最新切胶回收的步骤
胶回收DNA注意事项
胶回收DNA注意事项①切胶回收DNA片段是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
所以为了减少胶的体积，我们就可以用相对比较薄的胶来跑电泳，通常只要够点样即可，或是采用薄而宽的梳子来跑胶。
这样可减少回收试剂引起的一些后续麻烦。
②主要还是DNA的浓度, 如果DNA浓度不够, 想胶小点也不可能。
③紫外灯下切下含待回收DNA的凝胶时，要衬以干净的塑料薄膜，使用无DNA污染的新刀片，其目的在于防止外源DNA的污染。
④利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段可能有以下几个原因：胶块未完全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数辅助溶解；胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收；电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH结合DNA，如pH太高，应作适当调整；漂洗液中未加入无水乙醇。
⑤可以改用去离子水洗脱。
但是实验室所用纯水一般pH偏低，可利用NaOH适当调高其pH 值，以增加洗脱得率。
⑥洗脱产物含有残留的乙醇会影响后续酶切实验，请确保彻底去除漂洗缓冲液，具体方法参见回收效率低的解决方案。
⑦不可以使用更小洗脱体积（小于说明书提供的最小洗脱体积）进行洗脱以提高浓度，因为说明书提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积，若减少体积则不能将DNA完全洗脱下来。
⑧电泳检测只有一条目的带，可以选用凝胶回收试剂盒。
如果后续实验对片段纯度要求较高，建议即使只有一条带，也可以切胶纯化，其回收得到片段的纯度可能要比直接回收高一些。
⑨琼脂糖凝胶胶块不溶可能是下述原因：琼脂糖质量不好；含目的片段的凝胶再空气中放置过久，使胶块失水、干燥，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存在4℃或-20℃；制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
关于胶回收切胶的一点注意事项1. 电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。
2. 切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
DNA胶回收实验技术的方法和步骤
一. 提高胶回收量的办法1) 增加电泳时的上样量。
2) 电泳缓冲液用新鲜配制的。
3) 切胶时尽量只切有条带的胶，减小切胶体积：含目的片断很少的胶就不要要了，不然影响回收率。
4) 把切的两块或多块胶融化后，无论多大的体积都用一个管子，转移到同一个柱子上。
5) 溶胶时所加的溶液可多一点，这样更有利于DNA与膜的结合，不过一般不要多余750ul。
6) 胶回收的关键是通过柱子的溶液的盐浓度、酸碱性（电荷）和疏水性使DNA与柱子结合，因此，若电泳缓冲液的PH偏高，可在溶胶液中加入10ul（PH 5.0，3mol/L的NaAC）；为了使DNA分子更好的拦截在膜上，可以添加30％异丙醇在加热溶解胶后的液体里。
7) 加洗脱液之前，将柱子在室温放置几分钟（大约需10分钟），以使乙醇充分挥发。
8) 最后少加些洗脱液，尽量减少回收体积，一般用30-50μl洗脱液洗脱（不能太少，否则无法浸湿膜反而不利于洗脱）；洗脱液滴在膜中央，以充分洗脱结合在膜上的DNA。
9) 可以在加入洗脱液之后，可以在55度水浴5分钟或放在50度水浴10分钟以上再洗脱，或用封口膜密封4度过夜，第二天再离心回收，效果不错。
10) 将离心后的洗脱液加回吸附柱，再次离心。
二. 几种PCR产物回收的详方法和步骤1) 普通胶回收如果要胶回收，最好还是用试剂盒，方便，回收率也略高，实在要手工回收，可以切胶后加入3倍体积TE，水浴熔化后，酚、酚／氯仿抽提干净，乙醇沉淀即可。
另外好像还有冷冻法，没作过，不是很清楚。
2) 从低熔点凝胶回收DNA纯化DNA片段加与凝胶体积相等的TE（10mmol/l Tris-HCl pH8.0，0.1mmol/l EDTA），置65℃水浴5分钟保温，使凝胶完全溶解。
待放至室温，加等量酚（TE饱和，TE封在上层，取下层酚），轻轻混匀（不用混匀），12000rpm，3分钟离心。
反复1-2次。
取上层液，加0.1体积3mol/L醋酸钠（pH5.2）和2.5倍体积无水乙醇，进行乙醇沉淀。
PCR扩增结果分析和胶回收切胶的一点注意事项
讨论1.假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量，④PCR循环条件。
寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。
模板：①模板中含有Taq酶抑制剂，②在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。
③模板核酸变性不彻底。
在酶和引物质量好时，不出现扩增带，有可能是模板核酸提取过程出了毛病，可使用阳性对照的DNA模板配合检查模板质量。
酶失活：需更换新酶，或新旧两种酶同时使用，以分析是否因酶的活性丧失或不够而导致假阴性。
引物：引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称，是PCR失败或扩增条带不理想、容易弥散的常见原因。
有些批号的引物合成质量有问题，两条引物一条浓度高，一条浓度低，造成低效率的不对称扩增，对策为：①选定一个好的引物合成单位。
②引物的浓度不仅要看OD值，更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳，一定要有引物条带出现，而且两引物带的亮度应大体一致，如一条引物有条带，一条引物无条带，此时做PCR有可能失败，应和引物合成单位协商解决。
如一条引物亮度高，一条亮度低，在稀释引物时要平衡其浓度。
③引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融或长期放冰箱冷藏，导致引物变质降解失效。
④引物设计不合理，如引物长度不够，引物之间形成二聚体等。
Mg2+浓度：Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低PCR扩增的特异性，浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。
反应体积的改变：通常进行PCR扩增采用的体积为20ul、30ul、50ul、或100ul，应用多大体积进行PCR扩增，是根据科研和临床检测不同目的而设定，在做小体积如20ul 后，再做大体积时，一定要模索条件，否则容易失败。
物理原因：变性对PCR扩增来说相当重要，如变性温度低，变性时间短，极有可能出现假阴性;退火温度过低，可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率，退火温度过高影响引物与模板的结合而降低PCR扩增效率。
蛋白切胶回收步骤
蛋白切胶回收步骤
嘿，咱今儿就来说说蛋白切胶回收这档子事儿哈！
你想想看，这蛋白就像是一个个藏着宝贝的小盒子，咱得把它们从那一大块胶里给挑出来，这可不是个简单活儿呢！
首先啊，得把那含着蛋白的胶给找出来，这就好比在一堆杂物里找你心爱的小物件儿，得仔细着点儿呢！然后，给胶来个“美容”，把它切得整整齐齐的，可别毛毛躁躁的切坏了呀。
接着呢，就像挖宝藏一样，把带着蛋白的那一小块胶给挖出来，这可得小心，别把宝贝给弄丢咯。
把挖出来的胶放进小管子里，加点神奇的溶液，这就开始让蛋白从胶里慢慢跑出来啦。
这过程就好像是蛋白在胶里待久了，想出来透透气，咱就给它们创造个机会。
等它们跑出来一些了，就把管子放那儿，让它们好好地待着。
过了一会儿，再把管子拿出来晃晃，让蛋白和其他东西分离开来。
这就好像是把混在一起的糖果和石子儿给分开一样。
然后啊，把上面的液体吸出来，这里可得注意啦，别吸到不该吸的东西哦！吸出来的液体里可就有咱想要的蛋白啦。
哎呀，你说这蛋白切胶回收是不是挺有意思的。
就像一场小小的冒险，得细心、耐心，还得有点小技巧呢！
想想看，要是没做好这一步，那后面的实验不就都受影响啦？就好比盖房子，基础没打好，那房子能结实吗？所以啊，咱可得把这蛋白切胶回收给做好咯。
这就是蛋白切胶回收的步骤啦，虽然说起来简单，做起来可不容易呢！但只要咱认真对待，就一定能把蛋白好好地回收回来，为后面的实验打下坚实的基础呀！是不是很神奇呢？嘿嘿！。
胶回收
1. 使用TAE缓冲液或TBE缓冲液制作琼脂糖凝胶，然后对目的DNA进行琼脂糖凝胶电泳。
2. 在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面的液体。
此时应注意尽量切除不含目的DNA部分的凝胶，尽量减小凝胶体积，提高DNA回收率。
注）切胶时请注意不要将DNA长时间暴露于紫外灯下，以防止DNA损伤。
3. 切碎胶块。
胶块切碎后可以加快操作步骤6的胶块融化时间，提高DNA的回收率。
4. 称量胶块重量，计算胶块体积。
计算胶块体积时，以1 mg=1 ul进行计算。
5. 向胶块中加入胶块融化液DR-I Buffer。
DR-I Buffer的加量如下表： 6. 均匀混合后75℃加热融化胶块（低熔点琼脂糖凝胶只需在45℃加热)。
此时应间断振荡混合，使胶块充分融化（约6～10分钟)。
注）胶块一定要充分融化，否则将会严重影响DNA的回收率。
7. 向上述胶块融化液中加入DR-I Buffer量的1/2体积量的DR-II Buffer，均匀混合。
当分离小于400 bp的DNA片段时，应在此溶液中再加入终浓度为20%的异丙醇。
8. 将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。
9. 将上述操作7的溶液转移至Spin Column中，12,000 rpm离心1分钟，弃滤液。
注）如将滤液再加入Spin Column中离心一次，可以提高DNA的回收率。
10. 将500 ul的Rinse A加入Spin Column中，12,000 rpm离心30秒，弃滤液。
11. 将700 ul的Rinse B加入Spin Column中，12,000 rpm离心30秒，弃滤液。
12. 重复操作步骤11。
13. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上，在Spin Column 膜的中央处加入25 ul 的灭菌蒸馏水或Elution Buffer，室温静置1分钟。
注）把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60℃使用时有利于提高洗脱效率。
胶回收的方法、注意事项以及实验步骤
胶回收的方法、注意事项以及实验步骤DNA片段的分离与回收是基因工程操作中一项重要的技术,如可收集特定酶切片段用于基因克隆或是制备探针,回收PCR产物用于再次鉴定等。
1 各类常用回收方法由于分离方法众多,且各种不同的方法可能同时依据多项原理,所以只能粗略地将各种方法分成五大类:电泳法,收集孔法,机械破碎法,溶(熔)胶法与酶处理法:一,电泳法根据凝胶割否分透析袋法与流动电洗脱法(割胶),滤纸-透析膜法与DEAE膜法(不割胶).(1)透析袋法该方法可回收大于5kb的片段,缺点是操作麻烦并易造成DNA酶的污染.(2)流动电洗脱法该方法回收片段大小为4～50kb,且回收效率高达94～100%,极端条件下可回收大至550kb的片段.缺点是操作繁琐,而且为了取得较高的回收率,需特定的流动电洗脱槽.(3)滤纸-透析膜法回收率平均达70%左右,不需割胶,操作相对简单,但实验中需将滤纸上的DNA洗脱,也较繁琐,也不易控制.(4)滤纸-透析膜法此方法用于回收小片段,一般小于5kb的片段回收效率较高,可达70%以上;对于大片段(>15kb)则难以从DEAE膜上洗脱下.二,收集孔法(1)蔗糖法回收小片段效率较高,564bp的PCR产物带回收效率高达97.6%,并且回收中能将较宽的条带浓缩于收集孔中,但回收中制作收集孔较麻烦,并且收集孔中要加入蔗糖,故获得的DNA样品不能直接用于后续实验.(2)羟基磷灰石法该方法回收效率也较高,不利之处与上述方法相同,获得的DNA需再纯化,操作也较繁琐.三,机械破碎法指用机械力将凝胶压碎后再行回收DNA片段,有冻挤法,冻融法,压碎浸泡法,(单层)滤膜过滤法及双层(亲和)膜过滤法.(1)冻挤法将胶条割下置于塞有玻璃棉的吸嘴或是管底刺有小孔的eppendorf管中,冰冻30min后全速离心5min,收集清液,再经酚抽提,乙醇沉淀等纯化浓缩处理(也可直接沉淀).其基本原理理是利用离心力将凝胶中原有的液体挤出,同时也带出胶中的DNA.从胶浓度为1%琼脂糖中回收650bp,1.1kb,2.0kb,4.5kb的片段时,回收率分别为90%,74%,56%,30%.这是因为大分子DNA更难于被胶中的缓冲液带出,所以此法只适用于回收较小的DNA片段.(2)冻融法割下的胶条放在eppendorf管中,将之捣碎并放于-80℃冰冻5min,取出后迅速放置于37℃保温10min,如此反复3次能使DNA从胶中游离出来,离心获得上清中即含有目的DNA,可通过沉淀浓缩获得高浓度.对一般的DNA片段回收效率在60～80%.操作简单,并不需特殊设备.(3)压碎浸泡法又称醋酸铵法,操作较费时,回收效率较低,一般改良的方法是在冻挤法操作中,加入一定的水并浸泡10min,增加DNA的回收率.四,溶胶法根据物理或化学溶胶可分为低融点法(物理熔胶)与NaI,KI,NaClO4溶胶法(化学溶胶).(1)低融点胶法采用特殊的低融点凝胶,该胶在65℃即溶化,实验中是先灌制正常的凝胶,然后用低融点胶取代其中的部分(即可节约低融点凝胶用量,也能保证电泳中整块凝胶的完整性.)电泳完成后割下的凝胶可于65℃下保温溶解,后直接用于酶切,连接,DNA标记的实验.操作方便简单,但需特殊的低融点凝胶,成本较高,且回收得到的样品浓度较低.(2)化学融胶法琼脂糖能溶解于一些盐溶液中(NaI,KI,NaClO4),然后可用特殊的纯化柱将DNA样品溶液纯化,现在广泛使用的凝胶电泳中DNA片段回收试剂盒基本采用了此中回收原理,能在短时间内获得目的DNA片段,成本也较低.五,酶处理法对于大片段DNA的回收,象酵母人工染色体的克隆实验中,克隆片段可大到2 000kb,一般采用此方法.利用琼脂糖酶降解琼脂糖,能较温和的裂解琼脂糖,最终成功回收DNA片段.2 DNA回收中的注意事项除了选择合适的方法外,实验中还要注意以下几点:(1)防止抽提过程中污染DNA酶与回收片段接触的试剂与器皿等都应进行灭菌(酶)处理,即使是不能用干热或湿热法灭菌的器皿也要用乙醇浸泡以灭杀活菌与DNA酶,不然可能发生回收片段部分降解的现象,有时甚至一无所获.即使是轻微的降解反应——当发生在粘性末端时也会导致严重的连接困难.(2)紫外照射选择长波段回收过程往往需在紫外等监测下进行,与一般观察电泳结果不同的是这时应用长波紫外灯.因为短波紫外线(254nm)会引起DNA的断裂或是形成TT二聚体,前者会使以后的连接与转化等实验失败,后者可能造成基因突变,给克隆工作带来麻烦.即使是使用了长波紫外照射,回收DNA时也要尽量短时照射,避免连续长时间照射.(3)实验操作要轻柔特别在处理较大片段时应防止机械剪切作用DNA对的破坏,如吸取液体,转动离心管等操作均应缓慢,轻柔.综上所述,只有在合适的回收方法基础上注意具体操作步骤是才能有效回收所需片段,为以后的酶切,连接,标记等工作打下良好基础.3 实验步骤一、试剂盒法(Kit回收法,以上海申能博彩生物科技有限公司生产的试剂盒为例)(1)从电泳板上切割含目的DNA片段的凝胶块(割胶尽可能的小,提供后续回收效率)(2)凝胶称重后并将其放入1.5ml管中,将其适当切小,加速溶解.每100mg凝胶加入400μl solution SN.(若称重省略,一般加入400μl SN)(3)凝胶溶解:55-60℃,保温5-10分钟,每2分钟混匀一下,使凝胶溶解,胶完全融化后每400μl solution SN中加入solution B 100μl,混匀.(4)将3S柱装入2ml洗管,将上述混合液转移至3S柱,室温放置2min.室温10 000 rpm离心1分钟,稳定45秒.(5)取下3S柱,倒掉收集管中的废液,将3S柱放入同一收集管中,加入600μl Wash Solution,室温10 000 rpm离心1分钟.(6)重复步骤5一次.(7)取下3S柱,倒掉收集管中废液,将3S柱放入同一收集管中,室温10 000 rpm离心2分钟.(8)将3S柱放入新的离心管中,在3S柱子膜中央加30μl ddH2O,不加盖室温放置2分钟.(9)盖上离心管,室温10 000 rpm离心1分钟,离心管中的液体即为回收的DNA片段.二、冻融,挤压回收法(1)用手术刀在DNA紫外检测仪下切割下含有所要DNA片段的凝胶块置于Eppendorf管中,甩至管底,-20℃冻存30min,(2)取出后用牙签将凝胶块尽量捣碎,剪去管上部,用烧红的针头在管底扎几个微孔,孔径越细越好.(3)将管套入另一个Eppendorf管中,常温下,15 000rpm离心10分钟.(4)将上清液吸到收集管中,向沉淀中加入100μl重蒸水.(5)重复步骤(2),(3),(4)两遍(如图所示).(6)收集的上清于15 000rpm,4℃离心20分钟,吸取上清液,补足400μl.(7)收集的上清液加入0.1V 的KAc(pH=5.5,3M)和2.0～2.5V 的无水乙醇,充分混匀后-20℃放置30min,取出15 000rpm,4℃离心30min.(8)弃上清,加入400μl 70%的乙醇,15 000rpm,4℃离心5min.(9)弃上清并倒扣3~5min,然后37℃烘干(30min左右即可).(10)烘干沉淀可用30ml ddH2O溶解,待用.。
pcr切胶回收的步骤
pcr切胶回收的步骤
PCR切胶回收呀，这可是个很有趣的小实验呢。
先说说准备工作吧。
你得有已经跑过PCR并且经过琼脂糖凝胶电泳的胶块哦。
然后呢，把要用的工具都准备好，像干净的刀片啦，还有专门的切胶回收试剂盒。
开始切胶啦。
在紫外灯下看胶块的时候，就像寻宝一样呢。
找到你要的那条DNA 条带，然后用刀片小心翼翼地把它周围的胶切下来。
可别切太大块啦，不然会有好多杂质的。
切的时候就像在给小宝贝做精细的手术一样，要很小心哦。
切好胶之后，就按照试剂盒的说明来操作啦。
一般是把切下来的胶放到一个离心管里，然后加入一些溶液，让胶融化。
这时候你就看着胶慢慢变成液体，感觉就像魔法一样呢。
接着呢，要把融化后的液体加到吸附柱里。
这个吸附柱就像一个小卫士，专门把DNA吸附住，而那些杂质就被留在外面啦。
把液体加进去之后，离心一下，就像坐小过山车一样，让液体在离心力的作用下快速通过吸附柱。
然后呢，要清洗一下吸附柱。
这一步就像是给小卫士洗个澡，把它身上可能残留的杂质都洗干净。
再离心一下，把清洗的液体甩掉。
最后就是把我们想要的DNA从吸附柱上洗脱下来啦。
加入洗脱液，再离心，这个时候我们的DNA就乖乖地跑到洗脱液里啦。
就像把小宝贝从保护它的小房子里接出来一样。
这样，PCR切胶回收就完成啦。
虽然过程有点小复杂，但是只要按照步骤来，就可以得到我们想要的纯净的DNA啦。
每次做这个实验都感觉像是在和小小的DNA分子玩一场有趣的游戏呢。
切胶回收步骤
切胶回收步骤
嘿，咱今儿就来说说切胶回收这档子事儿！
你想想看啊，那凝胶就像是一个藏着宝贝的神秘盒子，咱得小心翼
翼地把里面咱想要的那部分给找出来。
首先呢，咱得把那含有咱目标片段的凝胶给找出来，这就好比在一
堆玩具里找出你最喜欢的那个小汽车，得看准咯！然后呢，用那干净
又锋利的刀片，轻轻地把那一块儿给切下来，可别太用力啦，不然把
宝贝给弄坏喽。
这就跟切蛋糕似的，得恰到好处。
切下来之后，可不是直接就完事儿了哦。
接下来要把这小块凝胶放
到一个专门的管子里。
这管子就像是宝贝的新家，舒舒服服地待在里面。
然后呢，就要加一些专门的溶液进去啦，这些溶液就像是给宝贝洗
个舒服的澡，让它能更好地被我们得到。
再之后，就是把这个管子放到一个合适的温度下，让一切反应好好
地进行。
这就好像是让宝贝在一个温暖的房间里休息，慢慢变得更好。
等反应得差不多了，就该离心啦！这离心就像是把宝贝身上多余的
东西甩掉，让它变得更纯粹。
最后，把那离心出来的液体收集起来，这里面可就有咱心心念念的目标片段啦！这感觉，就像是终于找到了藏在深处的宝藏一样，开心得不行！
你说这切胶回收是不是挺有趣的呀？虽然过程有点小麻烦，但一想到能得到自己想要的东西，那一切都值得啦！就像你为了吃到最喜欢的糖果，就算要跑很远的路去买，你也会很乐意呀！所以呀，别嫌麻烦，好好地去做切胶回收，说不定就能有大收获呢！。
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切胶回收的步骤
1．琼脂糖凝胶电泳目的基因，紫外灯下切除含有目的基因的琼脂糖，用纸巾吸尽凝胶表面的液体，尽量减少不含目的基因的凝胶量，称重（1mg=1ul）
2．尽量切碎凝胶
3．向离心管中加入3倍体积的NAL溶液，55（视具体胶定）度加热，使凝胶完全融化，
4．按每20ul硅胶树脂结合（树脂使用前要充分混匀）约3ugDNA加入适量比例的硅胶树脂，充分混合，室温放置20min，
5．10000rpm离心1分钟，去上清（上清液暂保存，如回收率不过可重复4）
6．加入800ul清洗液（清洗液加入56ml100%的无水乙醇），振荡混匀后，室温静置10min，10000rpm离心1分钟，去上清
7．重复步骤6，尽量去除上清，完全风干至不残留乙醇味道；
8．加入和硅胶树脂等体积的TEbuffer或灭菌蒸馏水混匀，55度水浴20min
9．10000rpm离心1分钟，吸上清为DNA回收液，
重复8，9初一语文讲义
辨析和修改病句的基本方法
辨析并修改病句是语文实际运用能力的具体表现之一，也是中考中长“考”不衰的常青树。
本专题主要就是帮助学生了解句子的致病原因，掌握辨析和修改病句的基本方法，提高“诊断和施治”的能力。
“病句的辨析及修改”是近年来各地中考的重点，也是难点。
这类题的主要考查方法有客观题和主观题两种。
病句的辨析一般以客观选择题出现。
这是一种比较传统的考察题型，它面广量大，仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢1
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以思维见长，是近年中考中常见的题型，也是学生最易失分的题目，这就要求同学们复习过程中要重视这一类题的复习和训练。
主观题多指修改性的题目，多用于对句子或文段的修改。
不仅要求学生们了解这是病句，是什么样的病句，而且要求知道如何修改，难度更大。
目前学生对病句尚处于感性认识的阶段，而且这种认识是分散和不完全的，往往还不能自觉地综合应用，这一专题的复习指导是非常必要的。
一、何为“病句”
如果一个句子文不从，字不顺，不合乎语法规范，那它就有语病。
通俗地说就是，凡是读起来不通顺，感觉别扭、含混不清的句子都是病句。
二、如何辨析病句
（1）感读——凭语感，凡是读起来别扭，听起来含混的，就可能有语病。
如：她有一个女儿，同许多年轻的妈妈一样，愿意把孩子打扮的漂亮一些。
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