Caspase-2在神经细胞凋亡中的作用
Caspase,BCL-2蛋白家族与细胞凋亡调控机制
Caspase,BCL-2蛋白家族与细胞凋亡调控机制1972年，Kerr等提出细胞凋亡的概念，细胞凋亡（apoptosis）又谓细胞程序化死亡（programmed cell death ,PCD）是一种参与了生物体许多过程的细胞去除机制，是由基因编程调控的细胞主动自杀过程。
生物体通过这种机制完成对衰老细胞和畸形细胞的清除。
另外细胞凋亡对胚胎发育，免疫耐受，细胞群体稳定等有重大影响，并且对进一步深入研究艾滋病，癌症等对人类的生存构成严重威胁的疾病有潜在的价殖。
因此，许多年以来，细胞凋亡一直是生物领域科研研究的热点。
细胞凋亡的过程非常复杂，与此有关的两大家族bcl-2,caspase对细胞凋亡的调控起着举足轻重的作用，本文就这两大家族对细胞凋亡的调控机制影响作一综述。
1 BCL-2蛋白家族BCL-2蛋白家族分为三个亚族，原生存亚族（Pro-suvival subfamily）即BCL-2亚族成员有BCL-2, BCL-CL, KS-BCL-2, BCL-W, MCL-1,BHRF1, NR-B,ORF16, LMW5-HL,AL,FIB-19K,及 CED-9;两个原凋亡家族（Proapoptotrc subfamily）是Bax and BH3亚族。
Bax,bak, bid及egl-1属bh3亚族【1】。
其中15种蛋白为哺乳动物（主要是人）所有，nr-3为鸡所有，线虫c.elegans中的蛋白有ced-9及egl-1,病毒蛋白有LMW5-HL,BHRF1,ORF-16,KS-BCL-2和EIB-19K,BCL-2家族在细胞凋亡过程中起到调节者的作用。
1.1 细胞周期细胞增殖可以启动PCD，在一定条件下，bax能加速细胞周期进程。
而BCL对凋亡的阻遏抑制细胞增殖受阻碍的细胞也难以再进入细胞周期的淋巴细胞中，BCL-2造成的生长抑至与阻碍转录因子NFZF(Nucleaar Factor Assocciate Transcription)激活相关，另外对FAS信号途径的干扰会抑至细胞。
细胞的细胞凋亡与细胞存活机制
细胞的细胞凋亡与细胞存活机制细胞凋亡和细胞存活是细胞内常见的两种相反的生理现象。
细胞凋亡是指细胞主动死亡，而细胞存活是指细胞在一定条件下保持正常功能和活力。
细胞凋亡和细胞存活是细胞生命过程中不可或缺的两种机制，它们在维持组织和器官的正常结构与功能方面发挥着重要作用。
一、细胞凋亡的机制细胞凋亡是一种高度有序的细胞死亡程序，通过调控一系列的细胞信号通路来控制细胞死亡的过程。
以下是细胞凋亡的主要机制：1.信号转导通路细胞凋亡的信号转导通路包括两个主要的途径：内源性途径和外源性途径。
内源性途径主要通过细胞内信号分子，如细胞色素C的释放和线粒体呼吸链的受损来引发细胞凋亡。
外源性途径则是通过外界环境信号的作用来诱导凋亡。
2.调控蛋白细胞凋亡的过程中，多种调控蛋白发挥着重要作用，例如，Bcl-2家族蛋白和caspase家族蛋白。
Bcl-2家族蛋白包括抑制凋亡的成员（如Bcl-2和Bcl-xL）以及促进凋亡的成员（如Bax和Bad）。
caspase 家族蛋白则是细胞凋亡的核心执行者，主要包括caspase-3和caspase-9。
3.凋亡信号细胞凋亡信号可以由多种因素产生，如DNA损伤、缺氧、毒物刺激等。
这些信号能够激活细胞凋亡通路中的相关分子，最终导致细胞死亡。
二、细胞存活的机制细胞存活是指细胞维持正常功能和活力的状态。
以下是细胞存活的主要机制：1.细胞增殖细胞存活的关键是细胞能够进行正常的增殖，维持组织和器官的正常结构和功能。
细胞增殖受到多种因素的调控，包括细胞周期调控蛋白、细胞生长因子等。
2.应激反应细胞在受到外界环境压力和内源性损伤刺激时，可以通过应激反应来维持存活。
应激反应包括细胞自噬、细胞修复、细胞逆境应激蛋白的激活等。
3.细胞信号网络细胞存活还受到多种信号网络的调控，例如细胞周期信号通路、细胞凋亡信号通路、细胞分化信号通路等。
这些信号网络相互作用，使细胞能够适应环境和维持正常存活。
三、细胞凋亡与细胞存活的相互作用细胞凋亡和细胞存活是密切相关的两种机制，它们相互作用，共同维持着生物体的正常发育和功能。
Caspase与细胞凋亡
Caspase与细胞凋亡Caspase与细胞凋亡沈阳市第一人民医院神经内科（110041）李莉摘要：细胞凋亡，又称程序性细胞死亡（Programmed cell death, PCD）是机体生长发育、细胞分化和病理状态中细胞自主性死亡过程。
是细胞内由基因编码调控的按严格程序执行的细胞自杀过程。
细胞凋亡是细胞生长发育过程的重要生命现象，是目前生物医学领域中的一个重要研究课题。
阐明细胞凋亡的分子机制可对一些疾病的防治（如肿瘤，神经退行性疾病等）产生积极影响。
许多实验提示细胞凋亡涉及一个瀑布式（Cascade）基因表达过程。
半胱氨酸蛋白酶（Caspase）在细胞凋亡中发挥始动和效应作用。
本文就其生物学特性及其在凋亡中的作用机制作一综述。
关键词：Caspase；细胞凋亡细胞凋亡的原词Apoptosis由两个拉丁字组成。
Apo指离开，ptosis是落下，意思是细胞凋亡有如秋天落叶，到一定时候即失去生命力，遂即脱落，细胞凋亡，又称程序性细胞死亡（Programmed cell death，PCD）是机体生长发育、细胞分化和病理状态中细胞自主性死亡过程，是细胞内由基因编码调控的，按严格程序执行的细胞自杀过程。
通常需要30到60分钟，细胞凋亡形态学上的变化主要有DNA破碎，染色质凝集，细胞皱缩，线粒体肿胀和凋亡小体形成，而整个过程的结束以凋亡小体被吞噬为标志。
多数类型细胞在凋亡的最后阶段发生细胞核DNA的降解：DNA降解成180-200bp或其倍数的片段，因此在琼脂糖凝胶电泳上可见到有特征性的梯形图谱。
目前对凋亡的研究深入到分子水平，发现多种半胱氨酸蛋白酶（Cysteine aspartase）在细胞凋亡之中发挥着重要作用。
1、什么是Caspase通过对美丽线虫（nematode caenorhabditis elegans）的细胞死亡机制的研究发现，至少有3个基因直接参与了细胞凋亡的调节。
ced-3、ced-4直接介导细胞死亡，为促凋亡基因，其编码的蛋白分别为CED-3、CED-4、ced-3在细胞中起关键作用，称为线虫自杀基因，CED-3则称为死亡蛋白酶；ced-9则拮抗其作用，为抗凋亡基因，其编码的蛋白质为CED-9。
基因调控在细胞凋亡中的作用
基因调控在细胞凋亡中的作用细胞死亡是细胞内部调控机制的一部分，并且是细胞周期的最终阶段。
凋亡，也称为“有序死亡”，是一种广泛存在于动物和植物生物中的程序性细胞死亡过程。
相比于坏死，凋亡具有明确的起始信号、前兆和特定的死亡表现，同时对周围环境没有负面影响。
如何调控细胞凋亡过程是一个重要的研究领域，其中基因调控在细胞凋亡中扮演了重要的角色。
基因调控是指细胞通过调控基因表达来控制其内部调控机制的过程。
细胞凋亡过程中，许多基因的表达发生了显著变化，从而控制了各种蛋白质的合成和分泌。
这些基因可以分为几类：先天免疫系统、细胞凋亡信号通路和炎症反应。
“信号通路”主要是指特定分子之间进行交互通讯的方式；“炎症反应”则指针对外部刺激引起的细胞反应，最终形成保护性反应。
先天免疫系统中的信号转导通路是调控凋亡的关键。
例如，在埃博拉病毒感染中，千百万人都受到了病毒的感染。
一项研究表明，与无症状感染者相比，患病者基因上出现了更多的免疫信号通道和炎症反应基因。
这些免疫基因支持先天免疫反应和炎症反应，从而形成对病毒的防御作用。
除了先天免疫系统外，细胞凋亡信号通路也是凋亡调控的重要一环。
由于各种内外因素的刺激，如DNA损伤、细胞过度增殖、病毒感染等，信号转导通路将会从诱导期转换到执行期，并开始产生凋亡程序。
凋亡调控主要通过JNK、p53、Bcl-2家族蛋白和Caspase信号通路来实现。
其中，Bcl-2家族蛋白是重要的凋亡调节基因家族。
Bcl-2家族共有25个成员，它们分为真核细胞活性基因（如Bcl-xL和Mcl-1）和真核细胞死亡基因（如Bax、Bid和Bad）。
这些基因通过调控线粒体膜的通透性来调控细胞凋亡。
线粒体膜通过表达外膜蛋白和内膜蛋白，产生并存储ATP、调节细胞体和细胞氧化还原状态，同时也可以调节细胞的凋亡程序。
PARP是蛋白解多聚酶（PARP）的缩写。
在细胞凋亡过程中，Bcl-2蛋白可以通过与PARP互动，直接或间接地、促进或抑制介导凋亡的某些蛋白酶，从而直接或间接地调控细胞凋亡过程。
凋亡相关通路及抑制剂
Z-LEHD-FMK Z-YVAD-FMK
Z-WEHD-FMK
3. Bcl-2家族抑制剂：Bcl-2家族属于较大的蛋白家族，所有成员 至少包含4个bcl-2 同源结构域（BH，分别命名为BH1，BH2，BH3， BH4）之一，BH对凋亡功能的发挥意义重大。依据BH结构域组成的 差异，其中有的成员是抗凋亡因子如Bcl-2，Bcl-xl和Mcl 1，而有 的成员是促凋亡因子如Bax，Bak和Bok，后者又可以细分为只含BH3 的促凋亡蛋白（如Bid，Noxa，Puma和Bad）以及同时包含BH1~3的 多结构域蛋白（如Bax和Bak）。绝大多数Bcl-2家族成员含有C端跨 膜结构域，该结构域能促使蛋白与线粒体外膜或其他胞外膜结合从 而发挥各自功能。Bcl-2基因与多种不同肿瘤的发展和治疗抵抗性 密切相关。
• （见图1 细胞凋亡信号通路）
死亡受体通路
• 胞外的死亡信号可通过死亡受体转入胞内。死亡受体为一类跨膜 蛋白, 属肿瘤坏死因子受体(NFR)基因超家族。其胞外部分都含 有一富含半胱氨酸的区域, 胞质区有一由同源氨基酸残基构成的 结构,有蛋白水解功能, 称“死亡区域”( death domain)。“死 亡区域” 使死亡信号得以 进一步传递而启动凋亡。已知的死亡 受体有五种, TNFR-1 (又称 CD120a 或 p55) , Fas( CD95 或 Apo1) , DR3 (死亡受体3,又称 Apo3, WSL-1, TRAMP, LARD) , DR4 和 DR5( Apo2,TRAIL-R2, TRICK2, KILLER)。前三种受体相 应的配体分别为 TNF, FasL(CD95L),Apo3L(DR3L),后两种均为 Apo2L(TRAIL)。
ABT-263
Obatoclax (GX15-070)
Caspase家族与细胞凋亡的关系_赵瑞杰
73
综 述 ·Re vie w P a pe rs
2010 年 第 46 卷 第 17 期
以半胱氨酸作为裂解底物的亲核基团；③对催化底 物的天冬氨酸有特异性，即催化时底物的天冬氨酸 羧基端肽键断裂；④有高度保守的 QACXG（X 为 R、 Q 或 G） 五肽序列；⑤通常以无活性的酶原形式存 在，须通过水解其氨基端一段序列而激活；⑥活化的 Caspase 可水解底物, 并通过级联放大诱发凋亡；⑦ 通常具有抑制剂,防止 Caspase 酶原被偶然激活而对 正常细胞造成损伤。因它们均具有半胱氨酸和天门 冬氨酸裂解位点，Alnemfi 将其命名为 Caspase，其基 因用 Caspase 表示，C 代表半胱氨酸蛋白酶机制，aspase 表示其能特异切割底物中在天冬氨酸 （asp）后 的肽键能力。
凋亡的分子机制进行综述。
关键词：caspase；细胞凋亡；分子机制
中图分类号：R329.2
文献标识码：A
文章编号：0258- 7033（2010）17- 0073- 06
细胞凋亡（apotosis）是一个细胞自我破坏的程序 缩、线粒体肿胀和凋亡小体的形成，而其结束以凋亡
性生化过程，通常需要 30~60 min。是多细胞生物体 小体被吞噬为标志。一般来说触发凋亡信号转导途
点 ，故 又 称 为 Caspase 蛋 白 酶 家 族 [1]，细 胞 凋 亡 形 态 完成。
学上的变化主要有 DNA 破碎、染色质凝聚、细胞皱
—— —— —— — —— —— —— —— —— ——— —— —— ———
1 什么是 Caspase
收稿日期：2009- 10- 15；修回日期：2009- 12- 27
半胱氨酸蛋白酶（caspase）家族是直接导致凋亡
Caspase的活化及其在细胞凋亡中的作用
当细胞受到某些刺激时，线粒体释放出促凋亡因子，如 Bcl-2家族的成员，这些因子会激活Caspase-9，进而激活 下游的Caspase，引发细胞凋亡。
内质网途径
当内质网应激时，会释放出Ca2+和活性氧，这些物质会 激活Caspase-12，进而引发细胞凋亡。
04 Caspase活化的研究方法
Caspase的活化及其在细胞凋亡 中的作用
目 录
• 引言 • Caspase的概述 • Caspase在细胞凋亡中的作用 • Caspase活化的研究方法 • Caspase活化与疾病的关系 • 展望与未来研究方向
01 引言
研究背景
细胞凋亡是生物体内一种重要的生理过程，它涉及到一系列复杂的分子事件和信 号转导途径。Caspase是一类在细胞凋亡过程中起关键作用的蛋白酶，其活化是 细胞凋亡的标志之一。
细胞凋亡的概述
01
细胞凋亡是细胞自我消亡的过程，是机体正常发育和维持内环 境稳定的重要机制。
02
细胞凋亡是由基因控制的程序性死亡，涉及一系列复杂的生化
反应。
细胞凋亡过程中，细胞膜保持完整，不会引起周围组织的炎症
03
反应。
Caspase在细胞凋亡中的角色
01
Caspase是一类蛋白酶，在细胞凋亡过程中起关键作 用。
当死亡受体（如Fas或TNFR）与其配体结合后，会募集并活化Caspase-8，引发细胞凋亡。
线粒体途径
当细胞受到某些刺激时，线粒体释放凋亡因子（如Cytochrome c），与Caspase-9前体结合 形成复合物，激活Caspase-9，进而活化效应Caspase引发细胞凋亡。
03 Caspase在细胞凋亡中的 作用
Caspase家族与细胞凋亡的关系
Caspase家族与细胞凋亡的关系一、本文概述细胞凋亡，也被称为程序性细胞死亡，是一种由基因控制的细胞自主有序的死亡方式。
它在生物体的发育、生长、平衡和稳态维持等过程中起着至关重要的作用。
在细胞凋亡的过程中，Caspase家族蛋白酶起着关键的角色。
本文旨在深入探讨Caspase家族与细胞凋亡之间的关系，包括Caspase家族的基本特性、它们在细胞凋亡中的功能机制，以及相关的调控网络和潜在应用。
我们将对Caspase家族进行简要的介绍，包括其成员的分类、结构特点以及活性调控等。
然后，我们将详细阐述Caspase家族在细胞凋亡过程中的关键作用，包括凋亡信号的接收、传递、放大和执行等阶段。
我们还将探讨Caspase家族与其他凋亡相关蛋白的相互作用，以及它们在细胞凋亡调控网络中的地位。
我们将展望Caspase家族在未来生物医学研究中的应用前景，特别是在癌症治疗、神经退行性疾病防治等领域中的潜在作用。
通过本文的阐述，我们期望能够更深入地理解Caspase家族与细胞凋亡的关系，为未来的生物医学研究提供有益的参考和启示。
二、Caspase家族概述细胞凋亡，也称为程序性细胞死亡，是生物体内一种至关重要的生理过程，负责维持机体的稳态，去除受损或不需要的细胞。
在这一过程中，Caspase家族扮演着核心的角色。
Caspase，全称为半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Cysteine-dependent Aspartate-directed Proteases），是一组存在于细胞质中的半胱氨酸蛋白酶，具有特定的天冬氨酸切割位点。
Caspase家族成员众多，按其功能和在凋亡过程中的作用，可以分为启动型Caspase（也称为上游Caspase，如Caspase-2, -8, -9, -10）和执行型Caspase（也称为下游Caspase，如Caspase-3, -6, -7）。
启动型Caspase在凋亡信号刺激下首先被激活，然后它们会激活执行型Caspase。
细胞色素C还原酶及其在细胞凋亡中的作用
细胞色素C还原酶及其在细胞凋亡中的作用细胞凋亡是一种重要的细胞死亡方式，它在病理和生理过程中都起着至关重要的作用，包括生长发育、免疫防御以及癌症抑制等，是维持组织稳态的基石。
而细胞色素C还原酶在这个过程中，发挥着一个不可替代的角色。
细胞色素C还原酶是一种内质网膜蛋白，主要位于线粒体的内质网膜上，并且参与线粒体呼吸链中第三和第四个色素的转运。
它主要是将细胞色素C还原为使用电子的氧化型，这个过程中生成了足够的电子来转运到线粒体内膜的呼吸链，从而产生ATP。
但是，在细胞凋亡中，它的作用却完全不一样。
当细胞遭受到特定的刺激，如DNA受到损伤或者细胞内环境失衡等，就会启动细胞凋亡的过程。
这个过程中，先前在细胞质中的细胞色素C开始释放到细胞质中，在释放出来之后，它就会结合到细胞凋亡刺激因子凋亡蛋白酶激活因子(APAF-1)上，形成复合物Apaf-1/cytochrome C，从而激活凋亡酶caspase-9。
稍后，这个酶会激活其他caspase，进而导致细胞凋亡的实现。
虽然细胞色素C在细胞凋亡中的作用与其在线粒体呼吸链中的作用截然不同，但是它在这个过程中的释放却会受到许多不同的调节。
在细胞正常情况下，细胞色素C还原酶一般位于线粒体内膜，并与一些蛋白质存在特定的相互作用，形成了一个复杂的调节网络。
然而，当线粒体发生损伤或者紊乱的环境导致线粒体膜的通透性增加时，这些复合物就被破坏，从而导致细胞色素C的流出。
细胞色素C的释放是细胞凋亡的关键节点之一，而蛋白质的结构和功能在这样的过程中都是非常重要的。
许多实验表明，一些疾病的发生与细胞的调节不当或者其自身的结构变化有关。
在人体中常见的白血病、淋巴瘤等疾病中，细胞色素C的释放会受到调节和调整，从而导致细胞发生异常变化甚至存活失调。
因此，对于细胞色素C还原酶的研究不仅是生物学领域的一个重要方向，也是对人类疾病如何控制甚至预测和治疗的一个重要问题。
只有进一步深入了解它在生命活动中作用的机制，才可以为后续的实验探索、疾病预测和治疗方法的研究提供更佳的基础。
细胞死亡机制中caspase的作用研究
细胞死亡机制中caspase的作用研究细胞死亡是生命中不可避免的一环，细胞死亡机制的研究一直是人类生命科学领域重要的课题之一。
在细胞死亡机制中，caspase起到了至关重要的作用。
Caspase是细胞内的一类酶，是重要的细胞凋亡信号传递酶，也是细胞死亡过程中最具活性的蛋白酶。
Caspase在细胞凋亡和其他细胞死亡方式中发挥着重要作用，例如，坏死、剥落及程序性坏死等。
在大多数细胞死亡过程中，细胞内外环境的变化能引起caspase 的激活。
激活后，caspase能够与细胞自身蛋白酶底物结合并切割其蛋白质结构。
这些底物包括细胞骨架蛋白、DNA修复蛋白、转录因子、RNA聚合酶等，其切割会触发一系列生物学反应，并引起细胞死亡。
caspase是一类特定的蛋白酶，它是由某些发生细胞凋亡反应的信号分子调节激活的。
所以也叫做凋亡蛋白酶。
caspase是一个切割酶，它切断细胞内许多蛋白质。
caspase在AOI和细胞凋亡中对细胞的分解、消失起着重要的作用。
caspase的功能涉及到细胞凋亡、炎症反应、免疫应答等诸多生物学过程。
在正常的生理过程中，caspase是保持细胞稳态的重要因子，在异常情况下，如病原微生物的感染、肿瘤细胞的增殖等，caspase发挥着重要的防御作用。
研究表明，caspase的存在对于一些生物过程是必须的。
例如，在胚胎发育过程中，caspase能够帮助细胞完成正常的凋亡过程、促进组织的正确建立以及保证细胞数量的恰当分布。
再如，在神经系统中，caspase的作用能够帮助神经元在机体受损后产生凋亡、分泌出神经营养因子以及调节神经元突触可塑性，从而帮助机体适应外界环境变化。
总之，在生物体内，caspase不仅仅是细胞死亡的执行者，同时也是组织细胞生存与成长的关键过程。
总之，在细胞死亡机制中，caspase起着极其关键的作用，它作为细胞凋亡的关键调节元素和最具活性的蛋白酶，能够帮助维持细胞稳态、促进组织正常建立以及适应外界环境变化等人体重要过程。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
用不同浓度的Ａ １３ ４２处理ＳＨ．ＳｙＳＹ细胞２４ｈ，ＭＴＴ法检测细胞的活力； Ｈｏｃｈｅｓｔ３３３４２染色法及Ａｎｎｅｘｉｎ ｖ．ｂｉｏｔｉｎ早期凋亡检测方法检测细胞凋亡：实时 荧光定量ＰＣＲ检测ｃａｓｐ觞昏２表达水平；蛋白酶活力检测法检测Ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白 酶活力。结果显示，Ａ １３ ４２能够使细胞活力显著下降，＿并诱导ＳＨ－－Ｓｙ５Ｙ细胞凋 亡：同时Ｃａｓｐａｓｅ．２ ｍＰ，ＮＡ表达水平显著升高，而Ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白酶活力显著下 降。 ３．Ｃａｓｐａｓｅ－２过表达对Ａ１３ ４２诱导的神经细胞凋亡的影响
ＰＣＲ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｐｅｒｆｏｍｅｄ ｔｏ ｃｌｏｎｅ ｒａｔ Ｃａｓｐａｓｅ一２ ｃＤＮＡ．Ｔｈｅ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔ ｗａｓ
ｓｕｂｃｌｏｎｅｄ ｉｎｔｏ ｐｃＤＮＡ３．１（＋）ｖｅｃｔｏｒ ａｆｔｅｒ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｏｎｆｉｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｌｏｎｅ． Ｔｈｅ ｐｃＤＮＡ３．１／Ｃａｓｐａｓｅ一２ ｖｅｃｔｏｒ Ｗａｓ ｔｒａｎｓｆｅｅｔｅｄ ｉｎｔｏ ＳＨ—Ｓｙ５Ｙ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｃａｓｐａｓｅ一２ ａｎｄ Ｃａｓｐａｓｅ一３ Ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ．
解密后适用本规定。
日期：塑』：￡纠
学位论文作者签名：亲真侠
导师签名：≮Ⅳ 日期：兰竖』：１２ 钟龟‘辱
Ｃ
华东师范大学硕士学位论文
脑功能基因组学研究所
Ｃａｓｐａｓｅ－２在神经细胞凋亡中的作用
பைடு நூலகம்
摘要
细胞凋亡是多细胞组织中的一种程序性死亡。它的主要功能是清除机体内损 坏或过多的细胞，从而有助于机体的存活。ｃａｓｐａｓｅ，天冬氨酸特异性半胱氨酸 蛋白酶（ｃｙｃｔｅｉｎｙｌａｓｐａｒｔａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｏｔｅａｓｅ，Ｃａｓｐａｓｅ）是细胞凋亡途径中的关键酶。 Ｃａｓｐａｓｅ参与多种类型的神经细胞凋亡，其中包括昌淀粉样肽诱导的细胞死亡。 但是其具体作用机制还有争议。
ｎｅｕｒｏｎａｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ＳＨ—Ｓｙ５Ｙ ｃｅｉｌｓ ｏｖｅｒｅｘｐｒｃｓｓｉｎｇ Ｃａｓｐａｓｅ－２ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ
Ｃａｓｐａｓｅ－２ ｏｖｅｒｅｘｐｒｃｓｓｉｏｎ ｏｎ ｎｅｕｒｏｎａｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｂ—ａｍｙｌｏｉｄ ｐｅｐｔｉｄｅ． １．Ｃａｓｐａｓｅ一２ ｉｎｄｕｃｅｄ ＳＨ－Ｓｙ５Ｙ ｃｅｌｌｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ
Ｓｕｒｐｒｉｓｅｌｙ，Ｃａｓｐａｓｅ一３ ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｗａｓ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ａｆｔｅｒ Ａ １３ ４２ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．
３．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｃａｓｐａｓｅ－２ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｎ ｎｅｕｒｏｎａｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ Ａ ０ ４２ ＳＨ－Ｓｙ５Ｙ ｃｅｌｌｓ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ Ｃａｓｐａｓｅ一２ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ
作者签名：
学位论文授权使用声明
本人完全了解华东师范大学有关保留、使用学位论文的规定，学
校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电
子版和纸质版。有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论
文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据库进
行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在
３３３４２ ｓｔａｉｎｉｎｇ ａｎｄ Ａｒｍｅｘｉｎ ｖ－ｂｉｏｔｉｎ ｓｔａｉｎｉｎｇ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｃａｓｐａｓｅ一２ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ．Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｓｓａｙ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｃａｓｐａｓｅ一３．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ
Ｃａｓｐａｓｅ．２是ＣａＳｐａＳｅ家族中的一个特殊成员，具有类似于启始Ｃａｓｐａｓｅｓ与 效应Ｃａｓｐａｓｅｓ的结构与功能特征。ｃ鹊ｐａｓｅ．２参与神经细胞凋亡过程，但是其功 能及参与的信号通路还值得进一步研究。
本文利用过量表达ｃ嬲ｐａｓｅ一２的神经瘤母细胞ＳＨ．Ｓｙ５Ｙ研究了在神经细胞凋 亡中ｃａｓｐａｓｅ．２的作用，以及Ｃａｓｐａｓｅ．２过表达对Ｂ淀粉样肽诱导的神经细胞凋 亡的影响。 １．Ｃａｓｐａｓｅ－２基因诱导ＳＨ—Ｓｙ５Ｙ细胞凋亡
本文采用ＰＣＲ技术从大鼠的大脑中克隆出ｃａｓｐ踞ｅ．２全长ｅＤＮＡ，然后克 隆入载体ｐｃＤＮＡ３．１（＋），构建ｐｃＤＮＡ３．１／Ｃａｓｐ酗ｅ－２真核表达载体。将 ｐｃＤＮＡ３．１，Ｃ船ｐａｓｅ一２载体转染入ＳＨ．Ｓｙ５Ｙ细胞。使ＣａｓｐａＳｅ一２在ｓＨ－ＳｙＳＹ细胞 中过量表达。实时荧光定量ＰＣＲ检测Ｃ船ｐ船ｅ．２和Ｃａｓｐａｓｅ一３的基因表达水平、 蛋白酶活力检测法检测Ｃ粥ｐａｓｃ．２和ＣａｓｐａＳｅ．３的活力。Ｈｏｃｈｅｓｔ３３３４２染色及 Ａｎｎｅｘｉｎ ｖ．ｂｉｏｔｉｎ检测细胞调亡。结果显示，Ｃａｓｐａｓｅ一２基因过表达可诱导ＳＨ．Ｓｙ５Ｙ 细胞凋亡，同时Ｃａｓｐ粥ｅ一３ ｍＲＮＡ表达及蛋白酶活力水平上升。 ２．１３．淀粉样蛋白诱导ｓＨ～ｓｙ５Ｙ细胞凋亡
华东师范大学 硕士学位论文 Caspase-2在神经细胞凋亡中的作 姓名：秦真侠 申请学位级别：硕士 专业：生理学 指导教师：胡应和;林龙年
20050501
答辩委员会成员名单
蠢真箧硕士学位论文答辩委员会成员名单
姓名
职称
单位
备注
袁崇刚 教授
华东师范大学生命科学学院
主席
钱昱 教授
华东师范大学生命科学学院
ＳＨ—Ｓｙ５Ｙ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｉｎｃｕｂａｔｅｄ ｗｉｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ａ ｔ３ ４２ ｆｏｒ ２４ｈ
Ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ＭＴＴ ａｓｓａｙ．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ Ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｗ！ｔｈ Ｈｏｃｈｅｓｔ
关键词：神经细胞凋亡：Ｃａｓｐｓｅ一２；Ｃａｓｐａｓｅ－３：Ｂ淀粉样肽
２
华东师范大学硕士学位论文
脑功能基因组学研究所
Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ Ｃａｓｐａｓｅ－２ ｉｎ ｎｅｕｒｏｎａｌ ａｐｏｐｔｏｔｓｉｓ
Ａｂｓｔｒａｃｔ
Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｓ ａ ｇｅｎｅｔｉｅａｉｌｙ ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｍｏｄｅ ｏｆ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｔｈａｔ ｅｘｉｓｔｓ ｉｎ ａｌｌ
Ａ Ｂ ４２ ＯＮ ｎｅｕｒｏｎａｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ Ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ、ｖｉⅡ１ Ｈｏｃｈｅｓｔ ３３３４２ ｓｔａｉｎｉｎｇ
ａｎｄ Ａｎｎｅｘｉｎ ｖ－ｂｉｏｔｉｎ ｓｔａｉｎｉｎｇ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｃａｓｐａｓｅ一２ Ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ
ｍｕｌｔｉｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｐｅｃｉｅｓ．Ｉｔｓ ｍａｊｏｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｓ ｔｏ ｆａｃｉｌｉｔａｔｅ ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ ｔｈｅ ｏｒｇａｎｉｓｍ ｂｙ
ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｄａｍａｇｅｄ ｏｒ ｓｕｐｅｒｆｌｕｏｕｓ ｃｅｉｌｓ．Ｃｙｃｔｅｉｎｙｌ ａｓｐａｒｔａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｏｔｅａｓｅｓ，ｋｎｏｗｎ ａｓ Ｃａｓｐａｓｅｓ，ａｒｅ ｂｅｌｉｅｖｅｄ ｔｏ ｂｅ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｍｅｄｉａｔｏｒｓ ｏｆ ｍａｎｙ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｅｘｅｃｕｔｉｎｇ ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｐｒｏｇｒａｍ．Ｃａｓｐａｓｅ ｈａｖｅ ｂｅｅｎ ｗｉｄｅｌｙ ｉｍｐｌｉｃａｔｄ ａｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｍｅｄｉａｔｏｒｓ ｏｆ ｍａｎｙ ｔｙｐｅｓ ｏｆ ｎｅｕｒｏｎａｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ， ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ Ｂ—ａｍｙｌｏｉｄ ｐｅｐｔｉｄｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ．Ｈｏｗｅｖｅｒ．ｃｏｎｓｉｄｅｒａｂｌｅ ｃｏｎｔｒｏｖｅｒｓｙ ｅｘｉｓｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ ａｓ ｔｏ ｗｈａｔ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｉｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ．
ｖ－ｂｉｏｔｉｎ ｓｔａｉｎｉｎｇ，Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ Ｃａｓｐａｓｅ一２ ｉｎｄｕｃｅｄ ＳＨ—Ｓｙ５Ｙ ｃｅｌｌｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．
Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，ｂｏｔｈ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ａｎｄ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｃａｓｐａｓｅ一３ ｗｅｒｅ ｅｌｅｖａｔｅｄ ｉｎ ＳＨ—Ｓｙ５Ｙ ｃｅｌｌｓ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ Ｃａｓｐａｓｅ－２． ２．Ｂ－ａｍｙｌｏｉｄ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ＳＨ－Ｓｙ５Ｙ ｃｅｌｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ
吴自荣 教授
华东师范大学生命科学学院
章平 副教授 华东师范大学脑功能基因组学研究所 答辩秘书
学位论文独创性声明
独创性声明
本人所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及 取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文 不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重 要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确说明并表示谢意。
ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ．Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｓｓａｙ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ｔｈｅ
ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｃａｓｐａｓｅ－３．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｃａｓｐａｓｅ·３ Ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｗｅ ｈａｓ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｃｅｌｌｓ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ