米的紫外灯管（UV lamp）下，通过分析紫外光吸收光谱来鉴定DNA 样品。
酶切检测是将DNA样品与特定的酶进行反应，用来分析DNA的特征。
常用的酶有限制性内切酶（restriction enzymes），例如EcoRI、BamHI、PstI和HindIII等。
2. 定量分析定量分析是指对某一DNA样品的浓度和数量进行测量，以了解其容量。
DNA的粗提取与鉴定
DNA的粗提取与鉴定
方法步骤：
1.溶解鸡血细胞核内的DNA
取一个125mL烧杯，注入15mL蒸馏水，注入1mL制备好的鸡血细胞液，用玻璃棒沿顺（或逆）时针方向快速搅拌5min，血细胞吸入大量水分而被胀破（搅拌加速破开裂），释放出DNA。
向烧杯中注入20mL 2mol/L的NaCl溶液，用玻璃棒沿顺（或逆）时针方向搅拌1min，混合均匀，DNA溶解。
2.析出含DNA的粘稠物
取150mL蒸馏水，沿烧杯壁缓慢加入，同时，用玻璃棒沿顺（或逆）时针方向缓慢不停地搅拌，大量含DNA的粘稠物逐渐析出，并吸附在玻璃棒周围，此时，溶液中NaCl浓度为0.14mol/L.
3.洗涤粘稠物——提取含杂质较少的DNA
取一个100mL的烧杯，注入25mL 95%酒精（常温），持玻璃棒连同吸附的粘稠物转移到注入酒精的烧杯中，沿顺（或逆）时针方向搅拌1—2min，血色及大部分杂质被洗去，缠绕在玻璃棒上的丝状物，其主要成分是DNA（含杂质较少）。
4.DNA的鉴定
取两只试管，分别加入2mL 0.015mol/L NaCl溶液，1号试管中加入丝状物，用玻璃棒搅拌，混合均匀，两只试管中分别加入2mL二苯胺试剂，振荡，水浴3min，1号试管变深蓝色（说明DNA 的量多），冷却后蓝色略深，2号试管无颜色变化。
注意：操作步骤2中搅拌不能快，以免析出的粘稠物被搅碎，搅拌后难以进行后面的操作。
DNA粗提取与鉴定
DNA的粗提取与鉴定1．根本原理2．操作过程(1)操作流程选取材料→破碎细胞，获取含DNA的滤液→去除滤液中的杂质→DNA的析出与鉴定。
(2)材料的选取：选用DNA含量相对较高的生物组织。
(3)破碎细胞①动物细胞：易破碎，可通过吸水破裂。
②植物细胞：参加洗涤剂、食盐后研磨。
(4)除去杂质的方法方法一：利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度的不同，通过调节NaCl溶液的浓度除去溶于和不溶于NaCl溶液中的杂质。
方法二：利用DNA对酶的耐受性，直接在滤液中参加嫩肉粉，反响10～15 min，嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质，而不会破坏DNA。
方法三：利用DNA对高温的耐受性，将滤液放在60～75 ℃的恒温水浴箱中保温10～15 min，使蛋白质变性沉淀而DNA分子还未变性。
(5)DNA的析出：向处理后的滤液中参加与滤液体积相等的、冷却的酒精溶液(体积分数为95%)，静置2～3 min，溶液中会出现白色丝状物，用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分。
(6)DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。
易错警示(1)本实验不能用哺乳动物成熟红细胞作实验材料，原因是哺乳动物成熟红细胞无细胞核。
可选用鸡血细胞作材料。
(2)实验中两次使用蒸馏水，第一次的目的是使成熟的鸡血细胞涨破释放出DNA，第二次的目的是稀释NaCl溶液，使DNA从溶液中析出。
1．如下图表示以鸡血为实验材料进展DNA的粗提取与鉴定的操作程序，请分析回答如下问题：(1)步骤一中，向鸡血细胞液中参加____________并搅拌，可使鸡血细胞破裂。
(2)步骤二中，过滤后收集含有DNA的____________。
(3)步骤三、四的操作原理是________________________________________________________________________________________________________________________；步骤四中，通过向溶液中参加____________调节NaCl溶液的物质的量浓度至____________mol/L时，DNA将会析出，过滤去除溶液中的杂质。
DNA的粗提取与鉴定
DNA的粗提取与鉴定（一）实验原理鸟类血液中红细胞有细胞核，细胞核内DNA与蛋白质结合成染色质。
利用DNA在0.14mol/L的氯化钠溶液中溶解度最低，而蛋白质此时的溶解度高的特点，可以使DNA与蛋白质分离，形成沉淀析出，通过过滤，得到粗提取的滤出物DNA。
再利用DNA不溶于酒精，但细胞中的其他物质可溶于酒精的特点，进一步提取出含杂质较少的DNA。
利用DNA遇二苯胺（沸水浴）成蓝色的特性，可以鉴定提取的DNA。
（二）实验材料（以鸡血为例）鸡血细胞液：先配备10%的柠檬酸钠溶液，按180mL新鲜鸡血混合100mL10%柠檬酸钠溶液的比例，立即将血液与柠檬酸钠充分混合，同时用玻璃棒搅拌以免凝血。
然后，用离心机以2000转/min的速度离心4min后，用吸管除去离心管上清液，就可获得所需的鸡血细胞悬液。
每组大约需要5—10mL鸡血细胞悬液。
如果无离心机，可将与柠檬酸钠充分混合的血液置于冰箱内，静置一天，使血细胞自行沉淀后，也可获得所需的鸡血细胞悬液。
（三）试剂与仪器1、2mol/L的NaCl溶液称取117g的NaCl，加蒸馏水至1000mL，使之完全溶解，即可获得2mol/L 的NaCl，须按此配方配备大量的2mol/L 的NaCl。
2、二苯胺试剂A液——1.5g二苯胺溶于100mL冰醋酸中，再加1.5mL浓硫酸，用棕色瓶保存。
B液——体积分数为0.2%的乙醛溶液。
实验前，将0.1mL的B液加入到10mL的A液中，现配现用。
3、0.015mol/L的NaCl溶液称取0.88g氯化钠加蒸馏水至1000mL，使之完全溶解。
4、塑料杯和试管DNA易吸附在玻璃器皿上，用塑料杯和试管可减少提取过程中DNA的损失。
（四）实验方法与步骤1、提取细胞核物质取5—10mL鸡血细胞悬液入烧杯中，加蒸馏水20mL，同时，用玻璃棒沿一个方向快速充分搅拌，使血细胞过度吸水破裂，细胞核内物质释放出来，然后用纱布过滤取其滤液。
2、溶解核内的DNA在滤液中加入2mol/L的NaCl40mL，并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min，核中DNA游离并充分溶解，染色质中的DNA和蛋白质分离。
dna粗提取与鉴定
dna粗提取与鉴定DNA粗提取与鉴定DNA是生命的基础，它携带了生物体的遗传信息。
在现代分子生物学中，DNA的提取和鉴定是非常重要的技术。
本文将介绍DNA粗提取和鉴定的方法。
一、DNA粗提取1.1 细胞破碎法细胞破碎法是一种常见的DNA粗提取方法。
它通过机械或化学手段破坏细胞膜和核膜，释放出细胞内的DNA。
机械方法包括高压均质和超声波破碎等，化学方法包括SDS、NaOH等。
这些方法都可以有效地破坏细胞结构，但同时也会对DNA造成一定程度的损伤。
1.2 酚/氯仿法酚/氯仿法是一种经典的DNA粗提取方法，它利用酚对蛋白质和核酸有不同的溶解度来分离DNA。
首先用盐水或缓冲液洗涤样品，然后加入酚/氯仿混合液，在离心后上层为水相（含RNA）、中间为界面层（含蛋白质）和下层为有机相（含DNA）。
通过抽取下层的有机相，可以得到粗提的DNA。
1.3 硅胶柱法硅胶柱法是一种高效的DNA粗提取方法，它基于DNA和硅胶之间的亲和力。
首先将样品加入硅胶柱中，然后用盐水或缓冲液洗涤硅胶柱，最后用低盐缓冲液洗脱DNA。
这种方法可以得到较纯的DNA，并且适用于大量样品处理。
二、DNA鉴定2.1 凝胶电泳凝胶电泳是一种常见的DNA鉴定方法，它利用电场将带电的DNA分子移动到凝胶上。
根据不同长度的DNA片段在凝胶中行进速度不同来分离不同大小的DNA片段。
通过比较样品中不同长度的DNA条带，可以确定样品中是否存在目标序列。
2.2 PCR扩增PCR扩增是一种高效、敏感、特异性强的鉴定方法。
它通过引物特异性识别目标序列，在体外进行大量扩增。
PCR扩增可以检测极少量的目标序列，并且能够对复杂混合物进行分析。
2.3 DNA测序DNA测序是一种直接读取DNA序列的方法。
它通过将PCR扩增的目标片段或提取的DNA样品，进行测序仪读取，得到目标序列的具体信息。
这种方法可以检测出极少量的变异或突变，并且可以对整个基因组进行分析。
三、总结DNA粗提取和鉴定是现代分子生物学中非常重要的技术。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
注入滤液中 ;③搅拌力度 。因黏稠物很软 , 如搅拌力度 控制不好 , 将黏稠物搅碎 , 使得过滤后在纱 布上得到的 黏稠物很少 , 造 成实 验失败 。应 缓缓 注入水 后可 先不 搅拌 , 待出现黏 稠物后 再轻轻 搅拌 1 ～ 2 圈即可 ;④该 步消耗蒸馏水量大 , 以每组 500mL计 , 每班 24 组 2个 班需 1桶 。用自来水也可做出效果 , 只是 溶液稍浑浊 。 时间 3min。 3.4 滤取含 DNA的黏稠物 过滤取黏 稠物 。若前三 步操作得当 , 黏稠物则很多 , 可用镊子及时 将黏稠物夹 出转移至 2mol/L的 NaCl溶液中 , 防止 黏稠 物堵 塞纱 布造成剩余溶液过滤困难 。过滤完成后将 黏稠物转移 至烧杯中 。此步 纱布仍 用两层 即可 达到 目的 , 参 考时 间 3min。 3.5 将 DNA的 黏 稠 物 再 溶 解 将 黏 稠 物 溶 解 于 20mL浓度为 2moL/L的 NaCl溶液中 , 搅拌 3min。 3.6 过 滤 含 DNA的 NaCl溶 液 将 滤 液 过 滤 至 100mL的烧杯中 , 取滤液 。时间 1min。 3.7 提取含杂 质较少 的 DNA 在 滤液 中加入 50 mL 冷却的医用酒精 (酒精在冰 箱中放置 24h)。冷酒精凝 聚 DNA效果好 , 杂质多为有机 物可溶解于 酒精中从而 使 DNA得以纯化 。若 滤液 仍显 淡血红 色可 以将 溶液 倒掉 (保留 DNA)再 注入 冷酒 精冲 洗 。用玻 璃棒 将出 现的丝状物轻 轻卷 起 。此步操 作一 定要 小心 , 严 防将 DNA搅断成 为 短节 节以 致无 法 捞出 。可 用 拇指 食指 夹住玻璃棒一端轻轻搓动 , 将 DNA卷起来 缠在玻璃棒 上 。此时 DNA呈淡黄色或白色 。时间 2min。 3.8 鉴定 DNA 将 DNA溶 解于 5mL0.015mol/L的 NaCl溶液中 , 注入二苯胺试剂 , 对照试管 不加 DNA, 搅 拌 后水浴 加热 5min, 待试 管冷却 后观 察 , 实 验试 管呈 蓝色 , 对照试管 无色 。注 入二苯 胺试 剂后溶 液出 现浑 浊 , 是二苯胺试剂由二苯胺在冰醋酸中溶 解而成 , 冰醋 酸结晶点高于 15℃, 而 该实验 一般在 1 月份 或 2 月份 进行 , 此时水温较低冰醋酸固化所致 , 加热 后即可恢复 透明 。有时实验 试管和 对照试 管虽 颜色 不同 , 但 并未 出现想象中的 蓝色 , 原 因有 :①加热 时间 不足 , 反 应进 行不彻底 ;②试 管未冷 却 , 冷却 后蓝 色要 明显些 ;③提 取的 DNA太少 ;④加入 试剂 剂量 过大 导致 DNA浓度 太 低 。正常 应溶 液占 试管 体积 1 /4, 若 溶液 占到 试管 1 /2或 3 /4即溶液剂量过大 ;⑤观察方法问题 。在蓝色
1 材料的选择与处理 材料选用鸡血 , 最好用新鲜鸡血 , 加入 抗凝剂柠檬
酸钠后置于离 心机中离 心 (1000 r/min)2min。 若无离 心设备 , 也可将 鸡血存 于冰 箱中静 置 24h待 血细 胞自 行沉淀 。不可选用猪血 , 原因是 DNA主要存 在于细胞 核中 , 而猪 (哺乳动物 )成熟的红细胞中无细胞核 。 2 试剂的配制
2mol/L、0.015mol/L的 NaCl溶液配制不再赘述 。 3 操作步骤
各组成员做好 分工 , 把握 好各 步骤 时间 。时 间缩 短达不到实验目的 , 延误则在一节课内完不成任务 。 3.1 提取鸡血细胞中的细胞核物质 取 10mL鸡血细 胞注入 50 mL烧杯中 , 加 入 20 mL蒸馏水 并沿 一个方 向搅拌 5min, 然后将血细胞 液过滤至 1000mL烧杯中 , 取滤液 。此步骤搅拌 时间一定 不要短 于 5min, 这是让 细胞有足够的 时间 吸水涨 破 , 释放 出细 胞核 物质 。有 学生问柠檬酸 钠在哪 , 这是没 有仔 细预习 未搞清 柠檬 酸钠的作用 , 若 鸡血中 不加 柠檬酸 钠 , 鸡血 早已 凝固 。 过滤是为了初步滤去鸡血中的杂质 。过滤 就用普通医 用纱布 , 两层即可 。此步骤参考时间 6min。 3.2 溶解细胞核内的 DNA 在滤液中加入 2mol/L的 NaCL40mL沿一个方向搅拌 1min。因溶液体积大约为 70mL,在 1000mL烧杯中液面太低不 利于搅 拌 , 建议不 用玻璃棒搅拌 , 改为用 手抓紧 烧杯 沿水平 面做圆 周向 摇动 。该步目的是让 DNA溶解于高浓 度的 NaCl溶液 中 , 多摇一会儿有利于 DNA充分溶解 。该步 参考时间 2min。 3.3 析出含 DNA的黏稠物 沿 烧杯内壁向滤液中加 入蒸馏水并轻轻搅拌至黏稠物不再增 加为止 。此步骤 操作需要重 点注 意 :①加水 量 。根 据 DNA在 NaCl溶 液中 的溶 解度 在 NaCl浓 度为 0.14 mol/L时最 低 , 及 M1 V1 =M2 V2 , 可求得溶液总体积 V2 = M1 V1 / M2 =2 × 40 /0.14≈570 mL, 因溶液原有 70 mL, 故只需加水 500 mL即可 ;②注水 方法 。取 500 mL水沿 烧杯 内壁 缓缓
生物学教学 2010年 (第 35卷 )第 7 期
· 35·
“ (河南省灵宝市第一高级中学 472500)
摘 要 本文介绍了 “DNA的粗提取与鉴定 ”实验的详细操作过程 , 重点分析了各步骤中学生易出现的问题及其原因和解决办法 。 关键词 DNA提取 鉴定