HER2免疫组化检测的质量控制
乳腺癌标本处理SOP
乳腺癌改良根治术标本处理SOP1.目的：及时、充分固定组织标本，保证HER2免疫组化和FISH检测质量。
2.操作者：乳腺科手术医师和病理科负责取材的技术员、病理医师3.步骤3.1乳腺切除标本的及时固定：手术医生必须在标本离体后半小时内将标本放入10％中性福尔马林液体固定（要求液体量至少为切除标本的4-5倍），或者立刻将标本送至病理科（新鲜标本按《冰冻送检乳腺肿瘤切除标本处理SOP》进行处理）。
3.2标本签收：病理科负责接收标本技术员核对患者基本信息、标本类型与送检单描述是否相符后给予签收（包括签收人姓名及时间）；3.3标本取材3.3.1取材医师在取材前再进行一次核对，先登记、编号再取材，记录者应对申请单上的各项内容逐一加以叙述。
如有不一致的情况，应及时与送检手术医师联系，在取得联系前不宜进行取材。
若对标本的病变、解剖关系或送检要求等有不明确之处，可邀请手术医师共同参与取材。
3.3.2确定标本的方位，将标本安放在切板上，皮瓣面向上，以腋窝脂肪作为乳房外侧的标志，确定乳腺标本的四个象限。
大体摄像（要求照片充分反应标本原始情况，包括正反面，背景干净，有标尺）。
3.3.3观察外表形态特征，触扪标本内有无肿块或结节。
3.3.4将标本底部朝上，第一刀需经乳头中央底部（但保持皮肤完好），在与肿瘤中心的连线处用长利刀切开乳房，再以第一刀平面的两侧每隔1cm作与第一刀平行的多个切面，顺序地展开薄片，并保持其方位，仔细检查每一薄片并新鲜取材。
如需固定过夜，用纱布分隔每一个切面，保证固定液足量。
3.3.5乳头及皮肤取材：在乳头基底部横切面取组织一块，乳头再平行纵切成4-5块全部取材。
皮肤如有病变则代表性取材。
3.3.6切缘取材：按解剖方位放好标本，内、外、上、下及基底部切缘各取一块。
3.3.7病变取材：先对病变处进行摄像，然后取材（要求照片充分反应病变情况，背景干净，有标尺）。
肿瘤取材按最大径为几厘米则至少取材几块，必要时多取材；3cm以下的肿瘤要求全部取材；其他四个象限分别检查并代表性取材。
HER2检测试剂盒(免疫组化法)说明书-Agilent
DAB 显色液。 5% 3, 3’-二氨联苯胺四盐酸显色剂溶液。
3×500mL
2×5
抗原修复液（包含清洗剂）（10×）。 0.1 mol/L柠檬酸盐缓冲液，1% 吐温-20，pH 5.7。
质控切片
P04605CN_01_SK00121-2CN/2017.02 2/26
P04605CN_01
10 × 试剂瓶
【检测原理】
HercepTest™检测试剂盒包含对常规处理的、石蜡包埋的样本进行两步法免疫组化染色 所需要的全部试剂。兔抗人 HER2 蛋白一抗孵育后，该试剂盒采用基于葡聚糖技术的即用型 显色试剂。该试剂包含羊抗兔二抗和偶联至葡聚糖多聚体骨架上的辣根过氧化酶分子。因此， 不需要再依次使用连接抗体，人免疫球蛋白显色试剂和胎牛血清之间的交叉反应也因为使用 固相吸附材料而消除。依次填加的色素原的酶转换，也使得显色反应发生于抗原所在部位。 标本需要复染和封片。反应结果在光学显微镜下观察。质控玻片包含 3 个福尔马林固定、石 蜡包埋的人类乳腺癌细胞系，染色强度分别在 0、1+、以及 3+，提供用于对染色结果进行 评估。这些细胞的染色强度与其所表达的受体密度一致。
该抗体着色为棕色 DAB 染色，定位于细胞膜。是一种半定量免疫组化分析方法，适用 于考虑接受曲妥单抗治疗患者的辅助评价方法。
人 HER2 基因（也称之为 ERBB2 或 NEU）编码蛋白通常称之为 HER2 或 p185HER2。 HER2 蛋白是一种膜受体酪氨酸激酶，与表皮生长因子受体（EGFR 或 HER1）具有同源性 (1-8)。HER2 蛋白通常由各种表皮细胞表达，是一种正常组织成分（8）。
外。该试剂盒所提供的材料足够用于最多 10 次免疫组化染色。
数量
胃癌胃镜活检标本HER-2检测中国专家共识2023版解读PPT课件
指导靶向治疗
HER-2阳性胃癌患者可接受针对HER2的靶向治疗，如曲妥珠单抗等，以 改善生存预后。
阴性结果处理建议
01
排除HER-2过表达
阴性结果表示胃癌细胞中HER-2蛋白表达水平较低或无表 达，可排除HER-2过表达的可能性。
THANKS
感谢观看
01
加强标作流程和结果判读标准，提高 HER-2检测的准确性和可靠性。
02
提高活检标本质量和 数量
通过改进活检技术、优化标本处理流 程等措施，提高活检标本的质量和数 量，为HER-2检测提供更加可靠的依 据。
03
加强临床医生培训和 教育
通过加强临床医生的培训和教育，提 高其对HER-2检测的认知水平和应用 能力，推动HER-2检测在临床实践中 的广泛应用。
胃癌胃镜活检标本HER-2检测中国 专家共识2023版解读
汇报人：xxx 2024-02-21
目录
• 引言 • HER-2基因与蛋白结构功能 • 胃癌胃镜活检标本采集与处理 • HER-2检测方法与技术 • 结果判读与临床意义 • 专家共识内容解读 • 挑战与展望
01
引言
背景与目的
胃癌是全球范围内发病率和死亡率较 高的恶性肿瘤之一，严重影响人类健 康。
新型检测技术将不断涌现
随着生物技术的不断发展，未来将会出现更加灵敏、特异、便捷的新型HER-2检测技术 ，为胃癌的精准治疗提供更加有力的支持。
HER-2检测将与免疫治疗等新型治疗手段相结合
未来HER-2检测将与免疫治疗等新型治疗手段相结合，为胃癌患者提供更加个性化的治 疗方案。
提高HER-2检测水平策略
HER2检测试剂盒(免疫组化法)说明书-Agilent
DAB 显色液。 5% 3, 3’-二氨联苯胺四盐酸显色剂溶液。
3×500mL
2×5
抗原修复液（包含清洗剂）（10×）。 0.1 mol/L柠檬酸盐缓冲液，1% 吐温-20，pH 5.7。
质控切片
P04605CN_01_SK00121-2CN/2017.02 2/26
P04605CN_01
10 × 试剂瓶
外。该试剂盒所提供的材料足够用于最多 10 次免疫组化染色。
数量
说明
1×22 mL
过氧化物酶阻断剂。 3%的过氧化氢，含有15 mmol/L的叠氮钠（NaN3）。
1×12 mL
1×22 mL
兔抗人HER2多克隆抗体。 即用型亲和分离的抗体,保存在0.05 mol/L Tris/HCl, 0.1 mol/L NaCl, 1%BSA, 酒 石黄(Tartrazin), 专利蓝V(Patentblue V), 15 mmol/L NaN3, pH 7.2溶液中。 免疫原：合成的HER2蛋白的C-末端（细胞质部分）片段部分，并偶联至血蓝蛋 白上。
2×22 mL
阴性质控试剂。
与HER2抗体等价蛋白浓度下的正常兔血清免疫球蛋白成分，保存在0.05 mol/L Tris/HCl, 0.1 mol/L NaCl, 15 mmol/L NaN3, pH 7.2，并含有1%BSA稳定剂的溶液 内。
1×1mL
DAB底物缓冲液。 50 mM咪唑, 1mM N, N'-乙基双 (2-[2-羟基苯基]甘氨酸) (EDHPA), 0.1%乙基苯基 聚乙二醇（Nonidet P-40）, 0.02% 过氧化氢, 0.01% 氯化苯二甲烃铵, pH 7.5。
【检测原理】
HercepTest™检测试剂盒包含对常规处理的、石蜡包埋的样本进行两步法免疫组化染色 所需要的全部试剂。兔抗人 HER2 蛋白一抗孵育后，该试剂盒采用基于葡聚糖技术的即用型 显色试剂。该试剂包含羊抗兔二抗和偶联至葡聚糖多聚体骨架上的辣根过氧化酶分子。因此， 不需要再依次使用连接抗体，人免疫球蛋白显色试剂和胎牛血清之间的交叉反应也因为使用 固相吸附材料而消除。依次填加的色素原的酶转换，也使得显色反应发生于抗原所在部位。 标本需要复染和封片。反应结果在光学显微镜下观察。质控玻片包含 3 个福尔马林固定、石 蜡包埋的人类乳腺癌细胞系，染色强度分别在 0、1+、以及 3+，提供用于对染色结果进行 评估。这些细胞的染色强度与其所表达的受体密度一致。
HER2的IHC判读和要点分析
>10%的浸润癌细胞呈现弱至中等强度、完整但不均匀的细 IHC 2+ 胞膜棕黄着色，或≤10%的浸润癌细胞呈现强且完整的细胞 （不确定） 膜棕褐着色 IHC 3+ （阳性） >10%的浸润癌细胞呈现强的（低倍镜下可见）、完整的细 胞膜棕褐着色
Wolff.JCO.2013.50.9984
乳腺癌HER2检测指南2014
修订后的活检样本肿瘤细胞中的细胞膜反应临界值
胃癌特异性评分标准并未规定活检样本肿瘤细胞中的细胞膜反应临界百分比
这是由于胃癌活检样本中 HER2 染色的高度异质性 如果至少五个细胞簇显示细胞膜 HER2 染色，则样本的分值应为 HER2 阳性
胃癌活检样本 HER2 IHC 3+ 染色
胃癌HER2检测IHC辅助判读方法
胃癌IHC染色范例：手术标本
IHC 3+ 染色范例
IHC 2+ 染色范例
IHC 1+ 染色范例
胃癌 IHC 染色范例：活检标本
IHC 3+ 染色范例
（经放大）
IHC 3+ 染色范例（经放大）
IHC 2+ 染色范例
IHC 2+ 染色范例（经放大）
乳腺癌 IHC 染色范例
乳腺癌标本中的 IHC 染色
肿瘤细胞组颗粒（非线性） 不明确膜染色
谢谢！
2
3
BC/GC IHC 判读要点分析
HER2检测在胃癌和乳腺癌中的不同
两者在组织病理学上的不同使得胃癌HER2的阳性判断标准需要修正
胃癌组织显示更多的 免疫组化染色显示腺管样排列的 胃癌肿瘤细胞显示不完全性（仅 基底和侧面）膜阳性
异质性
Hofmann M, et al. Histopathology 2008; 52:797 Rüschoff J, et al. Pathologe. 2010;31(3):208
乳腺癌免疫组化内容
乳腺癌免疫组化内容
一、标记物选择
在乳腺癌免疫组化实验中，通常会选择以下标记物：
1.ER（雌激素受体）：用于评估乳腺癌对激素治疗的反应性。
2.PR（孕激素受体）：与ER一起评估激素治疗的反应性。
3.HER2（人类表皮生长因子受体2）：用于评估乳腺癌的恶性程度和预测化疗效果。
4.Ki-67：反映肿瘤细胞的增殖活性。
5.p53：与肿瘤恶性程度和预后相关。
二、实验步骤
1.样本处理：将乳腺癌组织样本进行固定、脱水、透明、浸蜡等处理，以便进行免疫组化实验。
2.切片制备：将处理好的组织样本切成薄片，附着在载玻片上。
3.抗原修复：使用抗原修复液对组织切片进行加热，以暴露抗原并使其易于与抗体结合。
4.抗体孵育：将标记物抗体与组织切片混合，并在适宜温度下孵育一定时间，使抗体与抗原结合。
5.信号转化：使用酶或其他介质将抗原-抗体复合物转化为可见信号，以便在显微镜下观察。
6.染色观察：对组织切片进行染色，并在显微镜下观察标记物的表达情况。
7.结果分析：根据染色强度、阳性细胞比例等因素对结果进行分析，评估乳腺癌的生物学特性。
注意事项：
1.免疫组化实验需要使用特定的抗体，不同的抗体可能对不同的抗原具有特异性，因此选择合适的抗体非常重要。
2.实验过程中需要注意温度、时间和pH值等条件，以确保抗体与抗原的结合和信号转化的顺利进行。
3.免疫组化实验结果需要进行客观、准确的评估，避免出现假阳性或假阴性结果。
免疫组化检测ki-67、her-2、cd44、ck20在膀胱非浸润性乳头状尿路上皮癌
２．１ 低级别组和高级别组中 Ｋｉ６７、ＨＥＲ２、ＣＤ４４、 ＣＫ２０的表达 低级别组总病例数为 ４１８例，其中
·１３１０·
临床与实验病理学杂志 ＪＣｌｉｎＥｘｐＰａｔｈｏห้องสมุดไป่ตู้ ２０１９Ｎｏｖ；３５（１１）
网络出版时间：２０１９－１１－１３１４：５７ 网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０７３．Ｒ．２０１９１１１３．１４５６．０１０．ｈｔｍｌ
免疫 组 化 检 测 Ｋｉ６７、ＨＥＲ２、ＣＤ４４、ＣＫ２０在 膀 胱 非 浸 润性乳头状尿路上皮癌分级中的应用
接受日期：２０１９－０８－１２ 作者单位：上海交通大学医学院附属仁济医院病理科，上海 ２００１２７ 作者简介：夏 骏，男，医师。Ｅｍａｉｌ：ｓｃｈｅｄｕｌｅ５５＠ｈｏｔａｍａｉｌ．ｃｏｍ
刘 强，男，主任医师，通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｌｉｕｑｉａｎｇ＠ｒｅｎｊｉ． ｃｏｍ
路上皮肿瘤中，也不例外，而本实验主要探讨使用免 疫组化标记 Ｋｉ６７、ＨＥＲ２、ＣＤ４４、ＣＫ２０用于非浸润 性乳头状尿路上皮癌的分级有效性。
１ 材料与方法
１．１ 临床资料 收集 ２０１６年 ７月 １日 ～２０１８年 １２月 ３１日在上海交通大学医学院附属仁济医院诊 断为非浸润性乳头状尿路上皮肿瘤的病例（包括低 度恶性潜能尿路上皮乳头状肿瘤、低级别乳头状尿 路上皮癌、高级别乳头状尿路上皮癌）。所有 ＨＥ切 片均经两位病理医师诊断，其中分级明确组 ６４２例 （患者年龄 ２０～９１岁，平均 ６４岁），两位医师均诊 断为高级别乳头状尿路上皮癌者归于高级别组，合 计 ２２４例；两位医师均诊断为低级别乳头状尿路上 皮癌或低度恶性潜能尿路上皮乳头状肿瘤之一归为 低级别组，合计 ４１８例。另外，若两位医师至少有一 位诊断中出现 ＷＨＯⅡ级、局灶高级别或两位医师诊 断不一致者归为分级不确定组，将初发的行电切的 患者根据预后（５７例，患者年龄 ３１～９２岁，平均 ６５ 岁）分为高危组 ４７例和低危组 １０例，高危组是指患 者复发并且诊断为高级别或进展期病变。 １．２ 免疫组化 标本均经 １０％ 中性福尔马林固 定，常 规 石 蜡 包 埋，连 续 切 片，ＨＥ染 色，光 镜 下 观 察。采用免疫组化 ＥｎＶｉｓｉｏｎ法检测 Ｋｉ６７、ＨＥＲ２、 ＣＤ４４、ＣＫ２０的 表 达。ＨＥＲ２抗 体 购 自 罗 氏 公 司，
her2过表达标准
her2过表达标准关于HER2过表达标准的文章（1500-2000字）引言：HER2基因是一种与乳腺癌发生相关的重要基因，在许多乳腺癌患者中都会出现过表达的情况。
HER2过表达会导致肿瘤的恶性程度增加，并且预示着患者的预后可能较差。
因此，准确判断HER2过表达的标准对于乳腺癌的诊断和治疗具有重要意义。
本文将从HER2过表达的定义、检测方法、相关标准和治疗策略等方面逐步解析。
一、HER2过表达的定义：HER2基因位于人体第17号染色体上，是一种编码成蛋白质的基因。
HER2（人体表皮生长因子受体2）是一种细胞膜上的受体蛋白质，参与调控乳腺细胞的生长和分化。
当HER2基因发生异常，出现拷贝数扩增或突变等情况时，会导致HER2过表达。
HER2过表达的乳腺癌细胞具有更强的增殖能力和侵袭能力，从而增加患者的复发风险和死亡率。
二、HER2过表达的检测方法：目前常用的HER2过表达检测方法主要有免疫组化（IHC）和原位杂交（ISH）两种。
1. 免疫组化（IHC）：免疫组化是通过对乳腺癌组织样本进行染色，检测HER2蛋白在肿瘤细胞膜上的表达情况。
根据IHC的染色结果，HER2过表达通常被分为0-3级。
IHC 0级表示无HER2表达，IHC 1+级表示低表达，IHC 2+级表示中等表达，IHC 3+级表示强烈表达。
2. 原位杂交（ISH）：原位杂交是通过对乳腺癌组织样本进行染色，检测HER2基因的扩增情况。
常用的ISH方法包括荧光原位杂交（FISH）和辣根过氧化物酶原位杂交（CISH）。
FISH技术利用荧光标记的探针与HER2基因发生结合，形成特定的荧光信号，从而判断HER2基因是否扩增。
CISH技术则使用酶标标记的DNA探针，通过染色反应形成可见的颜色信号，评估HER2基因扩增的情况。
三、HER2过表达的相关标准：根据乳腺癌患者HER2表达情况的不同，可将HER2分为HER2阴性（-）、HER2低表达（+）、HER2中度表达（2+）和HER2强烈表达（3+）四个等级。
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• 设立适当对照组
• 难以确定的检测病例 1) 重新检测2) 将免疫组化检测结果与原位杂交检测结果对比3) 咨询外部实验室
• 设立适当对照组
• 难以确定的检测病例 1) 重新检测2) 将免疫组化检测结果与原位杂交检测结果对比3) 咨询外部实验室
• 使用标准化检测报告表 • 记录任何:
– 与标准化标本处理步骤相违背的不当操作 – 难以确定病理诊断的病例
a) 对相关从业人员进行教育培训 b) 每年重新检测约5%的阳性和阴性病例 c) 参与Ring研究
– 乳腺癌： 最多1小时
组织处理
– 胃癌： 20–30分钟之内
检测前
HER2检测偏倚
HER2检测偏倚
Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007;25:118–145; ; 《乳腺癌HER2检测指南（2009版）》编写组 乳腺癌HER2检测指南（2009版）中华病理学杂志 2009,38(12):836–840.
质保
• 旨在改善总体检测操作 • 与其他检测中心相比较
质控/质保原则（推荐）
内部质量控制 a) 染色
b) 评分
c) 实验室 d) 检测步骤 e) 记录
持续质量评价
• 严格遵守免疫组化或原位杂交操作步骤 • 设立对照组:
– 细胞系和组织标本免疫组化评分0/1+, 2+, 3+ 需经原位杂交确定 • 若对照组检测未能达标，需重新进行实验
过分固定1
持续性自发性荧光; 信号较弱或缺失
染色步骤
消化封闭不完全2
较强自发性荧光；背景亦呈现 较强非特异性染色
1. Abbott供图; 2. Ventana供图.
影响HER2检测结果之因素
报告内容
评分系统
取样
判读标准
检测后
使用图像 分析
HER2检测偏倚
组织处理
固定时间
检测前
固定方式
检测方 法验证
HER2检测偏倚
Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007; 25:118–145.
影响HER2检测结果之因素: 检测前
取样
– 原发性乳腺癌
• 最好为手术切除而非活检 标本，包含癌旁乳腺组织
• 避免细针穿刺活检取样
– 转移性乳腺癌
• 穿刺活检取样
– 胃癌
• 经内镜活检取样或经手术 切除之标本
实验条件 对照
实验试剂
检测中
抗原修复类型
检测仪器精准度 实验室步骤 检测人员
Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007;25:118─145.
HER2检测的影响因素：检测前
影响HER2检测结果之因素: 检测前
取样
组织处理 固定时间
Pr检e-测an前alytic 固定方式
• 使用标准化检测报告表 • 记录任何:
– 与标准化标本处理步骤相违背的不当操作 – 难以确定病理诊断的病例
a) 对相关从业人员进行教育培训 b) 每年重新检测约5%的阳性和阴性病例 c) 参与Ring研究
Adapted by permission from Macmillan Publishers Ltd; Bilous M et al. Mod Pathol 2003;16:173─182. © 2003.
标本固定较差1 染色不均
标本点状假阳性染色2 棕色点状染色为胞质染色而非胞膜染色
细胞质染色, IHC 02 弥散性非均一性细胞质染色
标本边缘假阳性染色1 肿瘤标本边缘染色而中心无染色
1. W Hanna供图; 2. Dako供图.
影响FISH检测结果之常见问题
标本制备
固定不完全1
片状染色;信号较弱或缺失
《胃癌HER2检测指南》编写组 胃癌HER2检测指南 中华病理学杂志 2011;40(8):553-557.
影响HER2检测结果之因素: 检测前
固定时间
– 乳腺癌
• 最少6小时 • 不超过48小时
– 胃癌
• 穿刺活检最少1小时 （以便充分固定）
质控/质保原则（推荐）
内部质量控制 a) 染色
b) 评分
c) 实验室 d) 检测步骤 e) 记录
持续质量评价
• 严格遵守免疫组化或原位杂交操作步骤 • 设立对照组:
– 细胞系和组织标本免疫组化评分0/1+, 2+, 3+ ，2+需经原位杂交确定 • 若对照组检测未能达标，需重新进行实验
• 评价: – 若正常组织检测为阴性而肿瘤组织检测细胞膜膜染色阳性，则免疫组化检测 即以足够 – 胃癌或胃食管交界癌：选择代表性区域 – 不均匀: 选择代表性区域 – 异质性特异区域: 按最高分评分
– 通过与其他实验室检测结果相比较而得到的检测技术评价的方式 （例如，外部控制）
Bilous M, et al. Mod Path 2003;16:173–182.
质量控制与质量保证有何区别？
质控
• 达到和/或维持目标质量 • 在检测中每个步骤均进行样品检
查，从而决定是否进行相关改进 • 操作步骤的内部验证 • 每批实验都应进行 • 确保每个检测结果均准确
Adapted by permission from Macmillan Publishers Ltd; Bilous M et al. Mod Pathol 2003;16:173─182. © 2003.
HER2检测质量的影响因素
影响IHC检测结果之常见问题
• 诸多因素会影响IHC结果的评估
内容提要
• HER2检测的质量控制和质量保证
– HER2检测质量的影响因素
• 检测前 • 检测中 • 检测后
– HER2检测的质量保证
• 内部质保 • 外部质保 • Ring研究
ห้องสมุดไป่ตู้
HER2检测的质量控制和质量保证
质量体系－定义
• 质量控制 （QC）
– 用以确保HER2检测结果正确性的内部验证步骤
• 质量保证 （QA）
取样
HER2检测偏倚
检测前
HER2检测偏倚
Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007; 25:118–145.
影响HER2检测结果之因素: 检测前
组织处理方式
•提供新鲜及已定位之标本或切除后迅速经甲醛固定之标本
– 立即转送至备检实验室:
• 尽量缩短从标本切除至浸入10%NBF固定之间的时间，通常控制在20–30分钟以内