第十九章 补体检测及应用
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5.补体检测及应用
* 若补体激活发生在脂质双层上,则可形成
C5b～9(膜攻击复合物，MAC）。
* 若补体激活发生在没有靶细胞的血清中,则有
关的补体成分可同S蛋白形成亲水的、无溶细 胞活性的SC5b～7、SC5b～8及SC5b～9。 1. MAC的组装
2. MAC的效应机制
补体系统三条激活途径的不同点
比较项目 激活物质 经典途径 Ag与Ab (IgM 、 IgG3、 IgG1、gG2) 形成的复合物 C1--C9 MBL途径 炎症期产生 的蛋白与病 原体结合之 后 旁路途径 细菌脂多糖 凝聚的IgG4 IgA等
C反应蛋白也可与C1q结合并使之激活，然后 依次激活补体其他成分。
补体活化的旁路途径
* 不经C1、C4、C2途径,而由C3、B因子、
D因子参与的激活过程 * 某些细菌、革兰氏阴性菌的内毒素、酵母多 糖、葡聚糖、凝聚的IgA和IgG4以及其他哺乳 动物细胞，均可不通过C1q的活化，而直接"激 活"旁路途径。 * 这种激活方式可不依赖于特异性抗体的形成。
0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.5
0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
全溶 全溶 全溶 全溶 大部分溶 微溶 不溶 不溶 不溶
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• 温育反应后，完全溶血的试管内液体红色透 明，不溶血的管内液体浑浊；放置后可见红 细胞沉淀，上清无色透明。按照以上标准， 以产生完全溶血的最高稀释管的溶血素稀释 倍数为溶血素的效价。例如表19-6中的溶血 素效价应为1:4000。 以豚鼠血清作补体来源时，应考虑到个体差异。 为了确保血清中补体的有效活性，必须取3只 以上豚鼠的血清混合后使用。
C5b～9(膜攻击复合物，MAC）。
* 若补体激活发生在没有靶细胞的血清中,则有
关的补体成分可同S蛋白形成亲水的、无溶细 胞活性的SC5b～7、SC5b～8及SC5b～9。 1. MAC的组装
2. MAC的效应机制
补体系统三条激活途径的不同点
比较项目 激活物质 经典途径 Ag与Ab (IgM 、 IgG3、 IgG1、gG2) 形成的复合物 C1--C9 MBL途径 炎症期产生 的蛋白与病 原体结合之 后 旁路途径 细菌脂多糖 凝聚的IgG4 IgA等
C反应蛋白也可与C1q结合并使之激活，然后 依次激活补体其他成分。
补体活化的旁路途径
* 不经C1、C4、C2途径,而由C3、B因子、
D因子参与的激活过程 * 某些细菌、革兰氏阴性菌的内毒素、酵母多 糖、葡聚糖、凝聚的IgA和IgG4以及其他哺乳 动物细胞，均可不通过C1q的活化，而直接"激 活"旁路途径。 * 这种激活方式可不依赖于特异性抗体的形成。
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全溶 全溶 全溶 全溶 大部分溶 微溶 不溶 不溶 不溶
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• 温育反应后，完全溶血的试管内液体红色透 明，不溶血的管内液体浑浊；放置后可见红 细胞沉淀，上清无色透明。按照以上标准， 以产生完全溶血的最高稀释管的溶血素稀释 倍数为溶血素的效价。例如表19-6中的溶血 素效价应为1:4000。 以豚鼠血清作补体来源时，应考虑到个体差异。 为了确保血清中补体的有效活性，必须取3只 以上豚鼠的血清混合后使用。
补体结合试验的原理及应用
补体结合试验的原理及应用1. 原理介绍补体结合试验是一种常见的实验方法，用于检测血清或体液中的溶菌酶的活性。
其原理基于抗原-抗体反应和补体激活的过程。
在一个完整的补体结合试验中，通常需要包括三个基本步骤：补体激活、免疫复合物的形成和补体结合。
1.1 补体激活补体是一组血浆蛋白，在机体的免疫防御机制中起着关键的作用。
当体内存在抗原时，抗原与特异性抗体结合形成免疫复合物。
这些免疫复合物可以激活补体系统。
补体分为经典途径和替代途径，其中经典途径是由免疫复合物激活补体的主要途径之一。
1.2 免疫复合物的形成免疫复合物是由抗原与抗体结合形成的复合物。
当抗原与抗体结合形成免疫复合物后，免疫复合物会引起补体激活。
1.3 补体结合补体结合是指补体成分与免疫复合物结合的过程。
当补体的C1q成分与免疫复合物结合后，C1q会激活补体的经典途径，进而引发连续的级联反应，最终形成一个膜攻击复合物（MAC），导致细胞膜的破坏。
2. 应用领域补体结合试验在医学检验、疾病诊断等领域具有广泛的应用价值。
以下是一些补体结合试验的应用领域：2.1 免疫疾病的诊断补体结合试验可用于检测自身免疫性疾病和某些免疫缺陷病的诊断。
例如，系统性红斑狼疮患者血清中的补体结合活性通常较低。
2.2 感染性疾病的诊断补体结合试验可用于检测某些感染性疾病的诊断，如流行性感冒、风疹、百日咳等。
在感染过程中，补体会参与抗体介导的免疫反应，通过补体结合试验可以检测到相关抗体和免疫复合物的形成。
2.3 肿瘤标志物的检测补体结合试验对某些肿瘤标志物的检测也具有一定的应用价值。
例如，前列腺特异性抗原（PSA）是早期发现前列腺癌的一个重要指标，通过补体结合试验可以检测血清中的PSA水平。
2.4 药物敏感性的评估补体结合试验可以用于评估药物的敏感性。
例如，某些抗肿瘤药物的疗效可能与补体结合试验的结果相关，通过补体结合试验可以评估药物对免疫复合物的效应。
3. 结语补体结合试验作为一种重要的实验方法，可以应用于医学检验、疾病诊断等多个领域。
补体检测及应用
1:4
4444 4 4 3
2
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3100 0 0 0
0
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1:512
0000 0 0 0
0
0
抗原对照
0000 0 0 0
0
0
注:1、2、3、4分别表示补体结合反应强度 ; 0表示全溶血,补体结合试验阴性
（二）试验方法
1.2%-5%绵羊红细胞（SRBC）的配置
2.溶血素：抗绵羊红细胞抗体，是以SRBC免疫 家兔所得的兔抗血清。试验前要进行溶血素的 稀释和滴定。
3.稀释缓冲液:PH7.2-7.4磷酸盐缓冲液 Ca+2、Mg
+2
不同稀释度溶血素的配置
最终稀释度 稀释液(ml) 稀释度
溶血素（ml）
3
0.20
1.30
4
0.25
1.25
5
0.30
1.20
6
0.35
1.15
7
0.40
1.10
8
0.45
1.05
9
0.50
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10
0,00
1.50
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0.5
临床免疫学补体检测及应用
第十九章补体检测及应用本章考点1.概述2.补体的活化途径3.有关补体测定的试验4.补体测定的应用补体是存在于人和脊椎动物正常新鲜血清及组织液中的一组具有酶样活性的球蛋白。
补体系统是补体加上其调节因子和相关膜蛋白共同组成一个反应系统，称为补体系统。
补体系统参与机体的抗感染及免疫调节，也可介导病理性反应，是体内重要的免疫系统和放大系统。
第一节补体系统的组成和性质一、命名根据l968年WH0命名委员会对补体系统进行了统一命名。
参与补体激活经典途径的固有成分按其被发现的先后顺序分别称Cl、C2、……C9。
Cl由Clq、Clr、Cls 三种亚单位组成；补体系统旁路激活途径及调节因子中另一些组分以英文大写字母表示，如B因子、D因子、P因子、H 因子等；补体调节成分多以其功能进行命名，如C1抑制物、C4结合蛋白、衰变加速因子等；补体活化后的裂解片段以该成分的符号后面加小写英文字母表示，如C3a、C3b等；具有酶活性的成分或复合物在其符号上划一横线表示，如、，灭活的补体片段在其符号前面加英文字母i表示，如iC3b等；对补体受体以其结合对象命名，如CLrR、C5Ar、对C3片段受体则用CRl、CR2……CR4表示。
二、分类构成补体系统包括30余种活性成分，按其性质和功能可以分为三大类：1.在体液中参与补体活化级联反应的各种固有成分；2.以可溶性形式或膜结合形式存在的各种补体调节蛋白；3.结合补体片段或调节补体生物效应的各种受体。
三、理化性质补体的大多数组分都是糖蛋白，且多属于β球蛋白，约占血清球蛋白总量的l0%；Clq，C8等为γ球蛋白；Cls，C9为α球蛋白。
正常血清中各组分的含量相差较大，C3含量最多，C2最低。
各种属动物间血中补体含量也不相同，豚鼠血清中含有丰富的补体，故实验室多采用豚鼠血作为补体来源。
补体性质不稳定，易受各种理化因素影响，如加热、机械振荡、酸碱、酒精等均可使其失活；在0℃～10℃下活性只保持3～4天，冷冻干燥可较长时间保持其活性；加热56℃30min可使血清中绝大部分补体组分丧失活性，称为灭活或灭能。
补体检测及其应用安徽理工大学
补体检测及其应用安徽理工大学
安徽理工大学医学院
（教案续页）
基本内容辅助手段和时间分配备注
第一节补体系统的性质与活化途径
一、补体系统的组成与性质
补体(complement，C)是存在于人和脊椎动物血清及组织中的一组具有酶样活性、不耐热和功能上连续反应的球蛋白，是抗体 发挥溶细胞作用的必要补充条件，故称为补体系统。补体并非单一成分，而是由补体及其调节因子和相关膜蛋白以及补体受体 共同组成的补体系统。补体系统广泛参与机体的抗感染防御反应，具有介导细胞溶解、调理吞噬、免疫黏附以及参与炎症反应 引起机体免疫损伤等作用，是体内具有重要生物学功能的免疫效应和放大系统。
补体系统由30多种活性成分组成，按其性质和功能可以分为三大类：①补体系统的固有成分；②以可溶性或膜结合形式存在的 补体调节蛋白；
③结合补体片段或调节补体生物学效应的补体受体受体(complement receptor，CR)。
由于由于补体系统组成和功能的复杂性，其命名较为复杂，一般有以下规律可循：参与补体经典邀活途径的固有成份，按其被 发现的先后次序命名为C1、C2、……C9，其中Cl由Clq、Clr、Cls三种亚单位组成；补体系统的其他成分以英文大写字母表 示，如B因子、D因子、P因子、H因子；补体调节蛋白多以功能命名，如Cl抑制物、C4结合蛋白和膜协同因子蛋白等；补体 活化后的裂解片段，以该成分的符号后面附加小写英文字母表示，如C3a、C3b等；具有酶活性的成分或复合物，在其符号上 划一横线表示，如Ci、C—3bB—b等；灭活的补体片段，在其符号前加英文字母i表示，如iC3b。补体性质不稳定，易受各种 理化因素影响，加热、紫外线照射、机械振荡或某些添加剂等理化因素均可能破坏补体。在0-10℃补体活性可保持3～4天， 冷冻干燥可较长时间保持其活性，加热56℃30 min即被灭活，所以补体活性检测标本应尽快进行测定。
安徽理工大学医学院
（教案续页）
基本内容辅助手段和时间分配备注
第一节补体系统的性质与活化途径
一、补体系统的组成与性质
补体(complement，C)是存在于人和脊椎动物血清及组织中的一组具有酶样活性、不耐热和功能上连续反应的球蛋白，是抗体 发挥溶细胞作用的必要补充条件，故称为补体系统。补体并非单一成分，而是由补体及其调节因子和相关膜蛋白以及补体受体 共同组成的补体系统。补体系统广泛参与机体的抗感染防御反应，具有介导细胞溶解、调理吞噬、免疫黏附以及参与炎症反应 引起机体免疫损伤等作用，是体内具有重要生物学功能的免疫效应和放大系统。
补体系统由30多种活性成分组成，按其性质和功能可以分为三大类：①补体系统的固有成分；②以可溶性或膜结合形式存在的 补体调节蛋白；
③结合补体片段或调节补体生物学效应的补体受体受体(complement receptor，CR)。
由于由于补体系统组成和功能的复杂性，其命名较为复杂，一般有以下规律可循：参与补体经典邀活途径的固有成份，按其被 发现的先后次序命名为C1、C2、……C9，其中Cl由Clq、Clr、Cls三种亚单位组成；补体系统的其他成分以英文大写字母表 示，如B因子、D因子、P因子、H因子；补体调节蛋白多以功能命名，如Cl抑制物、C4结合蛋白和膜协同因子蛋白等；补体 活化后的裂解片段，以该成分的符号后面附加小写英文字母表示，如C3a、C3b等；具有酶活性的成分或复合物，在其符号上 划一横线表示，如Ci、C—3bB—b等；灭活的补体片段，在其符号前加英文字母i表示，如iC3b。补体性质不稳定，易受各种 理化因素影响，加热、紫外线照射、机械振荡或某些添加剂等理化因素均可能破坏补体。在0-10℃补体活性可保持3～4天， 冷冻干燥可较长时间保持其活性，加热56℃30 min即被灭活，所以补体活性检测标本应尽快进行测定。
补体检测及应用
对照
0 0 0 0 0 0 0 0 0
1:64的抗原作为一个单位 2~4个单位，即1:32~ 1:16 正式试验 1:32的抗体作为一个单位 4个单位，即 1:8
3、待测标本
最好：采集血标本后及时分离血清并尽快 检测 保存：-20 ℃，检测不同时采集的2份以上 血清
实验前灭活补体和某些非特异性反应因素，
示，以50%溶血为判断终点，称为CH50(50%
complement hemolysis)
应用不同的激活物可活化不同的补体途径 基于经典途径的CP-CH50（临床常规项目） 应用于C3旁路检测的AP-CH50（尚未列入检验
常规）
1、CH50测定法的原理
在适当、 稳定的反应 系统中，溶 血反应与补 体的剂量依 赖关系呈现 “S”形曲线
待测血清 抗原 补体
N.S 溶血素 SRBC
0.2mL
0.2mL … 0.2mL 0.2mL 0.2mL … 0.2mL 0.4mL 0.2mL …摇匀，37℃，水浴15min 0.2mL 0.2mL 0.2mL 0.2mL 0.2mL 0.2mL 0.2mL 0.2mL
… … 0.2mL
摇匀，37℃，水浴15min
复习题
1.已知补体的活化有三条途径，试述三条激
活途径有何不同？
2. 补体结合试验的原理和方法？
3.血清总补体容血活性（CH50）测定的原理
及方法？
4. 免疫溶血法测定补体单个成分的原理？
50%溶血标准管
第一步 2%绵羊红细 胞 0.50ml 第二步 1.80%NaCl 溶液2.0ml 第三步 2%绵羊红细 胞0.50ml
2、已知抗原或抗体的滴定：通过CFT试验
抗原和抗体效价的方阵滴定
第十九章补体检测及应用
经典途径
2、补体激活的替代途径
替代途径的激活剂：某些细菌、革兰氏阴 性菌的内毒素、细菌的脂多糖、肽聚糖、 葡聚糖、酵母多糖、凝聚的IgG4和IgA聚 合物等。
激活过程：C3是启动替代途径并参与其 后级联反应的关键分子。 经典途径产生或自发产生的C3b与B因子 结合，血清D因子的作用，形成C3转化 酶（ C3bBb ）， 不稳定，与血 清 P 因 子 结 合 则 形 成 稳 定 的 C3 转 化 酶 （ C3bBbP ）； C3转化酶水解C3，形 成C5转化酶（ C3bnBb 或 C3bnBbP ）；
免疫调节作用 C3可参与捕捉并固定抗原，通过与抗原提呈细 胞上的CR1及CR2受体结合，使抗原易被APC处 理和提呈 作用于多种免疫细胞，调节细胞的增殖分化： C3b与B细胞表面CR1结合，促进B细胞增殖分 化 参与调节多种免疫细胞效应功能：NK结合C3b 增强ADCC作用
第二节 补体总活性测定
激活的特点： 可以识别自己与非己：C3b的中止与 激活 替代途径是补全权系统重要的放大机 制：替代途径C3转化酶对经典途径补 体的活化是一种放大机制。
3、MBL途径
激活物：病原微生物感染所诱导产生的急性期蛋白 ，如 MBL、CRP等。
激活过程：MBL与细菌的甘露糖残基结合；再与丝氨酸蛋 白 酶 结 合 ， 形 成 MBL 相 关 的 丝 氨 酸 蛋 白 酶 （ MASP-1 、 MASP-2），MASP具有与活化的C1q同样的生物学活性，可 水解C4和C2，形成C3转化酶；其后过程与经典途径相同。
甘 露 聚 糖 结 合 凝 集 素 （ mannan binding tectin，MBL） 途 径 ， 简 称 MBL途径：MBL结合至细菌而启动激 活的途径，此途径不依赖于抗原抗体 复合物的形成，在感染的早期就能发 挥免疫防御效应，为急性期蛋白途径。
医学免疫学：第5 第6 第19 章 补体、补体检测及细胞因子 (2)
C4bp的抑制作用（C4 Binding Protein)
结合C4b，抑制C4b与C2的结合，防止C3转化酶的组装。 促进I因子对C4b的蛋白水解
四. 补体的生物学作用
在细胞表面激活并形成 MAC，介导溶细胞效应； 激活过程中产生的水解片段，介导各种生物学效应
1. 溶菌、溶解病毒和细胞的细胞毒作用
CH50(U/ml)=1/血清用量*稀释倍数
取10只试管，分别编号，按照下表加入各试剂
试管号 BBS 1：20稀释血清 2％SRBC 2U溶血素
补体溶血活性
1 1.40
0.10
0.5
0.5
200
2 1.35
0.15
0.5
0.5
133
置
3 1.30
0.20
0.5
0.5
100
37℃
4 1.25
0.25
2. 调理作用 C3b、C4b
3. 免疫粘附 C3b
4. 炎症介质作用 过敏毒素 C3a、C5a 趋化因子 C5a
第十九章 补体检测及应用
补体总活性测定
• 补体最主要的活性是溶细胞作用 • 特异性抗体+红细胞→激活补体→溶血 • 在适当的、稳定的反应体系中，溶血反应
对补体的剂量依赖呈一特殊的S形曲线
阳性
阴性
阴性
阳性
二、方法评价
➢优 点
灵敏度高、所测定的抗体水平可达0.05μg/ml ， 出现交叉反应的机率较小， 可检测的抗原或抗体范围广泛， 无需特殊设备、结果容易观察、试验条件要求不高
➢现 状
影响的因素多、各种制剂需要繁琐的稀释和滴定等， 现代化、自动化抗原抗体检测方法的不断涌现，补体结合试验逐 渐被遗弃 补体结合试验作为一种经典的免疫方法类型，其设计和原理仍对 新型免疫方法的建立有着启迪和指导作用
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A.C3
B.C4
C.C5
D.C6
E.C7
3.关于 CH50 试验,不正确的是 A.方法简便,快速 B. 缓冲液 pH 和离子强度增高,补体活性下降 C.补体的溶血活性与反应体积成反比 D. 敏感性低 E.过量钙、镁离子可促进溶血反应 4.关于补体结合试验,错误的是 A.敏感性高 B.特异性强 C.易出现交叉反应 D.反应结果明显 E.试验条件要求低 5.作补体结合试验时,不需作 A.抗原抗体方阵滴定 B.溶血素滴定 C.补体滴定 D.绵羊红细胞滴定 E.血清在试验前应 56℃加热 30min 6.补体结合试验用的补体,不应该 A.选用几只适龄家兔血清混合 B.保存于 4℃共当日使用 C.尽量避免振荡 D.于实验前滴定效价 E.实验时,使用 2 个实用单位 (三)、B1 型题(配伍题) 问题 1～3
E.选择前带现象 22.CFT 检测系统中血清作 56℃30 分钟处理,目的在于 A. 破坏血清中的抗羊红细胞成分 B.增强血清中抗体同抗原结合的能力 C.破坏补体,去除一些非特异反应 D. 提高血清中抗体的激活状态 E.增加补体活性 23.溶血反应的检测试剂中加入少量的钙、镁离子的目的是 A. 有助于补体的激活 B.维持合适的 pH C.抑制细菌的生长 D.抑制溶血反应 E. 保持溶液的等渗压 24.在补体参与的溶血试验中,应使用 A.一个单位的溶血素 B.二个单位的溶血素 C.三个单位的溶血素 D.四个单位的溶血素 E.五个单位的溶血素 25.在溶血素滴定时,下述哪种情况定为一个溶血单位 A.全溶的最高稀释度 B.全不溶的最高稀释度 C.大部分溶的最高稀释度 D.小部分溶的最高稀释度 E.微溶的最高稀释度 26.下列哪项是正确的 A.缓冲液的种类与补体溶血活性无关 B.缓冲液 pH 值增加,补体溶血活性上升 C.缓冲液离子强度增加,补体溶血活性下降 D.缓冲液中钙、镁离子增多,对溶血无影响 E.钙、镁离子对稳定溶血系统无作用 (二)、A1 型题(否定型) 1.下列关于补体的特点,不正确的是 A.补体的性质不稳定 B.标本保存应置于-20℃以下 C.在 0~10℃活性保持 3~4 天 D.加热 56℃30min 灭活 E.不受各种理化因素的影响 2.补体激活替代途径的参与成分哪项除外
C.5~6% D.7~9% E.10%
8.溶血素即 A.SRBC B. 抗原 C.补体 D.IC E.抗 SRBC 抗体 9.经典途径激活血清补体作用最强的 IgG 是 A.IgG1 B.IgG2 C.IgG3 D.IgG4 E.IgM 10.补体系统经典激活途径与旁路激活途径的汇合点是 A. C5 B. C4 C.C3 D. C2 E. C1 11.C3a 和 C5a 的生物学作用有 A.杀菌作用 B.过敏毒素作用 C.中和病毒作用 D.调理作用 E.吞噬功能 12.能使补体而不使抗体灭活的温度和作用时间是 A.37℃,1h B. 45℃,30min C. 56℃,30min D. 60℃,30min E.80℃,30min 13.C3b 的抑制因子是 A.I、H 因子 B. H 因子, 过敏毒素灭活素 C.过敏毒素灭活素,S 蛋白 D.H 因子,S 蛋白 E. I 因子,过敏毒素灭活素
2.试述 CFT 的原理及结果解释。 ①补体能与任何抗原抗体复合物结合，不与单独的抗原或抗体结合，且补体与抗原抗体复合 物结合后不再游离。 ②补体结合试验参与成分共 5 种，分属 3 个系统。 ③若反应系统中抗原与抗体相对应，则发生结合，进一步结合补体；加入指示系统后不发生 溶血是为阳性，反之则发生溶血是为阴性。 ④补体结合试验在抗原、抗体的定性与定量检测以及抗原性差异分析中都有着广泛的用途。
1. ①介导细胞溶解 ②调理吞噬 ③免疫黏附 ④参与炎症反应引起机体免疫损伤 2.补体按其性质与功能分为三类,即 ①补体系统的固有成分,共 9 种,按先后次序分别命名为 C1-C9 ②调节和控制补体系统活化的成分,多以其功能命名,如 C1 抑制物 ③补体受体(CR),以其结合对象来命名 3.补体激活的经典途径是以 IgG(1,2,3)或 IgM 类抗体结合抗原后的免疫复合物为主要激活剂, 激活过程从 C1q 开始的,补体 C1~C9 共 11 种成分全部参与的活化途径。经典途径的活化过 程可分为识别、活化和膜攻击三个阶段。 4. ①CH50 试验测定经典途径总补体溶血活性,所反应的是补体 9 种成分的综合水平。 ②方法简便、快速，但敏感性低，补体的溶血活性除与试验中反应体 积成反比外，还与反应所用缓冲液的 pH、离子强度、钙镁浓度、SRBC 数量和反应温度有 一定关系。 ③钙镁离子可稳定溶血系统，但过量反而抑制溶血反应。 5.三个系统是：反应系统、补体系统、指示系统 五种成分是：已知抗原（或抗体）与待测抗体（或抗原），补体，SRBC 与抗 SRBC 抗体。 六、论述题 1.两种补体激活途径的比较 ________________________________________________________________ 经典途径 替代途径
第十九章 补体检测及应用 一、选择题
（一）、A1 型题（标准型） 1.正常血清中,补体含量最低的是 A.C1q B. C5aR C. C1rR D.Df D.C4 E.C5
3.补体激活的经典途径的始动分子是 A.C1s B.C1r C. C1q D.Df E.C5aR 4.补体激活的替代途径的始动分子是 A.C1q B.C1r C.C1s D.C3b E.C3d 5.在 CH50 试验中,溶血程度与补体含量的关系为 A.直线 B.抛物线 C.双曲线 D.S 形曲线 E.正态分布 6.CH50 试验是以什么作为终点指标 A. 100%溶血 B. 80%溶血 C.75%溶血 D. 50%溶血 E. 25%溶血 7.SRBC 悬液浓度一般为 A.1~2% B.2~5%
14.补体占总蛋白的含量为 A. 25%± B. 15%±
C.10%± D. 1%± E. 0.5%± 15.C4 的激活剂是 A.C1q B.C1r C.C1s D.C1qrs E.C5 16.识别抗原抗体复合物的补体是 A .C1s B.C1r C. C1q D.C2 E.C1qrs 17.当抗体与相应的抗原结合后,在何种情况下方能激活补体 A.CH1 的补体结合点暴露 B.CH2 的补体结合点暴露 C.CH3 的补体结合点暴露 D.借助抗原作桥梁 E.直接同补体结合 18.IgA、IgD 和 IgE 之所以不能与 C1q 结合,是因为 A.分子结构简单 B. VH 无补体结合点 C.Fab 段结构与补体相差甚远 D. Fc 段无补体结合点 E.VL 无补体结合点 19.常规的补体滴定法是以什么来定 “实用单位” A.以发生全溶的补体最少用量 B.以发生全溶的补体最高稀释度 C.以发生全不溶的补体最高稀释度 D. 以微不溶的补体最低用量 E. 以发生全溶的补体最低稀释度 20.补体滴定时,若 1:60 的 0.12ml 补体为 1 个“实用单位”,则 0.2ml2 个“实用单位”为 A. 1:60 B. 1:50 C.1:40 D. 1:30 E. 1:25 21.CFT 前的抗原抗体方阵滴定的目的在于 A.选择抗原抗体最适比例 B.避免抗原抗体复合物太多 C.使抗原抗体复合物结合补体的量最多 D.使抗原抗体复合物形成最少
________________________________________________________________ 激活物 抗原抗体（IgG1、2、3，IgM）复合物 脂多糖、酵母多糖等 参与成分 C1~C9 C3、C5~C9，B、D、P 因子 始动分子 C1q C3b 所需离子 Ca2+、Mg2+ Mg2+ C3 转化酶 C4b2a C3bBb C5 转化酶 C4b2a3b C3b）nBb 或（C3b）nBbP ————————————————————————————————
A.Hf
B. CR2 C.S 蛋白
D. If
E.CR5 1.能使 C5b~7 失去膜结合活性的是 2.能结合液相反应物,清除 IC 的是 二、填空题
1.补体的激活途径主要有两种,一种为_________,一种为_________。 2.参与补体结合试验的三个系统是__________,________和________。 3.补体最主要的活性是_________ 4.CH50 试验测定的是_________ 5.合成补体的主要细胞是_________ 6.CH50 法测定总补体活性,以_________为报告方式 7.具有调节 B 细胞功能,介导 EBV 感染的是_________ 三、判断题
1.补体经典途径的活化过程可分为识别、活化和膜攻击三个阶段。 2.补体结合试验阳性是指出现溶血现象。 四、名词解释
1. CH50 试验 2. 补体(Complement,C) 五、简答题
1.简述补体的生物学功能。 2.简述补体的分类。 3.简要回答补体激活的经典途径。 4.简述 CH50 试验的方法学评价。 5.简述 CFT 的三个系统、五种成分。 六、论述题
1.试比较两种补体激活途径。 2.试述 CFT 的原理及结果解释。
标准答案 一、选择题
（一）、A1 型题（标准型） 1.D 2.C 3.C 4.D 5.D 6.D 7.B 8.E 9.C 10.C 11.B 12.C 13.A 14.C 15.C 16.E 17.B 18.D 19.A 20.B 21.A 22.C 23.A 24.B 25.A 26.C (二)、A1 型题（否定型） 1.E 2.B 3.E 4.C 5.D 6.A (三)、B1 型题(配伍型) 1.C 2.E 二、填空题
1.经典途径,替代途径 2.反应系统,补体系统,指示系统 3..溶细胞作用 4.总补体溶血活性 5.巨噬细胞 6.U/ml CR2 三、判断题
1.√ 2.х 四、名词解释
1. CH50 试验:即补体 50%溶血试验,是根据补体能使致敏的 SRBC 发生溶血的原理,而建立起
的测定补体活性的试验,该试验以 50%溶血作为终点指标,因此称为 CH50 试验。 2. 补体:是一组存在于人和脊椎动物血清及组织液中具有酶样活性、不耐热和功能上连续反 应的糖蛋白，是抗体发挥溶细胞作用的必要补充条件，故称为补体。 五、简答题
B.C4
C.C5
D.C6
E.C7
3.关于 CH50 试验,不正确的是 A.方法简便,快速 B. 缓冲液 pH 和离子强度增高,补体活性下降 C.补体的溶血活性与反应体积成反比 D. 敏感性低 E.过量钙、镁离子可促进溶血反应 4.关于补体结合试验,错误的是 A.敏感性高 B.特异性强 C.易出现交叉反应 D.反应结果明显 E.试验条件要求低 5.作补体结合试验时,不需作 A.抗原抗体方阵滴定 B.溶血素滴定 C.补体滴定 D.绵羊红细胞滴定 E.血清在试验前应 56℃加热 30min 6.补体结合试验用的补体,不应该 A.选用几只适龄家兔血清混合 B.保存于 4℃共当日使用 C.尽量避免振荡 D.于实验前滴定效价 E.实验时,使用 2 个实用单位 (三)、B1 型题(配伍题) 问题 1～3
E.选择前带现象 22.CFT 检测系统中血清作 56℃30 分钟处理,目的在于 A. 破坏血清中的抗羊红细胞成分 B.增强血清中抗体同抗原结合的能力 C.破坏补体,去除一些非特异反应 D. 提高血清中抗体的激活状态 E.增加补体活性 23.溶血反应的检测试剂中加入少量的钙、镁离子的目的是 A. 有助于补体的激活 B.维持合适的 pH C.抑制细菌的生长 D.抑制溶血反应 E. 保持溶液的等渗压 24.在补体参与的溶血试验中,应使用 A.一个单位的溶血素 B.二个单位的溶血素 C.三个单位的溶血素 D.四个单位的溶血素 E.五个单位的溶血素 25.在溶血素滴定时,下述哪种情况定为一个溶血单位 A.全溶的最高稀释度 B.全不溶的最高稀释度 C.大部分溶的最高稀释度 D.小部分溶的最高稀释度 E.微溶的最高稀释度 26.下列哪项是正确的 A.缓冲液的种类与补体溶血活性无关 B.缓冲液 pH 值增加,补体溶血活性上升 C.缓冲液离子强度增加,补体溶血活性下降 D.缓冲液中钙、镁离子增多,对溶血无影响 E.钙、镁离子对稳定溶血系统无作用 (二)、A1 型题(否定型) 1.下列关于补体的特点,不正确的是 A.补体的性质不稳定 B.标本保存应置于-20℃以下 C.在 0~10℃活性保持 3~4 天 D.加热 56℃30min 灭活 E.不受各种理化因素的影响 2.补体激活替代途径的参与成分哪项除外
C.5~6% D.7~9% E.10%
8.溶血素即 A.SRBC B. 抗原 C.补体 D.IC E.抗 SRBC 抗体 9.经典途径激活血清补体作用最强的 IgG 是 A.IgG1 B.IgG2 C.IgG3 D.IgG4 E.IgM 10.补体系统经典激活途径与旁路激活途径的汇合点是 A. C5 B. C4 C.C3 D. C2 E. C1 11.C3a 和 C5a 的生物学作用有 A.杀菌作用 B.过敏毒素作用 C.中和病毒作用 D.调理作用 E.吞噬功能 12.能使补体而不使抗体灭活的温度和作用时间是 A.37℃,1h B. 45℃,30min C. 56℃,30min D. 60℃,30min E.80℃,30min 13.C3b 的抑制因子是 A.I、H 因子 B. H 因子, 过敏毒素灭活素 C.过敏毒素灭活素,S 蛋白 D.H 因子,S 蛋白 E. I 因子,过敏毒素灭活素
2.试述 CFT 的原理及结果解释。 ①补体能与任何抗原抗体复合物结合，不与单独的抗原或抗体结合，且补体与抗原抗体复合 物结合后不再游离。 ②补体结合试验参与成分共 5 种，分属 3 个系统。 ③若反应系统中抗原与抗体相对应，则发生结合，进一步结合补体；加入指示系统后不发生 溶血是为阳性，反之则发生溶血是为阴性。 ④补体结合试验在抗原、抗体的定性与定量检测以及抗原性差异分析中都有着广泛的用途。
1. ①介导细胞溶解 ②调理吞噬 ③免疫黏附 ④参与炎症反应引起机体免疫损伤 2.补体按其性质与功能分为三类,即 ①补体系统的固有成分,共 9 种,按先后次序分别命名为 C1-C9 ②调节和控制补体系统活化的成分,多以其功能命名,如 C1 抑制物 ③补体受体(CR),以其结合对象来命名 3.补体激活的经典途径是以 IgG(1,2,3)或 IgM 类抗体结合抗原后的免疫复合物为主要激活剂, 激活过程从 C1q 开始的,补体 C1~C9 共 11 种成分全部参与的活化途径。经典途径的活化过 程可分为识别、活化和膜攻击三个阶段。 4. ①CH50 试验测定经典途径总补体溶血活性,所反应的是补体 9 种成分的综合水平。 ②方法简便、快速，但敏感性低，补体的溶血活性除与试验中反应体 积成反比外，还与反应所用缓冲液的 pH、离子强度、钙镁浓度、SRBC 数量和反应温度有 一定关系。 ③钙镁离子可稳定溶血系统，但过量反而抑制溶血反应。 5.三个系统是：反应系统、补体系统、指示系统 五种成分是：已知抗原（或抗体）与待测抗体（或抗原），补体，SRBC 与抗 SRBC 抗体。 六、论述题 1.两种补体激活途径的比较 ________________________________________________________________ 经典途径 替代途径
第十九章 补体检测及应用 一、选择题
（一）、A1 型题（标准型） 1.正常血清中,补体含量最低的是 A.C1q B. C5aR C. C1rR D.Df D.C4 E.C5
3.补体激活的经典途径的始动分子是 A.C1s B.C1r C. C1q D.Df E.C5aR 4.补体激活的替代途径的始动分子是 A.C1q B.C1r C.C1s D.C3b E.C3d 5.在 CH50 试验中,溶血程度与补体含量的关系为 A.直线 B.抛物线 C.双曲线 D.S 形曲线 E.正态分布 6.CH50 试验是以什么作为终点指标 A. 100%溶血 B. 80%溶血 C.75%溶血 D. 50%溶血 E. 25%溶血 7.SRBC 悬液浓度一般为 A.1~2% B.2~5%
14.补体占总蛋白的含量为 A. 25%± B. 15%±
C.10%± D. 1%± E. 0.5%± 15.C4 的激活剂是 A.C1q B.C1r C.C1s D.C1qrs E.C5 16.识别抗原抗体复合物的补体是 A .C1s B.C1r C. C1q D.C2 E.C1qrs 17.当抗体与相应的抗原结合后,在何种情况下方能激活补体 A.CH1 的补体结合点暴露 B.CH2 的补体结合点暴露 C.CH3 的补体结合点暴露 D.借助抗原作桥梁 E.直接同补体结合 18.IgA、IgD 和 IgE 之所以不能与 C1q 结合,是因为 A.分子结构简单 B. VH 无补体结合点 C.Fab 段结构与补体相差甚远 D. Fc 段无补体结合点 E.VL 无补体结合点 19.常规的补体滴定法是以什么来定 “实用单位” A.以发生全溶的补体最少用量 B.以发生全溶的补体最高稀释度 C.以发生全不溶的补体最高稀释度 D. 以微不溶的补体最低用量 E. 以发生全溶的补体最低稀释度 20.补体滴定时,若 1:60 的 0.12ml 补体为 1 个“实用单位”,则 0.2ml2 个“实用单位”为 A. 1:60 B. 1:50 C.1:40 D. 1:30 E. 1:25 21.CFT 前的抗原抗体方阵滴定的目的在于 A.选择抗原抗体最适比例 B.避免抗原抗体复合物太多 C.使抗原抗体复合物结合补体的量最多 D.使抗原抗体复合物形成最少
________________________________________________________________ 激活物 抗原抗体（IgG1、2、3，IgM）复合物 脂多糖、酵母多糖等 参与成分 C1~C9 C3、C5~C9，B、D、P 因子 始动分子 C1q C3b 所需离子 Ca2+、Mg2+ Mg2+ C3 转化酶 C4b2a C3bBb C5 转化酶 C4b2a3b C3b）nBb 或（C3b）nBbP ————————————————————————————————
A.Hf
B. CR2 C.S 蛋白
D. If
E.CR5 1.能使 C5b~7 失去膜结合活性的是 2.能结合液相反应物,清除 IC 的是 二、填空题
1.补体的激活途径主要有两种,一种为_________,一种为_________。 2.参与补体结合试验的三个系统是__________,________和________。 3.补体最主要的活性是_________ 4.CH50 试验测定的是_________ 5.合成补体的主要细胞是_________ 6.CH50 法测定总补体活性,以_________为报告方式 7.具有调节 B 细胞功能,介导 EBV 感染的是_________ 三、判断题
1.补体经典途径的活化过程可分为识别、活化和膜攻击三个阶段。 2.补体结合试验阳性是指出现溶血现象。 四、名词解释
1. CH50 试验 2. 补体(Complement,C) 五、简答题
1.简述补体的生物学功能。 2.简述补体的分类。 3.简要回答补体激活的经典途径。 4.简述 CH50 试验的方法学评价。 5.简述 CFT 的三个系统、五种成分。 六、论述题
1.试比较两种补体激活途径。 2.试述 CFT 的原理及结果解释。
标准答案 一、选择题
（一）、A1 型题（标准型） 1.D 2.C 3.C 4.D 5.D 6.D 7.B 8.E 9.C 10.C 11.B 12.C 13.A 14.C 15.C 16.E 17.B 18.D 19.A 20.B 21.A 22.C 23.A 24.B 25.A 26.C (二)、A1 型题（否定型） 1.E 2.B 3.E 4.C 5.D 6.A (三)、B1 型题(配伍型) 1.C 2.E 二、填空题
1.经典途径,替代途径 2.反应系统,补体系统,指示系统 3..溶细胞作用 4.总补体溶血活性 5.巨噬细胞 6.U/ml CR2 三、判断题
1.√ 2.х 四、名词解释
1. CH50 试验:即补体 50%溶血试验,是根据补体能使致敏的 SRBC 发生溶血的原理,而建立起
的测定补体活性的试验,该试验以 50%溶血作为终点指标,因此称为 CH50 试验。 2. 补体:是一组存在于人和脊椎动物血清及组织液中具有酶样活性、不耐热和功能上连续反 应的糖蛋白，是抗体发挥溶细胞作用的必要补充条件，故称为补体。 五、简答题