pMETB(酵母表达载体)
pPIC9k-His酵母表达载体说明
其他酵母表达载体：
p416GFD p53blue pACT2-AD pAD-GAL4-2.1 pADH2 pAUR123 pBridge pCL1 pDEST32 pDisplay pDR195 pESC-His pESC-Leu pESC-TRP pESC-URA pFA6a-FGP(S65T)-kanMX6 pFLD pFLD/CAT pFLDα pGADT7-T pGAG424 pGAPZA pGAPZB pGAPZαB pGAPZαC pGBKT7 pGBKT7-53 pGBKT7-Lam pHIC-PI pHIL-D2 pHIL-S1 pHis2 pHisSi-1 pPIC9 pPIC9K pPIC9k-His pPICZA pPICZB pPICZC pPICZαA pPICZαB pPICZαC pPICZαD pPICZαFC pPICZαGB pPink-HC pPink-LC pPinkα-HC pRS316 pRS403 pRS405 pRS406 pRS414 pRS415 pRS416 pRS41H pRS426 pRS426gal pSEP1 pSEP2 pSEP3 pSos pSos-MAFB pUG66 pYC2/CT pYC2/NTA
载体名称
pPIC9k-‐His
Invitrogen pPIC9k-‐His 酵母表达载体 -‐-‐ -‐-‐ 多克隆位点，限制性内切酶 -‐-‐ -‐-‐ -‐-‐ -‐-‐ Ampicillin -‐-‐ -‐-‐ -‐-‐ -‐-‐ -‐-‐ -‐-‐
pMETA pMETB pMETC pMETαA pMETαB pMETαC pMyr pPIC3.5 pPIC3.5K pPIC6B pPIC6C pPIC6αA pPIC6αB pPIC6αC pYX212 SUMOprotease Ycp22lac-EGFP
毕赤酵母表达载体及宿主菌介绍
毕赤酵母表达载体及宿主菌介绍由于甲醇营养型酵母菌体内无天然质粒，所以携带外源基因的重组体必须整合于染色体中才能实现外源基因的表达。
整合表达的优点在于保持外源基因稳定性并可产生多拷贝基因。
典型的毕赤氏酵母表达载体含有醇氧化酶基因的调控序列，主要的结构包括：5’AOX1启动子片段、多克隆位点(MCS)、转录终止和polyA形成基因序列(TT)、筛选标记(His4或Zeocin)、3’AOX1基因片段，作为一个能在大肠杆菌中繁殖扩增的穿梭质粒，它还有部分pBR322质粒或COLE1序列。
如果是分泌型表达载体，在多克隆位点的前面，外源基因的5’端和启动子的3’端之间插人了分泌作用的信号肽序列。
在这个分泌信号的引导下，外源蛋白在内质网和高尔基体中经修饰和加工后能够由胞内转移至胞外，将成熟的蛋白质分泌到细胞外。
为方便于操作，通常表达载体都是穿梭质粒。
表达载体与酵母染色体有单交换和双交换整合2种方式，单交换整合时，或插入A0X1位点，或插入his位点。
有文献报道，以his4作为整合位点时，染色体突变株与表达盒间存在基因转换，偶而可使Laz表达盒丢失，故AOX1位点更好。
一般认为，单交换转化效率比双交换效率高，且易得到多拷贝整合，其发生机制可能是重复单交换引起的。
携带外源基因的表达载体可通过电穿孔、原生质体生成法或全细胞法转化酵母细胞。
甲醇酵母转化和大肠埃希氏菌转化不同之处是前者较为复杂。
对于大肠埃希氏菌而言，只要把重组表达载体导入细胞体内即可。
因其载体上携带有自身复制原点，可随染色体复制而复制，重组表达载体能够稳定存在。
在甲醇酵母系统中，所有的表达载体均不含酵母复制原点。
这就是说，导入酵母体内的重组表达载体只有和酵母染色体上的同源区发生重组，整合到染色体上，外源基因才能够稳定存在，外源蛋白才能得到稳定表达，这种整合的转化子一旦形成就非常稳定。
如果转化后的重组表达载体未能整合到染色体上，而是以游离的附加体形式存在，这种转化子就不稳定，重组表达载体极易丢失。
酵母菌的遗传工程和表达系统
酵母菌的遗传工程和表达系统酵母菌是一种常见的单细胞真菌，广泛存在于自然界中。
由于其易于培养、生长速度快、基因组较小、剪接机制类似于哺乳动物细胞等优点，酵母菌成为了功能基因组学、代谢工程学、蛋白质工程学等领域中的重要模型生物。
而酵母菌的遗传工程和表达系统则为这些研究提供了基础和保障。
酵母菌的遗传工程主要包括基因克隆、拷贝数调控、基因敲除、基因组编辑、基因表达调控、代谢通路调控等方面。
其中，基因克隆是构建目的基因载体的重要步骤，一般通过 PCR 扩增或基于荧光报告基因的克隆方法来实现。
而拷贝数调控则指通过操纵载体的拷贝数，达到目的蛋白在酵母细胞中表达量的控制。
酵母菌具有高度重组能力以及泛素降解酶机制，因此基因敲除和基因组编辑等操作在酵母菌中较为容易实现。
基因表达调控则是酵母细胞酿酒业中的重要应用，通过调节转录、翻译后修饰等环节来实现产品的调控。
代谢通路调控则是通过调节酵母菌内一系列代谢酶的表达量或活性来增加特定产物的产量。
酵母菌的表达系统则包括基于质粒的表达和基于基因组的表达两种方式。
质粒表达是将目的基因克隆至质粒中，然后将质粒转化至酵母细胞中，通过调控拷贝数和选择适当的启动子及终止子等措施实现表达。
而基因组表达则是将基因克隆至某一位点上，在酵母菌表达生命周期较长的时期内带来更稳定的表达效果，尤其适用于连续表达大规模生物分子的场合。
同时，可以采用多个方面的策略来处理表达过程中可能出现的问题，从而进一步优化表达效率和表达质量。
例如在 translational initiation 上加入特定元件、利用内质网信号肽将蛋白定向到内质网，从而利用内质网发生的翻译后修饰增加表达质量等等。
总之，酵母菌的遗传工程和表达系统为现代生物技术研究和产业化提供了重要的平台，无论从理论研究还是实践应用的角度来看，都具有广泛的前景和应用价值。
我们期待，基于酵母菌的遗传工程和表达系统将吸引更多的生物学家、遗传学家、代谢工程师、蛋白质化学家等多个领域的专家和研究人员的关注，一起推进这一新兴领域的发展和进步。
酵母表达体系
酵母表达体系毕赤酵母是甲醇营养型，甲醇代谢的第一步是：醇氧化酶利用氧分子将甲醇氧化为甲醛和过氧化氢。
为避免过氧化氢的毒性，甲醛代谢主要在过氧化物酶体里进行，使得有毒的副产物远离细胞其余组分。
由于醇氧化酶与O2 的结合率较低，因而毕赤酵母代偿性地产生大量的酶。
而调控产生醇氧化物酶的启动子也正是驱动外源基因在毕赤酵母中表达的启动子。
毕赤酵母含有两种醇氧化物酶，AOX1 AOX2。
细胞中大多数的醇氧化酶是AOX1 基因产物。
甲醇可紧密调节、诱导 AOX1 基因的高水平表达，为Mut+菌株，可占可溶性蛋白的30%以上。
AOX2 基因与AOX1 基因有97%的同源性，但在甲醇中带AOX2 基因的菌株比带AOX1 基因菌株慢得多，通过这种甲醇利用缓慢表型可分离Muts 菌株。
毕赤酵母表达外源蛋白：分泌型和胞内表达。
利用含有α因子序列的分泌型载体即可。
翻译后修饰：酿酒酵母与毕赤酵母大多数为N-连接糖基化高甘露糖型，毕赤酵母中蛋白转录后所增加的寡糖链长度（平均每个支链8-14 个甘露糖残基）比酿酒酵母中的（50-150 个甘露糖残基）短得多。
菌株：GS115 （ Mut+， Muts）和 KM71（Muts）分泌型载体:pPICZα A,B,and C(5’AOX1启动子，紧密型调节，甲醇诱导表达，α分泌信号介导的分泌表达，Zeocin抗性基因，C端含有6XHis标签)胞内表达型载体：pPICZ A,B,and C，一：分子克隆1.设计引物分泌型载体图谱：见酵母表达说明书（p13-pPICZ A，p14-pPICZ B,p15-pPICZ C）2.PCR扩增基因PCR反应体系（50μl）模板DNA 1μlForward Primer（10μM）1μlReverse Primer（10μM）1μldNTP Mixture(各2mM): 4μl5×PrimerSTAR buffer（Mg2+ plus）10μlPrimerSTAR DNA Polymerase 0.5μlddHO up to 50μl2PCR 反应流程预变性98℃ 2min变性98℃ 10sec退火56℃ 10sec 30个循环延伸72℃ 30sec完全延伸72℃ 10min保存4℃3.双酶切及其回收双酶切反应体系（40μl）DNA(空载体或目的基因) 30μlBamHⅠ 1.5μlXholⅠ 1.5μl10×Buffer K 4.0μl4.酶连接首先利用1%的琼脂糖电泳将双酶切后的PCR产物和载体进行分离,并通过胶回收试剂盒回收，按照目的基因和空载体的碱基摩尔比在1:3--1:9之间，一共吸取目的基因和空载体的总体积为5μl，在加入等量的5μl DNA快速连接试剂盒SolutionⅠ，16℃连接4-6h。
酵母菌表面展示的酵母细胞的培养与表达步骤
酵母菌表面展示的酵母细胞的培养与表达步骤酵母菌表面展示技术是一种重要的生物工程技术，可以通过将目标蛋白质或多肽序列表面展示在酵母菌细胞表面，从而实现蛋白质的高效表达和展示。
本文将介绍酵母菌表面展示的酵母细胞的培养和表达步骤。
1.准备培养基首先，准备含有所需营养物质的培养基。
常用的培养基包括YPD培养基（酵母粉蛋白质培养基）、SD培养基（合成蛋白质培养基）和SC培养基（选择性培养基）。
根据实验需要选择合适的培养基，并按照相关文献或方法指南进行配置。
2.酵母细胞传代培养将酵母细胞的初始培养物接种到含有适当培养基的无菌试管或烧瓶中。
根据实验需要，可以选择不同规模的培养容器，如试管、烧瓶或发酵罐。
在适当的温度下，用摇床或震荡培养器进行培养，保持适当的培养条件（如温度、pH值和氧气供应），直至菌液达到合适的菌密度。
3.感应表达载体将要表达的目标蛋白质或多肽序列插入相应的表达载体中，并将这些载体转化到酵母细胞中。
常用的表达载体包括pYD1和pYD2。
将重组载体和酵母细胞一同处理，使其进行感应表达。
4.酵母菌表达培养接种已感应表达的转化菌落到含有选择性培养基的培养容器中。
根据实验需要，可以选择添加相应的抗生素进行筛选。
将菌液继续在适当的培养条件下培养，并监测菌液的生长情况。
5.表达蛋白质的定量和纯化通过Western blot、ELISA等技术验证目标蛋白质或多肽序列的表达情况，并定量蛋白质的表达水平。
根据实验需要，可以采用亲和层析、离心和蛋白质纯化技术对表达的蛋白质进行纯化。
6.酵母菌表面展示将纯化的蛋白质重新悬浮于含有适当培养基的培养液中，并与酵母细胞进行共培养。
通过培养时的适当处理（如温度的改变、pH值的调整、特定培养基成分的添加等），使表达的蛋白质或多肽序列能够准确地定位和展示在酵母细胞表面。
7.酵母菌表面展示的验证通过免疫荧光、流式细胞术和酵母菌表面结构的特异性分析等方法，检测和验证酵母菌表面展示的效果。
酵母表达系统在蛋白质工程中的应用
酵母表达系统在蛋白质工程中的应用在现代生物技术领域中，蛋白质工程无疑是一个越来越重要的领域。
蛋白质工程的目的就是为了通过合成、改造、再造蛋白质，让它们发挥更好的作用。
但要想顺利实现这个目标，首先需要一个强大的工具——酵母表达系统。
本文将着重讨论酵母表达系统在蛋白质工程中的应用。
一、酵母表达系统的概述酵母表达系统指的是用酵母作为外源基因表达的宿主系统。
通常我们所使用的酵母表达系统分为两大类：酵母菌株（氨基酸合成型酵母、酵母菌、诺霉菌等）和酵母质粒。
酵母表达系统具有诸多优点：（1）表达效率高，含量可达30%以上；（2）修饰完备，可形成天然蛋白质的完整结构；（3）简单方便，培养条件简单，易于大规模生产。
二、酵母表达系统在蛋白质工程中的应用1. 蛋白质的可合成性: 酵母表达系统不仅适用于表达人类基因，而且还可以表达来自其他生物体的蛋白质基因。
例如，酵母表达系统可以用来合成的大肠杆菌中无法表达的大分子蛋白质，如人源性因子VIII和因子IX。
2. 蛋白质的结构保护: 酵母表达系统在表达可溶性蛋白质时，可以避免因过量表达而引起的蛋白质不正确折叠、表达时段不对，以及蛋白质酶解等问题。
此外，酵母表达系统还可以进行多肽连接和修饰，从而提高蛋白质稳定性和活性。
3. 蛋白质结构改造: 酵母表达系统不仅适用于合成蛋白质，还可以将已知结构的蛋白质进行改造，如改变蛋白质的区域，添加、改变或缩短结构域等，使其得到改进。
例如，可以通过酵母表达系统制备出抗体、酶及酶替代剂等以及多个域之间衔接的蛋白质，这些蛋白质具有与天然蛋白质相同的生物活性，且更加稳定。
4. 蛋白质的特定细胞定位: 酵母表达系统的另一个重要优点在于可以针对性地调控蛋白的表达定位。
例如，可以将表达在酵母中的蛋白转运到特定的亚细胞区域中，从而实现细胞定位和功能分化。
此外，通过改变酵母中的蛋白质结构、质量和量，可以增加细胞发酵性能、生物转化过程和蛋白质反应的有效性。
三、酵母表达系统面临的挑战与以上的优点相对应，酵母表达系统也存在着一些挑战：（1）构建表达载体；（2）寻找适宜的宿主菌株；（3）了解基因调控和宿主代谢途径；（4）选择适合的培养条件等。
酵母整合型表达载体整合原理和整合原件
酵母整合型表达载体整合原理和整合原件一、概述酵母整合型表达载体是一种用于基因工程研究中的重要工具，它能够整合外源基因并稳定地在酵母细胞中表达。
这一载体在生物技术领域具有广泛的应用，能够帮助科研人员进行基因表达调控、蛋白质功能研究等方面的工作。
本文将针对酵母整合型表达载体的整合原理和整合原件进行深入探讨，并结合个人观点对其进行分析。
二、整合原理酵母整合型表达载体的整合原理是指外源基因在酵母细胞染色体中的整合方式和机制。
一般来说，酵母整合型表达载体通过与酵母染色体的同源配对，使外源基因在染色体特定位点发生整合。
整合的过程需要依赖一系列的整合原件来进行调控和介导。
其中，整合原件主要包括酵母选择标记基因和整合酶等。
1. 酵母选择标记基因酵母选择标记基因是酵母整合型表达载体中的重要组成部分，它能够在酵母细胞中产生特定的表型，并在培养基中通过筛选来实现对整合事件的筛选。
常见的酵母选择标记基因包括TRP1、LEU2、HIS3等，它们分别对应酵母细胞的色氨酸、亮氨酸和组氨酸代谢通路，能够使突变体在对应的缺陷培养基上无法生长。
通过选择适当的酵母选择标记基因，可以在整合过程中实现对突变体的筛选，从而保证整合事件的稳定性和准确性。
2. 整合酶整合酶是酵母整合型表达载体中的另一个重要组成部分，它能够介导整合事件的进行，并在酵母细胞中调控外源基因的整合。
常见的整合酶包括酵母整合酶(INC)和整合介导蛋白(INP)等，它们能够与酵母染色体上的同源序列进行特异性结合，并介导外源基因的整合过程。
通过对整合酶的调控和改变，能够实现对整合事件的精准和高效地控制，从而满足不同研究需求的整合要求。
三、个人观点酵母整合型表达载体的整合原理和整合原件在基因工程研究中发挥着重要的作用，它们为科研人员提供了强大的工具和评台，能够帮助他们实现对外源基因的整合和驱动。
在未来的研究中，我认为可以进一步优化和改进整合原件的设计和构建，以提高整合事件的稳定性和效率，从而更好地满足不同研究领域对整合事件的需求。
巴斯德毕赤酵母新型分泌表达载体构建
α文章编号:10083464(2003)01003704巴斯德毕赤酵母新型分泌表达载体构建韦宇拓,甘凤琼,苏华波,赵颖怡,汪嵘,黄日波(广西大学生物技术实验中心,广西南宁530005)摘要:巴斯德毕赤酵母分泌表达载体pP I C I NU 是利用来源于克鲁维酵母(K luy vero m y ces m arx ianus )的菊粉酶基因信号肽DNA 序列(ISP )构建的。
表达实验结果表明,带有分泌表达载体pP I C I NU 的Β-1,3-1,4葡聚糖酶基因重组菌,具有与带有表达载体pP I C 9K (带有Α因子信号肽)的Β-1,3-1,4葡聚糖酶基因重组菌相同的分泌效率。
关键词:巴斯德毕赤酵母;克鲁维酵母菊粉酶基因信号肽;分泌表达;Α因子信号肽中图分类号:Q 782 文献标识码:ACon struction of a novel secreti ng expression vectors for P ich ia p astorisW E I Yu tuo ,GAN Feng qi ong ,SU H ua bo ,ZHAO Y ing yi ,W AN G Rong ,HUAN G R i bo(B i o techno logy R esearch Cen ter ,Guangx i U n iversity ,N ann ing 530005,Ch ina )Abstract :T he secreting exp ressi on vecto r ,pP I C I NU con tain ing inu linase signal pep tide (ISP )from K luy vero m y ces s m a rx ianu ,of P ich ia p astoris w as con structed .T he exp ressi on resu lts show ed that the secreti on efficiency of the beta1,31,4glucanase of recom b inan t P .p astoris con tain ing p P I C I NU w as as h igh as that of recom b inan t P .p astoris harbo ring pP I C I 9K carrying Αfacto r p rep ro p ep tide .Key wards :P ich ia p astori ;signal pep tides of K luy vero m y ces s m a rx ianu inu linase ;secreting ex 2p ressi on ;Α-facto r p rep ro pep tide Bong 等研究中发现在克鲁维酵母(K luy vero m y ces m a rx ianus )中,大部分菊粉酶能被分泌到胞外,将其先导肽用在酿酒酵母中能促进多种外源蛋白分泌到胞外,分泌效率高于常用的Α因子信号肽[1]。
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pMET B编号 载体名称北京华越洋生物VECT2790 pMET BpMETB载体基本信息载体名称: pMET B, p METB质粒类型: 毕赤酵母蛋白表达载体（methanoloica酵母）表达水平: 高拷贝诱导方法: 甲醇诱导启动子: AUG1克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶载体大小: 7779 b p5' 测序引物及序列: AUG1-‐F: 5´-‐CAATTTACATCTTTATTTATTAACG-‐3´ 3' 测序引物及序列: AUG1-‐R: 5´-‐GAAGAGAAAAACATTAGTTGGC-‐3´载体标签: C-‐V5， C-‐His载体抗性: 氨苄筛选标记: ADE2备注: 利用甲醇诱导蛋白在methanoloica酵母中表达。
稳定性: 稳定 Stable组成型/诱导型: 诱导型病毒/非病毒: 非病毒pMETB载体质粒图谱和多克隆位点信息pMET B多克隆位点pMETB载体序列LOCUS pMET B 7779 bp DNA SYNDEFINITION pMET BACCESSIONKEYWORDSSOURCEORGANISM other sequences; artificial sequences; vectors. FEATURES Location/Qualifierssource 1..7779/organism="pMET B"/mol_type="other DNA"misc_feature 1106..1130/label="AUG1_fwd_primer"misc_feature complement(1398..1419)/label="AUG1_rev_primer"CDS 2821..3396/label="ORF frame 1"CDS 3402..4535/label="ORF frame 3"CDS 4699..5697/label="ORF frame 1"gene complement(6510..7370)/label="Ampicillin"/gene="Ampicillin"CDS complement(6510..7370)/label="ORF frame 2"promoter complement(7412..7440)/label="AmpR_promoter"ORIGIN1 GGCGCGCCTT AATTAAGGCC GGCCCCTGCA GGGGGCCCCG AGATGGTACA TACTTAAAAG 61 CTGCCATATT GAGGAACTTC AAAGTTTTAT CTGTTTTTAG AATTAAAAGA CGATTGTTGT 121 AACAAAACGT TGTGCCTACA TAAACTCAAA TTAATGGAAA TAGCCTGTTT TGAAAAATAC 181 ACCTTCTTAA GTACTGACAA AGTTTTGTTA AATGACTATC GAACAAGCCA TGAAATAGCA 241 CATTTCTGCC AGTCACTTTT AACACTTTCC TGCTTGCTGG TTGACTCTCC TCATACAAAC 301 ACCCAAAAGG GAAACTTTCA GTGTGGGGAC ACTTGACATC TCACATGCAC CCCAGATTAA 361 TTTCCCCAGA CGATGCGGAG ACAAGACAAA ACAACCCTTT GTCCTGCTCT TTTCTTTCTC 421 ACACCGCGTG GGTGTGTGCG CAGGCAGGCA GGCAGGCAGC 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ATTTCATACA 4681 TAAGATCTAC TAGAATCAAT GTTAAACCTG TTATCATTAG AACAGCCATC TCCAGAAGGT 4741 TCTATCCAAG TGAAAACTTT GGTCTTCAAG CCAAAGACTG CTAAAACACA AACCCCAGTC 4801 CCAATTATTG TTGTTGCTGA AACTTCTACT TCTACTCCGG GTGGTGTTAT AGCCAAAGCT 4861 TCGGGCACTA AAGAGCCAAG ATTAGCAAAC GATGAATTGA CCAACCAATT CTTTGGTTCT 4921 CCTGCTAAAG AGTTTTCTAT TGCCAGCTTA TCAAACGAAC ACAAAGACGG TAAAGTCAAG 4981 ATCATTATTG ATGCTGGGAT CAAAGATGAT GACTCGACTA ATTACGTTAT TTCCAACACT5041 GTTGCTAAGT TAGTTTTAAC CGGTAAGCAA TTATTAGGTT TCTTATCCAA CTACGAACCA 5101 ACCATCGTTG ATTTTACTGC TGAAGCTGCA ACCGCTGCCC CAACTCCAGT TGTTAAGAAA 5161 GAACCTGCTG CATCTGGTAA GCTTGATGAT GCCAAATTAA TTGGTGTTAC TGCTGACAAG 5221 GAAAAAGATT TCTCCAACTG GTACTCCCAA ATTCTAATGA AGGGTGAAAT GTTAGACTAC 5281 TACGATGTCT CTGGTTGTTA CATTATGAGA CCAGCTTCTT ACACAATTTG GGAAAAGATT 5341 CAATCTTGGT TCGATTCGAA GATTAAAGAA GATGGTGTTA CTAATGCTTA TTTCCCAATG 5401 TTTGTCTCAT CCAAGGTTTT AGAAAAGGAA AAGGACCACA TCGATGGTTT CGCTCCTGAA 5461 GTTGCTTGGG TTACCAGAGC TGGTAAATCT GAATTAGAAG AACCAATTGC TATTAGACCA 5521 ACTTCTGAAA CTGTTATGGG TACCCTGCAG GGGCCGGCCT TAATTAAGGC GCGCCCTTCC 5581 TCGCTCACTG ACTCGCTGCG CTCGGTCGTT CGGCTGCGGC GAGCGGTATC AGCTCACTCA 5641 AAGGCGGTAA TACGGTTATC CACAGAATCA GGGGATAACG CAGGAAAGAA CATGTGAGCA 5701 AAAGGCCAGC AAAAGGCCAG GAACCGTAAA AAGGCCGCGT TGCTGGCGTT TTTCCATAGG 5761 CTCCGCCCCC CTGACGAGCA TCACAAAAAT CGACGCTCAA GTCAGAGGTG GCGAAACCCG 5821 ACAGGACTAT AAAGATACCA GGCGTTTCCC CCTGGAAGCT CCCTCGTGCG CTCTCCTGTT 5881 CCGACCCTGC CGCTTACCGG ATACCTGTCC GCCTTTCTCC CTTCGGGAAG CGTGGCGCTT 5941 TCTCATAGCT CACGCTGTAG GTATCTCAGT TCGGTGTAGG TCGTTCGCTC CAAGCTGGGC 6001 TGTGTGCACG AACCCCCCGT TCAGCCCGAC CGCTGCGCCT TATCCGGTAA CTATCGTCTT 6061 GAGTCCAACC CGGTAAGACA CGACTTATCG CCACTGGCAG CAGCCACTGG TAACAGGATT 6121 AGCAGAGCGA GGTATGTAGG CGGTGCTACA GAGTTCTTGA AGTGGTGGCC TAACTACGGC 6181 TACACTAGAA GAACAGTATT TGGTATCTGC GCTCTGCTGA AGCCAGTTAC CTTCGGAAAA 6241 AGAGTTGGTA GCTCTTGATC CGGCAAACAA ACCACCGCTG GTAGCGGTGG TTTTTTTGTT 6301 TGCAAGCAGC AGATTACGCG CAGAAAAAAA GGATCTCAAG AAGATCCTTT 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GGGGCGAAAA 7201 CTCTCAAGGA TCTTACCGCT GTTGAGATCC AGTTCGATGT AACCCACTCG TGCACCCAAC 7261 TGATCTTCAG CATCTTTTAC TTTCACCAGC GTTTCTGGGT GAGCAAAAAC AGGAAGGCAA 7321 AATGCCGCAA AAAAGGGAAT AAGGGCGACA CGGAAATGTT GAATACTCAT ACTCTTCCTT 7381 TTTCAATATT ATTGAAGCAT TTATCAGGGT TATTGTCTCA TGAGCGGATA CATATTTGAA 7441 TGTATTTAGA AAAATAAACA AATAGGGGTT CCGCGCACAT TTCCCCGAAA AGTGCCACCT 7501 GTATGCGGTG TGAAATACCG CACAGATGCG TAAGGAGAAA ATACCGCATC AGGAAATTGT 7561 AAGCGTTAAT ATTTTGTTAA AATTCGCGTT AAATTTTTGT TAAATCAGCT CATTTTTTAA 7621 CCAATAGGCC GAAATCGGCA AAATCCCTTA TAAATCAAAA GAATAGACCG AGATAGGGTT7681 GAGTGTTGTT CCAGTTTGGA ACAAGAGTCC ACTATTAAAG AACGTGGACT CCAACGTCAA 7741 AGGGCGAAAA ACCGTCTATC AAGGGCGATG GCCCACTAC//其他酵母表达载体：p416GFD pPIC9p53blue pPIC9KpACT2-AD pPIC9k-HispAD-GAL4-2.1 pPICZApADH2 pPICZBpAUR123 pPICZCpBridge pPICZαApCL1 pPICZαBpDEST32 pPICZαCpDisplay pPICZαDpDR195 pPICZαFCpESC-His pPICZαGBpESC-Leu pPink-HCpESC-TRP pPink-LCpESC-URA pPinkα-HCpFA6a-FGP(S65T)-kanMX6 pRS316pFLD pRS403pFLD/CAT pRS405pFLDαpRS406pGADT7-T pRS414pGAG424 pRS415pGAPZA pRS416pGAPZB pRS41HpGAPZαB pRS426pGAPZαC pRS426galpGBKT7 pSEP1pGBKT7-53 pSEP2pGBKT7-Lam pSEP3pHIC-PI pSospHIL-D2 pSos-MAFBpHIL-S1 pUG66pHis2 pYC2/CTpHisSi-1 pYC2/NTApMETA pYC2/NTBpMETB pYCP211pMETC pYEPlac112pMETαA pYEPlac195pMETαB pYES2pMETαC pYES2-EGFP pMyr pYES2-kan pPIC3.5 pYES2-NTA pPIC3.5K pYES2-NTB pPIC6B pYES2-NTC pPIC6C pYES3/CT pPIC6αA pYES6/CT pPIC6αB pYES-DEST52 pPIC6αC pYIP211 pYX212 pYIP5 SUMOprotease pYRP7Ycp22lac-EGFP Ycplac33。