流式细胞分析仪
质谱流式细胞仪工作原理
质谱流式细胞仪工作原理随着生物技术和分子生物学的快速发展，细胞分析已经成为生物学研究中不可或缺的一部分。
流式细胞仪是目前最常用的细胞分析工具之一，它可以快速、精确地分析单个细胞的特征。
而质谱流式细胞仪则是一种结合了质谱分析和流式细胞仪技术的新型仪器，它可以同时分析单个细胞的形态、结构和代谢产物等信息，为细胞分析提供了更加全面的工具。
一、流式细胞仪的基本原理流式细胞仪是一种利用光学原理进行细胞分析的仪器，它可以将单个细胞从细胞混合物中分离出来，并通过光学检测和计算机处理，对细胞的大小、形状、表面标记、活性等多个方面进行分析。
流式细胞仪的基本原理是利用激光光源对细胞进行照射，使其发生荧光或散射，然后通过光学系统对细胞进行检测和分析。
流式细胞仪的主要组成部分包括激光、光学系统、流体控制系统和计算机等。
二、质谱分析的基本原理质谱分析是一种常用的分析技术，它可以通过对化学物质分子的质量-电荷比进行分析，来确定化学物质的成分和结构。
质谱分析的基本原理是将化学物质分子通过电离、加速和分离等过程，将其分解成带正电荷的离子，并通过磁场和电场的作用，将这些离子分离出来，并对其进行检测和分析。
三、质谱流式细胞仪的工作原理质谱流式细胞仪是一种结合了流式细胞仪和质谱分析技术的新型仪器，它可以同时分析单个细胞的形态、结构和代谢产物等信息。
质谱流式细胞仪的基本工作原理是将单个细胞通过流体控制系统进行分离，然后利用激光照射对其进行荧光或散射检测，同时将其离子化。
离子化后的细胞代谢产物经过分离和检测，可以得到细胞代谢产物的质谱图谱，从而确定细胞的代谢状态和代谢产物组成。
质谱流式细胞仪的主要组成部分包括激光、流体控制系统、离子源、分析器和检测器等。
激光是质谱流式细胞仪的光源，它可以对单个细胞进行荧光或散射检测，并将其离子化。
流体控制系统是质谱流式细胞仪的核心部分，它可以将单个细胞从细胞混合物中分离出来，并将其送入离子源进行离子化。
美国贝克曼库尔特流式细胞分析仪
美国贝克曼库尔特流式细胞分析仪（Beckman coulter cell）产品型号：Cell Lab Quanta SC当前价格：0.00元产品数量：0新旧程度：全新有效期至：0000-00-00所在地：产品简介：仪器简介：T细胞亚群检测的CD45/CD4/CD8/CD3、CD45/CD56/CD19/CD3；阵发性血红蛋白尿（PNH）检测的CD55、CD59；血小板无力症（GT）检测的CD41、CD61等等详细信息仪器简介：T细胞亚群检测的CD45/CD4/CD8/CD3、CD45/CD56/CD19/CD3；阵发性血红蛋白尿（PNH）检测的CD55、CD59；血小板无力症（GT）检测的CD41、CD61等等。
但对于白血病/淋巴瘤免疫分型，国际上迄今为止也没有统一的抗体组合。
在2000年国际细胞分析学会（ISAC）大会上，临床血细胞计数协会组织了一次国际专家会议，以期对检测血液淋巴系统肿瘤所需最少、最有效的单抗数达成共识。
75%与会者一致认为，对于慢性淋巴系统增殖性疾病（CLD）有9种单抗：CD5,CD19,κ,λ,CD3,CD20,CD23,CD10,CD45对初诊来说是最基本的。
淋巴瘤和CLD相似，需要至少12-16种单抗。
对于急性白血病（AL），75%的与会者认为大约13-15种单抗是最基本的：CD10,CD19,CD79a,CD13,CD33,CD34,CD45,CD2,MPO，CD7,CD14,CD3,HLA-DR等，对初步鉴别白血病系列是必需的。
其他一些（CD16,CD56,CDw65,TdT,cyCD3）可能对某些病例有用。
几乎所有的投票者都认为，要对急性白血病完善分类所需单抗的恰当数量平均为20-24种。
但这些抗体之间组合也是一大难题，目前也无统一规定（如表二）。
大会多数发言者(11/13)指出，对已确诊病人的监护和分期来说，仅需较少单抗。
抗体的质量控制是实验的关键环节。
抗体的质量包括其特异性、灵敏度、精密度。
流式细胞分析仪
流式细胞分析仪流式细胞分析仪是一种高效、精确的生物学实验工具，广泛应用于细胞生物学、免疫学、遗传学等领域。
它的出现极大地促进了细胞研究的进展，为科学家们提供了更多的可能性。
本文将介绍流式细胞分析仪的原理、应用及其在生物科学研究中的重要性。
流式细胞分析仪（flow cytometer）是一种可以对细胞进行流式检测的仪器。
它通过检测光的散射和荧光来分析细胞的形态、大小、浓度和免疫表型等信息。
其原理主要是利用流式细胞术，将细胞通过细长的管道分流，并用激光或光源照射细胞，激发荧光信号并收集散射光信号，从而获得细胞的信息。
这种检测方法既高效又准确，可以同时分析数千个细胞。
而且，流式细胞分析仪具有高通量、高分辨率、快速、灵敏度高等优势，使其成为当前生物学研究中不可或缺的工具之一。
流式细胞分析仪广泛应用于细胞生物学研究。
例如，在肿瘤学研究中，通过流式细胞分析仪可以对肿瘤细胞进行快速、准确的鉴定和分类。
它可以检测肿瘤细胞的大小、形态、染色质含量以及免疫表型等特征，为研究人员提供了丰富的信息，有助于了解肿瘤细胞的发生和发展机制。
此外，流式细胞分析仪还可以用于研究细胞周期、细胞分化和凋亡等过程，为揭示细胞生物学的分子机制提供了有力的工具。
除了肿瘤学研究外，流式细胞分析仪在免疫学中也有重要的应用。
免疫表型是指细胞表面的免疫分子的表达情况。
通过流式细胞分析仪可以获得细胞的免疫表型信息，这有助于识别不同类型的免疫细胞并研究它们在免疫反应中的作用。
例如，在研究自身免疫性疾病时，可以利用流式细胞分析仪对免疫细胞进行免疫表型分析，了解其在疾病发生和发展过程中的变化，从而寻找潜在的治疗靶点。
此外，流式细胞分析仪还可用于细胞遗传学研究。
通过观察细胞的核酸含量和染色体结构等信息，可以识别不同类型的细胞，并对细胞的遗传变异进行分析。
例如，在遗传疾病研究中，可以利用流式细胞分析仪对细胞进行染色体异常的检测，对疾病相关的基因突变进行鉴定。
流式细胞仪介绍 ppt课件
Forward Light
Detector
Cell Surface
Area
相对荧光强度（FL） (需探针标记)
是细胞或细胞上的荧光染料被激光激发后发射出
的荧光，不同的荧光染料其发射波长不同。
区分阴阳性：通过荧光强度可将同一个细胞群体
中的有荧光标记的细胞与无荧光标记的细胞区分
开来。
区分阳性强弱：也可以将阳性细胞中的高FL的细
非常节省细胞，对于科研珍贵标本尤为重要！
绝对的细胞计数，无需计数微珠，细胞培养后往往需要细
胞计数仪，可以完全代替细胞计数仪。
自动标记，自动进样，自动清洗，节省时间。
自动补偿，对多色分析自动生成补偿数值
小巧的台式机设计,低噪，低热
非加压系统进样
(25)
34
仪器的竞争分析
BD的各种机型（一）
无加压系统
溶液瓶附着在仪器上
仪器状态能够通过溶液瓶的不同颜色来指示
软件基本特征
12‘’触摸屏（内嵌）
Live support 远程网络服务，德国工程师进
行远程在线检修机器
VGA 接口 (连接第二个显示器或者代替的显示
器)
功能强大、易于操作
——直观的操作界面 (用于仪器控制, 数据获取和数据
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Belgium
Canada
China
France
Germany
流式细胞仪工作原理
流式细胞仪工作原理流式细胞仪是一种广泛应用于生物医学研究领域的仪器，它能够实时、快速地分析和计数细胞，同时还能够对细胞进行分类、鉴定和分选。
流式细胞仪的工作原理主要包括样品处理、细胞悬浮、光学系统、信号检测和数据分析等几个关键步骤。
1. 样品处理：在使用流式细胞仪之前，需要对待测样品进行预处理。
通常情况下，样品会经过细胞培养、组织消化、细胞分离等步骤得到单细胞悬浮液。
然后，将样品注入样品管，并加入染色剂或标记物以便于对细胞进行鉴定或分类。
2. 细胞悬浮：样品注入样品管后，通过流动系统将细胞悬浮液输送到流式细胞仪的核心部件——流动池。
在流动池中，细胞会被单独地输送到激光束中进行分析。
为了保证细胞以单个的形式通过激光束，需要控制细胞的流速和浓度。
3. 光学系统：流式细胞仪的光学系统是其最关键的部分之一。
它包括激光器、光学滤波器、散射器和光电倍增管等组件。
激光器发出的激光束经过透镜聚焦后照射到细胞上，细胞与激光相互作用后会产生散射光和荧光信号。
散射光主要包括前向散射光（FSC）和侧向散射光（SSC），荧光信号则由标记物或染色剂产生。
4. 信号检测：散射光和荧光信号会经过光学滤波器的选择和分光镜的反射，然后被光电倍增管接收和转化为电信号。
光电倍增管会将光信号放大，然后将其转换为模拟电压信号。
这些信号会被模数转换器转换为数字信号，然后传输到计算机进行进一步的处理和分析。
5. 数据分析：流式细胞仪会将收集到的数据传输到计算机上，通过专业的流式细胞仪软件进行数据分析。
软件可以对细胞进行分类、鉴定和分选，同时还可以生成各种图表和统计分析结果。
研究人员可以根据实验需求对数据进行进一步的处理和解读。
流式细胞仪的工作原理基于光学散射和荧光信号的检测，通过对细胞的特征参数进行分析，可以获得大量关于细胞的信息。
它在生物医学研究、临床诊断和药物研发等领域具有广泛的应用前景。
流式细胞仪工作原理
流式细胞仪工作原理流式细胞仪是一种广泛应用于生物医学研究领域的仪器，用于分析和计数细胞、细胞表面标记物以及细胞内部的功能分子。
它通过将细胞以单个的方式通过一个窄的光束，利用光学和电子学技术对其进行快速而精确的分析。
流式细胞仪的工作原理包括样本处理、流体力学、光学系统和信号检测四个主要方面。
1. 样本处理样本处理是流式细胞仪工作的第一步。
细胞样本通常需要经过预处理，包括细胞的收集、固定、染色等。
固定可以防止细胞在流式细胞仪中被破坏或改变形态，染色则可以标记细胞表面或内部的特定分子。
2. 流体力学流体力学是流式细胞仪中非常重要的一部分。
它通过控制样本的流动速度和流动性质，使细胞以单个的方式通过光束。
流体力学的核心是流速的控制和细胞的聚焦。
通过控制流速，可以使细胞以适当的间隔通过光束，避免细胞重叠造成的误差。
聚焦系统则可以确保细胞在光束中心通过，以获得最佳的检测信号。
3. 光学系统光学系统是流式细胞仪的核心部分。
它包括激光器、光学镜头、滤光片和检测器等。
激光器产生高强度的单色光束，常见的激光器包括氩离子激光器、固态激光器和半导体激光器等。
光学镜头用于聚焦激光束，使其通过细胞时具有最佳的光斑形状和大小。
滤光片则用于选择性地过滤掉不需要的光信号，以减少背景干扰。
检测器用于接收和转换细胞发出的荧光信号或散射光信号，常见的检测器包括光电倍增管（PMT）和光电二极管（APD）等。
4. 信号检测信号检测是流式细胞仪中的最后一步。
根据不同的实验目的，可以选择不同的检测模式。
常见的检测模式包括荧光检测、散射光检测和脉冲检测等。
荧光检测是通过标记细胞表面或内部的荧光染料，利用荧光信号来分析细胞的特定分子表达水平或功能状态。
散射光检测则是通过测量细胞散射光的强度和角度，来分析细胞的大小、形态和复杂度等。
脉冲检测则是通过检测细胞在流动过程中产生的光信号的强度和持续时间，来分析细胞的内部结构和功能。
总结：流式细胞仪是一种通过光学和电子学技术对细胞进行快速而精确分析的仪器。
流式细胞仪荧光结果分析中的常见问题及解决方法
流式细胞仪荧光结果分析中的常见问题及解决方法流式细胞仪是一种用于细胞分析的实验室仪器，它能够对单个细胞进行快速而精确的定量和质量分析。
它主要通过将细胞悬浮液注入到仪器中，利用激光器照射细胞并检测经过细胞的光线散射和荧光信号，从而获取大量有关细胞形态、大小、复杂度、表面标记以及内部分子的信息。
它可同时测量多个参数，并具备高通量性能，能够快速分析数以万计的细胞，并提供详细的统计学数据。
它广泛应用于免疫学、细胞生物学、药理学、肿瘤学等领域的研究和实验中。
然而，在分析流式细胞仪得到的荧光结果时，常常会遇到一些问题，如信号强度弱、背景高、细胞群分布异常等。
本文将介绍常见问题，并提供相应的解决方法。
一、信号强度弱1. 信号补偿不正确：检查流式细胞仪上的单色阳性对照是否设置正确，并确保门控和补偿设置正确。
2. 用于检测的抗体不足：增加抗体的量或浓度。
二、荧光强度高1. 抗体浓度过高：减少每个样本中添加的抗体量。
2. 过量抗体被捕获：洗涤步骤要充分，并在洗涤缓冲液中加入吐温或Triton，以保持细胞的透化作用。
3. 封闭不足：在抗体混合液中加入1%-3%的封闭剂，并增加封闭步骤。
三、背景高/阳性细胞百分比高1. 增益设置过高/补偿过低：使用阳性对照正确设置流式细胞仪，并使用补偿减少小颗粒背景信号和降低增益。
2. 抗体过量：降低抗体的浓度，并在洗涤缓冲液中加入去污剂，确保洗去过量的抗体。
四、在应该只有一个细胞群的情况下观察到两个或多个细胞群1. 表达靶蛋白的细胞群不止一个：检查样本中包含的细胞类型预期的蛋白表达水平，并确保细胞充分分离。
2. 出现细胞双峰：细胞双峰显示为第二大细胞群，其荧光强度大约是单细胞荧光强度的两倍。
在染色前用移液枪将细胞轻柔混匀，并在细胞仪中运行之前再次混匀。
五、侧向散射背景偏高（来自小颗粒）1. 细胞裂解：确保样本中的细胞没有裂解和破碎，样本应新鲜并正确制备，避免高速离心或激烈涡旋的操作。
流式细胞仪结果分析
CD4+Th细胞、CD4+/CD8+比例
六、自身免疫病相关HLA抗原分析
HLA-B27可出现在58%～97%的强直 性脊椎炎 As 患者
七、移植免疫中的应用
FCM作为一个强大的技术平台,已应用于多个领 域,其在移植免疫分析中的应用也越来越广泛， 目前移植免疫中的FCM应用主要包括流式细胞 术的交叉配型 Flow cytometry cross-matching, FCXM 和群体反应性抗体 Panel reactive antibody, PRA 检测，
样本来源：各种细胞 如外（ZHOU）血,骨 髓,实体组织、悬浮或贴壁培养的细胞 ,微生 物,人工合成微球等， 检测大小：一般是0.5um～40um
流式细胞仪的组成
液流系统 光学系统 数据处理系统
分选系统
分析型流式细胞仪
分选型流式细胞仪
液1 液流流系统
流动室
流动室 Flow cell 是液流系统的核心部件,流动室是由石英 玻璃制成,单细胞悬液在流动室里被鞘液流包绕通过流动 室内一定孔径的孔,检测区在该孔的中心,细胞在此与激光 垂直相交，
荧光染料的特性
•激发波长 EXCITING •发射波长 EMISSION
荧光补偿
四、细胞分选原理
通过流式细胞仪进行细胞分选主 要是在对具有某种特征的细胞需进 一步培养和研究时进行的，
一 分选基本原理
细胞悬液形成液流柱 压电晶体 产生机械振动
流动室振动
液流断裂成液滴
空白液滴 不充电
弃去
含细胞的液滴 充电
微小的乳胶微球分别染成上百 种不同的荧光色 固相芯片是用 探针在芯片上的坐标位置给基 因的特异性编码；而液相芯片 则是用颜色来编码
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*7.样本获取速度：不小于33000个细胞/秒。
8.变异系数：每一个荧光接收通道CV<2%（全峰宽）。
9.检测颗粒大小：0.5um-50um。
10.最小样本量：≤30ul，适合微量样本的检测。
11.交叉污染率：≤0.1%。
12.液流系统：要求配备独立的液流车系统，提供仪器使用所需的全部液流单独容器，包括鞘液，DI水，清洗液，废液等，以便仪器正常运行，并可全自动执行各类清洗程序，无需实验人员值守更换液体。
*3.光学检测系统：固定光路，采用光胶藕和石英杯激发方式；光纤信号导入检测系统；全反射荧光信号收集系统，先收集常波长信号，再收集短波长信号，每个激光接收通道最多可加配至8个荧光接收器，满足多色检测升级需要。
*4.液流系统：采用流体力学聚焦原理。
5.荧光检测灵敏度：FITC≤100 MESF，PEቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ50 MESF。
17.主软件：采用PC兼容机，Windows界面仪器控制，软件可同时安装在任意多台电脑上进行数据分析和报告。
*18.临床自动软件：要求配备临床自动软件，拥有具CFDA认证的4色及6色配套试剂，可自动完成4色或6色TBNK免疫分型和绝对计数、以及HLA-B27的自动检测。
项目需求书
序号
采购项名称
需求条款
数量
1
流式细胞仪
*1.主机系统：要求配备488nm、640nm、405nm三根固态激光器，可实现三激光10色荧光12参数的同时检测。
1台
*2.检测器：2个散射光检测器，10个荧光PMT检测器，其中要求488nm激光激发4色，640nm激光激发3色，405nm激光激发3色。
*13.连续检测时间：配备20L及其以上的鞘液，可支持连续20小时不间断的检测。
*14.可升级选配自动进样装置，支持至少40个流式管的自动进样系统。（具备此功能，但本次采购不配备）
15.要求具有完善的全自动仪器质控系统，包括全套质控品和软件系统，保证仪器处于正常状况，确保检测结果准确可靠。
*16.要求具有临床质控系统，可完成体外诊断检测中仪器条件的设置优化，包括实验设置的电压、补偿、阈值等仪器条件，并同时监控仪器稳定性、灵敏度、激光功率状态、系统压力等。