切胶回收的步骤讲课稿
切胶回收的原理
切胶回收的原理咱来聊聊切胶回收这事儿。
这就像是从一堆宝藏里挑出咱想要的那一件宝贝，然后把它单独拿出来好好保存起来。
先说说凝胶电泳吧。
想象一下，各种大小的分子就像一群小伙伴在参加一场马拉松比赛，跑道就是琼脂糖凝胶。
那些小的分子啊，它们身子轻，跑起来就快，能在凝胶里跑得老远；而那些大的分子呢，就像背着重重行囊的人，跑得慢，没跑多远就被落下了。
这样一来，不同大小的分子就按照自己的速度在凝胶里拉开了距离，形成了一条条不同的条带。
这就好比是小伙伴们按照不同的速度在跑道上分散开来，各自在自己的位置上。
然后呢，咱就看到了那凝胶里的条条带带，这里面就有我们感兴趣的那部分。
这时候切胶回收就登场了。
就好像我们在那跑道上，看到了那个我们一直在找的小伙伴，然后把他所在的那一小段跑道给切下来。
那凝胶里的目标条带就像是藏着宝藏的那一小块地方。
那切下来的胶块里可都是宝贝啊。
可是怎么把这宝贝拿出来呢？这就涉及到切胶回收的核心原理啦。
有一种办法呢，是利用溶胶液。
这溶胶液就像是一个超级魔法溶剂。
把切下来的胶块放到溶胶液里，就像把那藏着宝贝的小盒子放到一个能打开它的魔法池子里。
溶胶液会把凝胶慢慢溶解掉，那些原本被困在凝胶里的DNA分子就被释放出来了。
这就好比是把宝贝从那个锁住它的小盒子里解救出来了。
还有一种情况呢，是和吸附有关的。
就像小磁石吸引小铁屑一样。
有些材料可以专门吸附DNA分子。
当把切下来的胶块处理后，那些DNA 分子就被吸附到特定的材料上了。
这时候其他的杂质就被留在一边了，就像把沙子和金子分开一样。
然后再通过一些特殊的溶液把吸附着的DNA 分子从材料上洗脱下来，这样就得到了比较纯净的我们想要的DNA分子啦。
在这个过程中，温度有时候也很关键。
就像不同的花朵需要不同的温度来生长一样。
合适的温度能让溶胶的过程更顺利，也能让吸附和洗脱的效果更好。
如果温度不合适，就像花儿在不合适的温度下长不好一样，切胶回收的效果可能就会大打折扣。
咱再从一个更形象的角度看。
切胶回收注意事项
切胶回收注意事项
以下是 6 条关于切胶回收注意事项：
1. 千万要选对工具啊！就像你去砍柴不能拿个小勺子一样，切胶得用合适的刀片啊。
比如你要是用个钝的不行的刀片去切，那能切得动吗？肯定不行呀！所以选择锋利的工具很重要，可别小瞧这个哦。
2. 切胶的时候可得细心点哟！这可不是开玩笑的，你想想，要是马马虎虎的，把需要的部分没切好或者切坏了，那不就白忙活啦！就好比搭积木，小心翼翼才能搭得稳当，对吧。
3. 做好防护措施呀！难道你不怕胶沾到手上或者其他地方吗？戴手套、穿实验服，这些都要准备好呀！不然万一沾到皮肤上，那多麻烦呀！
4. 操作环境要注意呀！你总不能在乱糟糟的地方切胶回收吧，就像你吃饭也不会在垃圾堆旁边吃呀。
找个干净整洁的地方，才能保证操作顺利呀。
5. 控制好力度啊！别太使劲了把胶都压坏了，也别太轻了切不下来。
就像骑自行车，太用力踩会累，太轻了又不走，得掌握好那个度。
6. 切完之后要妥善处理呀！别随手一扔就不管了。
就像你玩完玩具要收好一样，把切胶后的东西整理好，该放哪里放哪里，这样下次用起来也方便呀！
我觉得切胶回收一定要谨慎仔细，每个步骤都不能马虎，不然很可能前功尽弃呀！。
实验酶切胶回收和连接
NaI存在条件下，加热至55℃，含有DNA片段 的琼脂糖凝胶就会融化，然后可利用硅胶树脂 吸附DNA分子，从而得到纯洁的DNA片段。
硅胶树脂在高盐离子浓度下可以高效专一的吸 附DNA，通过离心可将DNA片段沉淀下来，在 碱性低盐浓度下其与DNA的结合能力会急剧降
操作步骤
1. 取一干净的1.5ml的离心管，称重，标记。
6. 重复步骤5一次。 7. 将Genclean柱放回收集管中，12000rpm ，1min，彻底去除
wash solution。 8. 将Genclean柱放到一干净的1.5ml的离心管中，参加30ml
Elution buffer,37 ℃放置2min, 12000rpm,1min.所得液体即目 的片段。 9. 取5ml目的片段，参加1ml 6×loading buffer，电泳鉴定。剩 余液体可直接用于后续试验或-20 ℃保存。
在我们今天的实验中，用到两种限制性酶分 别是HindⅢ和EcoRⅠ，这两种酶切割后产生 的片段都具有粘性末端，可以保证酶切产物 与载体正确的连接。
酶切体系
10×M : 2ml
HindⅢ : 1ml
EcoRⅠ: 1ml
ddH2O : 6ml
质 粒 ： 10ml
总体积 : 20ml
将酶切体系按顺序加好后放入已预热的37°C 的水浴锅中， 使反响体系在这个温度下进行酶切。 酶切2h后加2ml 10×loading buffer终止酶切反响，取全部的样品用于胶回收。
蛋白切胶回收步骤
蛋白切胶回收步骤
嘿，咱今儿就来说说蛋白切胶回收这档子事儿哈！
你想想看，这蛋白就像是一个个藏着宝贝的小盒子，咱得把它们从那一大块胶里给挑出来，这可不是个简单活儿呢！
首先啊，得把那含着蛋白的胶给找出来，这就好比在一堆杂物里找你心爱的小物件儿，得仔细着点儿呢！然后，给胶来个“美容”，把它切得整整齐齐的，可别毛毛躁躁的切坏了呀。
接着呢，就像挖宝藏一样，把带着蛋白的那一小块胶给挖出来，这可得小心，别把宝贝给弄丢咯。
把挖出来的胶放进小管子里，加点神奇的溶液，这就开始让蛋白从胶里慢慢跑出来啦。
这过程就好像是蛋白在胶里待久了，想出来透透气，咱就给它们创造个机会。
等它们跑出来一些了，就把管子放那儿，让它们好好地待着。
过了一会儿，再把管子拿出来晃晃，让蛋白和其他东西分离开来。
这就好像是把混在一起的糖果和石子儿给分开一样。
然后啊，把上面的液体吸出来，这里可得注意啦，别吸到不该吸的东西哦！吸出来的液体里可就有咱想要的蛋白啦。
哎呀，你说这蛋白切胶回收是不是挺有意思的。
就像一场小小的冒险，得细心、耐心，还得有点小技巧呢！
想想看，要是没做好这一步，那后面的实验不就都受影响啦？就好比盖房子，基础没打好，那房子能结实吗？所以啊，咱可得把这蛋白切胶回收给做好咯。
这就是蛋白切胶回收的步骤啦，虽然说起来简单，做起来可不容易呢！但只要咱认真对待，就一定能把蛋白好好地回收回来，为后面的实验打下坚实的基础呀！是不是很神奇呢？嘿嘿！。
胶回收
1. 使用TAE缓冲液或TBE缓冲液制作琼脂糖凝胶，然后对目的DNA进行琼脂糖凝胶电泳。
2. 在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面的液体。
此时应注意尽量切除不含目的DNA部分的凝胶，尽量减小凝胶体积，提高DNA回收率。
注）切胶时请注意不要将DNA长时间暴露于紫外灯下，以防止DNA损伤。
3. 切碎胶块。
胶块切碎后可以加快操作步骤6的胶块融化时间，提高DNA的回收率。
4. 称量胶块重量，计算胶块体积。
计算胶块体积时，以1 mg=1 ul进行计算。
5. 向胶块中加入胶块融化液DR-I Buffer。
DR-I Buffer的加量如下表： 6. 均匀混合后75℃加热融化胶块（低熔点琼脂糖凝胶只需在45℃加热)。
此时应间断振荡混合，使胶块充分融化（约6～10分钟)。
注）胶块一定要充分融化，否则将会严重影响DNA的回收率。
7. 向上述胶块融化液中加入DR-I Buffer量的1/2体积量的DR-II Buffer，均匀混合。
当分离小于400 bp的DNA片段时，应在此溶液中再加入终浓度为20%的异丙醇。
8. 将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。
9. 将上述操作7的溶液转移至Spin Column中，12,000 rpm离心1分钟，弃滤液。
注）如将滤液再加入Spin Column中离心一次，可以提高DNA的回收率。
10. 将500 ul的Rinse A加入Spin Column中，12,000 rpm离心30秒，弃滤液。
11. 将700 ul的Rinse B加入Spin Column中，12,000 rpm离心30秒，弃滤液。
12. 重复操作步骤11。
13. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上，在Spin Column 膜的中央处加入25 ul 的灭菌蒸馏水或Elution Buffer，室温静置1分钟。
注）把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60℃使用时有利于提高洗脱效率。
pcr切胶回收的步骤
pcr切胶回收的步骤
PCR切胶回收呀，这可是个很有趣的小实验呢。
先说说准备工作吧。
你得有已经跑过PCR并且经过琼脂糖凝胶电泳的胶块哦。
然后呢，把要用的工具都准备好，像干净的刀片啦，还有专门的切胶回收试剂盒。
开始切胶啦。
在紫外灯下看胶块的时候，就像寻宝一样呢。
找到你要的那条DNA 条带，然后用刀片小心翼翼地把它周围的胶切下来。
可别切太大块啦，不然会有好多杂质的。
切的时候就像在给小宝贝做精细的手术一样，要很小心哦。
切好胶之后，就按照试剂盒的说明来操作啦。
一般是把切下来的胶放到一个离心管里，然后加入一些溶液，让胶融化。
这时候你就看着胶慢慢变成液体，感觉就像魔法一样呢。
接着呢，要把融化后的液体加到吸附柱里。
这个吸附柱就像一个小卫士，专门把DNA吸附住，而那些杂质就被留在外面啦。
把液体加进去之后，离心一下，就像坐小过山车一样，让液体在离心力的作用下快速通过吸附柱。
然后呢，要清洗一下吸附柱。
这一步就像是给小卫士洗个澡，把它身上可能残留的杂质都洗干净。
再离心一下，把清洗的液体甩掉。
最后就是把我们想要的DNA从吸附柱上洗脱下来啦。
加入洗脱液，再离心，这个时候我们的DNA就乖乖地跑到洗脱液里啦。
就像把小宝贝从保护它的小房子里接出来一样。
这样，PCR切胶回收就完成啦。
虽然过程有点小复杂，但是只要按照步骤来，就可以得到我们想要的纯净的DNA啦。
每次做这个实验都感觉像是在和小小的DNA分子玩一场有趣的游戏呢。
胶回收方法全攻略
胶回收方法全攻略胶回收方法全攻略说到电泳凝胶的片断回收，想来在实验室久已的“老手”们都会不屑一顾。
确实，一般在各个和分子生物学沾到一点边儿的实验室里，从琼脂糖凝胶中回收DNA，仅仅是一种简单不过的常规实验操作。
虽说早期的凝胶电泳片断回收没有1—2个小时是搞不定的，每个实验室也有自己的独门秘诀，可后来各大品牌纷纷推出了了多种不同用途，不同价钱的快速凝胶回收试剂盒，一下子将胶回收的时间缩短到10多分钟，操作也大大简化，胶回收就变成“小菜一碟”了。
然而，从bbs逛上一圈下来，发现实际上还是有不少人为胶回收这种看似简单的操作而烦恼。
到底是什么导致了实验新手，甚至是老手在这个已经发展近40年的常规性实验中卡壳?由于胶回收的质量和数量直接影响后继的一系列实验——比如酶切连接、转化筛选、测序或者PCR 扩增、标记乃至显微注射等等，为大家搜罗各种产品和方法的优缺点，注意事项，做一个胶回收全攻略篇。
一、胶回收的关键参数胶回收的质量直接影响后继实验的成功与否。
要想做好胶回收，无论是自己亲力亲为还是借助目前五花八门的胶回收试剂，最基本的评定标准无外乎这么几个:质量( 回收产物的纯度和浓度)，回收效率，操作方便(速度)，柱子的载量等等。
回收产物质量：回收产物的质量主要指纯度。
常规电泳过程中，普通级别的琼脂糖自带的一些性状不明的多糖，会连同DNA一起从凝胶中抽提出来，会强烈抑制后继的连接、酶切、或者标记、扩增等实验。
从凝胶中回收DNA片断，产物的纯度自然是我们考虑的第一要务。
对于大片断DNA回收，质量还包括了产物的完整与否，如果机械剪切力使得回收产物大小不一致，后果决不是你希望碰见的。
而对于较小片断回收，质量其实还包括了回收产物的浓度。
因为产物浓度太小，对后继实验同样也有影响，比如连接、标记实验等等就很不爽，往往不得不再浓缩一次，增加了操作的复杂性。
此外，极微量的纯化介质或者是某些试剂混入回收产物中也会对结果产生致命的影响。
切胶回收步骤
切胶回收步骤
嘿，咱今儿就来说说切胶回收这档子事儿！
你想想看啊，那凝胶就像是一个藏着宝贝的神秘盒子，咱得小心翼
翼地把里面咱想要的那部分给找出来。
首先呢，咱得把那含有咱目标片段的凝胶给找出来，这就好比在一
堆玩具里找出你最喜欢的那个小汽车，得看准咯！然后呢，用那干净
又锋利的刀片，轻轻地把那一块儿给切下来，可别太用力啦，不然把
宝贝给弄坏喽。
这就跟切蛋糕似的，得恰到好处。
切下来之后，可不是直接就完事儿了哦。
接下来要把这小块凝胶放
到一个专门的管子里。
这管子就像是宝贝的新家，舒舒服服地待在里面。
然后呢，就要加一些专门的溶液进去啦，这些溶液就像是给宝贝洗
个舒服的澡，让它能更好地被我们得到。
再之后，就是把这个管子放到一个合适的温度下，让一切反应好好
地进行。
这就好像是让宝贝在一个温暖的房间里休息，慢慢变得更好。
等反应得差不多了，就该离心啦！这离心就像是把宝贝身上多余的
东西甩掉，让它变得更纯粹。
最后，把那离心出来的液体收集起来，这里面可就有咱心心念念的目标片段啦！这感觉，就像是终于找到了藏在深处的宝藏一样，开心得不行！
你说这切胶回收是不是挺有趣的呀？虽然过程有点小麻烦，但一想到能得到自己想要的东西，那一切都值得啦！就像你为了吃到最喜欢的糖果，就算要跑很远的路去买，你也会很乐意呀！所以呀，别嫌麻烦，好好地去做切胶回收，说不定就能有大收获呢！。
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切胶回收的步骤
精品资料
切胶回收的步骤
1．琼脂糖凝胶电泳目的基因，紫外灯下切除含有目的基因的琼脂糖，用纸巾吸尽凝胶表面的液体，尽量减少不含目的基因的凝胶量，称重（1mg=1ul）
2．尽量切碎凝胶
3．向离心管中加入3倍体积的NAL溶液， 55（视具体胶定）度加热，使凝胶完全融化，
4．按每20ul硅胶树脂结合（树脂使用前要充分混匀）约3ugDNA加入适量比例的硅胶树脂，充分混合，室温放置20min，
5．10000rpm离心1分钟，去上清（上清液暂保存，如回收率不过可重复4）
6．加入800ul清洗液（清洗液加入56ml100%的无水乙醇），振荡混匀后，室温静置10min，10000rpm离心1分钟，去上清
7．重复步骤6，尽量去除上清，完全风干至不残留乙醇味道；
8．加入和硅胶树脂等体积的TEbuffer或灭菌蒸馏水混匀，55度水浴20min 9．10000rpm离心1分钟，吸上清为DNA回收液，
10．重复8，9
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