荧光法测定乙酰水杨酸和水杨酸
特殊点：有两个单色器，光源与检测器通常成直角。 基本流程如图： 单色器：选择激发光波长 的第一单色器和选择发射 光(测量)波长的第二单色 器； 光源：灯和高压汞灯，染 料激光器(可见与紫外区) 检测器：光电倍增管。
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6、比色皿的检测面和放入检测腔的位置一定要 固定。
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用移液管分别准确移取浓度为4.00 μg·mL-1的ASA溶液2、4、6、8、 10 mL至5只50mL容量瓶中，用1％醋酸—氯仿溶液稀至刻度，摇匀。分 别测量它们的荧光强度. (2) SA标准曲线的制作
用移液管分别准确移取浓度为7.5μg·mL-1 的SA溶液2、4、6、8、 l0mL至5只50mL容量瓶中，用 1％醋酸—氯仿溶液稀释至刻度，摇匀。 分别2019测/12/量9 它们的荧光强度．
量
吸 收
发
射
外转换
荧
光
发 射 磷 振动弛豫 光
S0
l3
l 1 2019/12/9l 2 l 2Fra bibliotek射能量传递过程
荧光发射：电子由第一激发单重态的最低振动能级→基态（
多为 S1→ S0跃迁），发射波长为 l ‘2的荧光； 10-7～10 -9 s 。
由图可见，发射荧光的能量比分子吸收的能量小，波长
长；
If = 2.3 I0 l c = Kc
分子产生荧光必须具备的条件
1）具有合适的结构； 2）具有一定的荧光量子产率。
荧光量子产率（）：
发射的光量子数
吸收的光量子数
荧光量子产率与激发态能量释放各过程的速率常数有关 ，如外转换过程速度快，不出现荧光发射；
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仪器结构流程
系间跨越 内转移 外转移 振动弛预
激发态停留时间短、返回速度快的途径，发生的几率大， 发光强度相对大； 荧光：10-7～10 -9 s,第一激发单重态的最低振动能级→基态； 磷光20：19/112/90-3～10s；第一激发三重态的最低振动能级→基态；
内转换
振动弛豫 内转换
S2
系间跨越
S1
能
T1 T2
试剂：乙酰水杨酸，水杨酸，乙醇，阿司 匹林药片。
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实验步骤
1、ASA和SA贮备溶液的配制 （1）ASA贮备液的配制：称取0.4000g乙酰水杨酸溶于1％醋酸-氯仿溶 液中，用 1％醋酸—氯仿溶液定容于1000mL容量瓶中，摇匀，备用； （2）SA贮备液的配制：称取0.750g水杨酸溶于1％醋酸—氯仿溶液中， 用 1％醋酸—氯仿溶液定容于1000mL容量瓶中，摇匀，备用。 2、ASA和SA激发光谱和荧光光谱的绘制 将ASA和SA贮备液分别稀释100倍(分二次完成，每次稀释10倍)。用得 到的溶液分别扫描ASA和SA的激发光谱和荧光光谱曲线，并分别确定 它们的最大激发波长和最大发射波长。 3、标准曲线的制作 (1) ASA标准曲线的制作
l
‘ 2
>
l
2
>
l
1
；
磷光发射：电子由第一激发三重态的最低振动能级→基态（
T1 → S0跃迁）； 电子由S0进入T1的可能过程：（ S0 → T1禁阻跃迁）
S0 →激发→振动弛豫→内转移→系间跨越→振动弛豫→ T1 发光速度很慢： 10-3～10 s 。
光照停止后，可持续一段时间。
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1、溶剂用量控制在600mL，要求提高清洗效率， 减少移取溶剂时的损失，以节约试剂，同时保 护健康和环境。
2、用加长的胶头滴管移取少量的试剂，切忌直 接倾倒。
3、容量瓶使用25mL，注意相应液体体积的改动 4、要保证实验过程无水 5、在做标准曲线时，在做每一个点前，一定要
用这个点的溶液清洗比色皿至少三次，以保证 能作出曲线。
溶液浓度与荧光强度的关系
有线性关系：
荧光强度 If正比于吸收的光量Ia和荧光量子效率 ： If = Ia
由朗-比耳定律： Ia = I0(1-10- l c ) If = I0(1-10- l c ) = I0(1-e-2.3
lc)
浓度很低时，将括号项近似处理后：
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数据处理
1、从绘制的ASA和SA激发光谱和荧光光谱曲线上，确定 它们的最大激发波长和最大发射波长。 2、分别绘制ASA和SA的标准曲线，从标准曲线上确定试 样溶液中ASA和SA的浓度，并计算每片阿斯匹林药片中 ASA和SA的含量(mg)，将ASA测定值与说明书上的值比 较。 2019/12/9
实验指导
荧光分析方法
特点
1）灵敏度高 比紫外-可见分光光度法高2～4个数量级；为什么？ 检测下限：0.1～0.1g/cm-3 相对灵敏度：0.05mol/L 奎宁硫酸氢盐的硫酸溶液。
2）选择性强 既可依据特征发射光谱，又可根据特征吸收光谱；
3）试样量少 缺点：应用范围小。
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仪器与试剂
仪器：Cary Eclipse荧光光谱仪，石英比 色皿，容量瓶，移液管，玻璃注射器， 漏斗，量筒，滤纸。
1、实验目的 （1）掌握荧光法测定药物中乙酰水杨酸
的方法 （2）了解Cary Eclipse型荧光光谱仪的
基本操作 （3）强化称量、移液、配溶液等基本操
作
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实验原理
电子处于激发态是不稳定状态，返回基态时，通过辐射 跃迁(发光)和无辐射跃迁等方式失去能量；
传递途径
辐射跃迁
无辐射跃迁
荧光 延迟荧光 磷光
4、阿斯匹林药片中乙酰水杨酸和水杨酸的测定 取5片阿司匹林药片磨成粉末，准确称取0.40mg用1％醋
酸—氯仿溶液溶解，全部转移至100mL容量瓶中，用1％醋 酸—氯仿溶液稀释至刻度。迅速通过定量滤纸干过滤，用 该滤液在与标准溶液同样的测定条件下测量SA荧光强度。
将上述滤液稀释1000倍(用三次稀释来完成)，在与标准溶 液同样的测定条件下测量ASA荧光强度。
分子荧光法测定水杨酸乙酰水杨酸1
分子荧光法测定水杨酸和乙酰水杨酸一、实验目的1、学习荧光分析法的基本原理。
2、掌握应用分子荧光法测定乙酰水杨酸、水杨酸的分析方法。
3、了解F-3501型荧光分光光度计的主要结构及工作原理，掌握其正确的使用方法。
二、实验原理某些物质经紫外光或波长较短的可见光照射后，会发射出较入射波长更长的荧光。
荧光光谱反映了物质的特性，建立在测量荧光光谱基础上的分析方法称为荧光分析法。
当进行荧光测定时，总要选择不同波长的光波进行测定，即一个为激发光——物质所吸收的光；另一个为物质吸收后发出的光称为发射光或荧光。
对同一物质而言，在稀溶液（即A = abc < 0.05）中，荧光的强度F与该物质的浓度C 有以下关系：F = 2.3φabcI0式中φ为荧光过程的量子效率，a为荧光分子的吸光系数，b为试样的吸收光程，I0为入射光的强度。
当I0及b 不变时，上式变为：F= KC其中，K为常数。
荧光分析法具有灵敏度高（一般超过分光光度法2~3个数量级）、取样少、方法快速等特点，现已成为食品、生物医药、天然产品、农业、环境保护、化工等领域中的重要分析方法之一。
但由于许多物质本身不会发生荧光，故在使用范围上受到一定的限制。
乙酰水杨酸（ASA，即阿司匹林）水解能生成水杨酸（SA），而在乙酰水杨酸中，或多或少都存在着水杨酸。
由于两者都有苯环，也有一定的荧光效率，因而在以三氯甲烷为溶剂的条件下，可用荧光法进行测定。
从乙酰水杨酸和水杨酸的激发光谱和荧光光谱中可以发现：乙酰水杨酸和水杨酸的激发波长和发射波长均不同，利用此性质，可在各自的激发波长和发射波长下分别测定。
三、仪器与试剂1、仪器F-3501型荧光分光光度计、电子天平、离心机、真空泵、石英比色皿、移液管、棕色容量瓶、比色管、烧杯、砂芯抽滤装置、量筒、洗耳球、洗瓶等。
阿司匹林中乙酰水杨酸含量的测定
荧光光度法测定阿司匹林中乙酰水杨酸的含量一、实验目的1.掌握用荧光法测定药物中的乙酰水杨酸含量的方法。
2.掌握970CRT 型荧光分光光度计的操作方法。
3.加深对荧光光度法原理的理解。
二、实验原理1.荧光光度法原理（1）常温下，处于基态的分子吸收一定的紫外可见光的辐射能成为激发态分子，激发态分子通过无辐射跃迁至第一激发态的最低振动能级，再以辐射跃迁的形式回到基态，发出比吸收光波长长的光而产生荧光。
在稀溶液中，当实验条件一定时，荧光强度I F 与物质的浓度c 成线性关系：即Kc I F （这是荧光光谱法定量分析的理论依据）。
（2）荧光光谱激发光谱：固定测量波长(选最大发射波长)，化合物发射的荧光强度与照射光波长的关系曲线。
激发光谱曲线的最高处，处于激发态的分子最多，荧光强度最大。
荧光强度波长发射光谱：固定激发光波长(选最大激发波长), 化合物发射的荧光强度与发射光波长关系曲线。
固定发射光波长进行激发光波长扫描，找出最大激发光波长，然后固定激发光波长进行荧光发射波长扫描，找出最大荧光发射波长。
激发光波长和发射荧光波长的选择是本实验的关键。
2. 荧光光度法测定阿司匹林中乙酰水杨酸的含量通常称为ASA 的乙酰水杨酸（阿司匹林）水解即生成水杨酸（SA ）（如下式）。
而在阿司匹林中或多或少存在一些水杨酸，用醋酸—氯仿作为溶剂，然后用荧光法可以分别测定其含量，少许醋酸还可以增加二者的荧光强度（本次实验只测定阿司匹林中乙酰水杨酸的含量）。
在1%的乙酸—氯仿中乙酰水杨酸的激发光谱和荧光光谱如图所示：（为了消除药片之间的差异，可以取几片一起研磨，然后取部分由代表性的样品进行分析）三、仪器与试剂：仪器：970CRT 型荧光分光光度计及附件；容量瓶：1000mL 2只，100 mL 2只，50mL 8只；l0mL 吸管2支；铁架台；研钵；称量瓶；玻璃棒；烧杯；定量滤纸；电子天平。
试剂：冰醋酸；氯仿；乙酰水杨酸；阿司匹林；丙酮。
乙酰水杨酸含量的测定实验报告
一、实验目的1. 掌握乙酰水杨酸含量的测定方法；2. 熟悉酸碱滴定实验操作；3. 了解乙酰水杨酸的性质和应用。
二、实验原理乙酰水杨酸（Aspirin）是一种常用的解热镇痛药，其化学名称为乙酰水杨酸。
本实验采用酸碱滴定法测定乙酰水杨酸含量，原理如下：在强碱性溶液中，乙酰水杨酸中的酯结构在碱性条件下容易水解，生成水杨酸和乙酸盐。
水杨酸具有酸性，可与氢氧化钠（NaOH）反应，生成盐和水。
根据反应的化学计量关系，通过滴定过量的NaOH溶液，可以计算出乙酰水杨酸的含量。
三、实验器材与试剂1. 实验器材：电子天平、滴定管、锥形瓶、移液管、烧杯、漏斗、滤纸、玻璃棒等；2. 试剂：乙酰水杨酸标准品、氢氧化钠标准溶液、酚酞指示剂、蒸馏水等。
四、实验步骤1. 准备标准溶液：准确称取一定量的乙酰水杨酸标准品，溶解于适量蒸馏水中，转移至100mL容量瓶中，定容，配制成一定浓度的标准溶液。
2. 准备样品溶液：准确称取一定量的乙酰水杨酸样品，溶解于适量蒸馏水中，转移至100mL容量瓶中，定容，配制成一定浓度的样品溶液。
3. 滴定实验：（1）取一定量的样品溶液于锥形瓶中；（2）加入适量酚酞指示剂，用氢氧化钠标准溶液滴定至溶液由无色变为浅红色，记录消耗的氢氧化钠标准溶液体积；（3）重复滴定3次，计算平均值。
4. 计算结果：（1）根据滴定反应的化学计量关系，计算出样品中乙酰水杨酸的含量；（2）根据标准溶液的浓度和消耗的氢氧化钠标准溶液体积，计算出乙酰水杨酸的标准品含量；（3）根据样品溶液和标准溶液的浓度比，计算出样品中乙酰水杨酸的含量。
五、实验结果与分析1. 样品中乙酰水杨酸的含量为x mg/g；2. 标准品中乙酰水杨酸的含量为y mg/g；3. 样品中乙酰水杨酸的含量与标准品含量的相对偏差为z %。
六、实验总结通过本次实验，我们掌握了乙酰水杨酸含量的测定方法，熟悉了酸碱滴定实验操作。
实验结果表明，本实验方法具有较高的准确性和可靠性，为乙酰水杨酸的质量控制提供了有力保障。
乙酰水杨酸的合成和纯度检验实验报告
乙酰水杨酸的合成和纯度检验实验报告取少许样品配成乙酸乙酯的溶液待用。
将水杨酸、乙酰水杨酸标样（这两种样品溶液已经配好）和样品点点在硅胶板的同一条线上，在展开剂（石油醚（60-90）：乙酸乙酯：冰醋酸=30:10:1）中展开，然后取出挥发干溶剂，在紫外灯下观察个样品点的位置，并标记计算各点的Rf值（哪种物质的Rf值大，为何？）。
[注意事项]
1.水杨酸应当干燥，乙酸酐应当是新蒸的（取用时应相当注意）。
2.反应要严格控制反应温度，温度过高，将增加副产物的生成，如生成水杨酰水
杨酸酯，乙酰水杨酰水杨酸酯。
3.乙酰水杨酸易受热分解，因此熔点不是很明显，它的分解温度为128-135℃，
熔点为136℃，在测熔点时，可先将热载体加热至120℃左右，然后放入样品测定。
乙酰水杨酸的测定与光谱分析
05
乙酰水杨酸测定中的干 扰因素及消除方法
共存离子的干扰及消除
要点一
共存离子的干扰
在测定乙酰水杨酸时，溶液中可能存在的其他离子会对其 产生干扰，影响测定的准确性。
要点二
消除方法
采用离子交换法、萃取法或共沉淀法等分离手段，将干扰 离子从溶液中去除，以减小其对乙酰水杨酸测定的影响。
有机溶剂的干扰及消除
利用超声波的空化作用加速溶剂渗透 和物质传递，可实现乙酰水杨酸的快 速提取和分离。
微波辅助萃取技术
利用微波能加速有机溶剂对样品中乙 酰水杨酸的提取，具有提取效率高、 操作简便、节省时间和溶剂等优点。
测定仪器设备的升级与改造
高性能液相色谱仪
具有高灵敏度、高分辨率和高自动化程度等优点，可实现乙酰水 杨酸的高效分离和准确检测。
可以实现对乙酰水杨酸结构的准确鉴别。
04
乙酰水杨酸测定中的样 品处理技术
萃取技术
液-液萃取
利用两种不混溶的液体（通常为水和有机溶剂） 对乙酰水杨酸进行分离和纯化。
固-液萃取
利用固体吸附剂吸附乙酰水杨酸，然后用溶剂洗 脱，达到分离和纯化的目的。
膜萃取
利用半透膜使水杨酸通过膜而留下乙酰水杨酸， 达到分离目的。
沉淀技术
盐析法
通过加入无机盐使水杨酸或乙酰水杨 酸以沉淀形式析出，再进行分离和纯 化。
共沉淀法
利用杂质离子与乙酰水杨酸形成共沉 淀，将乙酰水杨酸与其他杂质分离。
蒸馏技术
常压蒸馏
利用乙酰水杨酸与杂质的沸点差进行 分离，通过控制蒸馏温度和压力，收 集不同沸点的组分。
减压蒸馏
降低压力使沸点降低，有助于分离沸 点相近的组分和减少能耗。
紫外可见分光光度计
实验荧光法测定乙酰水杨酸和水杨酸
实验荧光法测定乙酰水杨酸和水杨酸一、目的要求1、掌握用荧光法测定药物中乙酰水杨酸和水杨酸的方法。
2、掌握RF-5301型荧光仪的操作方法。
二、原理通常称为ASA的乙酞水杨酸(阿司匹林)水解即生成水杨酸(SA)，而在阿司匹林中，都或多或少存在一些水杨酸。
用氯仿作为溶剂，用荧光法可以分别测定它们。
加少许醋酸可以增加二者的荧光强度。
在1,醋酸一氯仿中，乙酞水杨酸和水杨酸的激发光谱和荧光光谱如图1.图1 在1,醋酸一氯仿中，乙酞水杨酸和水杨酸的激发光谱和荧光光谱为了消除药片之间的差异，可取几片药片一起研磨，然后取部分有代表性的样品进行分析。
三、仪器与试剂仪器 RF-5301型荧光仪，石英皿;容量瓶:1000mL 2只，100mL 8只，50mL 10只;l0mL吸管2支。
试剂乙酰水杨酸贮备液:称取0.4000g 乙酰水杨酸溶于1,醋酸一氯仿溶液中，用1,醋酸一氯仿溶液定容于1000mL容量瓶中;水杨酸贮备液:称取0.750g水杨酸溶于1,醋酸一氯仿溶液中，并用其定容于1000mL容量瓶中;醋酸;氯仿。
四、实验步骤1、绘制ASA和SA的激发光谱和荧光光谱将乙酰水杨酸和水杨酸贮备液分别稀释100倍(每次稀释10倍，分二次完成)。
用该溶液，分别绘制ASA和SA的激发光谱和荧光光谱曲线，并分别找到它们的最大激发波长和最大发射波长。
2、制作标准曲线(1) 乙酞水杨酸标准曲线在5只50mL容量瓶中，用吸量管分别加入4.00µg/mLASA溶液2、4、6、8、l0mL,用1,醋酸一氯仿溶液稀释至刻度，摇匀。
分别测量它们的荧光强度。
(2) 水杨酸标准曲线在5只50mL容量瓶中，用吸量管分别加入7.50µg/mL SA溶液2、4、6、8、l0mL，用1,醋酸一氯仿溶液稀释至刻度，摇匀。
分别测量它们的荧光强度。
、阿司匹林药片中乙酰水杨酸和水杨酸的测定 3将5片阿司匹林药片称量后磨成粉末，称取400.0mg用1,醋酸一氯仿溶液溶解，全部转移至100mL容量瓶中，用1,醋酸一氯仿溶液稀释至刻度。
测定乙酰水杨酸实验报告
一、实验目的1. 学习并掌握乙酰水杨酸（阿司匹林）的提取、纯化和含量测定方法；2. 熟悉乙酰水杨酸的理化性质，加深对药物分析的理解；3. 培养实验操作技能，提高实验数据的处理和分析能力。
二、实验原理乙酰水杨酸（阿司匹林）是一种常用的非甾体抗炎药，具有解热、镇痛、抗炎、抗风湿等作用。
本实验采用酸碱滴定法测定乙酰水杨酸的含量。
乙酰水杨酸在碱性溶液中发生水解反应，生成水杨酸和乙酸盐。
水杨酸在碱性溶液中易升华，而乙酸盐不挥发，因此可以通过测定反应后剩余的乙酸盐含量，间接计算出乙酰水杨酸的含量。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：分析天平、滴定管、锥形瓶、烧杯、电热恒温水浴锅、研钵、漏斗、滤纸等；2. 试剂：乙酰水杨酸片剂、氢氧化钠标准溶液、盐酸标准溶液、酚酞指示剂、蒸馏水等。
四、实验步骤1. 乙酰水杨酸提取：取乙酰水杨酸片剂10片，研磨成粉末，准确称取0.1g，置于锥形瓶中；2. 加水溶解：向锥形瓶中加入50ml蒸馏水，充分搅拌，使乙酰水杨酸溶解；3. 加碱水解：向锥形瓶中加入10ml氢氧化钠标准溶液，充分搅拌，使溶液呈碱性；4. 水解反应：将锥形瓶放入电热恒温水浴锅中，加热至80℃，维持水解反应30分钟；5. 冷却：将锥形瓶取出，放入冷水中冷却至室温；6. 加酸回滴：向锥形瓶中加入10ml盐酸标准溶液，充分搅拌，使溶液呈酸性；7. 滴定：用酚酞指示剂指示终点，用氢氧化钠标准溶液滴定至溶液颜色由红色变为无色；8. 计算乙酰水杨酸含量：根据消耗的氢氧化钠标准溶液的体积和浓度，计算出乙酰水杨酸的含量。
五、实验结果与分析1. 乙酰水杨酸提取：实验中，乙酰水杨酸片剂完全溶解，说明实验操作正确；2. 加碱水解：实验中，溶液呈碱性，符合水解反应条件；3. 水解反应：实验中，溶液颜色由红色变为无色，说明水解反应已完成；4. 加酸回滴：实验中，溶液呈酸性，符合回滴反应条件；5. 滴定：实验中，消耗的氢氧化钠标准溶液体积为V1，浓度为C1，计算乙酰水杨酸含量为：乙酰水杨酸含量= (V1 × C1 × 180.16) / 1000六、实验总结1. 本实验成功提取了乙酰水杨酸，并对其含量进行了测定；2. 通过实验，掌握了乙酰水杨酸的提取、纯化和含量测定方法；3. 加深了对乙酰水杨酸理化性质的理解，提高了实验操作技能和数据分析能力；4. 在实验过程中，应注意操作规范，保证实验结果的准确性。
水杨酸的检测方法
水杨酸的检测方法水杨酸可是个挺重要的玩意儿呢！咱得知道怎么检测它呀，不然怎么能放心使用呢！要说检测水杨酸，有一种常见的方法就是高效液相色谱法。
这就好比是一个超级侦探，能把水杨酸从一堆东西里精准地揪出来。
它通过让样品在特殊的柱子里“跑一跑”，然后根据各种信号来确定水杨酸的存在和含量。
就像你在人群中一下子认出你熟悉的朋友一样，高效液相色谱法能准确地识别水杨酸。
还有一种方法是分光光度法。
这个方法就像是一个有特殊眼光的观察者，它能根据水杨酸和某些试剂反应后产生的独特颜色变化来判断水杨酸的情况。
比如说，原本无色透明的溶液，遇到水杨酸后可能就会变得有颜色啦，这不就被发现了嘛！你想想，是不是有点像变魔术一样神奇呀！再说说滴定法，这就像是一场精确的较量。
通过加入特定的试剂，然后一点点地滴加，观察反应的变化，直到达到某个关键点，就能算出水杨酸的含量啦。
就好像你在和水杨酸进行一场拔河比赛，看谁更厉害。
咱检测水杨酸可不能马虎啊！这就好比你要去一个陌生的地方，你得有准确的地图和导航才能不迷路吧。
检测水杨酸就是给我们一个清晰的“地图”，让我们知道它到底在不在，有多少。
不然，用了含有水杨酸的产品，却不知道里面到底有没有水杨酸，或者有多少，那不就跟闭着眼睛走路一样危险嘛！检测水杨酸的方法还有很多呢，每一种都有它独特的本领和用处。
我们得根据具体情况选择合适的方法，就像你要根据不同的场合穿不同的衣服一样。
而且，这些方法也不是一成不变的呀，科学家们还在不断地研究和改进呢，让检测变得更准确、更方便。
所以啊，水杨酸的检测可真是个大学问！我们可得好好了解了解，这样才能在面对各种含有水杨酸的产品时心里有底呀！可别小瞧了这小小的水杨酸检测，它关系着我们的使用安全和效果呢！你说是不是？咱可不能稀里糊涂地就用了，得明明白白地知道里面的水杨酸到底是怎么回事儿！这才是对自己负责嘛！。
荧光法测定乙酰水杨酸和水杨酸
乙酰水杨酸：250350nm乙酰水杨酸(ASA)(EX)01020乙酰水杨酸(ASA)(EX) No. Start(nm) Apex(nm) End(nm) Height(Data) Valley(nm) Valley(Data)1 250.0 279.5 327.5 14.45 327.5 0.562 2 327.5 344.0 400.0 26.70 400.0 0.122发射光谱：250350nm乙酰水杨酸(ASA)(EM)01020乙酰水杨酸(ASA)(EM) No. Start(nm) Apex(nm) End(nm) Height(Data) Valley(nm) Valley(Data)1 250.0 347.5 400.0 26.21 400.0 1.002水杨酸的激发光谱：250350nm水杨酸(SA)(EX)0102030水杨酸(SA)(EX)No. Start(nm) Apex(nm) End(nm) Height(Data) Valley(nm) Valley(Data)1 250.0 255.0 285.5 10.71 285.5 1.7632 285.5 300.5 400.0 35.67 400.0 0.133发射光谱：250300350400nm水杨酸(SA)(EM)0102030405060708090 100水杨酸(SA)(EM)No. Start(nm) Apex(nm) End(nm) Height(Data) Valley(nm) Valley(Data)1 250.0 303.0 320.0 36.03 320.0 0.777乙酰水杨酸的标准曲线：Standard Calibration2010ug/mlStd.No. 344.0/347.0 Conc (ug/ml) diff RD t1 25.95 0.080 -0.065 -0.2467 -0.4993Comment:2 26.14 0.160 0.058 0.222 0.4492Comment:3 26.45 0.400 0.150 0.5701 1.154Comment:4 26.55 0.800 -0.143 -0.5454 -1.104Samp.No. 344.0/347.0 Conc (ug/ml)1 29.93 4.271Calibration type: 1st orderForce curve through zero: NoMin Conc (ug/ml): 0.080Max Conc (ug/ml): 0.800A0: -27.731A1: 1.0692R: 0.91582R2: 0.83873Lower concentration limit (ug/ml) : 0.000Upper concentration limit (ug/ml) : 1000.000水杨酸标准曲线：-0.10.10.20.30.40.50.60.70.80.91.11.21.3ug/mlStandard Calibration0102030 4050Std.No. 300.0/303.0 Conc (ug/ml) diff RD t 1 39.59 0.160 -0.084 -0.1968 -0.5092 Comment:2 42.61 0.400 0.247 0.5792 1.498 Comment:3 43.04 0.800 -0.072 -0.1695 -0.4385 Comment:4 45.06 1.200 -0.091 -0.2129 -0.5507Samp.No. 300.0/303.0 Conc (ug/ml) 1 47.85 1.636 Calibration type: 1st order Force curve through zero: No Min Conc (ug/ml): 0.160 Max Conc (ug/ml): 1.200 A0: -7.4015 A1: 0.18888 R: 0.93297 R2: 0.87043Lower concentration limit (ug/ml) : 0.000 Upper concentration limit (ug/ml) : 1000.000。
荧光分析法测定水杨酸...
荧光分析法测定药品中的羟基苯甲酸异构体含量一．实验目的1.学习荧光分析法的基本原理和操作；2.熟悉荧光分析法进行多组分含量的测定方法。
二．实验原理1、荧光分析法原理：当被测物质受到光照后，被测物分子吸收了具有特征频率的辐射能，分子从基态上升到激发态，分子在较高能级的激发态时，它可能处于激发态中各种振动状态的一种。
然而由于分子通过与溶剂分子、同类分子或其他分子的碰撞，而失去振动能级，降低至激发态时的最低振动能级，在此过程中并不发光。
但当分子从激发态的最低振动能级，即第一电子激发态的最低振动能级跃迁至基态的各个不同的振动能级时，则以光的形式辐射出能量，所辐射出的光既是荧光。
2、激发光谱和发射光谱：激发光谱：荧光是光致发光，因此必须选择合适的激发光波长，这可以从它们的激发光谱曲线来确定。
绘制激发光谱曲线时，选择荧光的最大发射波长为测量波长，改变激发光的波长，测量荧光强度的变化。
以激发波长为横坐标、荧光强度为纵坐标作图，即得到荧光化合物的激发光谱。
激发光谱的形状与吸收光谱的形状极为相似，经校正后的真实激发光谱与吸收关顾不仅形状相同，而且波长位置也一样。
这是因为物质分子吸收能量的过程就是激发过程。
发射光谱：发射光谱简称荧光光谱。
如果将激发光波长固定在最大激发波长处，然后扫描发射波长，测定不同发射波长处的荧光强度，即得到荧光光谱。
3、试验方法机理：邻- 羟基苯甲酸（亦称水杨酸）和间- 羟基苯甲酸分子组成相同，均含一个能发射荧光的苯环，但因其取代基的位置不同而具有不同的荧光性质。
在pH=12 的碱性溶液中，二者在310nm附近紫外光的激发下均会发射荧光；在pH=5.5的近中性溶液中，间-羟基苯甲酸不发荧光，邻-羟基苯甲酸因分子内形成氢键增加分子刚性而有较强荧光，且其荧光强度与pH=12时相同。
利用此性质，可在pH=5.5 时测定二者混合物中邻-羟基苯甲酸含量时，间-羟基苯甲酸不干扰。
另取同样量混合物溶液，测定pH=12 时的荧光强度，减去 pH=5.5时测得的邻-羟基苯甲酸的荧光强度，即可求出间-羟基苯甲酸的含量。