流式细胞仪
流式细胞仪分选细胞的原理
流式细胞仪分选细胞的原理一、仪器原理流式细胞仪是一种利用流体动力学原理，结合光学和电子仪器技术，对细胞进行快速检测、分类和分选的仪器。
其主要原理是通过细胞在液体中的流动来实现对细胞的分选和分类。
二、流式细胞仪的组成流式细胞仪主要由液体系统、光学系统和电子系统三部分组成。
1.液体系统：液体系统包括进样系统、流动系统和废液系统。
进样系统负责将待检样品引入流动系统；流动系统则通过液体的流动将细胞送到光学系统进行检测；废液系统则负责将已经检测过的样品排出。
2.光学系统：光学系统由激光器、光学镜头、滤光片和光电倍增管等组成。
激光器产生的激光经过光学镜头聚焦后，照射到流动的细胞上，细胞反射、散射或荧光发射的光信号被光学镜头收集并通过滤光片进行过滤，最后由光电倍增管转化为电信号。
3.电子系统：电子系统主要由数据采集卡、计算机和控制软件组成。
数据采集卡负责将光电倍增管转换的电信号进行放大和数字化处理，然后传输给计算机；计算机通过控制软件对数据进行处理、分析和展示。
三、细胞的分选原理流式细胞仪的分选功能是通过细胞的特征参数来进行判断和分选的。
1.散射光信号分选：散射光信号是细胞受到激光照射后，由于细胞的大小、形状和内部结构的不同，产生的光信号。
通过检测散射光信号的强度和角度，可以判断细胞的大小和形态，从而实现对细胞的初步分选。
2.荧光信号分选：荧光信号是细胞在受到特定荧光染料激发后发射的光信号。
通过检测细胞的荧光强度和荧光颜色，可以判断细胞内特定荧光标记物的存在与否，从而实现对特定细胞类型的分选。
3.双参数联合分选：双参数联合分选是指根据细胞的两个或多个特征参数进行综合分析和判断。
比如可以根据细胞的大小和形状、荧光强度和颜色等参数进行综合判断，实现对多种细胞类型的准确分选。
四、应用领域流式细胞仪广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物研发等领域。
1.生物医学研究：流式细胞仪可以对细胞的免疫表型、细胞周期、细胞凋亡等进行快速检测和分析，帮助科研人员深入了解细胞的生理和病理过程。
流式细胞仪常用的几种检测方法
流式细胞仪常用的几种检测方法1.细胞计数和生存率检测：流式细胞仪可以通过测定细胞的大小、形状和胞内染色物来实现细胞计数和生存率的检测。
通过自动聚焦和自动获取图像的功能，可以对大量的细胞进行计数和分析，并得出生存率数据。
2.表面标记检测：流式细胞仪可以利用荧光染料或荧光标记抗体对细胞表面的蛋白质、糖类或其他生物分子进行检测。
这种检测方法主要用于检测细胞表面标记的数量和分布情况，例如测定细胞表面特定抗原的表达水平。
3.细胞周期分析：流式细胞仪可以通过染色剂或荧光标记抗体对细胞进行染色，然后分析细胞在不同细胞周期阶段的比例。
这种检测方法可以用于研究细胞的增殖能力、细胞周期调控机制以及细胞周期与疾病发展的关系。
4.细胞凋亡检测：流式细胞仪可以利用染色剂或荧光标记抗体对细胞凋亡的标志物进行检测。
凋亡是细胞死亡的一种形式，通过测定凋亡细胞的数量和凋亡标志物的表达水平，可以研究细胞凋亡的调控机制以及细胞凋亡与疾病的关系。
5.细胞功能检测：流式细胞仪可以通过检测细胞内Ca2+浓度、ROS （活性氧物种）水平、蛋白质磷酸化等细胞功能指标来研究细胞的信号转导和功能活性。
例如，利用荧光染料可以测定细胞内钙离子的浓度变化，以研究细胞响应外界刺激的机制。
此外，流式细胞仪还可以进行细胞分选、多色细胞分析和细胞细胞间相互作用的研究。
细胞分选功能可以根据细胞标记物的表达水平将细胞分离出来，用于研究特定功能细胞的特性。
多色细胞分析可以用于同时检测多种标记物的表达水平，以揭示不同细胞类型的分子特征。
细胞间相互作用的研究可以通过检测细胞间的共聚或共表达标记物来研究细胞间的相互作用和相互影响。
总的来说，流式细胞仪是一种功能强大的实验室设备，常用于细胞生物学和疾病研究。
通过不同的检测方法，可以在细胞水平上研究细胞的数量、表面标记、周期、凋亡、功能以及细胞间相互作用等方面的特征。
流式细胞仪工作原理
流式细胞仪工作原理
流式细胞仪是一种用于细胞分析的高效、准确且灵活的仪器。
它主要通过光学原理和流体力学原理来实现对细胞的分析和计数。
具体来说，流式细胞仪的工作原理如下：
1. 光学系统：流式细胞仪通过激光器产生一束单色、相干、高强度的光束，常用的激光器有氩离子激光器、固态激光器等。
该光束经过特殊的光学透镜系统聚焦成一个细小的光点。
2. 将细胞样品注入流式细胞仪：样品一般为细胞悬液，可通过注射器或管道将其引入流式细胞仪。
为了保持细胞在单一层面通过光束，样品会与缓冲液混合并通过一个细管。
3. 流动系统：样品通过流动系统以一定的速度从流式细胞仪中流过。
流速可根据需要调节，通常为每秒几百到几千个细胞。
4. 切割和激发：当流过的细胞出现在光束中时，光束被活化和切割成小块，使每个细胞都接收到光的作用。
激发光束的颜色和波长取决于所使用的荧光探针。
5. 检测系统：流式细胞仪中的探测器可以检测细胞对光的散射和荧光。
流经的细胞会散射光，通过散射光的强度和角度测量可以获取细胞的大小、形态和复杂性等信息。
另外，如果细胞标记了荧光染料，探测器还可以检测荧光信号的强度和颜色。
6. 数据分析：流式细胞仪通过计算机对检测到的荧光和散射信号进行处理和分析。
可以对细胞进行计数、分类和排序，并生成各种图表和图像来描述细胞的特征和分布。
通过以上步骤，流式细胞仪可以快速、准确地分析细胞的各种参数，如大小、形态、表面标记物的表达水平以及细胞在特定条件下的生存率等，从而提供宝贵的细胞学数据。
流式细胞仪步骤
流式细胞仪步骤宝子们，今天来唠唠流式细胞仪的步骤呀。
那第一步呢，就是准备样本啦。
这个样本可不能马虎，得处理得妥妥当当的。
比如说细胞样本，要保证细胞是单个分散的状态，要是细胞都黏在一起，那流式细胞仪可就懵圈啦。
这就像咱们排队一样，得一个个排好，不能乱哄哄地挤成一团。
对于血液样本之类的，可能还需要进行一些特殊的处理，像裂解红细胞之类的操作，把那些会干扰检测的东西去掉。
接下来就是给样本标记啦。
这就像是给细胞穿上不同颜色的小衣服，让流式细胞仪能区分它们。
我们会用一些特异性的荧光抗体，这些抗体就像小侦探一样，能找到细胞上特定的蛋白或者标志物，然后紧紧地抱住它们。
不同的抗体带着不同颜色的荧光，这样细胞就被标记得花花绿绿的啦。
不过这一步可得小心哦，抗体的浓度要合适，就像做菜放盐一样，多了少了都不行。
浓度太高，可能会有非特异性结合，就像乱给人贴标签一样；浓度太低呢，又可能检测不到目标。
样本都准备好标记好之后呢，就可以把样本放到流式细胞仪里面啦。
这个时候就像是把精心打扮的小细胞们送上舞台一样。
流式细胞仪里面有个小管道，样本就沿着这个管道慢慢往前走。
在这个过程中呢，激光就会照射到这些细胞上。
激光就像舞台上的聚光灯一样，一照到细胞上，那些被标记的荧光就会发出亮光。
然后呢，仪器就开始检测这些荧光啦。
它会把每个细胞发出的荧光信号都收集起来，然后分析这些信号。
这个分析可厉害啦，它能知道每个细胞上有哪些标记，还能根据这些标记把细胞分成不同的群体。
就像把人群按照不同的特征分成不同的小组一样。
比如说按照细胞的大小、细胞表达的蛋白种类等等。
最后呢，我们就可以得到检测结果啦。
这个结果可以告诉我们好多信息呢，比如样本里不同类型细胞的比例是多少，细胞的状态是不是正常等等。
这就像是我们做了一次细胞世界的小普查，得到了很多有趣的情报。
宝子们，流式细胞仪的步骤大概就是这样啦，是不是还挺好玩的呢 。
流式细胞仪使用规范
流式细胞仪使用规范流式细胞仪（Flow Cytometer）是一种常用的细胞分析仪器，广泛应用于细胞学、免疫学、生物学、医学等领域。
流式细胞仪可以对细胞进行快速、准确的多参数分析，能够检测和分离不同细胞类型、测定细胞数量、评估细胞活性以及研究细胞表面标记物等。
为了保证流式细胞仪的正常使用，以下是一些流式细胞仪的使用规范和注意事项。
1.准备工作：a.检查仪器：确认仪器的状态，包括是否通电、通气、光源是否正常工作等。
b.清洁样品室：使用无菌纯水或适当的清洁剂擦拭样品室，确保没有杂物或污染物。
c.校准仪器：根据仪器规定进行标定和校准，确保仪器的准确性和稳定性。
2.样品准备：a.细胞处理：合理处理样品，保证单细胞悬浮状态。
可以通过胰酶消化、筛选等方法获取单细胞悬浮液。
b.细胞计数：使用合适的细胞计数仪进行细胞计数，计算出所需的细胞悬浮液浓度。
c.细胞染色：根据实验需求对样品进行适当的荧光染色或抗体标记，以便在流式细胞仪中检测和分析。
3.流式细胞仪操作：a.设置参数：根据实验设计和研究目的，设置合适的仪器参数，包括激光器选择、激发波长、检测波长、门控设置等。
b.样品加载：将样品注入流式细胞仪样品室，避免气泡的产生，并确保样品完整进入样品室。
c.数据采集：开始数据采集前，进行流式细胞仪的标定、峰位校正和峰间校正，以保证数据的准确性和可靠性。
d.数据分析：对采集到的数据进行分析和解读，根据实验要求选取合适的分析策略和软件进行数据处理。
4.清洁和保养：a.实验后清洁：实验结束后，及时清洁仪器，避免样品残留和交叉污染。
b.仪器维护：定期检查仪器的部件和附件，保证其正常工作。
如需要更换部件或常规维护，请按照厂家指南进行操作。
c.长时间停用：如果流式细胞仪长时间不使用，应按照厂家指南进行仪器的合理关闭和长期存储。
5.安全注意事项：a.避免直接接触激光线：在进行样品加载和设置参数时，避免接触激光线以避免损伤眼睛。
b.使用无菌操作：在样品加载和处理过程中，使用无菌操作和材料，避免细菌污染和交叉感染。
流式细胞仪的概念及其发展历史
流式细胞仪的概念及其发展历史1. 引言在现代生物科学领域中，流式细胞仪是一个关键的实验工具，用于分析和研究细胞的性质和功能。
本文将介绍流式细胞仪的基本概念以及其发展历史。
2. 流式细胞仪的概念流式细胞仪是一种能够快速、高效地分析和计数细胞、获得关于细胞表面分子、形态和功能信息的仪器。
它通过流式细胞术的原理，将细胞悬浮液以单个细胞为单位通过仪器，然后利用激光照射、细胞的自然发荧光或特定荧光染料来探测细胞的特定性质。
3. 流式细胞仪的发展历史20世纪60年代末，Wallace H. Coulter发明了第一台流式细胞仪。
这台仪器基于Coulter原理，使用电阻装置实现细胞计数，开创了流式细胞仪的先河。
随后，人们开始尝试利用光散射性质来分析细胞。
1970年代，Mack Fulwyler发明了一种使用激光照射和散射光收集的流式细胞仪。
这种新型流式细胞仪能够准确地测量细胞的大小和形状。
1980年代，流式细胞仪开始应用于免疫学研究领域。
人们开始利用荧光染料标记细胞表面的抗原，然后使用流式细胞仪进行检测和分析。
这一革新使得研究人员能够更深入地研究免疫细胞的功能和相互作用。
进入21世纪以后，流式细胞仪的性能不断提高。
新的激光技术、荧光染料和信号检测方法的应用使得流式细胞仪在多个领域都得到了广泛的应用，如免疫学、细胞生物学、血液学等。
4. 流式细胞仪的应用流式细胞仪的广泛应用使得它成为了生命科学领域中不可或缺的工具。
它可以用于细胞计数、活细胞和死细胞的区分、细胞周期分析、细胞凋亡检测、细胞表面标志物的鉴定等。
在免疫学研究领域，流式细胞仪被用来研究免疫细胞的活性、表面标志物、分泌物等。
同时，流式细胞仪还可以用于肿瘤学研究中的肿瘤细胞的检测和分类。
在血液学领域，流式细胞仪可以用于检测和鉴定不同类型的血细胞，包括白细胞、红细胞和血小板等。
5. 结论流式细胞仪凭借其高效、准确、可靠的特点，在现代生物科学研究中扮演着重要的角色。
流式细胞仪工作原理(一)
流式细胞仪工作原理(一)流式细胞仪工作原理什么是流式细胞仪？流式细胞仪（flow cytometer）是一种能够对细胞进行快速分析和分类的仪器，在医学、生物学等领域有着广泛应用。
流式细胞仪的组成流式细胞仪由主体仪器和计算机分析系统组成。
主要部分包括光源、检测器、激光、样品注射系统和流动细胞仓等部分。
流式细胞仪的原理流式细胞仪的工作原理基于细胞在流动状态下通过一束激光，同时检测细胞与光的交互作用，通过对细胞数量和物理特征的分析来实现细胞分类。
流式细胞仪的步骤流式细胞仪的操作步骤主要分为样本制备、仪器校准、样本注射、数据采集和数据分析。
样本制备将待检测的样本准备到合适的浓度和体积，通常需要使用细胞培养、荧光染色等方法。
仪器校准流式细胞仪需要进行仪器校准来保证数据质量，包括激光能量、电子学增益等方面的调整。
样本注射样本注射一般使用样本传送器或注射管来完成，注射后样品进入流动细胞仓进行分析。
数据采集流式细胞仪通过检测样品中的细胞和荧光信号来获得数据，数据将会被记录下来。
数据分析通过软件对数据进行分析和处理，比如进行细胞计数、细胞分类等。
流式细胞仪的应用流式细胞仪广泛应用于生物学、医学等领域，比如细胞学、免疫学、感染病学、药物研究等方面。
结语流式细胞仪是一种非常有用的仪器，在科学研究和医学诊断中都有着重要作用。
掌握流式细胞仪的工作原理和操作方法对于科研人员和医护人员来说是非常重要的。
流式细胞仪的优势流式细胞仪具有许多优势，例如高速度、快速获取结果、高精度、高通量、良好的灵敏度和特异性等。
流式细胞仪的缺点流式细胞仪也存在一些缺点，例如价格昂贵、需要较为复杂的校准和操作、需要专业的技术人员进行操作和分析等。
流式细胞仪技术的发展随着技术的进步，流式细胞仪也在不断发展和改进。
例如，现代化的流式细胞仪已经具备了多色激光、高通量、高精度、高速度、多参数检测等方面的特点。
流式细胞仪的未来未来，流式细胞仪具有广泛的应用前景。
流式细胞仪分类
流式细胞仪分类1. 简介流式细胞仪（Flow Cytometer）是一种常用的生物学实验仪器，用于对细胞进行分类和分析。
它通过将细胞悬浮液注入仪器中，利用激光束照射细胞，测量细胞在不同参数上的散射和荧光信号，从而对细胞进行分类和计数。
流式细胞仪广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物研发等领域。
2. 流式细胞仪的分类方式根据不同的参数和功能，流式细胞仪可以分为以下几种类型：2.1. 基础型流式细胞仪基础型流式细胞仪是最常见的类型，它可以测量细胞在不同波长的激光照射下的散射和荧光信号。
基础型流式细胞仪通常具有多个激光器和多个探测器，可以同时测量多个参数。
常见的参数包括细胞大小、形态、颜色、荧光标记物等。
2.2. 高通量流式细胞仪高通量流式细胞仪是一种能够快速处理大量样本的流式细胞仪。
它通常具有多个样本载体和多个样本接口，可以同时处理多个样本，提高实验效率。
高通量流式细胞仪广泛应用于大规模细胞筛选、细胞库构建和高通量药物筛选等领域。
2.3. 分选型流式细胞仪分选型流式细胞仪是一种能够根据细胞的特定特征进行分选的流式细胞仪。
它通常具有一个或多个分选器，可以根据预设的分选条件将特定类型的细胞分选出来。
分选型流式细胞仪广泛应用于细胞克隆、单细胞测序和细胞治疗等领域。
2.4. 成像型流式细胞仪成像型流式细胞仪是一种能够对细胞进行高分辨率成像的流式细胞仪。
它通常具有高倍率物镜和高灵敏度的相机，可以对细胞进行三维成像和时间序列成像。
成像型流式细胞仪广泛应用于细胞动力学研究、细胞迁移和细胞内信号传导等领域。
3. 流式细胞仪的工作原理流式细胞仪的工作原理包括激光照射、散射信号检测和荧光信号检测三个步骤。
3.1. 激光照射流式细胞仪通过激光器产生高能量的激光束，将激光束聚焦到细胞悬浮液中的单个细胞上。
激光束的波长和功率可以根据需要进行选择，常用的波长包括488nm、532nm和633nm等。
3.2. 散射信号检测当激光束照射到细胞上时，细胞会发生散射现象。
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三）淋巴细胞分类
CD3(T细胞，CD4、CD8))、CD19 （B细胞）、CD16、CD56（NK细胞）， 原发性或继发性免疫缺陷病、自身免疫 性疾病、淋巴细胞增殖病、肿瘤疗效观 察与预后判断、移植免疫检测等。
R1 M1 M1
流式细胞术检测细胞表型
四）白血病的免疫分型
流式细胞术白血病免疫分型是利用荧光素 标记的单克隆抗体作分子探针，多参数 分析白血病细胞的免疫表型，了解被测 白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。
流式细胞仪数据分析
点图分析
流式细胞仪数据分析
直方图分析
图中100～101（M1）为阴性细胞，101以上的（M2）为阳性细胞
五、 流式细胞术的应用
细胞结构 细胞大小 细胞颗粒度 细胞表面积 核浆比例 DNA含量与细胞
周期 RNA含量 蛋白质含量
……
细胞功能
UL
254
2.40 37.47 461.36
UR 1067 10.08 816.86 468.89
LL 5291 49.98 19.57 4.41
LR 3975 37.55 418.80 9.87
图 Annexin V/PI双标记分析细胞凋亡和坏死
Date acquired: 14-Jan-03 File: 7Gy 4hr.001 Source: dongbo DIPLOID: 100.00 % Dip G0-G1: 73.12 % at 48.16 Dip G2-M: 9.59 % at 96.33 Dip S: 17.29 % G2/G1: 2.00 Dip %CV: 6.04
FCM分析白血病免疫表型, 快速、特异、 准确，重复性好，能区分细胞起源、划 分其分化发育阶段等，对白血病的诊断 与分型、治疗方案选择与预后判断、发 病机理研究等有重要价值。
五） 细胞内蛋白的分析：
细胞破膜后将细胞内某一蛋白成分 进行荧光标记，用流式细胞仪进行测量 分析，同表型分析一样，可以测量出这 种阳性细胞的数量和这种蛋白的相对含 量。荧光探针多为FITC。
二）肿瘤诊断与抗肿瘤药物研究
1. 肿瘤诊断
DNA异倍体的出现是癌变的一个重要标志 细胞的增殖能力的大小也可反映肿瘤的生物
学特征 利用流式细胞仪进行细胞周期分析和DNA
倍性分析，辅助肿瘤诊断，包括监测癌前病 变、肿瘤的早期诊断和肿瘤细胞学诊断。
肿瘤组织中的各种DNA倍体
2倍体
异倍体
细胞表面/胞浆/核的特异性抗 原
细胞活性 细胞内/外的细胞因子 激素结合位点、细胞受体 蛋白磷酸化 pH值 钙离子浓度 细胞膜电位、线粒体膜电位
……
一） 细胞DNA含量检测
细胞固定后用PI （Propidium iodide碘化丙啶）， 染色，因为PI特异性结合于细胞DNA，荧光强度 与PI的结合量呈良好的线性关系，根据这个原理， 可测出细胞的DNA含量。用于细胞周期、细胞倍 体以及凋亡的检测。
4. 应用范围
凡是能被荧光素标记的细胞或颗粒都可用流式细 胞仪检测。
前提这种荧光素能被流式细胞仪所配置的激光光 源激发
在生物检测技术中流式细胞仪是不可多得的一机 多用的仪器。
二、流式细胞仪的工作原理和基本结构
待测细胞以单个细胞的悬液，经特 异性荧光染料染色，放入样品管， 吸入流动室。
流动室充满鞘液，作用：约束样品 在喷嘴中心，防止样品靠近喷孔 壁堵塞喷孔。细胞排成单列由喷 嘴中心喷出，形成细胞液柱。
2倍体
异倍体
4倍体
含量与凋亡关系
DNA亚G1峰的检测：利用PI染色，检测具有 亚G1期DNA含量的细胞比例，代表凋亡细胞数。
凋亡过程中，细胞内核酸酶的释放，将DNA降 解，分解成小的片段，在标本制备中的固定处 理时，细胞膜的完整性被破坏，使细胞内降解 的DNA片段从细胞内流出，造成总体DNA含 量减少，成为亚2倍体。
4倍体
2. 凋亡研究
在G0/G1峰前出现一 个亚二倍体峰，即凋 亡峰。
检测调亡，可进行抗 肿瘤药物研究和某些 因素对细胞的损伤机 理的研究。
Annexin V Assay
R1
Fil e: 4
Acq ui si tion Date: 06- Mar -03
Quad Events % Gated X M ean Y M ean
荧光信号
使用不同荧光标记的单克隆抗体染色，做多色 分析
荧光信号的强弱，反映了细胞抗原的表达含量
荧光样本制备
双色直接染色
端粒（荧光蛋白）
六）细胞内钙离子测定
1×106/ml的细胞悬液， 加入终浓度为1-5μmol/ml Fluo-3/AM，充分混匀， 室温避光作用60分钟。 以HEPES缓冲的Hank’s平衡盐溶液洗三次，重悬于 0.5ml同样的溶液，上流式细胞仪检测。 根据报告中给出的样品荧光强度计算细胞内钙离子 的浓度。
荧光信号与细胞特性
荧光染料被激发而发射的光信号。 定量染色
荧光信号大小 被标记组分含量的定量
多荧光标记胞内多种组分，实现多参数测量
光信号收集
光信号分离，导向 各探测通道接收并转化为电信号。
激光束
侧向散射 光，荧光
二色镜
1
2
3
细胞
前向 散射
光
收集透镜
带通滤波片 光电倍增管
三 数据处理及流式报告
单参数直方图
图中2N代表G0/G1期细胞，4N代表G2/M期细胞，两者中间代表 S期细胞。这是以2倍体和4倍体细胞为主的流式DNA图
DNA细胞周期分析
G2 M
G0
G1
细
s
胞 数
量
细胞周期
DNA分析
G0G1
s G2 M
2N
200
400
4N DNA含量
600
800
1000
肿瘤组织中的各种DNA倍体
Quad Events % Gated X M ean Y M ean
UL
254
2.40 37.47 461.36
UR 1067 10.08 816.86 468.89
LL 5291 49.98 19.57 4.41
LR 3975 37.55 418.80 9.87
图 Annexin V/PI双标记分析细胞凋亡和坏死
Mean：平均荧光强度，与被检测物质的表达 量有关，在正态分布时一般用该值。
Geo Mean：几何平均荧光强度，在阳性细胞 为偏态分布时一般用该值。
散点图
密度图
二维等高图
直方图
图 报告中常见的几种流式细胞图
R1
Fil e: 4
Acq ui si tion Date: 06- Mar -03
+
对比-----流式细胞仪是一种特殊的显微镜
流式细胞仪 流动的细胞
数量大 高速分选 细胞群体特征量分布
显微镜 静止的细胞样本
数量少 样本难以再利用 揭示细胞内部结构信息
流式细胞仪
多参数
量化的分布 容易检测各个参数间的
相关性
蛋白电泳 单参数 平均值 不容易
精品课件！
精品课件！
谢 谢 大 家
光信号
FSC SSC FL1 FL2 FL3
对数 线性
电信号
线性 线性 对数
脉冲处理，模数转换 （面积，峰高，宽度）
记录数据，显示结果
流式报告的图一般分为四种，即散点图、直方
图、密度图和二维等高图等。最常用的为散点
图和直方图。
几个概念：
%Gated：阳性细胞百分比。反映细胞群体中 阳性细胞的数量。
Apoptosis: 13.66 % Mean: 27.48
图 FCM测试细胞周
R1
期分布和凋亡
根据凋亡细胞的特点来检测
在形态上，早期细胞核固缩，染色体边集在核 膜内侧显新月体形、核碎裂；细胞浆和细胞器 密度增高、细胞体积变小；细胞膜皱折卷曲， 但早期细胞膜的完整性未受到破坏
凋亡细胞的FSC ？SSC ？ 细胞坏死时，细胞肿胀，FSC ？，SSC ？
什么是流式细胞仪
●流式细胞仪实物
BD-Calibur
BD FACSVantage
一、 概述
1. 发展历史 1934 Moldavan 1973 Steinkamp
2. 定义：对在高速流动的鞘液包括下对特异荧 光标记的细胞、粒子进行分析和分选的技术.
3. 特点 测量速度快，每秒钟能测数千个乃至上万个 细胞 可进行多参数测量 在分析的同时可把具有指定特征的细胞分离 出来，即分选技术。
相对复杂性
血液涂片
外周全血细胞散射光双参数点图
Hale Waihona Puke 荧光信号 荧光强度（FL）：细胞上的荧光染料被激光激发后发射出的 荧光，不同的荧光染料其发射波长不同。 有荧光标记的细胞与无荧光标记的区分开来（阴阳） 高FL细胞与低FL细胞区分开来（强弱）
一般的流式细胞仪只装有一个激光光源（488nm），可测出 三个FL，即FL1、FL2、FL3，大型的流式细胞仪装有两个 或三个激光光源（488nm、633nm和325nm），可测出6个 FL。
FCM检测胞内钙离子、 膜电位和线粒体功能
M1阴性界限划分完全是根据阴性对照！如下图：红色部分代表阴性对照，即： 所检测的物质在阴性组中的基础表达量，可以理解为背景、静息状态下、基础 水平、未受刺激时等。蓝色部分即阳性组，也就是接受刺激后，功能状态下、 药物作用后等。
六. 分选：
用荧光探针标记的细胞，可被有效地分离出来， 用于分选的效率较高的仪器国内较少，台式机
液柱与激光束相交，细胞上的荧光染料被激发产生荧光。 荧光信号变成电信号输出到计算机，软件分析。