耳聋基因检测 - 2
耳聋基因检测
自愿选择， 知情同意
受检人群
检测医院
初筛 TEOAE/DPOAE
结果不通过
结果通过
复筛(TEOAE/DPOAE )+AABR/ABR 阈值)筛选听力异常
基因检测流程
采取最少3个采血斑
知情同意、自愿选择
5个工作日
临床检验中心 耳聋基因检测
检测医院确诊 出具确诊报告
随访 检测结果正常
出具检测报告
检测结果为杂合突 变或纯合突变
Mohr-Tranebjaerg 综 合 TIMM8A 征
特雷彻-柯林斯综合征 TCOF1 （ Treacher Collins syndrome）
Alport综合征（遗传性 COL4A3,COL4A4,C
肾炎）
OL4A5
Wolfram综合征1型
WFS1
单个耳聋基因全测序
检测基因
GJB2 GJB3 SLC26A4 测序采用sanger法，在以下情况可建议进行单
氨基糖甙类药 物性致聋，无
法逆反
GJB3
538C>T 547G>A
1p33-p35 缝隙连接蛋白 Connexin 31 常染色体显性遗 传。我国本土克 隆和鉴定的第一 个耳聋致病基因
适用人群
新生儿 婚前、孕前和产前人群 各种原因不明的耳聋，包括先天性聋
和后天性聋人群 听力正常，但有耳聋家族史的人群
筛查案例
一家9口人，6人是耳聋
佛山家系为3代遗传的耳聋家系，现有家系成员9人，其中6名为 耳聋患者，除由于婚姻关系成为该家系成员的2名耳聋患者外， 剩余的4名患者均为母系家庭成员。
家系基因
12SrRNA A1555G
GJB2 235delc
耳聋基因检测的项目有哪些
核子基因科技 微信号：hezijiyinDNA
耳聋基因检测的项目有哪些
新生儿常见耳聋基因检测采用飞行时间质谱 检测技术，对新生儿抽取微量血液，在基因 水平上对常见耳聋基因进行检测。
耳聋基因检测的项目有哪些
耳聋基因检测通过用一定强度的激光照射样品与基质形成的共 结晶薄膜，基质从激光中吸收能量，样品解吸附，基质-样品之 间发生电荷转移使得样品分子电离，电离的样品在电场作用下 加速飞过飞行管道，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测， 即测定离子的质量电荷之比（M/Z）与离子的飞行时间成正比 来检测离子，并测得样品的分子量，进而推知突变位点。
耳聋基因检测的技术
飞行时间质谱仪： 利用目标序列捕获与高通量测序技术，对外周血样本DNA中遗传性耳聋的 相关基因目标区域进行测序和生物信息分析，获取该区域基因变异信息， 并对可疑致病突变进行验证，该方法能够检测到的遗传性耳聋包括常染色 体隐性（显性）非综合征性耳聋、线粒体遗传性耳聋等各种类型综合征性 的耳聋，可检测到包括GJB2、GJB3、线粒体基因等在内的84个基因的全部 突变位点，为临床诊断和突变筛查做出参考依据。
检测耳聋基因实验报告
检测耳聋基因实验报告研究背景耳聋是一种常见的感知器官缺陷，影响着全球数百万人口的听觉能力。
据世界卫生组织的数据，约有4660万人在全球范围内患有严重的耳聋问题，其中大部分是由遗传因素引起的。
因此，了解耳聋的遗传基础对于预防和治疗耳聋至关重要。
本实验旨在检测耳聋相关基因的存在，以帮助进一步了解耳聋的遗传机制。
实验设计样本收集本实验中，我们收集了100个来自不同地区、不同年龄和性别的样本，其中包括耳聋患者和正常人群。
所有的样本采集工作均在伦理审查委员会的指导下进行，并征得了每个受试者的知情同意。
DNA提取我们从每个受试者的全血样本中提取了DNA。
采用常规的DNA提取方法，包括细胞裂解、蛋白质沉淀、DNA沉淀等步骤，最终获得高质量的DNA样本。
耳聋相关基因检测根据文献研究和数据库查询，我们选择了九个与耳聋相关的常见基因进行检测，包括GJB2、GJB3、SLC26A4、MYO7A、USH1C、CDH23、PCDH15、TMC1和TECTA。
使用聚合酶链式反应（PCR）扩增这些基因的特定区域，并进行限制性内切酶切割试验或测序分析，以检测这些基因的突变。
实验结果经过耳聋相关基因的筛选和检测，我们获得了以下结果：基因突变类型突变频率突变位点:-: :-: :-: ::GJB2 缺失3% c.35delGGJB3 基因敲除1% 多个位点SLC26A4 缺失5% c.2168delAMYO7A 点突变2% c.101T>CUSH1C 插入突变1% c.2167_2168insACDH23 缺失4% c.6326delGPCDH15 缺失2% c.3165delCTMC1 点突变3% c.1001G>ATECTA 点突变1% c.546C>T结果表明，在100个受试者中，GJB2、SLC26A4、CDH23和TMC1这四个基因的突变频率较高，分别为3%、5%、4%和3%。
而其他基因的突变频率较低，不超过2%。
耳聋易感基因检测试剂盒实验标准操作程序
耳聋易感基因检测试剂盒实验标准操作程序1.项目概述耳聋是一种严重影响人类生活质量的常见先天性疾病，它可以由单一基因突变或不同基因的复合突变引起，也可由环境因素（如医疗因素，环境暴露，创伤，药物等）或基因和环境两者共同作用而致。
在世界范围内，每1000名新生儿中就有1名先天性耳聋患儿，50% 患儿的耳聋与遗传因素有关。
70%的遗传性耳聋不伴有其他症状，称为非综合征性耳聋 ( nonsyndromic hearing impairment, NSHI)。
非综合征耳聋是最常见的感音神经性聋，可以分为常染色体显性（DFNA，15％~ 20%）、常染色体隐性（DFNB，80%）、性连锁（DFN X-linked，1%）和线粒体遗传性耳聋（1%）四类。
迄今为止，共有114个耳聋位点见诸报道（54个为常染色体显性位点，60个为常染色体隐性位点）。
40余个感音神经性耳聋基因和更多的综合征耳聋基因被克隆。
据中国残疾人联合会网站统计，中国6000万残疾人口中2100万为听力残疾者。
听力言语残疾者中7岁以下的聋儿达80万人并以每年新增3万聋儿的速度在增长。
研究表明，大量的迟发性听力下降患者中，亦有许多患者也是由自身的基因缺陷致病，或由于基因缺陷和多态性造成对致聋环境因素易感性增加而致病。
因此，需要开展耳聋基因检测，对于由明确检测到的基因缺陷致病的患者及早进行干预治疗与预防措施，提高患者的生活质量，降低患耳聋的风险度。
2.测定原理本试剂盒采用了PCR体外扩增和DNA反向点杂交相结合的DNA芯片技术。
采用生物素标记的引物分别对耳聋易感基因突变区域进行特异性扩增，将扩增产物与标记不同突变类型耳聋易感基因探针的尼龙膜在导流杂交仪上进行导流杂交，然后通过化学显色对结果进行判读。
3.样品采集和制备3.1. 标本采集：①成人男性和女性及患儿：采用无菌抗凝管(添加抗凝剂)，抽取静脉血2ml耳聋易感基因检测试剂盒实验标准操作程序生效日期：混匀，拧紧瓶盖并标上病人编号。
遗传性耳聋基因检测与筛查 2
遗传性耳聋
由于基因和染色体异常所致的 耳聋。这种疾病是由父母的遗 传物质发生了改变传给后代而 引起的耳聋，并且在子孙后代
中以一定数量出现。
综合征型耳聋
Syndromic hearing loss , SHL 除耳聋外，还伴随有其它组织
器官的病变。
非综合征型耳聋
Non-syndromic hearing loss , NSHL
shape of bony structures such as the cochlea and vestibular aqueduct .
Transport iodide ions out of certain cells
Transport:
Ions(chloride , iodide , bicarbonate ,)
耳聋比例：第二常见耳聋基因， SLC26A4基因突变占 全部遗传性耳聋的14%。
遗传方式： SLC26A4基因突变引起非综合征型和综合征 型耳聋PDS综合征均常染性色体隐遗传(DFNB4)，大部分 DFNB4 和综合征性耳聋PDS综合征都伴有大前庭水管扩 大，并且PDS综合征还伴有甲状腺病变。
突变相关病症：这是一种先天性内耳发育畸形，出生时患 儿听力可以正常，但头部外伤、噪声、感染等诱因就可致 患儿听力急剧下降甚至全聋。
• 1846年Thomson发表的下颌骨-面颅骨发育不全综合征最早报道了综 合征型听力损失
• 1882年,Politzer首次描述了X-连锁遗传的听力损失 • 1995年发现第一个非综合征型听力损失基因后的近十年来,这一领域出
现了飞速的进展 • 2004年,王秋菊博士发现了一个Y-连锁遗传的听力损失家系,从而进一步
丰富了遗传性听力损失的理论内容
耳聋基因！听力障碍的主要原因，我们可以检测
耳聋基因！听力障碍的主要原因，我们可以检测我国是世界上耳聋人数最多的国家，携带耳聋基因突变的人群达到7000-8000万，每年还新出生3万余名聋儿，防聋治聋工作任务艰巨。
研究表明有将近70%的耳聋致病原因由遗传因素引起。
已确定的耳聋基因多达200多种，而GJB2、SLC26A4、mtDNA12S rRNA引起的耳聋在耳聋致病原因中高达40%。
GJB2基因突变是最常见的致聋因素，可导致先天性重度、极重度聋。
SLC26A4基因突变是第二大致聋因素，可引起大前庭导水管综合征性耳聋。
由mtDNA12S rRNA A1555G和C1494T突变所导致的耳聋占1.87%。
耳聋遗传方式多样，有常染色体隐性，常染色体显性，伴性遗传等，临床上以常染色体隐性遗传多见。
GJB2、SLC26A4大部分病例表现为隐性遗传，即单个杂合不引起听力障碍，纯合或者复合杂合才表现出听力障碍。
正常听力人群中有5-6%的人有这两个基因的携带，如果夫妻双方都为携带状态，那么生育的孩子有25%的风险为纯合或者复合杂合，即表现为听力障碍。
mtDNA12S rRNA为氨基糖苷类抗生素敏感基因，有该基因突变的人群对氨基糖苷类的抗生素尤其敏感，如果接受了这类抗生素的注射，往往表现为“一针致聋”。
该基因是母系遗传，如果孕妇筛查出有该基因的突变，所生育的孩子均携带该基因的突变，以后应终身避免使用该类抗生素，所以该基因的筛查有强烈的预警作用。
我们常常遇到一对听力正常的夫妻带着一个听力障碍的孩子来咨询，为什么我们夫妻二人家里没有耳聋家族史也会生育出一个听力异常的孩子？这种情况经过基因检测，多数能检测出GJB2或者SLC26A4基因的杂合突变。
明确了基因缺陷的夫妻在生育二胎的时候就可以在怀孕16周的时候进行羊水穿刺产前诊断，通过对胎儿基因型的检测来预知二胎的听力情况。
理论上有相同致聋基因携带的夫妻每生育一胎，胎儿的患病风险为1/4，听力正常但有单杂合携带的风险为1/2，完全正常的概率为1/4。
什么是耳聋基因检测
什么是耳聋基因检测我国有两千多万聋哑人，其中遗传性耳聋占50%以上。
遗传性耳聋多为隐性遗传病，即夫妻双方均为携带者时，自身听力正常，但子女有25%的机会为聋儿；而仅当夫妻中一方为携带者时，子女听力不受影响。
目前正常人群中携带遗传性耳聋突变基因的比例是5-6%，因此听力正常的夫妻生出聋儿的现象时有发生，新生儿中耳聋发病率已达1-3‰。
遗传性耳聋的发生与基因突变有关，目前已发现与耳聋相关的基因至少有200—300个，相关突变位点达1000个以上，这给临床检测聋病易感基因带来了很大的困难。
而对中国人而言，80%的先天性耳聋患者其致病基因为：GJB2基因235delC、SLC26A4基因919-2 A>G、线粒体12Sr RNA基因1555A>G和1494C>T。
进行这四种基因的检测，可以明确大部分遗传性耳聋的原因。
进行耳聋基因检测，对于个人、家庭及下一代都十分重要。
（1）避免“一针聋”：原本听力正常的人，在使用抗生素药物后，出现听力下降或者耳聋俗称“一针聋”。
既往人们不知道是什么原因引起，现已经明确是由携带线粒体基因被氨基糖甙类药物损伤所致。
抗生素用于预防感染和抗炎治疗，氨基糖甙类抗生素如庆大霉素、链霉素、丁胺卡拉霉素等，因其价格便宜和疗效好的原因，在临床被广泛应用，用药途径包括静脉、肌肉和局部，抗生素都均有一定的副作用，氨基糖甙类抗生素可导致耳聋，其中一部分患者（线粒体DNA A1555G基因突变）对上述药物极其敏感，少剂量短时应用此类抗生素后也有可能发生耳聋，所谓“一针致聋”。
在用药前进行耳聋基因检测是非常必要的。
除了明确耳聋的病因，尚可指导携带线粒体DNA A1555G基因突变但未发病母亲家族中的亲属用药，避免他们因使用氨基糖甙类药物也发生耳聋的悲剧。
（2）减缓耳聋的发展。
PDS基因突变导致大前庭水管综合征，此类患者应尽量避免头部外伤等原因引起颅压增高，损伤内耳，从而可减缓耳聋的发展；GJB2、GJB3基因突变可导致双侧感音神经性耳聋，部分婴儿出生就会耳聋，还有部分在幼儿或青少年时期发生耳聋。
耳聋基因检测方法及原理
耳聋基因检测是通过分析个体的基因组来确定与耳聋相关的遗传变异。
以下是常见的耳聋基因检测方法及其原理：
1. Sanger测序：Sanger测序是一种传统、经典的基因测序方法。
它通过将待测样本DNA片段进行扩增，然后使用DNA 聚合酶和剪切酶对扩增产物进行测序。
通过比对测序结果与参考基因组，可以鉴定个体是否携带与耳聋相关的突变。
2. 基于芯片的检测方法：这种方法使用特制的芯片或芯片阵列来同时检测多个耳聋相关基因的突变。
芯片上包含了预先设计好的探针，这些探针可以与特定的基因片段结合。
检测过程中，待测样本DNA片段与芯片上的探针发生杂交反应，通过芯片上的信号检测技术，可以确定样本中的突变情况。
3. 下一代测序（NGS）：NGS是一种高通量、高效的基因测序技术。
它通过同时测序多个DNA分子，可以快速、准确地确定个体的基因组序列。
对于耳聋基因检测，NGS可以检测多个耳聋相关基因的突变，捕捉并分析大量的遗传变异，提供更全面的基因信息。
4. RT-PCR：逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）是一种能够检测基因表达水平的方法。
在耳聋基因研究中，RT-PCR可用来
检测耳聋相关基因在耳部组织中的表达水平，以确定是否存在异常表达。
这些方法在耳聋基因检测中发挥了重要作用。
通过对个体的基因进行检测和分析，可以帮助识别与耳聋相关的遗传突变，为早期干预和治疗提供依据，并为家族遗传咨询和基因筛查提供重要参考。
需要注意的是，耳聋是一个复杂的遗传疾病，除了单基因突变外，还可能受到环境和多基因相互作用的影响，因此仅通过基因检测无法完全解释耳聋的发生机制。
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遵循常染色体隐性遗传模式
在不同人群均具有显著的高发病率
临床表现：绝大多数为先天性重度、
极重度耳聋
2
常见的致聋基因及位点
GJB3基因特点
GJB3基因是我国本土克隆的第一个遗传疾病基因
临床症状主要与GJB3突变基因的外显度有关，表现为正 常听力、轻度耳聋、中度耳聋、重度耳聋及极重度耳聋等
荧光探针法 飞行时间质谱法
测序法
耳聋基因检测常用方法比较
方法
主要设备
检测时间 所需步骤
特点
DNA测序法
PCR仪，测序仪 ＞10H
核酸提取、PCR，金标准，操作繁琐，需
电泳、纯化、测 要专门培训，结果判读
序
复杂
限制性内切酶法 PCR仪，电泳仪 约4H ARMS-PCR法
基因芯片法
P扫C描R仪仪，杂交仪，约5H
荧光PCR法
PDS基因突变 检测 试剂盒
SLC26A4：IVS7-2A>G、1174A>T、、 1229C>T、2168A>G ；
检测位点 （10个）
通量低
厦门致善
GJB2:35delG、167delT、176-
191del16、235delC、299-300delAT
； GJB3：538C>T、547G>A；
12SrRNA：1494C>T、1555A>G；
微阵列 芯片法
微阵列 芯片法
优缺点
检测位点少 （9个） 专用仪器 价格高 耗时长
检测位点 （15个） 专用仪器
价格高 耗时长
凯普
GJB2:35delG、176-191del16、235delC、299-
耳聋易感基因检测 试剂盒
300delAT； GJB3：538C>T； SLC26A4：IVS7-2A>G、2168A>G；
4
耳聋基因诊断的方法
公司 华大医学
市场上的耳聋产品
产品名称
检测位点
检测方法
耳聋基因检测
GJB2:35delG、167delT、176191del16、235delC、299-
SLC26A4
• 先天或后天中度以上感音神经性耳聋，临 床主要表现为大前庭水管综合征 • 指导并明确患儿的日常行为及注意事项
12S rRNA
• 氨基糖苷类药物引起的感音神经性耳聋 • 避免使用耳毒性药物，并对其母系成员具 有预防作用
3
耳聋筛查的意义
耳聋基因检测的意义
• 节省财政开支 • 提高出生缺陷 防治水平 • 推进计生、卫 生服务水平
卫生部
2010年12月颁布《新生儿 听力筛查技术规范（2010 版）》修订版，旨在全国范 围内全面系统的开展新生儿 听力筛查。
随着新生儿听力筛查工作的广泛开展和临床经验的积累，逐 渐发现在新生儿听力筛查中存在局限或缺陷，使得在普遍的 新生儿听力筛查中联合耳聋基因筛查成为可能。
3
耳聋筛查的意义
新生儿筛查方案
操作简单，实时监控， 核酸提取、PCR 据扩增曲线判读，通量
低
4
耳聋基因诊断的方法
测序技术
4
耳聋基因诊断的方法
PCR-RFLP分型技术
4
耳聋基因诊断的方法
TaqMan探针分型技术
4
耳聋基因诊断的方法
Multiplex SNaPshot分型技术
4
耳聋基因诊断的方法
电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）分型技术
常见的致聋基因及位点
GJB2
GJB3
常见致聋 基因
SLC26A4
12rRNA
2
常见的致聋基因及位点
遗传性耳聋特点
遗传性耳聋突变位点具有明显的种族差异
中国人群大部分遗传性耳聋由4个基因的突变所引起： GJB2基因：先天性非综合性耳聋； GJB3基因：后天高频感音神经性耳聋； SLC26A4基因：先天或迟发性耳聋，大前庭水管综合征； 12S rRNA基因：氨基糖苷类药物性耳聋。
非综合征型耳聋（70%）
综合征型耳聋（30%）
常染色体隐性（80%） 常染色体显性（15%） X连锁遗传（1%~3%） 线粒体遗传 （＜1%）
Alport 综合征 Pendred综合征 Waardenburg综合征 BOR综合征 Usher综合征
细菌感染 病毒感染 耳毒性药物 声损伤 ……
4
国内现状
数据来源：韩冰,中国人民解放军医学院,2013
3
耳聋筛查的意义
（例数） 1600 1400 1200
天津新生儿耳聋基因筛查
未通过数据
8.89% 91.11%
6.59% 93.41%
听力未通过率 听力通过率
1000
800
600
4.02% 95.98%
5.50%
400
94.50%
200
0
结论： GJB2
3
耳聋筛查的意义
天津新生儿联合筛查数据
物理听力 筛查
通过
未通过
耳聋基因筛查
通过
52834例 (90.47%)
2248例 (3.85%)
未通过
3056例 (5.24%)
259例 (0.44%)
结论： 天津58397例新生儿筛查的结果表明，仅通过新生儿物 理听力筛查，新生儿迟发性耳聋的漏检率高达5.24%。
MtDNA 12S rRNA携带者 6例（0.2%）
86例孕妇配偶进行耳聋基因检测
夫妇同为GJB2携带者3对 夫妇同为SLC26A4携带者3对
后代耳聋风险25%
包括胎儿在内的所有母系 成员均为携带者，须终生 绝对禁止使用氨基糖苷类 抗生素，可有效避免耳聋
的发生
4对夫妇进行产前诊断 1例胎儿确诊为遗传性耳聋，家庭选择引产
3.5万 6%
我国每年新增3.5万先天性聋儿，其中90%的聋儿 出生于听力正常、没有耳聋家族史的家庭。
我国正常人群中耳聋基因的携带率高达6%，大部分 非综合症性耳聋由GJB2、GJB3、SLC26A4、12S rRNA等基因的突变引起。
1
耳聋概况
耳聋致病因素
耳聋
遗传因素 (约60%)
环境因素（约40%）
遗传性耳聋基因检测
SLC26A4：IVS7-2A>G、1174A>T、 1226G>A、1229C>T、1975G>C、2027
荧光PCR熔
试剂盒
T>A、2168A>G 、IVS15+5G>A、
解曲线法
2162C>T、749T>C、754T>C；
12S rRNA：1494C>T、1555A>G；
检测位点多 （20个） 仪器要求较高
常染色体显性遗传
遵循常染色体显性遗传模式
后天高频耳聋的常见突变基因
缺乏系统的流行病学统计数据
2
常见的致聋基因及位点
SLC26A4基因特点
SLC26A4基因又称PDS基因，编码的Pendrin蛋白主要由 疏水性氨基酸组成，参与碘/氯离子的转运。Pendrin蛋白发生 异常即可影响细胞内外阴离子的转运，从而影响声音传递而导 致听力损失。
2
常见的致聋基因及位点
GJB2基因特点
GJB2基因编码缝隙连接蛋白Cx-26，负责细胞间信号介导 和离子传递，突变的GJB2基因可能导致连接蛋白异常，进而影 响细胞间隙的连接功能，引起内耳钾离子回收障碍而致耳聋， Cx-26 对维护耳蜗的正常功能非常重要。
常染色体隐性遗传
第一个发现的非综合征性耳聋基因
GJB3 SLC24A6 12S rRNA （基因）
天津58397例新生儿筛查的结果表明，仅通过物理听力
筛查，不同基因型的漏检率均超过90%以上。
数据来源：韩冰,中国人民解放军医学院,2013
3
耳聋筛查的意义
北京耳聋出生缺陷防控效果
3000例孕妇基因筛查 （耳聋基因突变携带者160例，5.3%）
GJB2携带者105例（3.5%） SLC26A4携带者49例（1.6%）
4
耳聋基因诊断的方法
HRM技术
4
耳聋基因诊断的方法
等位基因特异PCR技术
4
公司
耳聋基因诊断的方法
市场上的耳聋产品
产品名称
检测位点
检测方法
GJB2:35delG、176-191del16、235delC、299-
九项遗传性耳聋相 关基因检测试剂盒
300delAT； GJB3：538C>T； SLC26A4：IVS7-2A>G、2168A>G；
常染色体隐性遗传
遵循常染色体隐性遗传模式，多表现 为散发
SLC26A4基因突变与大前庭水管综合 征和Pendred 综合征有密切关系
临床表现：多在学龄前发病，呈进行 性或波动性听力下降，多为重度以上感 音神经性聋
2
常见的致聋基因及位点
12S rRNA基因特点
12S rRNA突变位点位于高度保守的小核糖体亚基氨酰— tRNA结合区域，是氨基糖苷类抗生素重要的识别区域。氨基糖 苷类抗生素攻击12S rRNA突变携带者的耳蜗细胞中的线粒体， 从而对这些细胞形成组织特异性的损伤，最终导致耳聋的发生。
PCR导流杂交法
12SrRNA：1494C>T、1555A>G；
检测位点少 （9个）
4
耳聋基因诊断的方法
公司 中生北控
市场上的耳聋产品
产品名称
检测位点
四项耳聋基因 检测试剂盒
GJB2:235delC； SLC26A4：IVS7-2A>G； 12S rRNA：1494C>T、1555A>G；