补体检测及其应用安徽理工大学
最新补体实验报告
最新补体实验报告补体系统是免疫系统中的一个重要组成部分，它通过一系列级联反应增强抗体的效力，促进炎症反应，并参与清除免疫复合物和细胞残骸。
本次实验旨在评估补体系统的激活状态及其在疾病发生中的作用。
实验材料：1. 人血清样本2. 补体成分C3、C4、C5检测试剂盒3. ELISA板4. 微孔板阅读器5. 标准曲线所用的补体蛋白标准品6. 缓冲液和其他实验耗材实验方法：1. 从健康志愿者中收集血液样本，分离血清并储存于-80°C条件下直至使用。
2. 根据试剂盒说明书，对C3、C4、C5进行定量检测。
将血清样本稀释至适当浓度后，加入到预先包被有相应抗体的ELISA板中。
3. 孵育一段时间后，洗涤去除未结合的物质，加入底物并启动酶反应。
4. 在规定时间内，使用微孔板阅读器测定各孔的吸光度，根据标准曲线计算样本中补体成分的浓度。
实验结果：实验数据显示，与健康对照组相比，患有某种疾病的患者血清中C3和C4的水平显著降低，而C5水平则显著升高。
这表明补体系统的激活与疾病的发展密切相关。
讨论：补体系统的激活通常伴随着炎症反应的加剧和免疫复合物的清除。
在本研究中观察到的C3和C4水平的降低可能反映了补体成分的消耗，而C5水平的升高可能是由于补体激活途径的增强。
这些变化可能与疾病相关的炎症过程和组织损伤有关。
未来的研究需要进一步探索补体系统在疾病中的具体作用机制，并评估其作为潜在治疗靶点的可能性。
结论：本实验报告总结了补体系统在疾病中的激活状态及其潜在的临床意义。
通过定量分析补体成分的水平，我们能够更好地理解补体系统在疾病发生和发展中的角色，并为未来的治疗策略提供科学依据。
补体检测及应用
1:4
4444 4 4 3
2
0
1:8
4444 4 3 2
1
0
1:16
4444 3 3 2
±
0
1:32
4444
3
2
±
0
0
1:64
4444 2 1 0
0
0
1:128
4210 0 0 0
0
0
1:256
3100 0 0 0
0
0
1:512
0000 0 0 0
0
0
抗原对照
0000 0 0 0
0
0
注:1、2、3、4分别表示补体结合反应强度 ; 0表示全溶血,补体结合试验阴性
（二）试验方法
1.2%-5%绵羊红细胞（SRBC）的配置
2.溶血素：抗绵羊红细胞抗体，是以SRBC免疫 家兔所得的兔抗血清。试验前要进行溶血素的 稀释和滴定。
3.稀释缓冲液:PH7.2-7.4磷酸盐缓冲液 Ca+2、Mg
+2
不同稀释度溶血素的配置
最终稀释度 稀释液(ml) 稀释度
溶血素（ml）
3
0.20
1.30
4
0.25
1.25
5
0.30
1.20
6
0.35
1.15
7
0.40
1.10
8
0.45
1.05
9
0.50
1.00
10
0,00
1.50
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
补体含量测定实验报告
1. 学习补体活性测定的原理和方法。
2. 掌握补体活性的定量分析方法。
3. 了解补体含量在临床医学中的应用。
二、实验原理补体（Complement）是一组存在于人体血浆中的蛋白质，具有增强免疫应答、清除病原体等作用。
补体活性测定是评估机体免疫功能的重要指标之一。
本实验采用经典途径补体活性测定方法，通过检测溶血素在补体参与下的溶血活性，间接反映补体含量。
三、实验材料1. 试剂：溶血素、补体标准品、生理盐水、蒸馏水、抗人球蛋白抗体、酶标仪、微量移液器、比色皿等。
2. 仪器：离心机、恒温水浴箱、显微镜、离心管等。
四、实验方法1. 标准曲线的制备（1）将补体标准品稀释成不同浓度（如1:2、1:4、1:8、1:16、1:32等）。
（2）将各浓度补体标准品与等量溶血素混合，置于37℃水浴箱中孵育30分钟。
（3）加入等量抗人球蛋白抗体，混匀，置于37℃水浴箱中孵育30分钟。
（4）加入生理盐水，终止反应。
（5）在酶标仪上检测各孔的吸光度（OD值）。
（6）以OD值为纵坐标，补体浓度为横坐标，绘制标准曲线。
2. 样品检测（1）取一定量待测样品，按上述步骤进行稀释。
（2）重复上述步骤，检测样品的OD值。
（3）根据标准曲线，计算样品中补体的含量。
1. 标准曲线制备：根据实验数据绘制标准曲线，如图1所示。
图1 补体标准曲线2. 样品检测：根据标准曲线计算样品中补体的含量，结果如下表所示。
表1 样品补体含量检测结果样品编号补体含量（U/ml）1 32.52 27.03 24.54 20.05 16.5六、实验讨论1. 本实验采用经典途径补体活性测定方法，通过检测溶血素在补体参与下的溶血活性，间接反映补体含量。
2. 实验结果显示，样品中补体含量在16.5～32.5 U/ml之间，说明样品具有一定的补体活性。
3. 补体含量测定在临床医学中具有重要意义，如评估机体免疫功能、诊断某些疾病等。
七、实验总结1. 本实验成功制备了补体标准曲线，为后续样品检测提供了依据。
补体结合实验报告
补体结合实验报告引言补体是一组在机体免疫系统中发挥重要作用的蛋白质。
补体结合实验是一种常用的实验技术，用于检测体液中的抗原与相应抗体结合的能力。
本实验旨在通过补体结合实验研究抗原与抗体的相互作用及补体的参与，从而深入理解免疫学的基本原理。
实验方法1.原料准备：–受试血浆/血清样品–目标抗原–目标抗体–补体源（如兔子补体）–磷酸盐缓冲液（PBS）–96孔酶标板2.补体结合实验步骤：1.在96孔酶标板中，分别加入PBS、受试血浆/血清样品、目标抗原和目标抗体。
2.加入适量的补体源，使其与抗原和抗体发生反应。
3.孵育一定时间，使补体与抗原抗体复合物形成。
4.加入适量的底物，孵育一定时间。
5.加入停止液终止反应，测定吸光度。
实验结果通过测定补体结合实验的吸光度，我们可以得到抗原与抗体结合的程度。
实验结果如下表所示：样品吸光度样品A 0.2样品B 0.4样品C 0.6样品D 0.8样品E 1.0结果分析根据实验结果可见，随着样品的增加，吸光度也相应增加，这说明抗原与抗体结合的程度越高，吸光度也越高。
在本实验中，样品E的吸光度最高，说明样品E 中的抗原与抗体结合最为紧密。
实验讨论在补体结合实验中，补体的参与起到了重要的作用。
补体能够与抗原抗体复合物结合，从而引发一系列的免疫反应，最终导致抗原被破坏。
因此，在补体结合实验中，补体的活性和浓度是影响实验结果的重要因素。
另外，实验中的孵育时间、适量的底物添加以及反应终止液的选择等因素也会对实验结果产生一定影响。
实验结论通过补体结合实验，我们成功研究了抗原与抗体的结合程度，并且了解了补体的参与机制。
实验结果表明样品E中的抗原与抗体结合程度最高。
补体结合实验为研究体液中的免疫反应提供了一种有效的工具，并有助于深入理解免疫学的基本原理。
参考文献1.Smith, R. L., Lasky, L. A., & Broze Jr, G. J. (1982). Kinetics of theinteraction of tissue factor pathway inhibitors 1 and 2 with factor Xa. TheJournal of biological chemistry, 257(18), 2217-2221.2.Walport, M. J. (2001). Complement: first of two parts. New EnglandJournal of Medicine, 344(14), 1058-1066.3.Walport, M. J. (2001). Complement: second of two parts. New EnglandJournal of Medicine, 344(15), 1140-1144.。
临床免疫学补体检测及应用
第十九章补体检测及应用本章考点1.概述2.补体的活化途径3.有关补体测定的试验4.补体测定的应用补体是存在于人和脊椎动物正常新鲜血清及组织液中的一组具有酶样活性的球蛋白。
补体系统是补体加上其调节因子和相关膜蛋白共同组成一个反应系统，称为补体系统。
补体系统参与机体的抗感染及免疫调节，也可介导病理性反应，是体内重要的免疫系统和放大系统。
第一节补体系统的组成和性质一、命名根据l968年WH0命名委员会对补体系统进行了统一命名。
参与补体激活经典途径的固有成分按其被发现的先后顺序分别称Cl、C2、……C9。
Cl由Clq、Clr、Cls 三种亚单位组成；补体系统旁路激活途径及调节因子中另一些组分以英文大写字母表示，如B因子、D因子、P因子、H 因子等；补体调节成分多以其功能进行命名，如C1抑制物、C4结合蛋白、衰变加速因子等；补体活化后的裂解片段以该成分的符号后面加小写英文字母表示，如C3a、C3b等；具有酶活性的成分或复合物在其符号上划一横线表示，如、，灭活的补体片段在其符号前面加英文字母i表示，如iC3b等；对补体受体以其结合对象命名，如CLrR、C5Ar、对C3片段受体则用CRl、CR2……CR4表示。
二、分类构成补体系统包括30余种活性成分，按其性质和功能可以分为三大类：1.在体液中参与补体活化级联反应的各种固有成分；2.以可溶性形式或膜结合形式存在的各种补体调节蛋白；3.结合补体片段或调节补体生物效应的各种受体。
三、理化性质补体的大多数组分都是糖蛋白，且多属于β球蛋白，约占血清球蛋白总量的l0%；Clq，C8等为γ球蛋白；Cls，C9为α球蛋白。
正常血清中各组分的含量相差较大，C3含量最多，C2最低。
各种属动物间血中补体含量也不相同，豚鼠血清中含有丰富的补体，故实验室多采用豚鼠血作为补体来源。
补体性质不稳定，易受各种理化因素影响，如加热、机械振荡、酸碱、酒精等均可使其失活；在0℃～10℃下活性只保持3～4天，冷冻干燥可较长时间保持其活性；加热56℃30min可使血清中绝大部分补体组分丧失活性，称为灭活或灭能。
补体含量测定的临床应用
补体含量测定的临床应用补体系统是人体免疫系统中的一个重要组成部分，对于维持机体的免疫平衡和抵御外界病原体的侵袭起着至关重要的作用。
补体含量测定作为检测补体系统功能的重要手段，在临床应用中具有广泛的价值和意义。
一、补体系统概述补体系统是一组血清蛋白，在机体的天然免疫和获得性免疫防御中起着关键作用。
其主要功能包括参与炎症反应、溶解和清除抗原抗体复合物、促进吞噬作用和调节免疫细胞的活化等。
正常情况下，补体系统处于平衡状态，但一旦发生疾病或免疫功能异常，补体系统的活性也会发生相应的改变。
二、补体含量测定的原理和方法补体含量测定是通过检测血清中不同的补体成分的浓度和活性水平，来评估机体补体系统的功能状态。
目前常用的方法包括CH50、AP50、C3、C4等指标的检测，通过免疫沉淀法、酶联免疫吸附测定法等技术手段进行。
三、补体含量测定在临床应用中的意义1. 诊断自身免疫性疾病：补体含量测定可帮助医生鉴别类风湿关节炎、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病，为临床诊断提供重要参考。
2. 监测炎症和感染状态：炎症和感染状态下，补体系统活性常常发生改变，通过补体含量测定可以及时发现炎症性疾病和感染，指导治疗和预后评估。
3. 评估器官移植排斥反应：补体含量测定可帮助评估器官移植患者是否存在排斥反应，及时调整免疫抑制治疗，提高移植成功率。
4. 指导免疫治疗方案：一些免疫相关疾病需要使用免疫调节药物进行治疗，补体含量测定可以帮助医生确定治疗方案和调整药物剂量。
四、补体含量测定的注意事项补体含量测定是一项辅助临床诊断的手段，结果需结合临床症状和其他检查结果来综合分析和判断。
同时，在进行检测前应妥善处理血清标本，避免出现干扰因素，确保检测准确可靠。
综上所述，补体含量测定在临床应用中具有重要的意义和价值，对于指导疾病诊断、治疗和预后评估都具有重要作用。
在未来的临床实践中，补体含量测定将继续发挥其重要的作用，为患者的健康和医学进步做出积极贡献。
补体激活试验实验报告
一、实验名称：补体激活试验二、实验目的：1. 理解补体激活的原理和过程。
2. 掌握补体激活试验的基本操作步骤。
3. 学习如何通过补体激活试验检测样本中的补体活性。
4. 分析补体激活试验的结果，评估补体的功能。
三、实验日期： 2023年X月X日四、院系专业班级姓名学号：- 院系：XX学院- 专业：XX专业- 班级：XX班- 姓名：XXX- 学号：XXXXXXX五、实验原理：补体系统是免疫系统的重要组成部分，它能够通过级联反应激活，产生多种生物学效应，包括细胞溶解、炎症反应和免疫复合物的清除等。
补体激活试验旨在检测样本中补体的活性，从而评估其免疫功能。
六、实验材料：1. 样本：人血清、兔抗羊红细胞抗体、绵羊红细胞、辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗兔抗体、补体激活剂、生理盐水、pH指示剂、TMB显色剂等。
2. 仪器：酶标仪、微量移液器、离心机、恒温水浴箱等。
七、实验方法：1. 将样本和兔抗羊红细胞抗体混合，加入绵羊红细胞，在37℃水浴箱中孵育30分钟。
2. 加入补体激活剂，继续孵育30分钟。
3. 加入HRP标记的羊抗兔抗体，孵育30分钟。
4. 加入pH指示剂，调整pH值至7.4。
5. 加入TMB显色剂，避光孵育10分钟。
6. 使用酶标仪测定吸光度（OD值）。
八、实验步骤：1. 准备实验材料，将所需试剂和样本按照实验方法进行配置。
2. 将兔抗羊红细胞抗体和绵羊红细胞混合，加入样本，在37℃水浴箱中孵育30分钟。
3. 加入补体激活剂，继续孵育30分钟。
4. 加入HRP标记的羊抗兔抗体，孵育30分钟。
5. 加入pH指示剂，调整pH值至7.4。
6. 加入TMB显色剂，避光孵育10分钟。
7. 使用酶标仪测定吸光度（OD值）。
8. 分析实验结果，评估补体的活性。
九、实验结果：1. 通过酶标仪测定OD值，得到样本的吸光度值。
2. 将样本的OD值与阴性对照组和阳性对照组进行比较，分析补体的活性。
十、实验结论：1. 样本中补体的活性正常，符合生理范围。
临床免疫学检验 课件 第18章 补体的检测及应用
一 CP-CH50测定法的原理
? （一）实验原理 ?补体最主要的活性是 溶细胞作用 ，这种活性很 容易通过 溶血反应 进行 检测。补体能使溶血素特 异性结合的绵羊红细胞溶解，当溶血素和绵羊红 细胞浓度恒定时，溶血程度与补体含量和活性相 关（ sRBC- 溶血素激活补体，导致靶细胞溶解）。 ?在一个适当的、稳定的反应系统中，溶血反应 对补体的剂量依赖呈一个特殊的 S形曲线。
? 补体含量与活性的测定，对机体免疫状态的 评价和疾病的诊断具有重要意义。
一、 补体的理化特性与生物学功能
分类
根据补体系统的生物学功能，可将其分为： 补 体固有成分、补体调节蛋白、补体受体 (complement receptor, CR) 三大部分 。
补体理化性质
? 由肝细胞、巨噬细胞 以及肠粘膜上皮细胞等多种细胞产生 均为多糖蛋白，大多数电泳迁移率属 β球蛋白 ?含量约占血清球蛋白总量的10% ，其中C3含量最高、D因
C1IN 150 α
180
H
C4 180 β2 430β2 C6 128 β2 C7 120 β2
75
I因子 93
β
50
60
H因子 159 β 400~480
55
S因子 88
α
500
C8 163 γ1
200
二、补体的活化途径
经典途径
图意示径途活激条三统系体补
补体 成分
分子量
电泳 区带
血清含量参 考值
（μg/ml ）
补体 成分
分子量
电泳 区带
血清含量参 考值
（μg/ml ）
C1q 390 γ2
70
C9
79
α
240
C1r 95
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
安徽理工大学医学院（教案续页）基本内容辅助手段和时间分配备注第一节补体系统的性质与活化途径一、补体系统的组成与性质补体(complement，C)是存在于人和脊椎动物血清及组织中的一组具有酶样活性、不耐热和功能上连续反应的球蛋白，是抗体发挥溶细胞作用的必要补充条件，故称为补体系统。
补体并非单一成分，而是由补体及其调节因子和相关膜蛋白以及补体受体共同组成的补体系统。
补体系统广泛参与机体的抗感染防御反应，具有介导细胞溶解、调理吞噬、免疫黏附以及参与炎症反应引起机体免疫损伤等作用，是体内具有重要生物学功能的免疫效应和放大系统。
补体系统由30多种活性成分组成，按其性质和功能可以分为三大类：①补体系统的固有成分；②以可溶性或膜结合形式存在的补体调节蛋白；③结合补体片段或调节补体生物学效应的补体受体受体(complement receptor，CR)。
由于由于补体系统组成和功能的复杂性，其命名较为复杂，一般有以下规律可循：参与补体经典邀活途径的固有成份，按其被发现的先后次序命名为C1、C2、……C9，其中Cl由Clq、Clr、Cls三种亚单位组成；补体系统的其他成分以英文大写字母表示，如B因子、D因子、P因子、H因子；补体调节蛋白多以功能命名，如Cl抑制物、C4结合蛋白和膜协同因子蛋白等；补体活化后的裂解片段，以该成分的符号后面附加小写英文字母表示，如C3a、C3b等；具有酶活性的成分或复合物，在其符号上划一横线表示，如Ci、C—3bB—b等；灭活的补体片段，在其符号前加英文字母i表示，如iC3b。
补体性质不稳定，易受各种理化因素影响，加热、紫外线照射、机械振荡或某些添加剂等理化因素均可能破坏补体。
在0-10℃补体活性可保持3～4天，冷冻干燥可较长时间保持其活性，加热56℃30 min即被灭活，所以补体活性检测标本应尽快进行测定。
补体多为糖蛋白，且多属于B球蛋白，少数为7球蛋白或a球蛋白，其中Clq分子量最大，D因子最小。
正常血清中补体各组分含量相差较大，以C3含量最多，D因子最少。
二、补体活化途径补体系统各组分通常以非活性的酶前体形式存在，只有在某些活化物的作用下，补体各组分便产生连锁酶促反应，又称级联反应，才表现出生基本内容辅助手段和时间分配备注物活性。
补体激活过程依据其起始顺序的不同可分为三条途径：①经典途径(classical complement pathway)；②甘露聚糖结合凝集素(mannan binding lectin MBL)途径；③旁路途径(alternative pathway)。
三条激活途径具有共同的末端通路，即膜攻击复合物(membrance attack complex，MAC)的形成及其溶解细胞效应。
(一)经典激活途径补体经典途径的激活物质主要是IgGl、IgG2、IgG3和IgM类抗体与相应抗原形成的免疫复合物(immunecomplex，IC)，激活过程从Clq开始，一个Clq分子必须同时有两个以上的球形头部与Ig分子的补体结合点结合后，才能被激活。
IgG为单体，必须要有两个以上的IgG分子才能激活Clq，而IgM分子为五聚体，含5个补体结合点，故一个分子IgM与抗原结合后即可激活Clq。
整个激活过程可分为两个阶段：识别阶段和活化阶段。
1．识别阶段在抗原抗体形成复合物后，抗体发生构象改变，使Fc段的补体结合位点暴露，与Clq结合后，进一步激活Clr和Cls，Cls具有酯酶活性。
识别阶段即指C1识别免疫复合物至C1酯酶即Cls形成的阶段。
2．活化阶段活化的Cls依次裂解C4和C2，形成具有酶活性的C3转化酶(C4b2b)，后者进一步裂解口并形成C5转化酶(C—4b2—b3b)，C5转化酶可裂解C5，引起共同的末端效应。
此即经典途径的活化阶段。
(二)甘露聚糖结合凝集素(MBL)激活途径MBL激活途径的激活物是在病原微生物感染早期体内炎症反应诱导肝细胞产生的急性期蛋白，如甘露聚糖结合凝集素(MBL)和C反应蛋白，而不是抗原抗体形成的免疫复合物。
正常人血清中MBL水平极低，炎症急性期反应时，其水平明显升高，MBL在结构上与Clq类似。
MBL先与细菌的甘露糖残基结合，然后与丝氨酸蛋白酶结合，形成MBL相关的丝氨酸蛋白酶(MBL-associated serine protease，MASP)，MASP具有与活化的Clq同样的生物活性，可水解C4和C2，继而形成C3转化酶，其后的反应过程与经典途径相同，依次激活其他成分。
(三)旁路激活途径在旁路途径中C1、C4和晓不参与，而是从激活C3开始，故又称为C3途径或替代途径。
旁路途径的激活物质主要是细菌细胞壁的脂多糖、酵母多糖和凝聚的IgA和IgG4，主要通过为补体的活化反应提供固相接触界面而实现其激活作用。
这种激活方式不依赖于特异性抗体的形成，从而在感染早分配备注期为机体提供有效的防御机制。
1．旁路C3转化酶的形成C3是启动旁路途径并参与其后级联反应的关健分子。
在经典途径中产生或自发产生的C3b可与B因子结合，血清中的D因子将结合状态的B因子裂解成Ba和Bb，Ba释放入液相，Bb仍附着于C3b，形成C—3bB—b复合物即旁路途径的C3转化酶。
C3转化酶具有酶活性，可裂解C3，但它极不稳定，极易被H因子和I因子作用而灭活，血清中备解素(properdin，P因子)可与之结合，使其稳定。
2．C5转化酶的形成旁路途径的激活物如细菌的脂多糖或酵母多糖出现时，C3转化酶裂解C3产生的C3b分子可与C3转化酶结合形成新的复合物C—3bn—Bb或C—3bnB—bP，即C5转化酶，C5转化酶裂解C5，至此以后的过程与经典途径相同，引起共同的末端效应。
3．C3正反馈循环补体活化过程中形成的C3转化酶不断使C3裂解，生成大量的C3b，新产生的C3b又可与B因子结合，扩大进一步的活化，构成了一个正反馈的循环圈，放大了补体的激活作用。
由于经典途径产生的C3b也能触发旁路途径，故旁路途径C3转化酶对经典途径补体活化也是一种放大机制。
(四)补体激活的共同末端效应三条补体激活途径形成的C5转化酶均可将C5裂解为C5a和C5b，C5b与细胞膜结合，继而结合C6和凹形成C5b67复合物，该复合物吸附C8，又形成C5b678复合物，当12～19分子的C9加入后，便形成C5b6789复合物，即膜攻击复合体(MAC)，MAC最终导致细胞内渗透压降低，细胞溶解。
在体内生理条件下三条途径密切相关，都以C3活化为中心。
第二节补体总活性测定一、血清补体总活性测定(CH50试验)(一)实验原理绵羊红细胞与相应抗体即溶血素结合的复合物可激活血清中的补体导致红细胞肿胀而发生溶血，溶血的程度与补体的活性呈正相关，但非直线关系。
在一个适当的、稳定的反应系统中，溶血反应对补体的剂量依赖呈一特殊的S形曲线。
以溶血百率为纵坐标，相应血清量为横坐标，可见有轻微溶血和接近完全溶血时，补体量的变化不敏感，但在30％～70％之间两者近似直线关系，此阶段对补体量的变化非常敏感，故实验中常以50％分配备注溶血作为最敏感的判定终点，以引起50％溶血所需要的最小补体量为一个CH50 U，可计算出待测血清中总的补体溶血活性，以CH50 U／ml表示。
(二)实验方法取新鲜血清标本进行检测，按表19-2的要求在各管中加入试剂和反应物，与配制的50％溶血的标准管一起放入37℃水浴箱温育30 min后2 500 r／min离心5 min，选择溶血程度与标准管最为相近的两管，在分光光度计上检测(波长542 nlTl、0．5 ClTI比色杯)OD值，以最接近标准管OD值的一管为终点管，然后按公式计算CH50值：CH50(U／m1)=(1／血清用量)×稀释倍数。
50％溶血标准管的配制：2％绵羊红细胞悬液2 r11l加8 ml蒸馏水，混匀，即为全溶血管，取全溶血管12 nll加巴比妥缓冲液2 ml即为50％溶血管。
(三)方法评价及临床意义方法简便快速，但敏感性较低，主要反映补体经典激活途径的溶血功能，所反应的是补体Cl～C9成分的综合水平。
CH50正常参考值50～100 U／ml。
①增高见于急性炎症、组织损伤、恶性肿瘤等；②降低见于急性肾小球肾炎、SLE活动期、RA、亚急性细菌性心内膜炎、严重肝病。
二、旁路途径溶血活性(APH50)测定(一)实验原理未致敏的家兔红细胞可激活血清中的B因子，引起旁路途径活化，导致兔红细胞溶解。
当红细胞量一定时，在规定反应时间内，溶血程度与血清中参与旁路激活的补体量及活性呈正比。
与CH50测定相似，以引起50％溶血所需要的最小补体量为一个APH50 U，可计算出待检血清中补体旁路激活途径的溶血活性，以APH50 U／ml表示。
(二)方法评价本法主要反映旁路激活途径的溶血功能，其结果与C3、B因子、P因子、D因子及C5～C9各组分量及活性有关。
第三节单个补体成分的测定根据世界卫生组织和国际免疫学会报告，在30多种补体成分中，主要检测C3、C4、Clq、B因子和C1酯酶抑制物。
测定方法可分为溶血法和免疫化学法。
一、免疫溶血法溶血法主要根据抗原与其特异性抗体结合后可激活补体的经典途径，导致细胞溶解。
该方法中抗原为SRBC、抗体为兔或马抗SRBC的抗体，即溶血索。
将两者组合作为指示系统参与反应。
试验中有两组补体参与，一组分配备注是作为实验反应系统的补体，选用或制备缺少待测成分的试剂，此类试剂，选用先天缺乏某单一补体成分的动物或人血清，也可利用化学试剂人为灭活正常血清中某种成分制备缺乏该成分的补体试剂；另一组为待测血清中的补体，当加入待测血清，使原来缺乏的成分得到补偿，补体成分齐全级联反应恢复，产生溶血。
溶血程度与待测补体成分活性有关，仍以50％溶血为终点。
免疫溶血法检测的是某补体的活性，而不是具体的含量。
检测待测标本中某一单个补体成分是否缺乏，可以帮助诊断补体某个成分缺失或其含量正常但无溶血活性的先天性补体缺陷。
该法无需特殊仪器设备，快速，但敏感性较低，影响因素多。
二、免疫化学法免疫化学法分为单向免疫扩散法、火箭免疫电泳、透射比浊法和散射比浊法。
前两种方法多用手工操作，匆响因素多，结果重复性差，已逐渐淘汰。
后两种方法根据补体与相应的抗体结合形成复合物，仪器通过对复合物产生的光散射或透射信号进行自动检测而得出所测补体的浓度，此法方法简单、重复性和特异性好，可反映所测补体成分的含量，进行标准化流程管理、是目前补体的主要检测方法。
第四节补体结合试验如果反应系统中存在待测的抗体(或抗原)，则抗原抗体发生反应后可结合补体，再加入指示系统时，由于反应液中已没有游离的补体而不出现溶血，此为补体结合试验阳性。
如果反应系统中不存夸待测的抗体(或抗原)，则液体中有游离的补体，与加入的指示系统结合出现溶血，此为补体结合试验阴性。