实验三+SDS-PAGE鉴定蛋白纯度(1)
SDS-PAGE测定蛋白质分子量及蛋白质的纯度鉴定
SDS-PAGE测定蛋白质分子量及蛋白质的纯度鉴定SDS-PAGE测定蛋白质分子量及蛋白质的纯度鉴定一、实验目的与原理蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移取决于它所带电荷以及分子大小和形状等因素。
1967年Shapiro等人发现，如果在聚丙烯酰胺系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠（SDS），大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合，即每克蛋白质结合1.4g的SDS－复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而消除了蛋白质原有的电荷差别，使蛋白质分子电泳的迁移率主要取决于本身的分子量，而与蛋白质所带的电荷无关，在一定条件下，蛋白质的分子量的对数与电泳迁移率间呈负相关。
本实验的目的是对多酚氧化酶的纯化度鉴定及分子量的测定，通过实验，学习和掌握SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法蛋白质纯度和分子量的鉴定。
二、仪器与试剂1、材料：硫酸铵盐析沉淀的多酚氧化酶粗酶样品、DEAE-纤维素DE52柱层析的样品，Sephadex G-100柱层析的样品。
2、试剂：（1）丙稀酰胺（Acr母液）：30%Acr （Acr/Bis）（2）10%的SDS溶液（3）10%的过硫酸铵溶液（4）四甲基乙二胺（TEMED）（5）分离胶缓冲液：1.5M Tris，PH8.8（6）浓缩胶缓冲液：1.0M Tris，PH6.8（7）电极缓冲液：10×30g Tris，125g 甘氨酸和5g SDS，加水溶解定容至1000ml，pH8.3（8）样品缓冲液：0.2M Tris，PH6.8，1%SDS，30%甘油，巯基乙醇及溴酚兰（9）染色液：0.15%考马斯亮蓝R250，溶于脱色液（10）脱色液：50%的甲醇，7%的冰醋酸的水溶液（11）标准分子量蛋白。
3、仪器设备：电泳仪、垂直电泳槽等。
三、操作步骤1、凝胶制备：用两块电泳玻璃板制成垂直板槽（不能漏胶），垂直放置。
将配制好的分离胶溶液倒入，滴加入无离子水，待凝胶聚集后，倒出无离子水，用吸水纸吸干，倒入浓缩胶，再插入梳子。
(完整版)SDS-PAGE检测蛋白质纯度
SDS-PAGE检测蛋白质纯度1．电泳的基本原理许多生物分子都带有电荷，其电荷的多少取决于分子性质及其所在介质的pH及其组成。
由于混合物中各组分所带电荷性质、电荷数量以及分子量的不同，在同一电场的作用下，各组分泳动的方向和速度也各异，因此，在一定时间内，由于各组分移动距离的不同，而达到分离鉴定各组分的目的。
2．影响电泳的主要因素2.1 电泳介质的pH当介质的pH等于某种两性物质的等电点时，该物质处于等电状态，即不向正极或负极移动。
当介质pH小于其等电点时，则呈正离子状态，移向负极；反之，介质pH大于其等电点时，则呈负离子状态，移向正极。
因此，任何一种两性物质的混合物电泳均受介质pH的影响，即决定两性物质的带电状态及其量，为了保持介质pH的稳定性，常用一定pH的缓冲液，如分离血清蛋白质常用pH8．6的巴比妥或三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲液。
2.2 缓冲液的离子强度离子强度对电泳的影响是：离子强度低，电泳速度快，分离区带不易清晰；离子强度高，电泳速度慢，但区带分离清晰。
如离子强度过低，缓冲液的缓冲量小，不易维持pH的恒定；离子强度过高，则降低蛋白质的带电量(压缩双电层)使电脉速度减慢。
所以常用离子强度为0.02-0.2之间。
2.3 电场强度电场强度和电泳速度成正比关系。
电场强度以每厘米的电势差计算，也称电势梯度。
如纸电泳的滤纸长15cm，两端电压（电势差）为150V，则电场强度为150/15=10V/cm，电场强度愈高，则带电粒子的移动愈快。
电压增加，相应电流也增大，电流过大时易产生热效应可使蛋白质变性而不能分离。
2.4 电渗作用在电场中，液体对固体的相对移动，称为电渗。
如滤纸中含有表面带负电荷的羧基，溶液则向负极移动。
由于电渗现象与电泳同时存在，所以电泳的粒子移动距离也受电渗影响，如纸上电泳蛋白质移动的方向与电渗现象相反，则实际上蛋白质泳动的距离，等于电泳移动距离减去电渗距离。
如电泳方向和电渗方向一致，其蛋白质移动距离，等于二者相加。
sdspage实验报告
sdspage实验报告SDS-PAGE实验报告引言：SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用的蛋白质分离和分析技术。
通过SDS（十二烷基硫酸钠）的作用，可以使蛋白质在电泳过程中带有负电荷，从而使其按照分子量大小在凝胶上进行分离。
本实验旨在通过SDS-PAGE技术分离和分析不同来源的蛋白质样品，探究其分子量和纯度。
材料与方法：1. 样品制备：从不同来源（如细菌、植物、动物）获得蛋白质样品，并进行样品的提取和纯化。
2. SDS-PAGE凝胶制备：根据所需分离范围选择合适的凝胶浓度，并制备上胶液和下胶液。
3. 样品处理：将样品与样品缓冲液混合，并加入还原剂和SDS。
4. 电泳条件：将样品加载到凝胶孔中，进行电泳操作。
设置适当的电压和时间。
5. 凝胶染色：将电泳后的凝胶进行染色，以可视化蛋白质带。
结果与讨论：通过SDS-PAGE技术，我们成功地分离和分析了不同来源的蛋白质样品。
在电泳过程中，蛋白质样品在电场作用下向阳极迁移，其迁移速率与其分子量成反比。
因此，我们可以根据蛋白质在凝胶上的迁移距离来推测其分子量。
观察到的凝胶图像显示出多个蛋白质带，每个带代表一个具有特定分子量的蛋白质。
通过与已知分子量标准品进行比较，我们可以推断出样品中蛋白质的分子量范围。
同时，通过比较不同来源的样品，我们可以观察到它们之间的差异。
在某些情况下，我们可能观察到一些额外的带，这可能是由于蛋白质的不同修饰或附加物所致。
例如，糖基化的蛋白质可能会在凝胶上显示出多个带，每个带代表不同程度的糖基化。
此外，我们还可以通过观察蛋白质带的强度来推断其纯度。
如果某个蛋白质带非常明亮且没有其他杂质带的干扰，那么可以认为该蛋白质具有较高的纯度。
相反，如果某个带非常弱或有其他带的干扰，那么可能表示该样品中存在其他蛋白质或杂质。
结论：通过SDS-PAGE技术，我们成功地分离和分析了不同来源的蛋白质样品。
通过观察蛋白质带的位置、分子量范围和强度，我们可以推断蛋白质的分子量和纯度。
SDSPAGE测定蛋白质相对分子质量实验报告
SDS_PAGE测定蛋白质相对分子质量实验报告实验报告：SDS-PAGE测定蛋白质相对分子质量一、实验目的通过SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）测定蛋白质相对分子质量，了解其基本原理和实验操作流程。
二、实验原理SDS-PAGE是一种常用的测定蛋白质相对分子质量的方法。
它利用十二烷基硫酸钠（SDS）与蛋白质的结合性质，将蛋白质变性并带负电荷，使得蛋白质在电场中的迁移率仅取决于相对分子质量，而与蛋白质的等电点、电荷性质无关。
通过比较标准蛋白质的迁移率和已知相对分子质量的蛋白质，可确定待测蛋白质的相对分子质量。
三、实验步骤1.准备试剂和器材：SDS-PAGE所需试剂包括丙烯酰胺、N-丙基甲基丙烯酰胺、过硫酸铵、甘氨酸、十二烷基硫酸钠、tris缓冲液、G250染料、乙醇等；器材包括电泳槽、制胶板、移液器、电泳仪、电源等。
2.制备标准蛋白样品：选择已知相对分子质量的标准蛋白样品，将其与G250染料混合，煮沸变性，冷却后作为标准蛋白样品。
3.制备样品：将待测蛋白质样品与G250染料混合，加入适量SDS-PAGE缓冲液，煮沸变性，冷却后作为待测样品。
4.制胶：将丙烯酰胺、N-丙基甲基丙烯酰胺、过硫酸铵、甘氨酸、tris缓冲液等混合，倒入制胶板中，插入样品梳子，静置凝固。
5.电泳：将凝胶放入电泳槽中，加入适量电泳液，将标准蛋白样品和待测样品分别加入对应的孔中。
打开电源，调整电流和电压，开始电泳。
6.染色和脱色：电泳结束后，将凝胶取出，用G250染料进行染色，然后进行脱色处理，以呈现清晰蛋白质条带。
7.相对分子质量测定：通过比较标准蛋白样品的迁移率和已知相对分子质量的蛋白样品，可确定待测蛋白质的相对分子质量。
四、结果分析通过本实验，我们成功地得到了SDS-PAGE凝胶电泳图谱，并测定了待测蛋白质的相对分子质量。
通过与标准蛋白样品的迁移率进行比较，发现待测蛋白质的相对分子质量约为50kDa。
此外，我们还发现不同浓度的待测蛋白质样品在凝胶电泳图谱上的条带位置也存在差异，表明它们具有不同的相对分子质量。
SDS-PAGE蛋白质纯度分析
SDS-PAGE蛋白质纯度分析十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（英语：sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，简称SDS-PAGE）是较常用的一种蛋白纯化分析技术。
SDS-PAGE可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离。
如果蛋白质样品中含有多个蛋白质或者纯化蛋白样品中含有其他杂蛋白，经过SDS-PAGE分离后不同的蛋白质会被分离成多个蛋白条带。
如果纯化的样品中只含有同一种蛋白质，蛋白质样品电泳后，则只显现一条蛋白条带。
由此SDS-PAGE技术可以对蛋白质样品的纯度进行分析。
SDS-PAGE分析原理SDS是一种阴离子表面活性剂能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。
因此，各种蛋白质-SDS复合物在电泳时的迁移速度仅由蛋白质分子量决定，不同的蛋白质由于分子量的差异经过SDS-PAGE电泳后分离，再经由蛋白质染色对蛋白质分离结果进行分析。
蛋白质SDS-PAGE分析流程1. 蛋白质浓度检测2. 样品处理: 在蛋白样品中加入等量含有B-巯基乙醇的2x loading buffer，煮沸10分钟3. 电泳准备: 配置合适浓度的SDS分离胶，安装电泳槽，注入1x 电泳液4. 蛋白质样品上样：根据蛋白质浓度，取适量处理过的蛋白样品依次加入电泳孔槽内，另外取适量蛋白标准marker加入其他空余孔槽内。
5. 开始电泳: 接通电源，将电压调至120v，保持恒定电压。
6. 电泳结束剥离胶: 当溴酚蓝迁移至凝胶底部，停止电泳；将蛋白胶取出，并切去浓缩胶和分离胶底部的溴酚蓝胶条。
7. 染色: 使用R250染色液对蛋白胶染色1小时8. 脱色: 使用脱色液对染色的蛋白胶脱色至背景干净，蛋白条带清晰可见9. 拍照分析中/英文项目报告在技术报告中，百泰派克会为您提供详细的中英文双语版技术报告，报告包括：1. 实验步骤（中英文）。
蛋白质纯度测定方法
蛋白质纯度测定方法一、引言蛋白质是生命体中最基本的分子之一，它在细胞的生命活动中扮演着极其重要的角色。
因此，对蛋白质进行纯度测定是非常必要的。
本文将介绍几种常用的蛋白质纯度测定方法。
二、背景知识在进行蛋白质纯度测定之前，需要了解几个基本概念：1. 蛋白质的纯度：指在样品中含有的目标蛋白质所占比例。
2. 蛋白质的含量：指样品中所有蛋白质所占比例。
3. 蛋白质的分离：指将混合物中不同种类的蛋白质分离出来。
三、方法介绍1. SDS-PAGE法SDS-PAGE法是一种常见的蛋白质分离方法，可以用于测定目标蛋白质在混合物中所占比例。
具体步骤如下：（1）制备样品：将待测样品加入SDS-PAGE电泳缓冲液中，并加入还原剂和热处理。
（2）电泳：将样品加入凝胶孔中，进行电泳分离。
（3）染色：将凝胶染色，观察目标蛋白质的带位置和强度。
2. 尿素-PAGE法尿素- PAGE法是一种用于测定蛋白质含量的方法。
具体步骤如下：（1）制备样品：将待测样品加入尿素-PAGE电泳缓冲液中，并加入还原剂和热处理。
（2）电泳：将样品加入凝胶孔中，进行电泳分离。
（3）染色：将凝胶染色，计算所有蛋白质的含量。
3. 透析法透析法是一种常见的蛋白质纯化方法。
具体步骤如下：（1）制备样品：将待纯化的混合物加入透析袋中。
（2）透析：用适当的缓冲液对混合物进行透析，使目标蛋白质从袋子中渗出。
（3）收集目标蛋白质：收集渗出液，即为目标蛋白质。
4. 亲和层析法亲和层析法是一种高效的蛋白质纯化方法。
具体步骤如下：（1）制备样品：将待纯化的混合物加入含有亲和基团的树脂中。
（2）洗涤：用适当的缓冲液对树脂进行洗涤，使非目标蛋白质从树脂上洗掉。
（3）吸附：目标蛋白质与亲和基团结合在一起，被吸附在树脂上。
（4）洗涤：用适当的缓冲液对树脂进行洗涤，去除杂质。
（5）洗脱：用适当的缓冲液将目标蛋白质从树脂上洗下。
四、总结本文介绍了几种常用的蛋白质纯度测定方法，包括SDS-PAGE法、尿素-PAGE法、透析法和亲和层析法。
sds-page测定蛋白质纯度
百泰派克生物科技
sds-page测定蛋白质纯度
SDS-PAGE是一种根据分子量分离蛋白质的凝胶电泳分析技术。
当蛋白质通过凝胶
基质电泳分离时，较小分子量的蛋白质受到来自凝胶基质的阻力更小，电泳时迁移速度更快。
影响蛋白质在凝胶基质中的迁移速率的其他因素还包括蛋白质的结构和电荷，在SDS-PAGE中，十二烷基硫酸钠（SDS，又称十二烷基硫酸钠）和聚丙烯酰胺凝胶的使用很大程度上消除了结构和电荷的影响，蛋白质的分离完全基于多肽链的长度。
蛋白质经SDS-PAGE电泳后按分子量大小分离开来，如果蛋白样品只含有一种蛋白质，那么其电泳后只会显现一个唯一的蛋白条带；但如果一个蛋白样品中含有多种大小不同的蛋白，那么电泳后不同的蛋白质会被分离成大小不同的蛋白条带。
于是，可以据此利用SDS-PAGE的分离作用进行蛋白纯度的鉴定，不仅可以分析一个未知
蛋白样品的纯度，还可以验证蛋白样品纯化后的效果。
百泰派克生物科技使用Bio-Rad Mini-PROTEAN® Tetra凝胶系统，提供基于1D和
2D的 SDS-PAGE分析服务技术包裹，用于多种蛋白质组学分析，包括蛋白质样品纯度分析、分子量测定、蛋白质鉴定、二硫键鉴定以及蛋白质定量等，欢迎免费咨询。
蛋白 SDS-PAGE纯度鉴定与分子量测定
蛋白SDS-PAGE纯度鉴定与分子量测定一、原理：（1）SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodiumdodecylsulphate-polyacrylamidegelelectrophoresis,SDS-PAGE）简称SDS-PAGE。
用于蛋白纯度及蛋白质亚基相对分子量（relativemolecularmass,Mr）测定。
SDS是一种阴离子去污剂，带有大量负电荷，与蛋白质结合后使蛋白质所带负电荷大大超过了天然蛋白质原有的负电荷，因而消除或掩盖了不同种类蛋白质间原有电荷的差异。
SDS破坏蛋白质氢键、疏水键，引起蛋白质构象改变，使蛋白质－SDS复合物形状近似椭圆形，短轴相同（1.8nm），长轴与蛋白质分子量成正比。
因此，蛋白质—SDS复合物(SDS-denaturedprotein)在凝胶中的迁移率不受蛋白质原有电荷和形状的影响，只与椭圆棒长度（蛋白质分子量）有关。
蛋白质的迁移率与分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX（6）1ml注射器及6号长针头；（7）微量注射器（10μl或50μl）?????试剂：标准蛋白质：不连续体系SDS-PAGE有关试剂（1）10%（W/V）SDS溶液：称5gSDS，加重蒸水至50ml，微热使其溶解，置试剂瓶中，4℃贮存。
SDS在低温易析出结晶，用前微热，使其完全溶解。
（2）1%TEMED（V/V）：取1mlTEMED，加重蒸水至100ml，置棕色瓶中，4℃贮存。
（3）10%AP（W/V）：称AP1g，加重蒸水至10ml。
最好临用前配制。
（4）样品溶解液：内含1%SDS，1%巯基乙醇，40%蔗糖或20%甘油，0.02%溴酚蓝，0.01mol/LpH8.0?Tris-HCl缓冲液。
①先配制0.05mol/LpH8.0?Tris-HCl缓冲液：称Tris?0.6g，加入50ml重蒸水，再加入约3ml?1mol/LHCl，调pH至8.0，最后用重蒸水定容至100ml。
SDSPAGE测定蛋白质相对分子质量实验报告
SDS－PAGE测定蛋白质相对分子质量一、前言聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳，简称PAGE，是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种经常使用电泳技术。
聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合进程由自由基催化完成。
的经常使用方式有两种:化学聚合法和光聚合法。
化学聚合以过硫酸铵(APS)为催化剂，以(TEMED)为加速剂。
在聚合进程中，TEMED催化过硫酸铵产生自由基，后者引发单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维。
PAGE依照其有无浓缩效应，分为持续系统和不持续系统两大类，持续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，要紧靠电荷和。
不持续系统中由于离子成份，pH，凝胶浓度及电位梯度的不持续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，因此其分离条带清楚度及分辨率均较前者佳。
不持续体系由电极缓冲液、浓缩胶及所组成。
浓缩胶是由AP 而成的大孔胶，凝胶缓冲液为的Tris-HCl。
分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓冲液为Tris-HCl。
电极缓冲液是Tris-甘氨酸缓冲液。
2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH 值使不持续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成份的不持续性，这是样品浓缩的要紧因素。
SDS是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构。
而强如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的断裂。
在和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，如此就排除不同分子间的电荷不同和结构不同。
SDS-PAGE一样采纳的是不持续缓冲系统，与持续缓冲系统相较，能够有较高的分辨率。
浓缩胶的作用是有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，把较稀的样品加在浓缩胶上，通过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭小的区带。
蛋白质纯度鉴定
蛋白质纯度鉴定蛋白质是生命体中必不可少的大分子有机化合物，其结构和功能各不相同，因此在研究生物学、制药学等领域中，对蛋白质的纯度鉴定十分关键。
蛋白质的纯度指的是蛋白质分子在样品中占有的总比例，它不仅关系到后续的实验和理论研究，也影响到药品的安全性和有效性。
下面，我们将针对蛋白质纯度鉴定的方法和技术展开讨论。
一、理化方法1. 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）SDS-PAGE是一种广泛应用于蛋白质纯度鉴定的方法，该方法将样品中的蛋白质分子加入一定量的阴离子表面活性剂（SDS）并使之电泳，通过分子量大小的差别将蛋白质分离出来，并用Coomassie蓝染色或银染色进行可视化。
该方法有较高的分辨率和可重复性，但需要较高的设备和试剂成本，并且只能检测到存在亚精度的杂质。
2. 高效液相色谱（HPLC）HPLC是一种高效、高精度、高灵敏度的液相色谱检测技术，能够对蛋白质样品中的杂质进行分离和检测，从而判定蛋白质的纯度。
根据不同的分离模式，HPLC可以分为离子交换、逆相、凝胶过滤、亲和层析等几种，应用范围广泛。
该方法需要专业的仪器设备和专业操作技术，但是其结果具有准确性高和可重复性强的特点。
二、免疫学方法1. ELISA法ELISA（酶联免疫吸附试验）常被应用于纯度较高的蛋白质样品的鉴定，该方法通过特异性抗体的识别并与抗原结合，从而判断蛋白质在样品中的含量。
当然，根据样品中抗原含量的不同，可以将该方法分为直接ELISA、间接ELISA、Sandwich ELISA等类型。
该法操作简便，对较小分子量蛋白质也有很好的检测效果，但是需要一定的抗体或者蛋白质结构信息。
2. Western Blotting法Western Blotting是一种通过蛋白质电泳分离，将成像膜上的蛋白质与蛋白质特异性抗体结合并进行检测的方法。
该方法常被用于验证蛋白质纯度和鉴定蛋白质的蛋白质伴侣分子等应用。
在实验操作过程中，需要较高的专业熟练程度和精准操作技巧，且耗时较长，但是其结果准确性高，能够监测低含量的蛋白质。
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四、实验步骤
1、安装垂直板电泳槽 2、制备凝胶板 3、样品处理 4、加样 5、电泳 6、染色及脱色
五、实验结果及分析
测量由点样孔至溴酚蓝及蛋白质带的距离 （mm），计算相对迁移率（Rf） Rf =样品移动距离（mm）/溴酚蓝移动距离 （mm） 以标准蛋白分子量的对数作纵坐标，相对迁 移率作横坐标制作标准曲线。根据样品蛋 白质的相对迁移率从标准曲线上查出其分 子量。
注意事项
• （1）用SDS-凝胶电泳法测定分子量时，每次测 量样品必须同时作标准曲线，而不得利用另一次 电泳的标准曲线。 • （2）因SDS可吸附考马斯亮蓝染料，染色前先用 2 SDS 脱色液浸泡凝胶，洗去SDS。可使染色及脱色时 间缩短，并使蛋白带染色而背景不染色。 • （3）若样品为水溶液，则需将样品溶解液的浓度 提高一倍，然后与等体积样品溶液混合。
ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测蛋白质分子量
一、实验目的
• 理解电泳分离和鉴定物质的原理； • 掌握SDS-PAGE中SDS的作用，测定蛋白 质分子量的原理； • 重点掌握电泳操作过程。
二、实验原理
• 电泳的原理：电荷效应和分子筛效应 • SDS-PAGE测定蛋白质分子量的原理： SDS的电荷作用和变性作用 测分子量的标准曲线： lgM=-bRf+c
思考题
• 1．用SDS-凝胶电泳法测定蛋白质分子量时 为什么要用巯基乙醇？ • 2．是否所有的蛋白质都能用SDS-凝胶电泳 法测定其分子量？为什么？
三、实验用品
1、试剂 、 30％分离胶贮存液 10％浓缩胶贮存液 分离胶缓冲液（Tris-HCl缓冲液 PH8.9） 浓缩胶缓冲液（Tris-HCl缓冲液 PH6.7） 电泳缓冲液（Tris-甘氨酸缓冲液PH8.3） 样品溶解液：取SDS 100mg，巯基乙醇0.1mL，甘油1mL，溴酚蓝 2mg，0.2mol/L，pH7.2磷酸缓冲液0.5mL，加重蒸至10mL（遇液体 样品浓度增加一倍配制）。用来溶解标准蛋白质及待测固体 染色液：0.25g考马斯亮蓝R-250，加入454mL 50%甲醇溶液和46mL冰 乙酸即可。 脱色液：75mL冰乙酸，875mL水与50mL甲醇混匀。 10%过硫酸铵溶液； 10％SDS溶液； 1％TEMED。
பைடு நூலகம்
2、材料 、 标准蛋白：溶菌酶（Mr 14 300）、胰凝乳蛋白酶原 (Mr 25 000)、胃蛋白酶（Mr 35 000）、卵清蛋 白（Mr 43 000）、血清白蛋白（Mr 67 000）等。 按每种蛋白0.5-1mg/mL配制。可配成单一蛋白质 标准液，也可配成混合蛋白质标准液。 3、器材 、 DYCZ-24D型垂直板电泳槽；移液管1 mL（ 3），5 mL（ 4），0.5mL（ 1），0.1mL（ 2）；烧杯 100mL（2）；细长头的吸管；微量注射器。