薄层色谱
合集下载
色谱学 第三章 薄层色谱
在吸附色谱过程中，溶质、溶剂和吸附剂三 者是相互联系而又相互竞争的，如此构成了 整个层析分离过程 。 在薄层吸附色谱过程中，主要为物理吸附， 无选择性。因之吸附剂与多元组分溶液接触 时，一方面任何溶质都可被吸附（当然单位 重量吸附剂所能吸附物质的量，即“吸附量” 会因物质种类而异），另一方面，吸附剂也 可吸附流动相分子。由于物理吸附是可逆的， 故被吸附的分子同时也可被解吸出来。
偶氮染料 偶氮苯 对甲氧基偶氮苯 苏丹黄 苏丹红 对氨基偶氮苯 对羟基偶氮苯
Ⅱ 0.61 0.28 0.18 0.11 0.04 0.01
表3-2 硅胶活度分级法 Rf Ⅲ Ⅳ 0.70 0.83 0.43 0.67 0.30 0.53 0.13 0.40 0.07 0.20 0.01 0.07
除上二种外，还有其他一些吸附剂。吸附剂品种如下： （1）硅胶：薄层色谱用为200~250目粒度，规格很多，一般如有石膏作粘 结剂，称硅胶G；石膏含量为5~20%，一般为10~13%，亦有用淀粉作粘 结剂的，称硅胶S，不加粘结剂者称硅胶H或硅胶N，为了便于观察组分的 斑点，也可在硅胶中加入荧光指示剂。如果又加有粘结剂时，则称为硅胶 GF或硅胶GF254，即吸收254nm紫外光。 （2）氧化铝：根据加有粘结剂情况不同，有H、G、HF、GF等品种。 （3）硅镁吸附剂：即费罗里硅土，使用前要在130℃下活化二小时。 （4）纤维素：长度仅为2~20微米的短纤维，分天然纤维和微晶纤维两种 形式，也可加粘合剂、一般用于亲水性物质的分离，如羟基化物等，但缺 点为不能用浓硫酸等腐蚀性溶剂进行显色。 （5）聚酰胺：这是一种使用广泛的有机吸附剂，多用于分离酚类化合物， 样品容量大，但粘结能力差，可加入纤维素或淀粉作粘结剂。 （6）烧结薄层板：这是一种多次使用的薄层板，是由200~300目石英或玻 璃粉，与200~300目硅胶或氧化铝按1：25重量混合，用乙醇调成浆料，涂 在玻璃板上。0.25~0.3毫米厚，然后在700~780℃高温下烧结，即成烧结板。 烧结板用一次后可用乙醇或其它有机溶剂洗涤，最后用水洗干净后烘干再 继续使用。
薄层色谱法
薄层色谱法
课程：分析制样技术
薄层色谱法
一、薄层色谱法概念及原理
• 薄层色谱法（常用TLC表示）又称薄层层析，属于固－
液吸附色谱。 • 样品在薄层板上的吸附剂（固定相）和溶剂（移动相）之
间进行分离。由于吸附剂对不同组分的吸附能力的不同， 使它们在薄层上的移动速度也有差别，从而得以分离，显 然试样中吸附能力最弱的组分在薄层中移动距离最大，而 试样中吸附能力最强的组分在薄层中移动距离最小。
四、注意事项
1）展开时，层析缸中的有机溶剂蒸气必须达到饱和，否则，Rf值将不能重现。
2）在薄层用的吸附剂中，硅胶适用于酸性和中性组分的分离，碱性组分与硅胶有相互 作用，不易展开，或发生拖尾现象，不好分离；氧化铝适用于碱性好中性组分的分离 ，但不适用于酸性组分的分离。
3）如果单一展开剂效果不好，可以用混合溶剂，通过改变溶剂组分和比例来调整展开 剂的极性，从而达到分离效果的目的。
二、吸附剂与展开剂的选择
（2）展开剂：
选择展开剂时，主要考虑极性，其洗脱能力与极性成正比 。分离极性大的化合物赢选用极性展开剂，而分离极性小 或非极性的化合物应选用极性小的展开剂。 单一溶剂极性大小顺序如下： 酸>吡啶>甲醇>乙醇>正丙醇>丙酮>乙酸乙酯>乙醚>氯 仿>二氯甲烷>甲苯>苯>四氯化碳>二硫化碳>环己烷>石 油醚
① 蒸气显色法：利用样品组分与单质碘、液溴、浓氨水等物质的蒸气作用
而显色。将上述易挥发物质放于密闭容器中，再将展开剂已完全挥发的薄层板 放入则显色。
② 显色剂显色法：将一定浓度的显色剂溶液均匀喷洒在薄层上，是样品组
分显色。
③ 紫外显色法：某些化合物在紫外光照射下回发出荧光，可将展开剂挥发
课程：分析制样技术
薄层色谱法
一、薄层色谱法概念及原理
• 薄层色谱法（常用TLC表示）又称薄层层析，属于固－
液吸附色谱。 • 样品在薄层板上的吸附剂（固定相）和溶剂（移动相）之
间进行分离。由于吸附剂对不同组分的吸附能力的不同， 使它们在薄层上的移动速度也有差别，从而得以分离，显 然试样中吸附能力最弱的组分在薄层中移动距离最大，而 试样中吸附能力最强的组分在薄层中移动距离最小。
四、注意事项
1）展开时，层析缸中的有机溶剂蒸气必须达到饱和，否则，Rf值将不能重现。
2）在薄层用的吸附剂中，硅胶适用于酸性和中性组分的分离，碱性组分与硅胶有相互 作用，不易展开，或发生拖尾现象，不好分离；氧化铝适用于碱性好中性组分的分离 ，但不适用于酸性组分的分离。
3）如果单一展开剂效果不好，可以用混合溶剂，通过改变溶剂组分和比例来调整展开 剂的极性，从而达到分离效果的目的。
二、吸附剂与展开剂的选择
（2）展开剂：
选择展开剂时，主要考虑极性，其洗脱能力与极性成正比 。分离极性大的化合物赢选用极性展开剂，而分离极性小 或非极性的化合物应选用极性小的展开剂。 单一溶剂极性大小顺序如下： 酸>吡啶>甲醇>乙醇>正丙醇>丙酮>乙酸乙酯>乙醚>氯 仿>二氯甲烷>甲苯>苯>四氯化碳>二硫化碳>环己烷>石 油醚
① 蒸气显色法：利用样品组分与单质碘、液溴、浓氨水等物质的蒸气作用
而显色。将上述易挥发物质放于密闭容器中，再将展开剂已完全挥发的薄层板 放入则显色。
② 显色剂显色法：将一定浓度的显色剂溶液均匀喷洒在薄层上，是样品组
分显色。
③ 紫外显色法：某些化合物在紫外光照射下回发出荧光，可将展开剂挥发
实验四（）薄层色谱
实验四（）薄层⾊谱实验四（1）薄层⾊谱⼀、实验⽬的1、学习学习薄层⾊谱法的原理，了解其意义和应⽤。
2、掌握薄层板的制作及薄层⾊谱的操作⽅法。
⼆、实验原理薄层⾊谱法是以薄层板作为载体，让样品溶液在薄层板上展开⽽达到分离的⽬的，故也称为薄层层析。
它是快速分离和定性分析少量物质的⼀种⼴泛使⽤的实验技术，可⽤于精制样品、化合物鉴定、跟踪反应进程和柱⾊谱的先导（即为柱⾊谱摸索最佳条件）等⽅⾯。
1、薄层⾊谱常⽤的吸附剂硅胶和氧化铝是薄层层析常⽤的固相吸附剂。
化合物极性越⼤，它在硅胶和氧化铝上的吸附⼒越强，所以吸附剂均制成活性精细粉末。
活化通常是加热粉末以脱去⽔分。
硅胶是酸性的，⽤来分离酸性或中性的化合物。
氧化铝有酸性、中性和碱性的，可⽤于分离极性或⾮极性的化合物。
商⽤的硅胶和氧化铝薄层板可以买到，这些薄板常⽤玻璃或塑料制成。
溶剂在薄层板上爬升的距离越长，化合物的分离效果越好。
宽的薄层板也可⽤于量较⼤的样品，具有1~2mm厚的⼤板可⽤于50~1000 mg样品的分离制备。
2、样品的制备与点样样品必须溶解在挥发性的有机溶剂中，浓度最好是1~2%。
溶剂应具有⾼的挥发性以便于⽴即蒸发。
丙酮、⼆氯甲烷和氯仿等是常⽤的有机溶剂。
分析固体样品时，可将20~40mg样品溶到2mL 的溶剂中。
在距薄层板底端约1cm处，⽤铅笔划⼀条线，作为起点线。
⽤⽑细管（内径⼩于1mm）吸取样品溶液，垂直地轻轻接触到薄层板的起点线上。
样品量不能太多，否则易造成斑点过⼤，互相交叉或拖尾，不能得到很好的分离效果。
3、展开将选择好的展开剂放在层析缸中，使层析缸内空⽓饱和，再将点好样品的薄层板放⼊层析缸中进⾏展开。
使⽤⾜够的展开剂以使薄层板底部浸⼊溶剂3~5mm，但溶剂不能太多，否则样点在液⾯以下，溶解到溶剂中，不能进⾏层析。
当展开剂上升到薄层板的前沿（离顶端5~10mm处）或各组分已明显分开时，取出薄层板放平晾⼲，⽤铅笔划出前沿的位置后即可显⾊。
薄层色谱
不同类型的化合物需选用不同的显色剂。一些常用显色剂见表 1。
表 1 一些常用的显色剂
显色剂
配制方法
检出对象
浓硫酸
10%H2SO4
大多数有机化合物在加热后可显 出黑色斑点
碘蒸气
将薄层板放入缸内被碘蒸气饱和数 很多有机化合物显黄棕色
分钟
碘的氯仿溶液
0.5%碘的氯仿溶液
同上
5%磷钼酸乙醇溶液，喷后 120℃烘
硝酸铈铵
6%硝酸铈铵的 2mol／L 硝酸溶液 显色剂，多元醇在黄色底色上有
棕黄色斑点
香兰素-硫酸
3g 香兰素溶于 100mL 乙醇中，再加 高级醇及酮呈绿色
入 0.5mL 浓硫酸
茚三酮
0.3g 茚三酮溶于 100mL 乙醇，喷 氨基酸、胺、氨基糖
后,110℃热至斑点出现
东北师范大学化学学院综合化学实验学习资料
东北师范大学化学学院综合化学实验学习资料
了荧光）。也可将展开完毕的薄 层板烘干后用显色剂喷雾显色。常用的显色剂有碘和三氯化铁水溶液等。许多有机化合物能 与碘生成棕色或黄色的络合物，利用这一性质，在一密闭容器中（一般用展开缸即可）放几 粒碘，将展开并干燥的薄层板放入其中，稍稍加热，让碘升华，当样品与碘蒸气反应后，薄 层板上的样品点处即可显示出黄色或棕色斑点。除饱和烃和卤代烃外，均可采用此方法。
有关，其活性随含水量的增加而下降。活化温度：硅胶板于烘箱中逐渐升温至 105～110℃ 烘 30min；氧化铝板于 150～160℃烘 4h。活化后的薄层板放在干燥器内保存备用。
（3）点样 在距薄层板底端 8~10mm 处，划一条线，作为起点线。用毛细管（内径小于 1mm）吸 取样品溶液（一般以氯仿、丙酮、甲醇、乙醇、苯、乙醚或四氯化碳等作溶剂，配成 1%溶 液），垂直轻轻地接触到薄层的起点线上。如溶液太稀，一次点样不够，第一次点样干后， 再点第二次、第三次，多次点样时，每次点样都应点在同一圆心上。点样次数依样品溶液浓 度而定，一般为 2~5 次。若样品量太少时，有的成分不易显出；若量太多时易造成斑点过大， 互相交叉或拖尾，不能得到很好的分离。点样后的斑点直径以扩散成 1~2mm 圆点为度。若 为多处点样时，则样点间距为 1~1.5cm。 （4）展开 薄层的展开需在密闭的容器中进行。先将选择的展开剂放在层析缸中，使层析缸内的空 气饱和 5~10min，再将点好试样的薄层板放入层析缸中进行展开。样点的位置必须在展开剂 液面之上。当展开剂上升到薄层的前沿（离顶端 5~10mm）或各组分已明显分开时，取出薄 层板，立即用铅笔或小针划出溶剂前沿的位置，晾干或烘干后即可显色。根据标样对照或 Rf 值的不同对各组分进行鉴定。 展开剂的选择主要是根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等因素来综合考虑。溶剂 的极性越大，则对化合物的洗脱力越大，即 Rf 值也越大。如发现样品各组分的 R f 值 较大， 可考虑换用一种极性较小的溶剂，或在原来的溶剂中加入适量极性较小的溶剂展开，如原用 氯仿为展开剂，则可加入适量的苯。相反，如原用展开剂使样品各组分的 R f 值较小，则可 加入适量极性较大的溶剂，如氯仿中加入适量的乙醇试行展开，以达到分离的目的。 （5）显色 展开完毕，取出薄层板, 划出前沿线，如果化合物本身有颜色, 就可直接观察它的斑点。 如果本身无色，可用显色剂法或紫外光照射法显色。用硅胶 GF254 制成的薄板层，由于加入
表 1 一些常用的显色剂
显色剂
配制方法
检出对象
浓硫酸
10%H2SO4
大多数有机化合物在加热后可显 出黑色斑点
碘蒸气
将薄层板放入缸内被碘蒸气饱和数 很多有机化合物显黄棕色
分钟
碘的氯仿溶液
0.5%碘的氯仿溶液
同上
5%磷钼酸乙醇溶液，喷后 120℃烘
硝酸铈铵
6%硝酸铈铵的 2mol／L 硝酸溶液 显色剂，多元醇在黄色底色上有
棕黄色斑点
香兰素-硫酸
3g 香兰素溶于 100mL 乙醇中，再加 高级醇及酮呈绿色
入 0.5mL 浓硫酸
茚三酮
0.3g 茚三酮溶于 100mL 乙醇，喷 氨基酸、胺、氨基糖
后,110℃热至斑点出现
东北师范大学化学学院综合化学实验学习资料
东北师范大学化学学院综合化学实验学习资料
了荧光）。也可将展开完毕的薄 层板烘干后用显色剂喷雾显色。常用的显色剂有碘和三氯化铁水溶液等。许多有机化合物能 与碘生成棕色或黄色的络合物，利用这一性质，在一密闭容器中（一般用展开缸即可）放几 粒碘，将展开并干燥的薄层板放入其中，稍稍加热，让碘升华，当样品与碘蒸气反应后，薄 层板上的样品点处即可显示出黄色或棕色斑点。除饱和烃和卤代烃外，均可采用此方法。
有关，其活性随含水量的增加而下降。活化温度：硅胶板于烘箱中逐渐升温至 105～110℃ 烘 30min；氧化铝板于 150～160℃烘 4h。活化后的薄层板放在干燥器内保存备用。
（3）点样 在距薄层板底端 8~10mm 处，划一条线，作为起点线。用毛细管（内径小于 1mm）吸 取样品溶液（一般以氯仿、丙酮、甲醇、乙醇、苯、乙醚或四氯化碳等作溶剂，配成 1%溶 液），垂直轻轻地接触到薄层的起点线上。如溶液太稀，一次点样不够，第一次点样干后， 再点第二次、第三次，多次点样时，每次点样都应点在同一圆心上。点样次数依样品溶液浓 度而定，一般为 2~5 次。若样品量太少时，有的成分不易显出；若量太多时易造成斑点过大， 互相交叉或拖尾，不能得到很好的分离。点样后的斑点直径以扩散成 1~2mm 圆点为度。若 为多处点样时，则样点间距为 1~1.5cm。 （4）展开 薄层的展开需在密闭的容器中进行。先将选择的展开剂放在层析缸中，使层析缸内的空 气饱和 5~10min，再将点好试样的薄层板放入层析缸中进行展开。样点的位置必须在展开剂 液面之上。当展开剂上升到薄层的前沿（离顶端 5~10mm）或各组分已明显分开时，取出薄 层板，立即用铅笔或小针划出溶剂前沿的位置，晾干或烘干后即可显色。根据标样对照或 Rf 值的不同对各组分进行鉴定。 展开剂的选择主要是根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等因素来综合考虑。溶剂 的极性越大，则对化合物的洗脱力越大，即 Rf 值也越大。如发现样品各组分的 R f 值 较大， 可考虑换用一种极性较小的溶剂，或在原来的溶剂中加入适量极性较小的溶剂展开，如原用 氯仿为展开剂，则可加入适量的苯。相反，如原用展开剂使样品各组分的 R f 值较小，则可 加入适量极性较大的溶剂，如氯仿中加入适量的乙醇试行展开，以达到分离的目的。 （5）显色 展开完毕，取出薄层板, 划出前沿线，如果化合物本身有颜色, 就可直接观察它的斑点。 如果本身无色，可用显色剂法或紫外光照射法显色。用硅胶 GF254 制成的薄板层，由于加入
薄层色谱
1 目测法 样品经色谱分离后，直接观察所得斑点的大小
和颜色的深浅，并与标准品在相同条件下展开所得 到的一系列已知不同浓度的标准斑点相比较，而近 似地判断样品中所测成分的含量。 2 测面积法
展开后色谱上的斑点面积与化合物含量间，符 合一定的线性关系。 3 仪器测定法
38
3 仪器测定法
用光密度计或称薄层扫描仪（TLC Scanner）扫描定量， 该方法已成为薄层定量的主要方法。 1.吸收测定法
相对比移值，即相对于某一物质x的Rf值，用Rx 表示。 其定义为：Rx＝组分的Rf值／物质x的Rf值 组分A相对于物质B的“相对比移值” RB =a/b
6
三.薄层色谱的操作
吸附剂的选择 薄层板的制作 展开剂的选择 点样 展开 定位与显色 薄层层析的定量测定
7
(一) 薄层层析用的吸附剂
常用的薄层层析吸附剂有硅胶、氧化铝、纤 维素、聚酰胺等。
吸附剂的选择：首先决定于样品成分的性质， 即它们的溶解性、酸碱性、极性以及是否与 吸附剂起化学反应等；
其次要考虑吸附剂、载体是否容易得到及其 价格等。
8
9
(二) 薄层板的制作
层析板是用专门的涂布器把浆状的吸附剂（纸浆、纤维素、硅胶、 中性氧化物、聚酰胺、多孔性玻璃粉，硅烷化键合硅胶等）均匀 地涂在在薄层板（玻璃板、金属板或弹性塑料板）上，干燥 （110℃活化）后即可使用。
2.点样量
点样量的多少与薄层的性能、厚薄及显色剂的 灵敏度有关。一般来说，样品量最小为几ng，常用 量为几至几十µg，制备型的分离可以点样到mg量。 总之点样量随分离目的而定。
3.点样方式 最好是直径3—5mm的圆点。
常用的点样方式
a 一般点样 b 径向点样 c 条状点样 d 线形小孔点样
和颜色的深浅，并与标准品在相同条件下展开所得 到的一系列已知不同浓度的标准斑点相比较，而近 似地判断样品中所测成分的含量。 2 测面积法
展开后色谱上的斑点面积与化合物含量间，符 合一定的线性关系。 3 仪器测定法
38
3 仪器测定法
用光密度计或称薄层扫描仪（TLC Scanner）扫描定量， 该方法已成为薄层定量的主要方法。 1.吸收测定法
相对比移值，即相对于某一物质x的Rf值，用Rx 表示。 其定义为：Rx＝组分的Rf值／物质x的Rf值 组分A相对于物质B的“相对比移值” RB =a/b
6
三.薄层色谱的操作
吸附剂的选择 薄层板的制作 展开剂的选择 点样 展开 定位与显色 薄层层析的定量测定
7
(一) 薄层层析用的吸附剂
常用的薄层层析吸附剂有硅胶、氧化铝、纤 维素、聚酰胺等。
吸附剂的选择：首先决定于样品成分的性质， 即它们的溶解性、酸碱性、极性以及是否与 吸附剂起化学反应等；
其次要考虑吸附剂、载体是否容易得到及其 价格等。
8
9
(二) 薄层板的制作
层析板是用专门的涂布器把浆状的吸附剂（纸浆、纤维素、硅胶、 中性氧化物、聚酰胺、多孔性玻璃粉，硅烷化键合硅胶等）均匀 地涂在在薄层板（玻璃板、金属板或弹性塑料板）上，干燥 （110℃活化）后即可使用。
2.点样量
点样量的多少与薄层的性能、厚薄及显色剂的 灵敏度有关。一般来说，样品量最小为几ng，常用 量为几至几十µg，制备型的分离可以点样到mg量。 总之点样量随分离目的而定。
3.点样方式 最好是直径3—5mm的圆点。
常用的点样方式
a 一般点样 b 径向点样 c 条状点样 d 线形小孔点样
薄层色谱和柱层析
薄层色谱和柱层析一、薄层色谱（TLC）1.原理：薄层色谱是一种基于分子在固体表面和流动相之间相互作用的分离技术。
它使用薄层固定在玻璃或铝板上的吸附剂（例如硅胶或氧化铝）来分离混合物中的化合物。
在色谱板上涂覆样品后，通过液态或气态的流动相让混合物成分在吸附剂上移动，不同化合物的移动速度不同，从而实现分离。
2.应用：薄层色谱被广泛应用于药物化学、食品科学、环境科学和生命科学等领域。
它通常用于混合物的分析，确定混合物中是否存在特定化合物。
此外，它也可用于纯化样品中的化合物，通过可视化或其他检测方法来定位目标化合物位置。
3.操作步骤：薄层色谱的操作步骤主要包括：（1）准备色谱板：将吸附剂均匀涂覆在固定的玻璃或铝板上，使其成为薄层。
（2）样品的涂覆：将待分离的混合物溶解在适当的溶剂中，并用微量移液管将样品均匀地涂覆在色谱板上。
（3）开展分离：将涂覆了样品的色谱板悬挂在色谱槽中，加入合适的溶剂溶液，使之满足色谱板的一端。
（4）显色：在色谱板完全干燥后，通过目视或化学法将化合物可视化。
常用的显色剂包括碘、紫外线灯或化学染色剂。
二、柱层析（CC）1.原理：柱层析是一种基于分子在固定填料（固相）和流动相之间相互作用的分离技术。
根据样品的特性选择不同的固相材料，并将其装填在柱中。
当样品通过柱时，不同化合物与固相发生不同程度的相互作用，从而分离。
2.应用：柱层析广泛应用于化学和生物化学领域，用于分离和纯化化合物。
它可用于药物合成中的纯度检查、食品中毒素的分离、蛋白质的纯化等。
柱层析的分离效果通常较好，纯度高。
3.操作步骤：柱层析的操作步骤主要包括：（1）准备填料和柱子：根据需要选择适当的固相材料，并将其装填在柱子中。
（2）样品的预处理：将待分离的样品预处理，如溶解在适当的溶剂中，并清除杂质。
（3）样品注入：将样品注入柱中，注意控制样品体积和注入速度。
（4）洗脱：通过加入不同组成的洗脱液（流动相），使样品中不同化合物以不同速率从柱中洗脱。
薄层色谱分析
吸附可逆
吸附过程是可逆的，被吸附物在一定条件下可 以解吸出来。在单位时间内被吸附于吸附剂的 某一表面积上的分子和同一单位时间内离开此 表面的分子之间可以建立动态平衡，称为吸附 平衡。
吸附层析过程就是不断地产生平衡与不平衡、 吸附与解吸的动态平衡过程。
以上信息部分源 于网上资料，部 分为自己见解， 希望大家看后给 予指正与补充。
一般实验中应用较多的是以吸附剂为固定相的薄 层吸附层析。
吸附
吸附是表面的一个重要性质。任何两个相都可 以形成表面，吸附就是其中一个相的物质或溶 解于其中的溶质在此表面上的密集现象 。
如：以前实验中我们利用活性炭吸附一些物质
吸附的产生
物质分子之所以能在固体表面停留，这是因为 固体表面的分子（离子或原子）和固体内部分 子所受的吸引力不相等。在固体内部，分子之 间相互作用的力是对称的，其力场互相抵消。 而处于固体表面的分子所受的力是不对称的， 向内的一面受到固体内部分子的作用力大，而 表面层所受的作用力小，因而气体或溶质分子 在运动中遇到固体表面时受到这种剩余力的影 响，就会被吸引而停留下来。
薄层色谱，或称薄层层析(thin— layer chromatography）简介
是以涂布于支持板上的支持物作为固 定相，以合适的溶剂为流动相，对混 合样品进行分离、鉴定和定量的一种 层析分离技术。
薄层色谱法（TLC）
系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片 上，成一均匀薄层。待点样在薄层一端展开后， 根据比移值（Rf）与适宜的对照物按同法所得的 色谱图的比移值（Rf）作对比，用以进行药品的 鉴别、杂质检查或含量测定的方法。
注：Rf=溶质移动的距离/溶液移动的距离。 表示物质移动的相对距离。
薄层色谱法优点
薄层色谱法
3
薄层色谱法
（thin layer chromatography; TLC) （一）概述 1.背景
1938年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一 种天然药物。1965年德国化学家出版了“薄层色 谱法”一书，推动了这一技术的发展。 因TLC法设备简单，分析速度快，分离效率高， 结果直观，很快被用作定性和半定量的方法。 70年代中后期发展了高效薄层色谱。80年代以后 发展了薄层色谱光密度扫描仪，和各步操作的仪 器化，并实现了计算机化。
23
展开时的注意事项
产生原因：展开槽未被展开剂饱和。尤其是 使用混合溶剂时，极性较弱和沸点较低的溶 剂，在薄层边缘容易挥发，使边缘部分的展 开剂中极性溶剂的比例增大，Rf相对增大。 同一物质在同一薄层板上出现中间部分的Rf 值比边缘的Rf值小，即边缘效应。
24
展开时的注意事项
消除办法：若在展开前先将展开槽与薄层
43
六味地黄丸中牡丹皮的薄层图谱
1.丹皮酚； 2～5.六味地黄丸
44
薄层色谱法（TLC)应用实例
二、醋酸可的松中其他甾体的检查
取本品，加氯仿-甲醇(9︰1) 制成每1ml 中含10mg的溶 液，作为供试品溶液；精密量取适量醋酸可的松，加氯仿甲醇(9︰1) 稀释成每1ml 中含0.10mg的溶液，作为对照溶液。 照薄层色谱法（附录Ⅴ B）试验，吸取上述两种溶液各5μl， 分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以二氯甲烷-乙醚-甲醇-水 (385︰60︰15︰2) 为展开剂，展开后，晾干，在105 ℃干燥 10分钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，立即检视。供试品 溶液如显杂质斑点，不得多于3 个，其颜色与对照溶液的主 斑点比较，不得更深。
⑵点样
将试样用最少量展开剂溶解，用毛细 管蘸取试样溶液，在薄层板上点样。在样 点上轻轻画出一条平行于玻璃板底边的细 线。薄层色谱板载样量有限，勿使点样量 过多。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
4
薄层色谱与柱层析和纸层析比较
(1)快速 (2)分离效率高(多柱路) (3)灵敏度高(斑点扩散小,比纸色谱高10-100倍) (4)显色方法多样(腐蚀性显色剂) (5)图象易保存
5
二. 基本参数
比移值（Rf） Rf =原点至组分点中心的距离/原 点至溶剂前沿的距离 组分A的Rf =a/c 组分B的Rf =b/c
常用的点样方式
a 一般点样
b 径向点样
c 条状点样
d 线形小孔点样
e 样品填入沟槽
径向展开与普通展开的区别
展开操作
1.展开槽的密闭 目的是使展开槽被展开剂蒸气饱和并使展开剂组成 不变。 2.展开槽的饱和 为避免“边缘效应”，在薄层板用展开剂蒸气饱和 有时是必要的。 3.展开距离 常规薄层最长展距为20cm;高效薄层展距最长为 10cm。 4.展开温度
24
• 图1 • 1.防风通圣丸2.妙济丸3.心通口服液4.天麻丸5.十全 大补丸6.黄氏响声丸7.木瓜片8.止痛化瘤片9.石斜夜 光丸10.川穹茶调浓缩丸11.补肾益脑丸12.逍遥丸13. 黄连上清丸14.丸味羌活丸15.乌鸡白凤丸16.人参再 造丸。“标”为蒿本内酯对照品
1 2
3 4
5 6 7
32
Thank you
本组成员:
33
建立含当归、 川穹 中成药中藁本内酯的薄层色谱 TLC
实际上当归 川穹中藁本内酯含量远高于阿魏酸和川芎嗪 在药材中的含量。已有大量研究报道蒿本内酯对心血管系 统有较强药理活性。 因此 将藁本内酯作为含当归 川穹 中成药中活性检测成分是最有科学依据的
但由于藁本内酯结构特殊稳定性差，其藁本内酯对照品 制备难 保存更难现还未有文献报道中成药制剂中的藁本 内酯检测分析 ，我们可以通过薄层色谱来分析
2 专属性显色剂
指能使某一类或少数几类官能团或化合物显色的试剂。 例如2%2，4-二硝基苯肼乙醇溶液喷后在120℃加热10分钟，醛 酮在黄橙色背景上显红色或橙色斑。
四、薄层色谱法 在中成药分析中的应用
当归 、川穹是养血活血的常用传统中药。也是 中成药制剂的常用药材。现常用阿魏酸和川芎嗪作 为当归、川芎的指标检测成
17
5.展距对结果的影响
展距对结果的影响，硅胶HPTLC 分离洋甘菊油， a）3 cm、b）5 cm、c）7 cm、d）9 cm。
18
(六)薄层层析的定性检测
展开完毕后，把薄层从层析缸中取出，用铅笔划出或 小针刺出展开剂前缘的位置，随即进行显色，以确定各个 斑点的位置、Rf值和显色情况，从而判断试样中含有哪些 组分。
30
新型薄层色谱内标法测定葛根素含量
• 以大豆甙元为内标物在高效硅胶薄层板上测定葛根素注射液， 中药葛根及中成药玉泉丸中葛根素的含量，建立了新型TLC内 标法测定葛根素的新方法。 • 仪器材料：CS-9000型双波长扫描仪（日本岛津），定量点样毛 细管（Drummond scientific A）,高效硅胶G薄层板（青岛 海洋化工厂，200mm×100mm，50mm×100mm， 30mm×100mm） • 薄层扫描条件：在高效硅胶G薄层板上以甲醇－乙酸乙酯－石 油醚－水（1.8:6:4:0.35）为展开剂，展距为8cm,在365nm紫外 光下观察斑点位置。葛根素Rf＝0.35,大豆甙元Rf＝0.71。 • 定量：锯齿反射扫描。
常用的薄层色谱法以吸附剂为固定相,属于吸附色谱的范畴
3
特点
薄层色谱与液相色谱法比较
HPLC TLC
在一块板上点上多个样品 同时进行分离
每次只能分析一个样品
对样品制备要求高，必须不 用毕一次弃去，可直接用 含可吸留在柱上的杂质，否 样品的粗提物点样 则柱性能受损 可用检测器种类较少 展开后可用多种手段检测
1 通用显色剂
(1) 浓硫酸或50%的硫酸溶液：极大多数有机物质，喷此种显色 剂后立刻或在加热到110—120℃并经数分钟后出现棕色到黑色斑 点。 (2) 酸碱指示剂溶液：例如0.3%溴甲酚绿甲醇溶液，在绿色背景 上显现黄色斑，表示是脂肪族羧酸。 常用的通用显色剂还有：5%磷钼酸乙醇、 碱性高锰酸钾溶液、 硝酸银-氢氧化铵试剂、荧光显色剂等。
• 吸附剂的选择：首先决定于样品成分的性 质，即它们的溶解性、酸碱性、极性以及 是否与吸附剂起化学反应等； • 其次要考虑吸附剂、载体是否容易得到及 其价格等。
8
9
(二) 薄层板的制作
层析板是用专门的涂布器把浆状的吸附剂（纸浆、纤维素、硅胶、 中性氧化物、聚酰胺、多孔性玻璃粉，硅烷化键合硅胶等）均匀 地涂在在 薄 层板 （玻 璃 板、金属 板 或弹性塑 料 板 ）上， 干 燥 （100℃-105 ℃活化），时间一般为30min,后即可使用.也可 放在干燥器内备用
相对比移值（Rst） 其定义为：Rst＝原点至样品斑点中心的距离／ 原点至参考物斑点中心的距离 组分A相对于物质B的“相对比移值” RB =a/b
6
三.薄层色谱的操作
• 吸附剂的选择 • • • • • 薄层板的制作 展开剂的选择 点样 展开 显色
7
(一) 薄层层析用的吸附剂
• 常用的薄层层析吸附剂有硅胶、氧化铝、 纤维素、聚酰胺等。
28
2.棒状薄层色谱（Rod-TLC）
将样品点在薄层棒上，经点样、展开后 将被分离后的色谱棒通过适当的机械传动 装置，水平地穿过检测氢火焰的中心，使 化合物燃烧裂解，形成离子碎片和自由电 子，再由电极收集它们并产生与化合物量 成正比的电流信号而测出各物质的含量。
29
3.超薄层色谱（Ultra Thin-layer Chromatography）
12
(四 ) 点
样
1.样品溶液 一般用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等挥发性有机 溶剂，最好用与展开剂极性相似的溶剂溶解试样，配 成0.5%~1%的试液。 2.点样量 点样量的多少与薄层的性能、厚薄及显色剂的 灵敏度有关。一般来说，样品量最小为几ng，常用量 为几至几十µg，制备型的分离可以点样到mg量。总之 点样量随分离目的而定。 3.点样方式 最好是直径3—5mm的圆点。
10
(三)薄层层析中展开剂的选择
主要根据极性的不同来选择流动相展开剂。
各种展开剂按其极性不同排序为： 烷烃<烯烃<醚类<硝基化合物<二甲胺<酯 类<酮类<醛类<硫醇<胺类<酰胺<醇类<酚类 <羧酸
11
在具体工作中，展开剂的选择还必须进 一步通过实践，一般可用下列方法： (1)查阅文献 (2)微型薄层 ：用小玻片铺上薄层，用各 种经初步选择认为可能应用的展开剂展开， 从而选择适当的展开剂，再用于一般的薄层 层析。用微型薄层，节省材料和时间。
有色物质经展开后呈现明显的色斑，很易判断。
对于无色物质，可根据化合物的性质，用物理检 出法、化学检出法、酶与生物检出法和放射性检出法进行
显色。
19
1.化学检出法
化学检出法是在薄层上使用一种或数种 化学试剂与被检出物质反应，生成有颜色 的化合物而定位。这种试剂叫显色剂。
显色剂 一般分为两类，即通用显色剂 和专属性显色剂。
31
薄层色谱（TLC）与基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱
（MALDI-TOF-MS）联用分析大脑中磷脂
• 薄层色谱条件： 高效硅胶60薄层板（10×10cm）（Terck， Germany） • 展开剂 氯仿：甲醇：水：三乙胺（30:35:7:35 v/v/v/v） • 层析槽 CAMAG，Switerland • 样品量 5µL • 显色条件 PRIMULINE（Direct Yellow 59）溶于丙酮/水（80:20v/v ） 中，UV254nm观察紫色斑点 • 检测 取下斑点，用75µL氯仿+75µL甲醇+75µL 0.9%Nacl水溶液洗 脱，涡旋搅拌，离心分离，蒸干有机相，剩余物溶于 20µL基质溶液， 直接用MALDI-TOF-MS检测
中成药分析
本组成员:
薄层色谱法
（Thin-layer Chromatography，TLC）
1 2
前言
基本参数
3 4
薄层的基本操作
薄层色谱在中成药分析中的应用一.前言Fra bibliotek定义:
薄层色谱法通常指以吸附剂为固定相的一种 液相色谱法。即将固定相在玻璃、金属或塑 料等光洁的表面上均匀地铺成薄层，试样点 在薄层的一端，流动相借毛细作用流经固定 相,使被分离的物质展开。
26
五、 特殊的薄层
1. 高效薄层色谱（HPTLC） 2. 棒状薄层色谱（Rod-TLC） 3. 超薄层色谱 （Ultra Thin-layer Chromatography）
1.高效薄层色谱（HPTLC）
HPTLC是在普通薄层基础上发展起来的一种更为 灵敏、精细的薄层技术。高效薄层是采用小颗粒吸 附剂制备的均匀薄层，分离效率比普通薄层提高三 倍，检出灵敏度增加，分析时间缩短。 高效薄层色谱由于吸附剂颗粒小，流动相展开速 度慢，平衡易于达到，质量传递的阻滞作用往往可 以忽略不计，展开后斑点的大小主要由化合物分子 扩散系数决定。化合物展开后只要不走在溶剂前沿， 均呈小而圆整的斑点。
8
标 9 101112 1314 15 16
1 2
3 4
5 6 7
8
标 9 101112 1314 15 16
从图 1 可看出 2，3，7，8，13，15，16 在蒿本内酯对照品点 处没有类似的荧光斑点， 说明这几个中成药制剂中 TLC 检测不到 当归，川穹的有效成分寞本内酯，可以初步判断这几个制剂中当 归 ，川穹的药材加入量很低或没有加入正品当归，川穹药材。
23
样品溶液制备:取各中成药用研钵研磨成细末状，分别称取2 g 各药细末加入10 mL 的甲醇溶解,再用超声波清洗机分别超声 30 min，离心，取上清液作为供试样,备用.称取藁本内酯对照 品10 mg 加入10 mL 甲醇溶解,作为对照样品，备用
薄层色谱与柱层析和纸层析比较
(1)快速 (2)分离效率高(多柱路) (3)灵敏度高(斑点扩散小,比纸色谱高10-100倍) (4)显色方法多样(腐蚀性显色剂) (5)图象易保存
5
二. 基本参数
比移值（Rf） Rf =原点至组分点中心的距离/原 点至溶剂前沿的距离 组分A的Rf =a/c 组分B的Rf =b/c
常用的点样方式
a 一般点样
b 径向点样
c 条状点样
d 线形小孔点样
e 样品填入沟槽
径向展开与普通展开的区别
展开操作
1.展开槽的密闭 目的是使展开槽被展开剂蒸气饱和并使展开剂组成 不变。 2.展开槽的饱和 为避免“边缘效应”，在薄层板用展开剂蒸气饱和 有时是必要的。 3.展开距离 常规薄层最长展距为20cm;高效薄层展距最长为 10cm。 4.展开温度
24
• 图1 • 1.防风通圣丸2.妙济丸3.心通口服液4.天麻丸5.十全 大补丸6.黄氏响声丸7.木瓜片8.止痛化瘤片9.石斜夜 光丸10.川穹茶调浓缩丸11.补肾益脑丸12.逍遥丸13. 黄连上清丸14.丸味羌活丸15.乌鸡白凤丸16.人参再 造丸。“标”为蒿本内酯对照品
1 2
3 4
5 6 7
32
Thank you
本组成员:
33
建立含当归、 川穹 中成药中藁本内酯的薄层色谱 TLC
实际上当归 川穹中藁本内酯含量远高于阿魏酸和川芎嗪 在药材中的含量。已有大量研究报道蒿本内酯对心血管系 统有较强药理活性。 因此 将藁本内酯作为含当归 川穹 中成药中活性检测成分是最有科学依据的
但由于藁本内酯结构特殊稳定性差，其藁本内酯对照品 制备难 保存更难现还未有文献报道中成药制剂中的藁本 内酯检测分析 ，我们可以通过薄层色谱来分析
2 专属性显色剂
指能使某一类或少数几类官能团或化合物显色的试剂。 例如2%2，4-二硝基苯肼乙醇溶液喷后在120℃加热10分钟，醛 酮在黄橙色背景上显红色或橙色斑。
四、薄层色谱法 在中成药分析中的应用
当归 、川穹是养血活血的常用传统中药。也是 中成药制剂的常用药材。现常用阿魏酸和川芎嗪作 为当归、川芎的指标检测成
17
5.展距对结果的影响
展距对结果的影响，硅胶HPTLC 分离洋甘菊油， a）3 cm、b）5 cm、c）7 cm、d）9 cm。
18
(六)薄层层析的定性检测
展开完毕后，把薄层从层析缸中取出，用铅笔划出或 小针刺出展开剂前缘的位置，随即进行显色，以确定各个 斑点的位置、Rf值和显色情况，从而判断试样中含有哪些 组分。
30
新型薄层色谱内标法测定葛根素含量
• 以大豆甙元为内标物在高效硅胶薄层板上测定葛根素注射液， 中药葛根及中成药玉泉丸中葛根素的含量，建立了新型TLC内 标法测定葛根素的新方法。 • 仪器材料：CS-9000型双波长扫描仪（日本岛津），定量点样毛 细管（Drummond scientific A）,高效硅胶G薄层板（青岛 海洋化工厂，200mm×100mm，50mm×100mm， 30mm×100mm） • 薄层扫描条件：在高效硅胶G薄层板上以甲醇－乙酸乙酯－石 油醚－水（1.8:6:4:0.35）为展开剂，展距为8cm,在365nm紫外 光下观察斑点位置。葛根素Rf＝0.35,大豆甙元Rf＝0.71。 • 定量：锯齿反射扫描。
常用的薄层色谱法以吸附剂为固定相,属于吸附色谱的范畴
3
特点
薄层色谱与液相色谱法比较
HPLC TLC
在一块板上点上多个样品 同时进行分离
每次只能分析一个样品
对样品制备要求高，必须不 用毕一次弃去，可直接用 含可吸留在柱上的杂质，否 样品的粗提物点样 则柱性能受损 可用检测器种类较少 展开后可用多种手段检测
1 通用显色剂
(1) 浓硫酸或50%的硫酸溶液：极大多数有机物质，喷此种显色 剂后立刻或在加热到110—120℃并经数分钟后出现棕色到黑色斑 点。 (2) 酸碱指示剂溶液：例如0.3%溴甲酚绿甲醇溶液，在绿色背景 上显现黄色斑，表示是脂肪族羧酸。 常用的通用显色剂还有：5%磷钼酸乙醇、 碱性高锰酸钾溶液、 硝酸银-氢氧化铵试剂、荧光显色剂等。
• 吸附剂的选择：首先决定于样品成分的性 质，即它们的溶解性、酸碱性、极性以及 是否与吸附剂起化学反应等； • 其次要考虑吸附剂、载体是否容易得到及 其价格等。
8
9
(二) 薄层板的制作
层析板是用专门的涂布器把浆状的吸附剂（纸浆、纤维素、硅胶、 中性氧化物、聚酰胺、多孔性玻璃粉，硅烷化键合硅胶等）均匀 地涂在在 薄 层板 （玻 璃 板、金属 板 或弹性塑 料 板 ）上， 干 燥 （100℃-105 ℃活化），时间一般为30min,后即可使用.也可 放在干燥器内备用
相对比移值（Rst） 其定义为：Rst＝原点至样品斑点中心的距离／ 原点至参考物斑点中心的距离 组分A相对于物质B的“相对比移值” RB =a/b
6
三.薄层色谱的操作
• 吸附剂的选择 • • • • • 薄层板的制作 展开剂的选择 点样 展开 显色
7
(一) 薄层层析用的吸附剂
• 常用的薄层层析吸附剂有硅胶、氧化铝、 纤维素、聚酰胺等。
28
2.棒状薄层色谱（Rod-TLC）
将样品点在薄层棒上，经点样、展开后 将被分离后的色谱棒通过适当的机械传动 装置，水平地穿过检测氢火焰的中心，使 化合物燃烧裂解，形成离子碎片和自由电 子，再由电极收集它们并产生与化合物量 成正比的电流信号而测出各物质的含量。
29
3.超薄层色谱（Ultra Thin-layer Chromatography）
12
(四 ) 点
样
1.样品溶液 一般用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等挥发性有机 溶剂，最好用与展开剂极性相似的溶剂溶解试样，配 成0.5%~1%的试液。 2.点样量 点样量的多少与薄层的性能、厚薄及显色剂的 灵敏度有关。一般来说，样品量最小为几ng，常用量 为几至几十µg，制备型的分离可以点样到mg量。总之 点样量随分离目的而定。 3.点样方式 最好是直径3—5mm的圆点。
10
(三)薄层层析中展开剂的选择
主要根据极性的不同来选择流动相展开剂。
各种展开剂按其极性不同排序为： 烷烃<烯烃<醚类<硝基化合物<二甲胺<酯 类<酮类<醛类<硫醇<胺类<酰胺<醇类<酚类 <羧酸
11
在具体工作中，展开剂的选择还必须进 一步通过实践，一般可用下列方法： (1)查阅文献 (2)微型薄层 ：用小玻片铺上薄层，用各 种经初步选择认为可能应用的展开剂展开， 从而选择适当的展开剂，再用于一般的薄层 层析。用微型薄层，节省材料和时间。
有色物质经展开后呈现明显的色斑，很易判断。
对于无色物质，可根据化合物的性质，用物理检 出法、化学检出法、酶与生物检出法和放射性检出法进行
显色。
19
1.化学检出法
化学检出法是在薄层上使用一种或数种 化学试剂与被检出物质反应，生成有颜色 的化合物而定位。这种试剂叫显色剂。
显色剂 一般分为两类，即通用显色剂 和专属性显色剂。
31
薄层色谱（TLC）与基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱
（MALDI-TOF-MS）联用分析大脑中磷脂
• 薄层色谱条件： 高效硅胶60薄层板（10×10cm）（Terck， Germany） • 展开剂 氯仿：甲醇：水：三乙胺（30:35:7:35 v/v/v/v） • 层析槽 CAMAG，Switerland • 样品量 5µL • 显色条件 PRIMULINE（Direct Yellow 59）溶于丙酮/水（80:20v/v ） 中，UV254nm观察紫色斑点 • 检测 取下斑点，用75µL氯仿+75µL甲醇+75µL 0.9%Nacl水溶液洗 脱，涡旋搅拌，离心分离，蒸干有机相，剩余物溶于 20µL基质溶液， 直接用MALDI-TOF-MS检测
中成药分析
本组成员:
薄层色谱法
（Thin-layer Chromatography，TLC）
1 2
前言
基本参数
3 4
薄层的基本操作
薄层色谱在中成药分析中的应用一.前言Fra bibliotek定义:
薄层色谱法通常指以吸附剂为固定相的一种 液相色谱法。即将固定相在玻璃、金属或塑 料等光洁的表面上均匀地铺成薄层，试样点 在薄层的一端，流动相借毛细作用流经固定 相,使被分离的物质展开。
26
五、 特殊的薄层
1. 高效薄层色谱（HPTLC） 2. 棒状薄层色谱（Rod-TLC） 3. 超薄层色谱 （Ultra Thin-layer Chromatography）
1.高效薄层色谱（HPTLC）
HPTLC是在普通薄层基础上发展起来的一种更为 灵敏、精细的薄层技术。高效薄层是采用小颗粒吸 附剂制备的均匀薄层，分离效率比普通薄层提高三 倍，检出灵敏度增加，分析时间缩短。 高效薄层色谱由于吸附剂颗粒小，流动相展开速 度慢，平衡易于达到，质量传递的阻滞作用往往可 以忽略不计，展开后斑点的大小主要由化合物分子 扩散系数决定。化合物展开后只要不走在溶剂前沿， 均呈小而圆整的斑点。
8
标 9 101112 1314 15 16
1 2
3 4
5 6 7
8
标 9 101112 1314 15 16
从图 1 可看出 2，3，7，8，13，15，16 在蒿本内酯对照品点 处没有类似的荧光斑点， 说明这几个中成药制剂中 TLC 检测不到 当归，川穹的有效成分寞本内酯，可以初步判断这几个制剂中当 归 ，川穹的药材加入量很低或没有加入正品当归，川穹药材。
23
样品溶液制备:取各中成药用研钵研磨成细末状，分别称取2 g 各药细末加入10 mL 的甲醇溶解,再用超声波清洗机分别超声 30 min，离心，取上清液作为供试样,备用.称取藁本内酯对照 品10 mg 加入10 mL 甲醇溶解,作为对照样品，备用