琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒大比对
胶回收QC操作标准
琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒（离心柱型）QC标准操作流程1. 实验试剂和耗材1.2 实验试剂1.3 耗材2. 实验操作流程胶回收试剂盒的检测须进行两个实验验证，第一个实验为GelRed染色法，第二个实验为EB染色法。
2.1 GelRed染色法2.1.1 1.5%琼脂糖凝胶的制备（1）准确称取1.5g琼脂糖置于250ml三角锥形瓶中，添加125ml 1×TAE溶液。
（2）轻微混匀后将其置于微波炉中，高火加热6min至溶液沸腾，取出锥形瓶放置室温2min。
（3）添加1×TAE溶液至110ml，再次于微波炉中高火加热3min至溶液沸腾。
（4）室温放置10min后将溶液倒入插有梳子的胶槽内，待胶块凝固后使用。
2.1.2 胶回收实验（1）取6个2ml离心管，依次编号为1-6号，使用分析天平准确称取空离心管的重量。
（2）用干净锋利的手术刀片切下不含核酸染料的1.5%琼脂糖凝胶胶块，放入已称重的2ml离心管中，称取胶块与离心管总重，计算凝胶块的重量。
要求胶块重量不超过200mg 为宜。
（3）添加溶胶液Binding Solution B，要求1、2号管中每100mg琼脂糖凝胶加入200ul Binding Solution B，3、4号管中每100mg琼脂糖凝胶加入300ul Binding Solution B，5、6号管中每100mg琼脂糖凝胶加入400ul Binding Solution B.（4）每管中添加50ul DL2502，混匀后置于60℃水浴5min，期间间断混合，直至凝胶块完全融化。
【注意事项】观察各管内溶胶液溶解胶块的快慢程度。
（5）将上述混合液转移至套放于2ml收集管的GenClean柱中，室温放置2min，10000rpm 室温离心1min，取出GenClean 柱，并倒掉收集管中废液。
（6）将GenClean 柱重新放回收集管中，加入500ul Wash Solution，于12000rpm，室温离心1min，倒掉收集管中废液。
DNA凝胶回收(试剂盒)
DNA凝胶回收（试剂盒）
1.在紫外灯下切下含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸净凝胶表面液体并切碎。
计算凝胶重量。
该重量作为一个凝胶体积。
（提前记录1.5ml离心管重量，100mg等于100ul体积）
2.加入3个凝胶体积的Buffer DE-A,混合均匀后于75℃加热（低熔点琼脂糖凝胶于40℃加
热），间断混匀（每2-3Min），直到凝胶块完全融化。
（约6-8Min）
注意：buffer DE-A为红色。
帮助观察凝胶是否完全融化。
3．加0.5个buffer DE-A体积的Buffer DE-B，混匀。
（当分离的DNA片段小于400bp时，需再加入一个凝胶体积的异丙醇）
注意：加入buffer DE-B 为黄色
4．吸取3中混合液，转移到DNA制备管中（2ml试剂盒内提供的离心管）中，12000g离心1Min，室温放置2Min。
弃滤液。
5．将制备管置于2ml 离心管中，加500ul buffer W1，放置2Min，12000g离心30s 弃滤液。
6．将制备管置于2ml 离心管中，加700ul buffer W2，放置2Min，12000g离心30s 弃滤液。
重复一次，不过时间为1Min。
7．将制备管置于2ml 离心管中，12000g再离心1Min。
8．将制备管置于洁净的1.5ml的离心管中（试剂盒内提供），在制备膜中央加入25-30ul Eluent，室温静置1min，12000g 离心1min 洗脱DNA.可暂放-20冰箱中。
爱思进胶回收说明书
爱思进胶回收说明书
爱思进胶回收试剂盒的使用说明书如下：
1. 制备琼脂糖凝胶电泳：将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据Marker 判断PCR产物的大小是否符合要求。
2. 切胶：切下包含目的片段的凝胶，尽量切去上下两端的凝胶，以减少非特异性产物的影响。
3. 胶的融化：将切下的凝胶放入一个离心管中，加入适量的胶融化液，使凝胶完全溶解。
4. 洗涤：将凝胶溶液加入一个离心柱中，离心柱的管底会有一个膜，可以吸附凝胶中的DNA片段。
然后加入洗涤液，将离心柱离心，去除残留的胶融化液。
5. 洗脱：加入适量的洗脱液，离心柱离心，将DNA从膜上洗脱下来。
6. 检测：取洗脱液进行电泳检测，观察电泳结果是否包含目的片段。
以上是爱思进胶回收试剂盒的使用说明书的大致步骤，由于不同版本的产品可能存在差异，因此建议在使用前仔细阅读说明书或咨询专业人士。
DNA凝胶回收试剂盒产品说明书
北京四正柏生物科技有限公司网站: 客服热线:400-7060-959技术支持:DNA 凝胶回收试剂盒产品编号规格MDN3066-5050次MDN3066-100100次保存条件及效期：常温运输和保存，保质期一年。
产品描述：本试剂盒用于从琼脂糖凝胶中或DNA 反应体系中(如PCR 反应)回收DNA 片段。
试剂盒采用可以高效、专一结合DNA 的硅胶膜和独特的溶胶体系，或DNA 反应体系中回收的单链、双链及环状DNA ，回收效率可达50-90%(跟片段大小相关)。
得到的DNA 可直接用于连接、转化、酶切、测序、杂交等分子生物学实验。
产品组分：使用方法：1.凝胶回收：切取含DNA 片段的琼脂糖凝胶(100mg 左右，尽可能多地把多余的胶切除，否则会影响回收效率)，放入一干净的1.5ml 塑料离心管(自备)中，用移液枪头捣碎，按重量比为1：3到1：5的比例加入通用溶胶液(100mg 琼脂糖凝胶需要加入300μl-500μl 通用溶胶液)。
PCR 产物回收：直接在PCR 反应管中加3-5倍体积的通用溶胶液，混匀，然后跳过第2步、直接从第3步做起。
如果PCR 反应中使用了石蜡，需要预先去除。
2.50℃保温使胶完全溶化(一般需要5分钟)，其间可以振荡数次以促进琼脂糖凝胶的溶化。
如果片段长度在300bp 成份50次包装100次包装通用溶胶液25ml 50ml 吸附柱活化液25ml 50ml 通用洗柱液50ml 100ml 离心吸附柱50套100套DNA 洗脱液10ml 10ml 说明书1份1份以下，建议不要加热，以免DNA变性，影响回收率。
3.在等待期间，活化离心吸附柱。
在离心吸附柱中加入0.5mL吸附柱活化液，套上收集管后室温放置2分钟，然后12,000rpm离心2分钟，倒弃穿透液，再将吸附柱套上收集管后待用。
活化后的离心吸附柱必须在当天使用。
4.在上柱前，在溶化的胶中加入相当于胶块体积1/2的异丙醇（对100mg胶块，加50uL），快速振荡10秒混匀。
实验十 DNA 片段从凝胶中回收
DNA浓缩，去盐及去除杂质 浓缩， 浓缩
加入3倍量的碘化钠溶液于样品DNA溶液中（若 DNA为固态，则先将之溶于适量水或TE中，再加 3倍体积的碘化钠溶液）。 加20ul或更多的“基因纯”试剂（每ul该试剂可 20ul ul 吸附0.3ugDNA，操作者可根据这一指标自行决 定“基因纯”试剂的用量，但不应少于10ul）。 以下步骤与“从琼脂糖凝胶中分离纯化DNA片段” 中步骤d到j相同。
从凝胶中分离回收ＤＮＡ的方法
现在常用的技术有： 电洗脱法 低熔点琼脂糖凝胶法 ＤＥＡＥ滤膜插片法等 其中电洗脱法，经济节省，操作方便， 对Ｄ ＮＡ的回收效果好。
低熔点琼脂糖凝胶法
65oC琼脂糖凝胶熔点 低熔点琼脂糖凝胶 37oC 液体
ＤＥＡＥ滤膜插片法
High efficient DNA high quality for microinjection <5kb fragment 100ng DNA fragment 10mmol/L EDTA(pH8.0) 5 minutes 0.5 mol/L NaOH 5 minutes 低盐缓冲液50mM/LTris .Cl 0.15M/L NaCl 10mM/L EDTA(pH8.0) 高盐缓冲液50mM/LTris .Cl 1M/L NaCl 10mM/L EDTA(pH8.0)
１３．12000g，4℃下离心１０分钟，得ＤＮＡ沉 淀。 １４．弃上清，加入７０％乙醇洗涤２次后弃干乙 醇。 １５．加入５０µl ＴＥ溶解ＤＮＡ。 １６．取１０µl ＤＮＡ溶液加入2µl Loading buffer 于０．８％琼脂糖上， ４０伏电泳，３小时。 １７．在紫外透射仪上观察结果。 １８．测定ＤＮＡ溶液OD260,OD280值。
琼脂糖凝胶DNA片段回收中的常见问题
原因：洗脱液中含有乙醇
建议：洗脱前，确保柱子中乙醇已无残留乙醇。
琼脂糖凝胶DNA片段回收中的常见问来自 1、未回收到DNA片段或回收效率很低
A、原因：胶块未完全溶解
建议：为加快凝胶的溶解，应将凝胶置于55度水浴中溶解，期间不断上下颠倒，待确定凝胶完全溶解后再进行后续操作。每100 mg凝胶应加入100uL溶胶液，如果胶块过大，应将胶块切成小块，以便于凝胶溶解。
D、原因：洗脱缓冲液不合适
建议：洗脱液的pH值在7.0~8.5时，洗脱效率最高，洗脱液pH超出此范围，将会显著影响收获率，请使用试剂盒配套的Elution Buffer（pH 8.5，10mM Tris-HCl），或者使用使用pH值在此范围的ddH2O。
E、原因：洗脱缓冲液未加到离心柱中间
建议：因为在洗脱时使用较少的洗脱缓冲液，洗脱缓冲液应加在中间位置，并室温放置1~2分钟，然后再离心洗脱。另外，采用65度预热的洗脱Buffer将显著提高回收效率。
F、原因：起始回收量太少
建议：如果起始回收量很好的样品，应富集，最好使用不少于1ug的样品。对于PCR产物，应事先电泳检测产量，在进行回收操作。
2、电泳时，产物漂出点样孔
原因：洗脱时，柱子中残留乙醇
建议：在进行洗脱前，如果柱子上残留乙醇，将会影响洗脱效率，在洗脱前应再次离心，或者空气中放置几分钟，再进行洗脱。
B、原因：加入溶胶液过少
建议：对于PCR产物，或者酶切产物，应加入2倍体积的溶胶液。对于凝胶回收，每100 mg凝胶应加入不少于100uL溶胶液。对小于200bp的片段应加入5倍体积的溶胶液。
C、原因：DNA Wash Buffer 中未加入无水乙醇
从琼脂糖凝胶中回收DNA
五、实验结果与讨论
1. 实验结果 2. 讨论
附I： TaKaRa Agrose Gel DNA Purification Kit Ver2.0回收DNA 的操作步骤
1. 使用TAE或TBE缓冲液制作琼脂糖 凝胶，然后对目的DNA进行琼脂糖 凝胶电泳。 2. 在紫外灯下切出含有目的DNA的琼 脂糖凝胶。应注意尽量切除不含目 的DNA部分的凝胶，尽量减少凝胶 体积，提高DNA回收率。 注: 切胶时不要将DNA长时间暴露 于紫外灯下，以防DNA损失。
五、注意事项
切胶时不要将DNA长时间暴露于紫外灯下， 以防DNA损失。 胶块一定要充分融化,否则会严重影响 DNA的回收率。 混合振荡操作不要过于剧烈。 灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60゜C 使用时有利于提高洗脱效率。 DNA需长期保存时，建议使用Elution Buffer。 纯化的DNA用于序列分析时，最好使用灭 菌的双蒸水进行DNA的洗脱。
四、百泰克DNA回收试剂盒 回收DNA的操作步骤
1. UV下切下DNA条带，尽量切除不含 DNA的凝胶； 2. 将切下的胶块放入1.5ml EP 管中，称 重； 3. 加2倍体积的溶胶/结合液DB(如凝胶重 0.1g，加200μl DB溶胶液)； 4. 56℃水浴4-6 min 至胶完全溶解，每2 min涡旋震荡一次帮助加速溶解 ； （每100mg最初的凝胶重量加150ul的异 丙醇，震荡混匀）
3. 切碎胶块，可加快步骤6的胶块 融化时间，提高DNA回收率。
4. 称量胶块重量，计算胶块体积。 以1mg=1µ L进行计算。
5. 向胶块（1%）中加入3个凝胶体 积量的胶块融化液DR-1 Buffer。 6. 混合均匀后75゜C加热融化胶块。 并间断振荡混合，使胶块充分融 化（约6-10分钟）。
实验七 琼脂糖凝胶中dna片段的回收
实验七琼脂糖凝胶中DNA片段的回收一．原理从琼脂糖凝胶中回收DNA片段．可得到大小一致的DNA片段。
有多种方法可用于琼脂糖凝胶中DNA片段的回收。
例如低融点琼脂糖法、洗脱法等。
本实验方法是先使凝胶被NaI溶解，然后DNA与玻璃粉结合，再从玻璃粉中洗脱出DNA片段。
二．方法1．在琼脂糖凝胶小电泳分离DNA片段，当DNA片段完全分开后，停止电泳。
2．在长波长紫外灯下观察凝胶，切下含所需的琼脂糖部分。
将胶放人预称重的微离心管中。
3．称含凝胶的离心管重量，每0.1g凝胶加200μl NaI溶液。
4．于50℃温育微离心管，每5min颠倒几次离心管混匀离心管，直到琼脂糖完全融解。
5. 每μg DNA加入5μl玻璃粉悬液。
轻轻颠倒使之混匀，于冰上放置10min，使DNA结合在玻璃粉上。
6．于室温离心5秒，收集结合有DNA的玻璃粉。
7．倒掉上清。
加700μl -20℃预冷的清洗缓冲液，轻轻地抽吸，使玻璃粉重悬浮。
冰上放置5min。
8．重复第6与7步两次，于室温离心10秒，使玻璃粉沉淀下来。
倒掉上清，重复离心，小心除去全部残存液体。
9．加入30～50μ1 TE，轻轻吹打使玻璃粉重悬浮。
于50℃温育10min，将DNA洗脱下来。
10．于室温离心l0秒，使玻璃粉沉淀下来。
将上清转移到另一管中。
小心，不要吸人玻璃粉，因为它可抑制许多酶的活性。
三．试剂1.玻璃粉(1)取30g玻璃粉（Sigma 325目二氧化硅）悬于200ml蒸馏水的烧杯中。
搅拌混匀后，静置9min。
(2)将上清转移到离心管中．于6000⨯g离心10min，沉淀玻璃粉。
(3)倒掉上清，将玻璃粉重悬于50ml 25％硝酸中，室温放置过夜。
(4)于6000⨯g沉淀玻璃，用无菌双蒸水洗涤，沉淀玻璃粉4一6次，直到pH值至中性。
(5)用无菌水重悬沉淀，配成10％的浆液。
(6)将此浆液分装成0.1ml一管．贮存于-70℃。
待用的样品呵贮存于-20℃或4⨯。
2．NaI溶液NaI 90.8gNa2SO3 15gddH2O至 100ml3．乙醇清洗液成分为：100mmol／L NaCIlmmol／L DETA，pH8．O10mmol／L Tris—HLc，pH7.550％乙醇四．说明1．本方法琼脂糖凝胶电泳缓冲液只能使用TAE，回收的DNA片段应在0.8～6kb之中。
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3. 评估方法 • 使用Nanodrop 2000测量OD值
图： 取2ul纯化的质粒DNA上样于1.0%琼脂糖凝胶电泳 分析结果。M: DL5000 DNA Marker. 结果表明，Magen的HiPure Plasmid Micro Kit与其它品 牌对应的产品效果相当，质粒条带完整，超螺旋质粒含量 高。
2. 琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒大比对
1. 选择品牌： • Qiagen, QIAquick Gel Extraction Kit , 28704 • Tiagen, 超薄琼脂糖凝胶回收试剂盒,DP208 4. 电泳结果
• Omega, E.Z.N.A. Gel Extraction Kit, D2500-02
1. 选择品牌： • Qiagen, QIAamp DNA Blood Mini Kit, D51104 • Tiagen, 血液基因组提取试剂盒(DP318) 4. 电泳结果
试剂盒回收DNA，然后电泳检测DNA回收效率。结果表明，
Magen的HiPure Gel Pure DNA Micro Kit在小片段和大片段上 有更高的回收率，其余片段则相差不大。
3. 评估方法
•
用1琼脂糖电泳分析DNA回收效率
Magen HiPure Gel Pure DNA Micro Kit(D2110)的优势：
3. 评估方法
•
用1琼脂糖电泳分析DNA回收效率
Magen HiPure PCR Pure DNA Micro Kit(D2120)的优势： 1. 高效去除引物二聚体。 2. 低洗脱体积，可低至7-10ul洗脱。 3. 长时间稳定的结合柱，无需平衡液处理 4. 更高的回收率
4.பைடு நூலகம்柱法血液DNA提取试剂盒大比对
1. 溶胶液体积耐受性好。1-3倍体积的溶胶液都可以获得同样的效果。 (实际用量只需1倍体积。) 2. 更高的回收率。对小片段DNA有更高的回收率。 3. 多种用途:凝胶回收，PCR产物回收，基因组DNA精制等 4. 低洗脱体积，可低至7-10ul洗脱。
3. PCR回收试剂盒大比对
1. 选择品牌： • Qiagen, QIAquick PCR Purification Kit , 28104 • Tiagen, 超薄产物纯化试剂盒, DP203 4. 电泳结果
• Omega, E.Z.N.A. Cycle Pure Kit, D6492-02
• Axygen, AxyPrep PCR 清洁试剂盒, AP-PCR-50 • Magen, HiPure PCR Pure DNA Micro Kit, D2120-02
2. DNA片段
图： 各种片段大小的DNA电泳后，分别用不同品牌的PCR产物
• 用1.0% 琼脂糖电泳分析质粒的图谱
• 使用ABI3730测序检测质粒的质量
1. 质粒小量提取试剂盒大对比
5. OD Reading和产量
Sample ID 260/2 80 1.89 2ml PCDNA3. 1 1.90 1.89 1.88 1.81 2ml pET28b 1.79 1.80 1.82 1.89 2ml PEGF-N1 1.90 1.9 1.88 260/23 0 2.20 2.20 2.10 2.21 1.95 1.84 1.81 1.95 2.20 2.20 2.2 2.21 Yield(u g) 25 23 24 25 7 5 5 6 25 23 24 25 Compan y Magen axygen Qiagen Tiagen Magen axygen Qiagen Tiagen Magen axygen Qiagen Tiagen
• Axygen, AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒, AP-GX-50 • Magen, HiPure Gel Pure DNA Micro Kit, D2110-02
2. DNA片段
图： 各种片段大小的DNA电泳后，分别用不同品牌的胶回收
• 大片段：基因组DNA， 10KB DNA片段
• 中片段：1KB, 5KB的DNA片段 • 小片段：150bp和300bp DNA片段
6. 操作步骤比对
6.1. 柱子是否需要平衡液处理 需要：Tiagen, Omega 不需要：Magen, Axygen, Qiagen 6.2. 中和后离心时间(获得上清液) 10分钟离心：qiagen, Tiagen, Axygen 1分钟离心：Magen 6.3. 基因组/蛋白沉淀物去除效果 上清易有颗粒残留:qiagen, Tiagen, Axygen 上清澄清，沉淀贴壁紧：Magen
• Axygen, Axyprep Plasmid Mini Kit, AP-MN-P-50 • Magen, HiPure Plasmid Micro Kit, P1001-01
2. 使用菌液和菌种：
• 3ml培养过夜的菌液，OD600=3.0。
• 载体类型：pCDNA3.1, pEGF-N1, pET-28b.
• 大片段：基因组DNA， 10KB DNA片段
• 小中片段：300bp, 5KB的DNA片段 • 引物二聚体严重的PCR产物
回收试剂盒回收DNA，然后电泳检测DNA回收效率。结果表明，
Magen的HiPure PCR Pure DNA Micro Kit与其它品牌的产品有 着同样的回收率，但可更高效去除引物二聚体。
Magen与其它品牌大比拼
1. 质粒小量提取试剂盒大对比
1. 选择品牌： • Qiagen, Qiaprep Spin Miniprep Kit, 27104 • Tiagen, 质粒小量提取试剂盒，DP103
4. 电泳结果
• Omega, E.Z.N.A. Plasmid Mini Kit, D6943-02
Magen公司HiPure Plasmid Micro Kit优势： 1. 新型的碱裂解法，只需2分钟离心即可获得上清液。 2. 基因组DNA/蛋白质沉淀离心更彻底，上清更澄清。
结果表明，Magen 的HiPure Plasmid Micro Kit与其它品牌对 应的产品的产量和纯度都相当。
3. 长时间稳定的结合柱，无需平衡液处理