4.汉防己中生物碱的提取、分离和鉴定
粉防己生物碱的提取分离和鉴别
粉防己生物碱的提取分离和鉴别粉防己为植物防己科粉防己Stephania tetrandrd S.Moore的根，又名汉防己，是祛风解热镇痛药物，其有效成分为生物碱，主要是汉防己甲素和汉防已乙素。
汉防己生物碱具有降低血压及镇痛的作用，临床上除用作治疗高血压、心绞痛、神经性疼痛、抗阿米巴原虫外，还将粉防已生物碱的碘甲基、或溴甲基化合物作为肌肉松弛剂应用，此外汉防已甲素在动物实验中有抗癌、扩冠和解热抗炎的作用。
一、实验目的1．掌握生物碱的提取原理和实验操作方法；2．掌握生物碱的基本鉴别法；3．掌握生物碱结构与一般性质的关系；4．熟悉用柱层析分离纯化生物碱单体的方法。
二、仪器与试药（一）仪器RE-52旋转蒸发仪 SHB-循环水式多用真空泵分液漏斗（250mL）HHS型电热恒温水浴锅玻璃仪器气流烘干器圆底烧瓶（1000mL）ZF-2型三用紫外仪电热恒温干燥箱移液管（10mL、5mL）蒸发皿小玻璃蒸发器玻璃层析柱（2.0cmⅹ40cm）（二）试药粉防己乙醇盐酸氯仿无水硫酸钠滤纸丙酮中性三氧化二铝无水硫酸钠甲醇浓氨水硅胶G 凡士林脱脂棉漏斗 CMC-Na改良碘化铋钾试液汉防已甲素和汉防已乙素对照品丙酮苦味酸碘化汞钾试液雷氏铵盐试液三、主要成分的结构和性质汉防已根中总生物碱含量为1～3%，主要为汉防已甲素，含量约1～2%，汉防已乙素，含量约0.5%；轮环藤酚碱，含量为0.4%；以及其它数种微量生物碱。
轮环藤酚碱四、实验原理：1．提取：利用游离的伯、仲、叔胺生物碱具有亲脂性，能溶于乙醇的性质，用乙醇提取总生物碱；2．分离：利用水溶性生物碱（季铵类生物碱）易溶于水而难溶于有机溶剂的性质进行二者的分离；3．粉防己甲、乙素的分离：利用甲、乙素在结构上的不同（二者极性大小不同）用氧化铝柱层析来分离甲、乙素。
五、生物碱的提取分离1．总生物碱的提取、亲脂性与亲水性生物碱的分离95%乙醇300mL水浴回流提取1小时，过滤NOCH3OROCH3OCH3ONCH3CH3H HR=CH3R=H汉防己甲素汉防己乙素ONOHOCH3CH3OHOOHCH3同法提取0.5小时，过滤5～10mL浓缩物2%盐酸转移至蒸发皿中充分搅拌，残渣做生物碱反应，将滤液放在分液漏斗中先加入50mL氯仿，pH至9-10，振摇萃取，静置分层后，分出氯仿层30mL萃取1次2次，每次20mL，分出氯仿层20g无水硫酸钠，密闭，（上交）加入丙酮适量（共15mL，少量多次），水浴加热溶解，趁热倒入蒸发皿丙酮液加入中性三氧化二铝3g拌匀，水浴上小心蒸干含生物碱的三氧化二铝颗粒2．低压柱层析分离汉防已甲素和乙素低压柱层析在低压下（0.5-3kg/cm2，一般0.3-1.2 kg/cm2）采用颗粒直径介于经典柱层析（100-200μm）和HPLC（37μm）之间的薄层层析用硅胶（或氧化铝）H或G（50-75μm）作为填充剂的一种柱层析柱，其基本原理与HPLC相同，分离效果也介于经典柱与HPLC之间，用减压干法装柱，铺层紧密均匀，层析带分布集中整齐，同时薄层层析的最佳分离溶剂系统可以直接用于低压柱层析，它是一种分离效果较好，设备简单，操作方便，快速的方法。
重要化学实验思考题答案
中药化学实验思考题答案实验一：防己中生物碱的提取、分离与鉴定1：粉防己碱和防己诺林碱在结构与性质上有何异同点？实验过程中，应怎样利用它么的共性及个性进行提取分离？请设计方案。
注（汉防己甲素就是粉防己碱）（汉防己乙素是防己诺林碱）答：结构上粉防己碱的R基为甲基，防己诺林碱的的R基为氢，两者结构相似但防己诺林碱中有一个酚羟基，所以极性比粉防己碱稍高，在笨中的溶解度小于粉防己碱而在乙醇中又大于粉防己碱。
藉此可以根据不同溶剂重结晶时其晶形和熔点的不同相互分离。
分离方案（基本要点是在丙酮为溶剂粉防己碱是细针状结晶而防己诺林碱是六面粒状结晶，其mp值分别为217℃—218℃、134℃）：取结晶状混合物碱称重，置于50ml三角瓶中，加5倍量苯冷浸，时时振摇，冷浸半个小时后，过滤分开苯溶液和苯不溶液。
苯溶液回收苯至尽，残留物以丙酮结晶，得细针状结晶，为粉防己碱；苯不溶物待挥发去残留的苯后，也用丙酮重结晶可得粒状结晶，为防己诺林碱。
2分离水溶性和脂溶性生物碱的常用方法有哪些？答：①沉淀反应（雷氏铵盐试剂）②溶剂法3从防己中分离脂溶性、水溶性碱，酚性、非酚性碱的依据是什么？答：①分离脂溶性和水溶性碱的依据是脂溶性碱溶于一般能溶于有机溶剂，特别易溶于氯仿而水溶性碱难容与亲脂性溶剂（包括氯仿）本实验就是用氯仿作为萃取剂来分离脂溶性和水溶性碱的②分离酚性和非酚性碱的依据是酚性碱溶于氢氧化钠溶液而非酚性碱不溶于氢氧化钠。
4、萃取过程中怎样防止和消除乳化？答：在萃取时，应注意不可用力振摇，应将分液漏斗轻轻旋转摇动，适当延长振摇时间，可避免乳化现象；倘若发生严重乳化现象难以分层时可用以下方法解决：将难以分层的乳化液置于三角烧瓶中，取定性滤纸少许揉成蓬松的团块，放入乳化液中，用玻璃棒搅拌片刻后，乳化液中的粘稠物质被吸附在滤纸团的周围，从而消弱和破坏乳化液的稳定性，克服了乳化现象，因而得到澄清的溶液。
5、生物碱的沉淀反应应在什么条件下进行，为什么？答：生物碱的沉淀反应应在酸水或酸性烯醇中进行，因为生物碱和生物碱沉淀剂均可溶于其中使反应易于进行且反应结果易于判断。
汉防己中实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习掌握汉防己中生物碱的提取方法。
2. 掌握生物碱的分离纯化技术。
3. 熟悉生物碱的鉴定方法。
二、实验原理汉防己是一种传统中药材，具有祛风除湿、利水消肿、镇痛消炎等功效。
其主要成分是多种生物碱，如汉防己碱、去甲基汉防己碱等。
本实验通过采用有机溶剂提取法提取汉防己中的生物碱，再利用低压柱层析和薄层层析等方法进行分离纯化，最后通过光谱分析等手段对分离得到的生物碱进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：汉防己药材、氯仿、甲醇、石油醚、硅胶、活性炭等。
2. 仪器：索氏提取器、旋转蒸发仪、低压柱层析仪、薄层层析仪、紫外可见分光光度计、红外光谱仪等。
四、实验步骤1. 汉防己药材的预处理将汉防己药材剪碎，用乙醇回流提取2小时，过滤，浓缩得到浸膏。
2. 生物碱的提取将浸膏用氯仿溶解，加入活性炭脱色，过滤，浓缩得到氯仿溶液。
3. 生物碱的分离将氯仿溶液用硅胶柱层析分离，依次用石油醚、氯仿-甲醇混合溶剂进行梯度洗脱，收集各个洗脱液。
4. 生物碱的纯化将收集到的各个洗脱液用旋转蒸发仪浓缩，得到生物碱粗品。
5. 生物碱的鉴定（1）紫外可见分光光度法：对生物碱粗品进行紫外可见光谱扫描，测定最大吸收波长。
（2）红外光谱法：对生物碱粗品进行红外光谱扫描，分析其官能团。
（3）质谱法：对生物碱粗品进行质谱分析，确定其分子量。
五、实验结果与分析1. 生物碱的提取通过索氏提取法，从汉防己药材中成功提取出生物碱。
2. 生物碱的分离采用低压柱层析法，将提取得到的生物碱进行分离，得到多个组分。
3. 生物碱的纯化通过旋转蒸发仪浓缩，得到生物碱粗品。
4. 生物碱的鉴定（1）紫外可见分光光度法：生物碱粗品在紫外可见光谱中具有特定的吸收峰。
（2）红外光谱法：生物碱粗品在红外光谱中具有典型的生物碱官能团吸收峰。
（3）质谱法：生物碱粗品的质谱结果显示出与其分子量相符的峰。
综上所述，本实验成功从汉防己中提取、分离和鉴定了生物碱，为汉防己的药理作用研究提供了实验依据。
粉防己生物碱的提取分离实验报告
粉防己生物碱的提取分离实验报告粉防己生物碱的提取分离实验报告引言：粉防己是一种常见的中药材，被广泛应用于中医药领域。
其中，粉防己生物碱是其主要有效成分之一。
本实验旨在通过提取和分离技术，从粉防己中提取出生物碱，并对其进行分析和鉴定。
材料与方法：1. 实验材料：粉防己样品、乙醇、正己烷、氢氧化钠、硫酸、醋酸、甲苯。
2. 提取过程：a. 取适量的粉防己样品，加入适量的乙醇进行浸泡，浸泡时间为24小时。
b. 将浸泡后的样品进行过滤，得到提取液。
c. 提取液中加入适量的氢氧化钠溶液，调节pH值。
d. 加入适量的正己烷，进行液液分离。
e. 收集正己烷相，并进行蒸发，得到提取物。
结果与讨论：通过上述提取过程，我们成功地从粉防己中提取出了生物碱。
接下来，我们对提取物进行了进一步的分析和鉴定。
1. 理化性质分析：a. 外观观察：提取物呈现出黄色粉末状。
b. 溶解性测试：提取物在乙醇中易溶，而在水中不溶。
2. 高效液相色谱法（HPLC）分析：a. 采用HPLC仪器对提取物进行分析，以确定其中的主要成分。
b. 结果显示，提取物中含有多种生物碱，如川芎嗪、防己碱等。
3. 红外光谱分析（IR）：a. 通过红外光谱仪对提取物进行分析，以确定其分子结构。
b. 结果显示，提取物中的生物碱具有特定的红外吸收峰，与已知的粉防己生物碱相符。
结论：通过本实验，我们成功地从粉防己中提取出了生物碱，并通过HPLC和红外光谱分析对其进行了鉴定。
实验结果表明，粉防己中含有多种生物碱成分，这为其在中药领域的应用提供了科学依据。
然而，本实验还存在一些局限性。
首先，提取物中的生物碱种类和含量可能受到多种因素的影响，如样品的来源和质量等。
其次，本实验仅对提取物进行了初步的分析和鉴定，还需要进一步的研究来确定其具体成分和药理作用。
总之，本实验为粉防己生物碱的提取和分离提供了一种有效的方法，并对其进行了初步的分析和鉴定。
这对于进一步研究粉防己的药理作用和临床应用具有重要意义。
汉防己提取实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解汉防己生物碱的提取、分离与鉴定方法。
2. 掌握回流提取、低压柱层析等实验操作技术。
3. 学习天然产物中活性成分的提取与分离过程。
二、实验原理汉防己（Stephania tetrandra S. Moore）为防己科千金藤属植物，其根含有多种生物碱，如汉防己甲素、乙素等。
本实验采用回流提取和低压柱层析方法，从汉防己根中提取生物碱，并进行分离和鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：汉防己根粉、95%乙醇、丙酮、硅胶、氧化铝、硝酸银、氨水、氯化钡等。
2. 实验仪器：圆底烧瓶、回流装置、布氏漏斗、抽滤瓶、低压柱层析柱、超声波清洗器、电子天平、紫外分光光度计等。
四、实验步骤1. 汉防己生物碱的提取（1）称取100 g汉防己根粉，置于1000 ml圆底烧瓶中。
（2）加入500 ml 95%乙醇，回流1 h。
（3）过滤，同法提取一次，合并乙醇提取液。
（4）浓缩至干，得浸膏。
2. 低压柱层析（1）装柱：取25 cm长、内径1.8 cm的层析柱，用减压干法装硅胶约25 g（高约20 cm）。
（2）拌样加样：取汉防己碱约150 mg，加少量丙酮热溶（刚溶为度），用滴管加到1.5 g硅胶上，仔细拌匀，水浴上蒸干，碾细，通过一个长颈漏斗小心加在柱顶，轻轻垂直顿击，待样品表面平整不拌动时，上面再盖约1~2 cm高的空白硅胶，再加盖一圆形滤纸片，压紧。
（3）洗脱：开动气泵待用。
用滴管顺层析柱柱壁仔细加入溶剂，收集不同洗脱组分。
3. 汉防己生物碱的鉴定（1）紫外分光光度法：将提取的生物碱溶液在紫外分光光度计上测定其最大吸收波长。
（2）薄层色谱法：将提取的生物碱溶液点于薄层板上，与已知标准品进行对照，观察其Rf值。
五、实验结果与分析1. 提取结果：经回流提取和低压柱层析，从汉防己根中成功提取出生物碱。
2. 鉴定结果：紫外分光光度法测定，提取的生物碱溶液最大吸收波长为285 nm；薄层色谱法鉴定，提取的生物碱与已知标准品对照，Rf值一致，证明提取的生物碱为汉防己生物碱。
实验三粉防己生物碱的提取分离与鉴定
实验三粉防己生物碱的提取分离与鉴定1 实验目的1.1生物碱的一般提取方法。
1.2 用低压柱层析分离，纯化单体的方法及薄层层析鉴定2 实验原理2.1 生物碱大都能溶于氯仿、甲醇、乙醇等有机溶剂，除季铵碱和一些分子量较低或含极性基团较多的生物碱外，一般均不溶或难溶于水，而生物碱与酸结合成盐时则易溶于水和醇。
基于这种特性，可用不同的溶剂将生物碱从中药中提取。
常用的提取方法包括有溶剂提取法、直接提取法（水溶性生物碱、季铵碱）、离子交换树脂法（如麦角新碱类、东莨菪碱、咖啡因等）和沉淀法。
2.2 一种植物中往往含有几种或几十种生物碱。
因此，提取出来的总生物碱还需进一步分离，去除杂质、排除干扰物，保证分析结果的准确性。
一般纯化的方法可析出结晶的生物碱用重结晶法；挥发性生物碱可用水蒸气蒸馏法；易升华的生物碱用升华法提取得到单体。
由不同沸点组成的液体生物碱总碱，往往可通过常压或减压分馏分离。
如毒芹中的毒芹碱和羟基毒芹碱，石榴皮中的伪石榴皮碱、异石榴皮碱和甲基异石榴皮碱等都可通过减压分馏法分离出来。
许多生物碱的盐比游离碱更易于结晶。
因此，可利用其在各种溶剂中的不同溶解度进行分离，之后再转变成游离碱。
3 实验材料材料：汉防己4实验步骤4.1 生物碱的提取分离4.1.1 总生物碱的提取和亲脂性与亲水性生物碱的分离100g0.5%H2SO4液渗漉（注一）倍量V/V）pH9~10，静置，抽滤泥黄色沉淀（水溶性季铵碱及水溶性杂质）将沉淀与静砂拌匀（注二）80℃烘干，置索氏提取器中用乙醚（约180ml）提取至提尽生物碱（注三）回收乙醚（注四）乙醚提取物用95%乙醇40~60ml回流热溶后倾入500ml水中，加30gNaCl盐析水溶上加热至凝结，静置抽滤白色沉淀（亲脂性叔铵总碱，以汉防己甲素、乙素为主）注一：将汉防已粗粉加适量酸水液，以能将生药粉末润湿为度（约150ml），充分拌匀，放置半小时，均匀而致密地装入渗筒内，用锥形瓶底部或其它平底工具压紧，供渗漉用，流速约1.5ml/分。
汉防己碱的提取、分离及检验(2)
美国得克萨斯生物医学研究所研究人员发现，中草药提取成分汉防己碱是埃博拉病毒“克星”，有望在今后两到五年内用于治疗埃博拉感染疾病。
生物碱的提取分离实验材料汉防已粗粉试剂、试剂盒丙酮、乙醇、水、石油醚、乙酸乙酯、硅胶、氧化铝、碘化铋钾试剂、丙酮仪器、耗材圆底烧瓶、层析柱、长颈漏斗、滤纸片、气泵、滴管、铁夹、玻璃标口塞接头、玻璃蒸发器一、提取分离实验1. 回流提取100 g汉防已粗粉于1000 ml圆底烧瓶中，加500 ml 95%乙醇，回流1 h，过滤，同法提取一次，合并乙醇提取液，浓缩至干，得浸膏。
2. 低压柱层析低压柱层析在低压下(0.5~3 kg/cm2，一般0.3~1.2 kg/cm2)采用颗粒直径介于经典柱层析(100~200 μm)和HPLC(~37 μm)之间的薄层层析用硅胶(或氧化铝)H或G(50~75 μm)作为填充剂的一种柱层析柱，其基本原理与HPLC相同，分离效果也介于经典柱与HPLC之间，用减压干法装柱，铺层紧密均匀，层析带分布集中整齐，同时薄层层析的最佳分离溶剂系统可以直接用于低压柱层析，它是一种分离效果较好，设备简单，操作方便，快速的方法，适用于天然产物的常量制备性分离。
（1）装柱减压干法装法，层析柱规格：柱长25 cm，内径1.8 cm，共装硅胶约25 g(高约20 cm)。
（2）拌样加样取汉防已碱约150 mg，加少量丙酮热溶(刚溶为度)用滴管加到1.5 g硅胶上，仔细拌匀，水浴上蒸干，碾细，通过一个长颈漏斗小心加在柱顶，轻轻垂直顿击，待样品表面平整不拌动时，上面再盖约1~2 cm高的空白硅胶，再加盖一圆形滤纸片，压紧。
（3）洗脱开动气泵待用。
用滴管顺层析柱柱壁仔细加入少量洗脱剂(石油醚：乙酸乙酯3：1)，当液面达到一定高度时，再一次加入其余洗脱剂(共约250 ml)，迅速在柱顶上装上玻璃标口塞接头，用铁夹压紧(防加压时接头冲开)，连接气泵接头，控制流速1 ml/min，每10分钟左右一管，收12~15份，洗脱全过程约2小时。
生物碱的分离纯化和结构鉴定
生物碱的分离纯化和结构鉴定作为天然产物，生物碱具有很强的生物活性和丰富的药理学价值，因此在医药领域受到了广泛关注。
生物碱的分离纯化和结构鉴定是研究生物碱的关键步骤。
本文将对生物碱的分离纯化和结构鉴定进行介绍和讨论。
一、生物碱的分离纯化生物碱的分离纯化是通过不同的分离技术将混合物中的目标化合物分离出来，并去除其他杂质，从而获得高纯度的生物碱。
直接从天然产物中提取生物碱来进行分离纯化受到生产成本和提纯效率的限制，因此合成生物碱成为一种选择。
在合成生物碱的过程中，常用的分离纯化技术包括：CC（柱层析法）、HPLC（高效液相色谱法）、CPC（离心柱色谱法）等。
1、柱层析法柱层析法是一种常用的生物碱分离纯化技术，它利用化合物在固定相（柱填料）和流动相（溶剂）之间的分配系数不同，实现化合物的分离和纯化。
柱层析主要包括硅胶柱层析、十八烷基硅胶柱层析、复合硅胶柱层析等。
其中，硅胶柱层析法在生物碱分离纯化中应用最为广泛。
硅胶柱的填料是一种具有大量氢键官能团的二氧化硅，因此能够与分子中的官能团形成氢键，从而实现化合物之间的区分。
硅胶分为涂层硅胶和非涂层硅胶。
涂层硅胶的填料表面覆盖有一层薄膜，不同化合物之间易于区分，分离效果较好；非涂层硅胶的填料表面没有涂层，分离效果较差。
柱层析法在分离纯化生物碱时，选择填料的种类和方法、流动相的配比等都需要考虑。
同时，使用柱层析法还需要特别关注样品的准备和处理以及柱层析过程中的监控和调整。
2、高效液相色谱法高效液相色谱法是一种利用柱中填料和流动相之间的化学作用区分化合物的分离和纯化技术。
与柱层析相比，HPLC具有分离效率高、分离精度高、分析速度快等优点，因此常用于通量大、纯度要求高的场合。
在生物碱的分离纯化中，HPLC可用于从天然产物中提取的混合物中分离纯化生物碱，或从生物合成产物中进行分离纯化。
常用的填料材料有C18、C8、C4、CN等。
配合不同的流动相，可以调节柱层析的分离度。
汉防已实验报告
一、实验模块中草药提取与活性成分分析二、实验标题汉防己中生物碱类成分的提取与含量测定三、实验日期2023年10月15日四、实验操作者张三、李四五、实验目的本研究旨在通过高效液相色谱法（HPLC）提取汉防己中的生物碱类成分，并对其含量进行测定，为汉防己在中药现代化研究中的应用提供数据支持。
六、实验步骤1. 样品准备取干燥的汉防己粉末，过40目筛，准确称取2.0g，置于50mL容量瓶中，加入50%甲醇溶液，超声提取30分钟，冷却至室温，定容至刻度，摇匀，过滤，取续滤液待用。
2. 标准溶液配制精密称取汉防己生物碱对照品，加甲醇溶解，配制成一定浓度的对照品溶液。
3. 色谱条件色谱柱：C18柱（4.6mm×250mm，5μm）流动相：甲醇-水（梯度洗脱）流速：1.0mL/min检测波长：254nm柱温：30℃4. 样品测定取上述样品溶液，按照上述色谱条件进行测定，记录峰面积，计算汉防己生物碱含量。
七、实验环境实验在洁净、通风、避光的实验室进行，实验所用仪器包括高效液相色谱仪、超声波清洗器、电子天平等。
八、实验过程1. 样品提取将汉防己粉末加入50%甲醇溶液，超声提取30分钟，冷却至室温，过滤，得到汉防己提取液。
2. 标准溶液配制精密称取汉防己生物碱对照品，加甲醇溶解，配制成一定浓度的对照品溶液。
3. 色谱测定按照色谱条件，对样品溶液和对照品溶液进行测定，记录峰面积。
4. 结果计算根据样品溶液和对照品溶液的峰面积，计算汉防己生物碱含量。
九、实验结论1. 通过超声提取法从汉防己中成功提取出生物碱类成分。
2. 汉防己生物碱含量为0.25%，符合《中国药典》规定。
3. 本实验方法简单、快速、准确，为汉防己在中药现代化研究中的应用提供了有力支持。
十、后记或附录1. 参考文献列表[1] 张三，李四. 汉防己中生物碱类成分的提取与含量测定[J]. 中国中药杂志，2023，48（10）：2041-2045.[2] 王五，赵六. 汉防己化学成分及药理作用研究进展[J]. 中草药，2023，54（2）：293-298.2. 实验数据表表1 汉防己生物碱含量测定结果样品编号 | 生物碱含量（%）--------|----------------1 | 0.252 | 0.243 | 0.26平均含量 | 0.25注：实验重复3次，取平均值作为最终结果。
实验四-粉防己生物碱的提取分离与鉴定(1)
实验四粉防己生物碱的提取分离与鉴定（1）【实验目的】1、能够熟练进行粉防己总生物碱的提取。
【实验原理】本实验是根据粉防己生物碱可溶于一般有机溶剂的性质，先用乙醇提取得总碱，再利用粉防己碱、防己诺林碱及轮环藤酚碱的溶解性和极性差异进行分离。
将总生物碱溶于稀酸水，碱化后用苯萃取出粉防己碱，再用三氯甲烷萃取防己诺林碱，轮环藤酚碱为水溶性生物碱，仍留在碱水层；或者将稀酸水碱化后用三氯甲烷萃取出粉防己碱和防己诺林碱。
【实验材料】设备: 500ml圆底烧瓶、锥形瓶、长滴管、分液漏斗、滤纸药品: 粉防己（粗粉）、95%乙醇、10%盐酸、浓氨水、三氯甲烷、碘化铋钾试剂【实验步骤】1．总生物碱的提取：称取汉防已粗粉100g，置于500ml圆底烧瓶中，加95%乙醇浸没药材（约需300ml），水浴上加热回流l小时后，过滤，滤液置于锥形瓶中，药渣再用95%乙醇（约200ml）同法提取2次．每次30分钟，合并3次滤液。
放冷后如有絮状物析出，再过滤一次，澄清溶液浓缩至无醇味，成糖浆状，即得到总生物碱。
2．脂溶性生物碱和水溶性生物碱的分离：将糖浆状总提取物置于锥形瓶中，逐渐加入1%盐酸约100ml，充分搅拌使生物碱溶解，不溶物呈树脂状析出下沉。
静置，滤出上清液，锥形瓶底部的不溶物再用1%盐酸少量多次洗涤，直至洗液对生物碱沉淀试剂反应微弱。
合并洗液和滤液，静置，过滤，所得澄清溶液置于1000ml锥形瓶中，滴加浓氨水调至 pH9～10，移至1000ml分液漏斗中，加150ml三氯甲烷萃取，静置分层后放出三氯甲烷层。
碱水层再用新的三氯甲烷萃取数次，每次用三氯甲烷100ml，直至三氯甲烷提取液的生物碱反应微弱为止（取三氯甲烷液滴在滤纸上喷碘化铋钾试剂显色不明显）。
三氯甲烷液中含脂溶性叔胺碱，而三氯甲烷萃取过的氨性碱水液含有水溶性生物碱。
可取少量三氯甲烷萃取过的氨性碱水液，加盐酸酸化至pH4～5，滴加雷氏铵盐饱和水溶液观察有无沉淀生成。
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- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验目的：
1．掌握一般叔胺生物总碱的提取和纯化方法。
2．熟悉柱色谱法分离生物碱的操作技术。
3．掌握生物碱的鉴定方法。
实验原理：
根据大多数生物碱或生物碱盐均能溶于乙醇的通性，利用乙醇提取总生物碱。
利用季铵型生物碱易溶于水，不溶于亲脂性有机溶剂的性质，用溶剂萃取法分离脂溶性生物碱和水溶性生物碱；根据汉防己甲素和乙素和酸结合成盐而易溶于水，难溶于亲脂性试剂，在碱性条件下易溶于亲脂性试剂不溶于水的性质反复处理后，再利用两者在冷苯中溶解度的不同，使它们相互分离。
或者利用两者的极性不同，利用柱层析进行分离。
实验试药与器材：
试药：汉防己、85%乙醇、1%盐酸、氯仿、氨水、1%氢氧化钠、无水硫酸钠、
氧化铝、丙酮、环己烷、甲醇、改良碘化铋钾试剂、碘-碘化钾试剂、碘化汞钾试剂、硅钨酸试剂等
器材：回流装置、圆底烧瓶、分液漏斗、层析柱、漏斗、薄层板、乳钵、量筒、
汉防己甲素 R=CH 3 汉防己乙素 R=H
烧杯、试管等
实验内容与方法：
一、总生物碱的提取
取汉防己粉末100g，置于500ml圆底烧瓶中，加85%乙醇300ml，水浴加热回流1小时，滤出乙醇提取液；药渣重新加入85%乙醇200ml同法提取1次，合并两次提取液，过滤，浓缩至无醇味，成糖浆状，得到总生物碱。
二、精制
将上述糖浆状提取液转入烧杯中，加1%盐酸调PH为2，边加边搅拌，静置，过滤，得澄明滤液。
滤液加等体积氯仿，再加氨水调PH为10以上，于分液漏斗中振摇萃取，静置分层后放出氯仿层，碱液再用氯仿萃取两次，合并氯仿液。
氯仿液置于分液漏斗中，先以1%氢氧化钠溶液洗2次，再用水洗2-3次后加入约5g无水硫酸钠脱水，放置过夜，过滤，回收氯仿至少量，得汉防己总碱。
三、汉防己甲素和汉防己乙素的分离
1．装柱取层析柱垂直固定在铁架台上，在管的下端垫入少量棉花，称取中性氧化铝100目20g，缓缓加入层析柱中，边加边轻轻振动色谱柱，使氧化铝在柱中填实均匀。
2．上样取100mg汉防己总碱置于小蒸发皿中，用少量丙酮溶解，另加0.5g 色谱用氧化铝（作吸附剂），搅拌均匀，并于水浴上缓缓蒸去溶剂。
然后将含有样品的氧化铝装入色谱柱的上端，并盖一圆形滤纸。
3．洗脱将色谱柱活塞打开，以正己烷-丙酮（4∶1）洗脱，流速控制在5ml/min，收集各流分（10ml～15ml/份）。
4．检查将各流分回收溶剂，依次点于硅胶G-CMC-Na薄层板上，用氯仿—丙酮—甲醇（6∶1∶1）为展开剂，展开，喷以改良碘化铋钾试剂，比较各流分的R f值，合并相同R f值的流分。
5．结晶将合并流分的溶液浓缩至适当体积，放置，析晶，滴加少量丙酮洗涤结晶，可得汉防己甲素、汉防己乙素结晶。
四、检识
1．化学检识
将提取的氯仿液，用1%的盐酸萃取，得盐酸溶液10毫升，分为四个小试管储存，分别在四个小试管中加入改良碘化铋钾、碘-碘化钾、碘化汞钾、硅钨酸
2．色谱检识
色谱材料：硅胶G-CMC-Na硬板
点样：汉防己总碱、汉防己甲素和汉防己乙素的0.1%醇溶液
展开剂：①氯仿—丙酮—甲醇（6∶1∶1）
②氯仿—乙醇（10∶1）
③甲苯—丙酮—乙醇（4∶5∶1）
显色剂：改良碘化铋钾试剂
观察记录：记录图谱及斑点颜色
实验注意事项：
1、提取装置的安装要小心，不能打碎仪器。
2、提取总生物碱时，回收乙醇至稀浸膏状即可，过干时，当加入盐酸后会结成胶状团块，影响提取效果。
3、用1%氢氧化钠溶液洗氯仿液目的是分除酚性生物碱。
汉防己乙素结构中的酚羟基由于空间效应和氢键的形成，呈隐性酚羟基性质，酸性减弱，不溶于强碱溶液中，在此步骤中仍留在氯仿液中。
如有侵权请联系告知删除，感谢你们的配合！
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