不同品种灵芝中四种核苷类成分的含量比较

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灵芝不同部位多糖含量测定

醇、浓硫酸、丙酮、乙醚等均为分析纯试剂。
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作者简介：胡斌杰（９１）男（）本科，师，１７一，汉，讲主要从事生物化工
工艺教学和天然产物有效成分提取、分离及应用方面的研究
摘要：用苯酚一酸法对灵芝茵盖表皮层、采硫木栓层、茵柄、孢子粉、酵茵丝体等部位中的灵芝多糖进行了测定，发
结果发现，灵芝发酵茵丝体中的多糖含量明显高于灵芝的其它部位，其含量顺序分别为：发酵茵丝体＞茵盖表皮层＞
孢子粉＞菌柄＞栓层。木关键词：芝；同部位；灵不多糖；析分
（ａｆｎｎｖｒｉ，ａｆｎ７０，ｎｎＣｉａＫｉｇＵｉｅｓｔＫｉｇ４５０Ｈｅａ，ｈｎ）ｅｙｅ４
Ａｂｔａｔｓｒｃ：Ｕｓｎｈｎｌｓｌｕｉｃｄｍｅｈｄｏｎｄｒｒａｍｅｔｐｄｒｓｆｉｄｌｎｌａｅｓｏｍｉｇｐｅｏ — ｕｆｒｃａｉｔｏｆＧａｏｅｍａｔｅｔｎｓｅｉｅｍｉ，ｒｅａｏｙｒｍｕｈｒｏｅｌｓｏｅｐｗｄｒａｔｆｅｅｔｄｍｙｅｉｆｎｄｒｃｄｕｐｌｓｃｈｒｄｓｔｅｍｅｓｒｍｅｔｅｕｔｈｗｅｐｒｏｅｒｏｒｎｅｃｌｏｐｆｍａＧａｏｅｍａｌｉｉｍｏｙａｃａｉｅ，ｈａｕｅｎｓｌｓｏｄｕｒｓｔａｒｅｔｔｅｍｙｅｉｆｎｄｒａｐｌｓｃｈｒｏｔｎｔｓｓｇｉｃｎｌｉｈｒｔａｈｔｅａｓｏｓｈｔｅｆｍｎａｉｃｌａｏｖＧａｏｅｍｏｙａｃａｉｃｎｅｉｎｆａｔｙｈｇｅｈｎｔｅｏｈｒｒｆｔｄｅｗａｉｐｔｉｃｎｅｒｅＦｒｅｔｄｍｙｅｉ＞ａｌｏｅｒａｍｅｔ＞ｐｒｓＡｔａｔｎｏｔｎｔｎｏｄｒｏ：ｅｉｔｍｎｅｃｌＴｂｅｃｒｘｔｅｔｎｓＳｏｅ＞ｔｃｉ＞Ｆｒｅｅａｏｙｒａｔｒｏｉｄｌｎｌａｅ．ｌＫｅｒｓ：ＧａｏｅｍａＬｕｉｕｄｆｅｅａｓｐｌｓｃｈｒｄ；ｎａｙｉｙｗｏｄｎｄｒｃｄｍ；ｉｒｎｔｒ；ｏｙａｃａｉｅａｌｓｓｆｐｔ

不同产地灵芝中重金属含量比较

不同产地灵芝中重金属含量比较朱龙平1姚文明1陈建文1（1.中山大学药学院，广东广州5100062.）摘要用原子吸收光谱法、原子荧光光谱法测定不同产地灵芝中铅、镉、砷、汞、铜的含量，结果样品中铅含量<0.061mg/kg、镉含量<0.006mg/kg、砷含量<0.168mg/kg、汞含量<0.013mg/kg、铜含量<6.33mg/kg均符合国家标准。

关键词：原子吸收光谱法、原子荧光光谱法、灵芝、重金属灵芝又称灵芝草、神芝、芝草、仙草、瑞草，是担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌赤芝（G．lucid um·karst）和紫芝（G．japonicrn L loyd）的总称。

灵芝作为拥有数千年药用历史的中国传统珍惜药材，具备很高的药用价值，现代药理学研究证实，灵芝对于增强人体免疫力，调节血糖，控制血压，辅助肿瘤放化疗，保肝护肝，促进睡眠等方面均具有显著疗效。

市面上灵芝类保健品种类繁多，目前国内的每年销售额约十几亿元人民币。

据报道灵芝中含有铅、镉、砷、汞等有害元素，因此测定灵芝中的铅、镉、砷、汞、铜等元素的含量对灵芝的质量控制和合理使用具有重要意义。

本实验利用原子吸收光谱法和原子荧光光谱法测定了不同产地的灵芝中重金属元素的含量，方法准确可靠。

1实验部分1、试品与试剂、仪器１.１试品灵芝，无限极（中国）有限公司提供，产地如下：经中山大学药学院生药学教研室杨得坡教授鉴定为多孔菌科灵芝属真菌紫芝（G．japonicrn L loyd）。

1.2 仪器试剂原子吸收光谱仪(附石墨炉)（美国Thermo公司）；AG285分析天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；XDY—2A型双道原子荧光光度计（北京海光仪器公司）；高压消解罐（100ml）；硝酸、硫酸、盐酸、高氯酸等均为分析纯，去离子水实验室自制；单元素标准溶液购于国家有色金属及电子材料分析测试中心，镉标准液，编号：GSB04-1721-2004，标识号107100、铅标准液，编号：GSB04-1742-2004，标识号10646，铜标准液，编号：GSB04-1725-2004，标识号10619，汞标准液，编号：GSB04-1725-2004，标识号10619、砷标准液，编号：GSB04-1714-2004，标识号10708。

灵芝多糖

灵芝多糖灵芝属真菌具有很高的药用价值从而得到广泛的研究与应用,而多糖类化合物是灵芝属真菌的主要化学成分之一。

灵芝多糖结构如分子量、单糖组成和糖苷键类型等，对其活性影响很大，本文列举了灵芝多糖结构通用的检测方法。

已有实验证实，灵芝多糖的生物保健功能主要体现在降血糖、降血脂、抗肿瘤、提高免疫力和抗氧化方面。

灵芝是担子菌门担子菌纲多孔菌科灵芝属药用真菌，古代就认为其有扶正固本、滋补强壮的功效，对其药性十分推崇。

灵芝类所含化学成分复杂,且因所用菌种培养方法、提取方法等不同而异.研究灵芝类的化学成分的目的,在于了解和比较灵芝属不同品种及同一品种的不同发育阶段(如子实体、菌丝体、孢子体)所含的化学成分,通过药理及临床研究确定其有效成分或有效部分.目前研究较多的灵芝化学成分主要有:三萜类化合物、多糖类、核苷类、甾醇类、生物碱类、呋喃衍生物、氨基酸多肽类、无机元素、脂肪酸等现代科学检测表明，灵芝在免疫系统的调节、通过增强宿主免疫调节功能达到抗肿瘤作用、抗病毒作用、通过提高氧化酶活性而清除体内自由基达到抗衰老的作用、降血脂等方面有着极其重要的医学作用。

随着近年来对灵芝研究的不断深入，发现灵芝多糖是灵芝的主要活性物质之一，其重要性不言而喻。

本文综述了近年来国内外对灵芝多糖的主要研究进展。

灵芝多糖的结构如同其他的生物活性大分子，灵芝多糖的生物活性依赖于化学结构，因此，要研究灵芝多糖生物活性的机理，不可避免的要研究其化学结构。

对灵芝多糖的化学结构的研究，主要集中于其单糖的组成、多糖分子量范围、单糖连接方式等方面。

近年来，随着研究的不断深入，对灵芝多糖的化学结构已经有了一定的了解。

虽然灵芝多糖化学结构由于灵芝种类的不同而有所差异，但其化学结构的某些方面是固定不变的。

灵芝多糖的组成灵芝多糖是由肽多糖、葡萄糖、杂多糖等多糖均一体组成的混合物,是灵芝中的主要有效成分[9].从构成来看,灵芝多糖大多为杂多糖,即除葡萄糖基外,还含有少量D-阿拉伯糖、D-木糖、D-半乳糖、D-甘露糖、L-岩藻糖、L-鼠李糖、L-阿拉伯糖等单糖。

人工栽培灵芝与野生灵芝活性成分的比较分析

中国 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 物与营养
嘧啶、腺嘌呤、腺昔等成分，可以运用薄层色谱对】
化成分测定的数据表明，灵芝作为药用，其主要成分
其进行鉴别，同时用紫外分光光度法还可以测定灵芝子实体中总核苷含量。戴敬等ｎ利用毛细管电泳测定州了四维灵芝液中腺苷与鸟昔的含量，方法简便、快速、
１３核苷类．核苷是组成ＲＡ、ＤＡ必不可少的重要物质，是ＮＮ具有广泛生理活性的一类水溶性成分。灵芝中含有尿
离到的有２００多种，其中大部分为ｐ一葡聚糖，少数为
作者简介：周春红（９６１８～），女，重庆合川人，硕士研究生，研究方向：食品化学与营养学。
质检查和含量测定。
降血脂、抗氧化及抗衰老等作用，故灵芝多糖是灵芝的主要有效成分。灵芝多糖种类很多，有水溶性多糖、
酸性多糖和碱性多糖，以杂多糖为主，主要由Ｌ阿拉．伯糖、Ｌ岩藻糖、Ｌ鼠李糖，Ｄ一一一葡萄糖、Ｄ一半乳糖、Ｄ一甘露糖、Ｄ一木糖和Ｄ一聚糖等组成。目前已分葡Ｊ
多糖类化合物是灵芝所含主要化学成分之一。现
已证明，灵芝多糖类具有抗肿瘤、免疫调节、降血糖
柄、子实体等部位灵芝酸Ｂ的含量，发现主要集中在表皮部位。马林捧等也发现ＨＬ ” ＰＣ的方法快速、简便、分离度好，适用于灵芝及其相关制剂的三萜类物
灵芝（ａｏｅｍａｌｃｄｍ）古称瑞草，又称 “ Ｇｎｄｒｉｕｕ三

灵芝中10种灵芝酸类成分含量一测多评法的建立

其中灵芝酸类成分具有直接杀伤肿瘤细胞的作用[3―4]。

灵芝多糖含量、灵芝酸总量是2020年版《中国药典》中灵芝质量控制的指标，然而紫外分光光度法的专属性不强，检测时易受皂苷、油酸等物质干扰，无法保证测得的总三萜酸含量准确度[5]。

近年来，高效液相色谱（high-performance liquid chromatography，HPLC）法已成为测定酸类成分的主要手段之一，能有效解决专属性问题[6―7]。

但灵芝酸类成分的对照品不易获得，价格昂贵，限制了HPLC法在灵芝酸类成分检测中的应用。

一测多评（quantitative analysis of multi-components by single marker，QAMS）法是利用中药有效成分间的内在函数关系和比例关系，仅测定1种成分（对照品易得），来实现多种成分（对照品没有或难以供应）的同步监控[8]，该方法已广泛应用于中药的质量控制工作中[9―10]。

2010年版《中国药典》首次在中药材黄连项下收载了QAMS法，2015年版《中国药典》增加至9个品种[11]，2020年版《中国药典》增加至16个品种[4]。

本研究在前期建立的灵芝HPLC指纹图谱[12]基础上，拟采用QAMS法，以灵芝酸A为内参物，得到灵芝酸B、灵芝酸C2、灵芝酸D、灵芝酸F、灵芝酸H、灵芝烯酸A、灵芝烯酸B、灵芝烯酸C、灵芝烯酸D与灵芝酸A之间的相对校正因子，计算出这9种灵芝酸的含量，并与外标法（external standard method，ESM）比较，建立快捷、经济、全面的灵芝酸类成分含量测定的QAMS法，并对不同产地灵芝进行质量控制，为其质量标准修订提供参考。

1　材料1.1　主要仪器本研究所用的主要仪器有Series Ⅲ型HPLC仪（美国SSI/ALLCHROM公司）、Waters 1525型HPLC仪（美国Waters公司）、AL104型分析电子天平[梅特勒·托利多仪器（上海）有限公司]等。

灵芝多糖

二、灵芝多糖在药品中的应用
在体外，GLP不能直接抑制或杀伤肿瘤细胞，也不能诱导肿瘤细胞凋亡，但GLP能够增强巨噬细胞的吞噬功能，促进淋巴细胞增生，增强T杀伤细胞的细胞毒作用，促进免疫细胞产生IL-2、IFNy、 TNFa等而间接诱导肿瘤细胞凋亡。灵芝多糖具有疗效明确、无任何毒副作用等特点, 已被用作临床治疗肿瘤的辅助药物。
展
望
灵芝多糖调节免疫功能、抗衰老、抗肿瘤、抗辐射等作用已得到研究人员和学术界普遍认可。
随着灵芝菌深层培养技术的成熟，及基因工程、生物分离技术、免疫技术在GLP研究中的应用，其对人类健康的作用将进一步凸显出来。GLP广泛的药理作用和高度的安全性使其越来越被国内外重视身体健康的人们所青睐，这是灵芝产品拥有广阔市场的坚实基础。
获得灵芝多糖的方法
一是从固体培养的子实体中浸提提取
二是通过深层发酵生产
灵芝多糖含量的测定
一、用苯酚-硫酸法测定总糖
二、பைடு நூலகம்NS法测定还原糖
三、多糖=总糖--还原糖
灵芝多糖结构
• 目前已分离到的灵芝多糖有 200 多种，有水溶性多糖、水不溶性多糖、酸性多糖和碱性多糖等，大部分多糖以 β一 (1— 3)为主链，p一(1—6)及(1—4)为侧链，其侧链数目大小不一，组成侧链的糖基成分复杂。 • 通过IR、13C2NMR、高碘酸盐氧化、甲基化分析、Sm ith 降解、部分酸水解等手段对灵芝多糖的化学结构进行了研究, 其立体构形和DNA、RNA相似，螺旋层之间主要以氢键固定，分子量从数百到数十万，除一小部分小分子多糖外，大多不溶于高浓度酒精，在热水中溶解，大多存在于灵芝细胞内壁。
一、灵芝多糖在功能性食品中应用二、灵芝多糖在药品中的应用

灵芝的化学成分_功效及药理作用_冯道俊

灵芝的化学成分、功效及药理作用○冯道俊　(潍坊学院生物工程学院　山东　潍坊　261061) 灵芝[Ganoderma lucid um(Fr.)Karst]为担子菌纲灵芝属真菌,自古就有“仙草”、“瑞草”之称,是中医扶正固本、滋补强壮的珍贵中药,在我国有悠久的药用历史,药用价值极高,被视为珍贵的中药材,是中医药宝库中的珍品。

东汉《神农本草经》将灵芝列为上品,认为“久食,轻身不老,延年神仙”。

现代医学证明:灵芝含有多种生理活性物质,能够调节和增强人体免疫力。

最新研究表明,灵芝还具有抗疲劳、美容养颜、延缓衰老和防治艾滋病等功效。

2000年版《中华人民共和国药典》收载灵芝(赤芝、紫芝)子实体为法定中药材。

目前国际医药学界也非常重视灵芝的研究与开发,2000年美国出版的《美国草药药典和治疗概要》收载了灵芝,该书迄今共收载10种中药或草药,灵芝为其中之一。

1　化学成分及其功效到目前为止,科学研究工作者已从灵芝中分离出近200种化合物,实验室及临床研究都已分别揭示了这些化合物就是灵芝这一中国古老珍贵中药防病治病的药理活性成分。

日本、美国等发达国家也先后对灵芝进行了研发及临床验证。

世界医学界已公认了灵芝的生物理化医药作用。

1.1　微量元素　灵芝子实体含有多种微量元素,有锰、镁、钙、铜、锗、锶、锌、铁、铍、硼、铬、镍、钒,钛等。

灵芝对锗的富集能力较强,有机锗的含量是人参的4～6倍、枸杞的100倍,有机锗能使血液循环畅通,增加红血球携氧能力,延缓衰老,并能与体内污染物、重金属相结合形成锗化合物排出体外,还有调整人体不正常电位的功能,抑制病症的恶化。

1.2　灵芝多糖　灵芝多糖是灵芝中的有效成分之一,是灵芝中提高人体免疫功能、扶正固本的主要成分。

灵芝的多种药理活性大多和灵芝多糖有关,目前已分离出200多种。

现在已知灵芝多糖有广泛的药理活性,能提高肌体免疫力和肌体耐缺氧能力,消除自由基,抑制肿瘤,抗放射,提高肝脏、骨髓、血液合成DNA、RNA和蛋白质能力,延年益寿等。

灵芝介绍

谢谢
三、对心血管系统的作用

动物实验和临床试验均表明，灵芝可有效地扩张冠状动脉，增加冠脉血流量，改善心肌微循环，增强心肌氧和能量的供给，因此，对心肌缺血具有保护作用，可广泛用于冠心病、心绞痛等的治疗和预防。对高血脂病患者，灵芝可明显降低血胆固醇、脂蛋白和甘油三脂，并能预防动脉粥样硬化斑块的形成。对于粥样硬化斑块已经形成者，则有降低动脉壁胆固醇含量、软化血管、防止进一步损伤的作用。并可改善局部微循环，阻止血小板聚集。这些功效对于多种类型的中风有良好的防治作用。
灵芝介绍
灵芝

灵芝又称灵芝草、神芝、芝草、仙草、瑞草，是多孔菌科植物赤芝或紫芝的全株。以紫灵芝药效为最好，灵芝原产于亚洲东部，中国分布最广的在江西，灵芝作为拥有数千年药用历史的中国传统珍贵药材，具备很高的药用价值，经过科研机构数十年的现代药理学研究证实，灵芝对于增强人体免疫力，调节血糖，控制血压，辅助肿瘤放化疗，保肝护肝，促进睡眠等方面均具有显著疗效。
化学成分

灵芝属的化学成分较为复杂，且因所用菌种、菌种产地、栽培方法、提取工艺、制剂方法不同而各异。灵芝属的子实体、菌丝体和孢子中含有多糖类、核苷类、呋喃类衍生物、甾酵类、生物碱类、蛋白质、多肽、氨基酸类、三萜类、倍半萜、有机锗、无机盐等。灵芝多糖是灵芝的主要有效成分之一，具有抗肿瘤、免疫调节、降血糖、抗氧化、降血脂与抗衰老作用。
八、贮藏方法

新鲜的灵芝可以直接食用，但保存期很短。灵芝采收后，去掉表面的泥沙及灰尘，自然凉干或烘干，水分控制在13%以下，然后用密封的袋子包装，放在阴凉干燥处保存。市场上散装的灵芝，使用前最好清洗后食用。置干燥处，防霉，防蛀。
九、食用方法

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不同品种灵芝中四种核苷类成分的含量比较
采用Dikma C18（250 mm×4.6 mm， 5 μm），以10 mmol/mL KH2PO4水溶液（pH 4.4）-甲醇为流动相梯度洗脱（流速∶1 mL/min）在260 nm波长、柱温25 ℃条件下用HPLC考察尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤以及鸟苷在不同品种灵芝中的含量差异。

结果表明，不同品种的灵芝中四种核苷类成分的含量存在显著差异，而且这种方法简便快速，稳定性和重复性良好，适用于灵芝中尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤以及鸟苷含量的同时测定。

灵芝；尿嘧啶；尿苷；腺嘌呤；鸟苷
灵芝（Ganoderma lucidum）作为一种药食两用菌，具有补气安神，止咳平喘的功效，可用于多种疾病的治疗和保健。

灵芝化学成分主要有多糖、三萜、核苷、甾醇等。

其中核苷类是具有广泛生理活性的成分，已有文献报道从灵芝中分离出多种核苷类成分[1，2]。

不同品种灵芝中的核苷类成分含量是否存在差异，这些差异与灵芝的质量是否存在一定的联系，这些研究尚未见报道。

本研究参考文献中的核苷类物质的分析检测方法[35]，采用HPLC法建立了同时检测灵芝中尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤以及鸟苷四种核苷类成分的方法，并对不同品种之间的含量进行比较，为灵芝中核苷类成分与灵芝质量之间的联系建立基础。

1仪器与材料
Waters AcquityHPLCTM（Waters公司，包括：四元溶剂泵，自动进样器，柱温箱，紫外检测器，Empower化学工作站等）；KQ600B型超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）
灵芝子实体来源：收集灵芝菌种156，119，140，D6，D111，D133，D164于2003年在上海市崇明县栽培获得的子实体。

样品剪碎后用万能粉碎机粉成细粉过100目用于提取。

尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤及鸟苷标准品（供含量测定用）购自SIGMA公司。

2方法与结果
2.1色谱条件
2.2对照品溶液制备
精密称取尿嘧啶2.4 mg、尿苷2.2 mg、腺嘌呤2.7 mg及鸟苷2.06 mg分别置10 mL量瓶中，加水并稀释至刻度，摇匀，即得尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤和鸟苷对照品储备液。

分别精密移取等量尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤和鸟苷对照标准品储备液，制成混合溶液。

2.3供试品溶液制备
取样品细粉约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精确加入蒸馏水15 mL，超声处理（功率250 W，频率40 KHz）1 h，放冷，摇匀，滤过，滤液用0.45 μm 微孔滤膜滤过，即得。

2.4线性关系考察
2.5精密度试验
取混合对照品，连续进样5次，计算峰面积，结果尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤、鸟苷的RSD（n=5）分别为0.80%、 2.52%、3.37%、 1.75%。

表明仪器精密度良好。

2.6重复性试验
取同一品种灵芝样品5份，按2.3中方法制备供试品溶液、进样测定；计算出含量，结果尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤、鸟苷的含量RSD（n=5）分别为2.46%、3.52%、4.80%、3.45%。

表明方法重复性良好。

2.7稳定性试验
取同一供试品溶液，分别于0，2，4，8 h进样测定，计算峰面积，结果尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤、鸟苷的峰面积RSD分别为1.26%、2.54%、3.13%、3.90%。

表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。

2.8加样回收率试验
取同一批已知含量的灵芝样品5份，各约0.5 g，精密称定，准确加入一定量的尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤、鸟苷对照品溶液，按“2.3”项下制备供试品溶液并进样测定，计算加样回收率。

结果尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤和鸟苷的平均加样回收率（n=5）和RSD分别为100.8%，2.3%；100.2%，2.1%；103.8，1.1%；101.5%，1.5%。

张圣龙，等：不同品种灵芝中四种核苷类成分的含量比较
2.9样品的含量测定
分别精密称取样品粉末各2份，按“2.3”项下制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定四种核苷类成分的峰面积，外标法计算含量，色谱图见图1，含量测定结果见表2和图2。

3讨论
灵芝中核苷类成分比较复杂，等度洗脱相很难将4种成分在短时间同时分开，通过对不同流动相的比较采用梯度洗脱程序使核苷类成分得到满意分离。

同时对流动相pH值的影响进行比较，选择10 mmol/L的KH2PO4水溶液pH值在4.85左右，并用磷酸单独调整到不同pH值，通过对比，pH值为4.40时，四种核苷类成分的分离效果最佳。

不同灵芝品种的核苷的含量差异非常大，由于这些品种的栽培条件、地点和管理方式都相同，而核苷类成分差异大的原因与品种有很大的关系。

栽培条件的改变是否会改变核苷类成分的种类和含量的差异，而这些改变与灵芝的质量是否相关也值得我们进一步研究。

本研究建立的HPLC方法，简便快速，且稳定性和重复性良好，适合灵芝中尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤以及鸟苷含量的同时测定，是一种理想的分析测定方法。

余竞光，申福臻等.薄盖灵芝深层发酵菌丝体化学成分的研究（Ⅱ）[J].中草药，1981，12（7）：78.
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