补体检测及应用
补体结合试验的原理及应用
补体结合试验的原理及应用1. 原理介绍补体结合试验是一种常见的实验方法，用于检测血清或体液中的溶菌酶的活性。
其原理基于抗原-抗体反应和补体激活的过程。
在一个完整的补体结合试验中，通常需要包括三个基本步骤：补体激活、免疫复合物的形成和补体结合。
1.1 补体激活补体是一组血浆蛋白，在机体的免疫防御机制中起着关键的作用。
当体内存在抗原时，抗原与特异性抗体结合形成免疫复合物。
这些免疫复合物可以激活补体系统。
补体分为经典途径和替代途径，其中经典途径是由免疫复合物激活补体的主要途径之一。
1.2 免疫复合物的形成免疫复合物是由抗原与抗体结合形成的复合物。
当抗原与抗体结合形成免疫复合物后，免疫复合物会引起补体激活。
1.3 补体结合补体结合是指补体成分与免疫复合物结合的过程。
当补体的C1q成分与免疫复合物结合后，C1q会激活补体的经典途径，进而引发连续的级联反应，最终形成一个膜攻击复合物（MAC），导致细胞膜的破坏。
2. 应用领域补体结合试验在医学检验、疾病诊断等领域具有广泛的应用价值。
以下是一些补体结合试验的应用领域：2.1 免疫疾病的诊断补体结合试验可用于检测自身免疫性疾病和某些免疫缺陷病的诊断。
例如，系统性红斑狼疮患者血清中的补体结合活性通常较低。
2.2 感染性疾病的诊断补体结合试验可用于检测某些感染性疾病的诊断，如流行性感冒、风疹、百日咳等。
在感染过程中，补体会参与抗体介导的免疫反应，通过补体结合试验可以检测到相关抗体和免疫复合物的形成。
2.3 肿瘤标志物的检测补体结合试验对某些肿瘤标志物的检测也具有一定的应用价值。
例如，前列腺特异性抗原（PSA）是早期发现前列腺癌的一个重要指标，通过补体结合试验可以检测血清中的PSA水平。
2.4 药物敏感性的评估补体结合试验可以用于评估药物的敏感性。
例如，某些抗肿瘤药物的疗效可能与补体结合试验的结果相关，通过补体结合试验可以评估药物对免疫复合物的效应。
3. 结语补体结合试验作为一种重要的实验方法，可以应用于医学检验、疾病诊断等多个领域。
补体检测及应用
1:4
4444 4 4 3
2
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0
0
抗原对照
0000 0 0 0
0
0
注:1、2、3、4分别表示补体结合反应强度 ; 0表示全溶血,补体结合试验阴性
（二）试验方法
1.2%-5%绵羊红细胞（SRBC）的配置
2.溶血素：抗绵羊红细胞抗体，是以SRBC免疫 家兔所得的兔抗血清。试验前要进行溶血素的 稀释和滴定。
3.稀释缓冲液:PH7.2-7.4磷酸盐缓冲液 Ca+2、Mg
+2
不同稀释度溶血素的配置
最终稀释度 稀释液(ml) 稀释度
溶血素（ml）
3
0.20
1.30
4
0.25
1.25
5
0.30
1.20
6
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8
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9
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10
0,00
1.50
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0.5
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0.5
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0.5
补体检测及应用题库8-4-10
补体检测及应用题库8-4-10问题：[单选]不依赖特异性抗体形成，在感染早期为机体提供有效防御机制的补体途径是（）A.经典途径B.MBL途径C.旁路途径D.内源性途径E.外源性途径不依赖特异性抗体形成，在感染早期为机体提供有效防御机制的补体途径是旁路途径。
问题：[单选]血清补体水平降低可见于（）A.G-细菌感染B.心肌梗死C.糖尿病D.大叶性肺炎E.妊娠在细菌感染，特别是G-细菌感染时，常因补体旁路途径的活化而引起血清补体水平的过度降低；而心肌梗死、甲状腺炎、大叶性肺炎、糖尿病、妊娠等情况下，血清补体水平常升高。
山东11选5 https://问题：[单选]关于补体活化途径的说法错误的是（）A.经典途径是以抗原抗体结合C1q启动激活的途径B.旁路途径的活化是从C4开始，由B因子、D因子参与激活的过程C.补体活化表现出的生物活性为溶细胞效应D.MBL途径的诱导物是急性时相蛋白产生的MBL和C反应蛋白等E.补体活化过程中产生的水解片段也参与机体的免疫调节和炎症反应旁路途径的活化是从C3开始。
问题：[单选]溶血反应对补体的剂量依赖曲线是（）A.直线B.双曲线C.抛物线D.S形曲线E.对数曲线溶血反应对补体的剂量依赖曲线是特殊的S形曲线。
问题：[单选]关于补体成分检测说法错误的是（）A.检测单个补体含量的方法包括免疫溶血法和免疫化学法B.免疫溶血法的指示系统包括SRBC抗原和抗体溶血素C.免疫化学法检测补体含量必须使用过量的补体抗体D.免疫溶血法检测补体成分快速但敏感性低E.自动免疫比浊法是目前临床免疫检测中的主要检测方法免疫溶血法检测的是单个补体成分的活性而不是含量。
问题：[单选]补体含量降低的疾病不包括以下哪种（）A.心肌梗死B.类风湿关节炎C.革兰阴性细菌感染D.SLEE.自身免疫性溶血性贫血心肌梗死可观察到补体值的升高。
临床免疫学补体检测及应用
第十九章补体检测及应用本章考点1.概述2.补体的活化途径3.有关补体测定的试验4.补体测定的应用补体是存在于人和脊椎动物正常新鲜血清及组织液中的一组具有酶样活性的球蛋白。
补体系统是补体加上其调节因子和相关膜蛋白共同组成一个反应系统，称为补体系统。
补体系统参与机体的抗感染及免疫调节，也可介导病理性反应，是体内重要的免疫系统和放大系统。
第一节补体系统的组成和性质一、命名根据l968年WH0命名委员会对补体系统进行了统一命名。
参与补体激活经典途径的固有成分按其被发现的先后顺序分别称Cl、C2、……C9。
Cl由Clq、Clr、Cls 三种亚单位组成；补体系统旁路激活途径及调节因子中另一些组分以英文大写字母表示，如B因子、D因子、P因子、H 因子等；补体调节成分多以其功能进行命名，如C1抑制物、C4结合蛋白、衰变加速因子等；补体活化后的裂解片段以该成分的符号后面加小写英文字母表示，如C3a、C3b等；具有酶活性的成分或复合物在其符号上划一横线表示，如、，灭活的补体片段在其符号前面加英文字母i表示，如iC3b等；对补体受体以其结合对象命名，如CLrR、C5Ar、对C3片段受体则用CRl、CR2……CR4表示。
二、分类构成补体系统包括30余种活性成分，按其性质和功能可以分为三大类：1.在体液中参与补体活化级联反应的各种固有成分；2.以可溶性形式或膜结合形式存在的各种补体调节蛋白；3.结合补体片段或调节补体生物效应的各种受体。
三、理化性质补体的大多数组分都是糖蛋白，且多属于β球蛋白，约占血清球蛋白总量的l0%；Clq，C8等为γ球蛋白；Cls，C9为α球蛋白。
正常血清中各组分的含量相差较大，C3含量最多，C2最低。
各种属动物间血中补体含量也不相同，豚鼠血清中含有丰富的补体，故实验室多采用豚鼠血作为补体来源。
补体性质不稳定，易受各种理化因素影响，如加热、机械振荡、酸碱、酒精等均可使其失活；在0℃～10℃下活性只保持3～4天，冷冻干燥可较长时间保持其活性；加热56℃30min可使血清中绝大部分补体组分丧失活性，称为灭活或灭能。
补体结合试验的原理及应用
补体结合试验的原理及应用补体结合试验（Complement fixation test，CFT）是一种常用的免疫学试验，广泛应用于临床、动物卫生、微生物学和生化学等领域。
本文将介绍补体结合试验的原理、方法和应用。
一、原理CFT是通过检测抗原-抗体结合后是否影响补体作用来确定是否存在特定抗体的一种免疫学试验。
抗原与特异性抗体结合后，形成免疫复合物，该复合物可以与补体结合并激活补体，从而引发一系列补体反应。
而在CFT中，引入两种补体成分：被偶联的抗原与补体激活剂（即受体），以及补体底物（即被激活的补体）。
被测血清中如有特异性抗体，可与被偶联的抗原发生结合，使得补体激活剂发生变化，无法与补体底物相结合。
因此，测得补体底物与补体激活剂之间无结合，即补体未被激活，则可证明血清中存在特定抗体。
二、方法1. 试剂与设备（1）被测血清：取血后离心获取血清；（2）受体：把抗原与抗体偶联在羊红细胞表面，用0.1M苏打缓冲液洗涤去除未偶联的抗原和抗体；（3）抗原与特异性抗体：比如，细菌、病毒、药物等；（4）补体：常见的有裂解法（Lysed Sheep Erythrocytes，LSE）和搅拌法（Z牛补体）；（5）试管/小瓶/平板：供反应使用；（6）显微镜、离心机等。
2. 步骤（1）制备试剂：适量的抗原和抗体分别和受体在适宜条件下以一定比例混合，制成一定浓度的大量受体；另需要制备几重稀有度的抗原和抗体梯度稀释物；（2）标准样品制备：以已知抗体滴定值的血清为标准样品，依据其相对滴定值制成浓度为10U的配制液；（3）加样：将待检血清、标准样品及对照血清加到小瓶中，每组加4支小瓶；（4）加试剂：加入适量偶联抗原及补体；（5）反应：置平板中，在37℃恒温箱内孵育数小时，待反应结束；（6）结果判定：利用显微镜观察血清和补体底物与补体激活剂是否结合，判断血清中抗体是否存在。
三、应用CFT可以测定某一种特定抗体的存在与否，具有特异性、敏感性和准确性等优点。
第十九章补体检测及应用
经典途径
2、补体激活的替代途径
替代途径的激活剂：某些细菌、革兰氏阴 性菌的内毒素、细菌的脂多糖、肽聚糖、 葡聚糖、酵母多糖、凝聚的IgG4和IgA聚 合物等。
激活过程：C3是启动替代途径并参与其 后级联反应的关键分子。 经典途径产生或自发产生的C3b与B因子 结合，血清D因子的作用，形成C3转化 酶（ C3bBb ）， 不稳定，与血 清 P 因 子 结 合 则 形 成 稳 定 的 C3 转 化 酶 （ C3bBbP ）； C3转化酶水解C3，形 成C5转化酶（ C3bnBb 或 C3bnBbP ）；
免疫调节作用 C3可参与捕捉并固定抗原，通过与抗原提呈细 胞上的CR1及CR2受体结合，使抗原易被APC处 理和提呈 作用于多种免疫细胞，调节细胞的增殖分化： C3b与B细胞表面CR1结合，促进B细胞增殖分 化 参与调节多种免疫细胞效应功能：NK结合C3b 增强ADCC作用
第二节 补体总活性测定
激活的特点： 可以识别自己与非己：C3b的中止与 激活 替代途径是补全权系统重要的放大机 制：替代途径C3转化酶对经典途径补 体的活化是一种放大机制。
3、MBL途径
激活物：病原微生物感染所诱导产生的急性期蛋白 ，如 MBL、CRP等。
激活过程：MBL与细菌的甘露糖残基结合；再与丝氨酸蛋 白 酶 结 合 ， 形 成 MBL 相 关 的 丝 氨 酸 蛋 白 酶 （ MASP-1 、 MASP-2），MASP具有与活化的C1q同样的生物学活性，可 水解C4和C2，形成C3转化酶；其后过程与经典途径相同。
甘 露 聚 糖 结 合 凝 集 素 （ mannan binding tectin，MBL） 途 径 ， 简 称 MBL途径：MBL结合至细菌而启动激 活的途径，此途径不依赖于抗原抗体 复合物的形成，在感染的早期就能发 挥免疫防御效应，为急性期蛋白途径。
补体检测及应用练习题
补体检测及应用一、A11、CH50试验测定的是A、总补体量B、总补体浓度C、总补体溶血活性D、总补体体积E、单个补体2、补体结合试验的指示系统包括A、特异性抗体和补体B、特异性抗原和补体C、红细胞和溶血素D、加热灭活的病人血清E、特异性抗原和抗体3、以免疫黏附作用清除免疫复合物的补体活性片段是A、C3aB、C2aC、C3bD、C5bE、Clq4、MBL激活途径发生在A、感染刚刚形成B、抗体产生之后C、脂多糖的激活D、感染早期的急性期反应E、感染恢复期5、不属于血清学反应的是A、凝集反应B、溶血反应C、溶菌反应D、补体结合反应E、Ⅳ型变态反应6、补体受体4（CR4）是哪一种受体A、C4bB、C4aC、iC3bD、C5aE、C1q7、可抑制MAC形成的补体膜调节因子是A、S蛋白B、H因子C、DAFD、MCPE、HRF8、C1多聚体复合物形成时，必须有下述哪种无机离子参与A、Ca2+B、Mg2+C、Cu2+D、Fe3+E、Fe2+9、总补体活性测定试验的原理属于A、溶血反应B、凝集反应C、沉淀反应D、补体结合反应E、中和反应10、以下哪项与补体结合试验无关A、抗原B、抗体C、补体D、溶血素E、酶11、补体活化过程中，产生具有趋化因子活性的片段是A、C3aB、C5aC、C4aD、C4bE、ic3b12、补体经典途径的激活顺序是A、C3→C5→C9B、C1→C2→C4→C3→C5→C9C、C1→C4→C2→C3→C5→C9D、C1→C2→C3→C4→C4→C9E、C1→C3→C2→C4→C5→C913、在总补体活性测定时，所测定的是A、红细胞与补体结合的能力B、补体溶解红细胞的活性C、补体溶解致敏红细胞的活性D、溶血素与补体结合的能力E、特异性抗体与红细胞结合的能力14、补体经典途径的主要激活物是A、免疫复合物B、酵母多糖C、细菌脂多糖D、肽聚糖E、凝聚的IgA15、补体结合试验的叙述，下列哪项是错误的A、新鲜豚鼠血清作为补体B、补体、SRBC和溶血素应预先定量C、出现溶血反应即为反应阴性D、不出现溶血反应即为反应阳性E、待测定系统中的抗原与抗体相对应，形成复合物激活补体，出现溶血16、下列补体组分中参与吞噬调理作用的是A、C1qB、C1C、C3b+C4bD、C5E、C1γ17、检测总补体活性，采用50%溶血试验是因为A、50%溶血试验比100%溶血试验简单B、以50%溶血作为终点较100%溶血作为终点更敏感C、以50%溶血作为终点较100%溶血作为终点可节约时间D、以50%溶血作为终点较100%溶血作为终点更为节省成本E、50%溶血作为终点好判断18、关于补体旁路激活途径的叙述，错误的是A、激活物质是细胞壁成分B、从C3激活开始C、发挥效应比经典途径早D、亦有激活效应的扩大E、旁路途径在感染后期发挥作用19、补体结合试验结果阴性时出现A、血凝B、血凝抑制C、溶血D、不溶血E、沉淀20、在经典激活途径中，补体识别的亚单位是A、C1B、C2C、C3D、CAE、C921、关于补体的叙述，下列哪项是正确的A、血清中大多数补体成分均以无活性的酶前状态存在B、多数补体分子属于γ球蛋白C、补体固有成分对热稳定D、补体的含量因抗原刺激而增加E、补体各成分均由肝细胞合成。
补体结合实验的原理及应用
补体结合实验的原理及应用补体结合实验是一种重要的免疫学实验方法，用于检测和分析体内是否存在补体结合抗原或抗体。
该实验基于补体系统的特性，通过补体的激活和结合来检测特定的抗原抗体反应，从而可以诊断疾病、研究免疫反应机制和评价疫苗效果等。
补体系统是人体免疫系统的一个重要部分，通过一系列的酶解反应参与机体的免疫防御和炎症反应。
补体分子主要由补体蛋白C1至C9及其他一些辅助蛋白组成，其中关键的酶解反应包括：免疫复合物形成、补体激活、补体蛋白C3和C5的裂解和形成膜攻击复合物等。
补体结合实验的基本原理是，通过将需要检测的抗原和抗体与补体体系相结合，利用补体活性变化的特性来检测抗原抗体结合情况。
主要可以分为免疫沉淀法和溶血试验两种方法。
免疫沉淀法是在试验体系中加入补体体系和待检测的抗原抗体反应物质，通过观察补体的激活和沉淀来检测抗原抗体结合情况。
一般使用的试剂有天门冬氨酸-苏氨酸盐缓冲液（VERONALTAMATE）和尿话藤素盐酸盐（PORCIMAERIN HYDROCHLORIDE）。
实验中，当抗原和抗体结合后形成免疫复合物时，会激活补体系统并发生酶解反应，导致沉淀形成。
通过观察沉淀的形成程度，可以判断抗原和抗体的结合情况。
溶血试验是通过测量红细胞发生溶血的程度来评估抗原抗体结合情况。
在试验中，待检测的抗原与抗体发生结合，形成免疫复合物后，加入补体体系和靶标红细胞，补体激活后会引发红细胞溶解现象。
通过测量补体激活所导致的红细胞溶解程度，可以评估抗原抗体结合的阳性与否。
补体结合实验在临床医学和科研方面有广泛的应用。
在疾病诊断方面，补体结合实验常用于检测体内的抗体水平，如乙型肝炎、风湿热、系统性红斑狼疮等疾病的诊断与鉴定。
同时，补体结合实验还可用于评估药物或疫苗的免疫效果，通过观察抗原抗体反应产生的补体结合情况，来判断药物或疫苗的治疗效果。
此外，补体结合实验还被广泛应用于免疫学研究领域，用于研究免疫反应机制、筛查特异性抗原和抗体等。
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试管内加入的试剂量（ml）
1:60
补体
0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 _
主要检测的单个补体成分：C3、C4、C1q、B因子 和C1脂酶抑制物
方法：免疫溶血法 测定补体的溶血活性 免疫化学法 测定补体的含量
一、免疫溶血法
定义：抗原与特异性抗体结合后激活补体的经典途径，
导致红细胞溶解。当缺乏某种补体成分时，加入指
示系统，不能使补体连续激活，不发生溶血；再加
入待测血清，使原来缺乏的成分得到补偿，补体成
分齐全，级联反应恢复，产生溶血，溶血程度与以
待测补体成分活性有关，以50%溶血为终点。
（1）指示系统：兔抗血清致敏SRBC
（2）实验反应系统的补体：选用或制备缺乏
某单一补体成分动物或人血清的试剂 （3）待测血清：待测血清标本中的补体
测定成分 补体来源 处理方法 去除成分 指示系统 结果 加入待测血清补充成分 结果 溶血途径
C4 豚鼠血清 氨水 C4 致敏红细胞 不溶血 C4 溶血 经典途径
B 因子 正常人血清 加热 B 因子 兔红细胞 不溶血 B 因子 溶血 旁路途径
二、免疫化学法
单向免疫扩散法 火箭免疫电泳 透射比浊法 散射比浊法
第四节 补体结合试验
一、试验原理 补体结合试验三个系统： 反应系统：已知抗原或抗体与待测抗体或抗原 补体系统：豚鼠血清 指示系统：SRBC与溶血素结合成为致敏绵羊红 细胞
缓冲液
0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
2%SRBC
结果
0.1 全溶血 0.1 全溶血 0.1 37℃ 全溶血 0.1 30分钟 全溶血 0.1 大部分溶血 0.1 微溶血 0.1 不溶血 0.1 不溶血 0.1 不溶血
以最高稀释度的溶血素仍能产生完全溶 血为最大有效反应管(1：4000)即为1个单 位，一般试验使用2个单位(1：2000)
4. 50%溶血标准管配制
试剂 2%SRBC DH2O 1.8%Nacl 2%SRBC 用量 0.5ml 2.0ml 2.0ml 0.5ml 50% 100% 溶血程度
5.血清总补体50%溶血活性测定(ml)
试管号 1：20稀释3 4 5 6 7 8 9 10
按以下公式求50%溶血的总补体值
1 CH50（U/ml）= ×稀释倍数 血清用量 总补体活性参考范围:50-100 U /ml
(三)方法评价
CH50测定经典途径总补体溶血活性
反应的是补体9种成分综合水平
缓冲液PH 、离子强度、Ca+2、Mg +2浓度各 个环节严加控制。
第三节 单个补体成分的测定
0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0.50 0,00
1.40 1.35 1.30 1.25 1.20 1.15 1.10 1.05 1.00 1.50
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
图19-3
二、试验方法
（一）试剂的制备 1.抗原适当纯化 2.抗原和抗体的滴定:选择抗原与抗体均呈 强阳性反应（100%不溶血）的最高稀释 度作为抗原和抗体的效价，即一个单位 由方阵滴定表可见1:64的抗原和1:32的抗 体为一个单位,正式试验抗原用2-4个单位, 抗体用4个单位
（二） 替代途径（旁路途经）
激活剂是微生物的菌体多糖、内毒素、
蛋白水解酶、IgG4和IgA聚合物等，参与 的成分C3、C5-C9、B因子、D因子、P 因子。
两种补体激活途径的比较
经典途径
激活物 参与成分 始动分子 所需离子 抗原抗体复合物 C1-C9 C1q Ca+2、Mg +2
替代途径
脂多糖、酵母多糖 C3、C5-C9 B、D、P因子 C3b Mg +2
1:2000
1:3000
0.2
0.4
1:1000
1:1000
0.2
0.2
1:4000
1:5000 1:6000 1:8000 1:10000
0.2
0.8 0.2 0.2 0.2
1:2000
1:1000 1:3000 1:4000 1:5000
0.2
0.2 0.2 0.2 0.2
溶血素的滴定
管号 溶血素 稀释度 溶血素
物，膜协同因子蛋白等 补体受体：补体C3的受体，CR1-5等
补体系统功能
参与机体的抗感染防御反应，介导细胞 溶解，调理吞噬，免疫黏附以及参与炎 症反应引起的机体的免疫损伤，是体内 具有生物学功能的免疫效应系统和放大 系统
二 、主要两种补体的活化途径
（一）经典途径：是以IgG或IgM类抗体 结合抗原后的免疫复合物为主要的激活 剂，补体的11种成分全部参与的途经。 分为识别、活化和膜攻破三个阶段。
溶血反应程度与补体的剂量依赖呈S型曲线。
（二）试验方法
1.2%-5%绵羊红细胞（SRBC）的配置 2.溶血素：抗绵羊红细胞抗体，是以SRBC免疫 家兔所得的兔抗血清。试验前要进行溶血素的 稀释和滴定。 3.稀释缓冲液:PH7.2-7.4磷酸盐缓冲液 Ca+2、Mg
+2
不同稀释度溶血素的配置
最终稀释度 1:1000 稀释液(ml) 1.8 稀释度 1:100 溶血素（ml） 0.2
C3 转化酶
C5转化酶
C4b2a
C4b2a3b
C3bBb
（C3b）nBb 或 （C3b）nBbP
第二节 补体总活性测定
一、血清补体总活性测定（CH50试验）
（一）实验原理：
特异性抗体与红细胞结合后可激活补体，导致红
细胞表面形成跨膜小孔，使胞外水分渗入，引起红
细胞肿胀而发生溶血，溶血程度与补体的活性有关。
补体检测及应用
四川大学华西医院临床免疫实验室 刘瑾
第一节 补体的性质与活化途径
一、补体的性质
补体是一组存在于人和脊柱动物血清及 组织液中,具有酶样活性,不耐热,功能上 连续反应的糖蛋白,是抗体溶解细胞必要
的补充条件。
补体系统组成
补体的固有成分；C1-C9、C1q、C1r C1s
共11中蛋白分子
调节和控制补体系统活化的成分；C1抑制