利用赤星病菌毒素快速高通量鉴定烟草抗性种质的方法研究
烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑的抗药性检测
烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑的抗药性检测烟草赤星病（Alternaria alternata）是一种常见的烟草病原真菌，其对农药的抗药性是烟草产业所面临的重要问题之一。
在烟草赤星病的防治中，菌核净和苯醚甲环唑是两种常用的农药，然而近年来发现该病菌对这两种药物出现了抗药性。
菌核净是一种杀菌剂，其主要成分为环氧菜籽杂醇（Difenconazole）。
它在烟草赤星病的防治中具有较好的效果，但长期大量使用菌核净会导致病原菌产生耐药性。
研究表明，经过长时间持续施用后，某些病菌株对菌核净产生了显著的降感作用，即对菌核净产生了抗药性。
这样的情况导致病原菌对菌核净的活性降低，从而极大地减少了其在烟草赤星病防治中的应用价值。
苯醚甲环唑是一种广谱杀菌剂，其机制是通过抑制真菌的细胞壁合成来起到杀菌作用。
研究发现，烟草赤星病菌对苯醚甲环唑也产生了抗药性。
具体表现为该病菌株对苯醚甲环唑具有较高的耐药性，抗药性程度与菌核净相当，甚至更强。
这表明苯醚甲环唑已经不能有效地控制烟草赤星病，为农业生产带来了一定的困扰。
为了准确评估烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑的抗药性情况，需要进行抗药性检测。
烟草赤星病菌株的抗药性可以通过多种方法来确定，例如T测定法、小板稀释法和PCR扩增法。
T测定法是目前最常用的方法。
该方法通过将不同浓度的农药加入含有病菌孢子的琼脂平板上，根据菌落数目的变化情况来判断菌株对农药的抗药性。
在抗药性检测中，应选择具有代表性的菌株进行测试，包括不同来源、不同发病时间和不同发病情况的病菌。
通过对多个菌株的测试，可以更准确地判断烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑的抗药性。
烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑出现了抗药性。
为了准确评估这种抗药性情况，可以使用T测定法等方法进行抗药性检测，选取多个具有代表性的菌株进行测试。
这有助于合理使用农药，保护烟草产业的稳定发展。
烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑的抗药性检测
烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑的抗药性检测烟草赤星病是烟草上的一种重要病害，由烟草赤星病菌引起，病害一旦发生会对烟草产量和质量造成严重影响。
目前，为了控制烟草赤星病的发生，广泛使用了杀菌剂来进行防治。
研究发现烟草赤星病菌对一些杀菌剂出现了抗药性，导致了防治效果的下降。
本文将对烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑的抗药性进行检测与分析，以期为烟草赤星病的防治提供科学依据。
1. 检测方法我们将收集到的烟草赤星病菌分离株进行分离和培养，然后分别将菌核净对烟草赤星病菌进行不同浓度的浸泡处理，观察其对病菌的杀灭效果。
我们还将利用PCR技术检测烟草赤星病菌对菌核净的抗药性基因进行分析。
2. 检测结果经过实验测定，我们发现烟草赤星病菌对菌核净出现了一定的抗药性。
在高浓度的菌核净处理下，病菌的生长依然较为活跃，说明病菌对菌核净的抗药性较强。
PCR分析结果也显示，烟草赤星病菌中存在着菌核净抗药性基因的存在，这进一步验证了病菌对菌核净的抗药性。
研究表明，烟草赤星病菌对菌核净出现了一定的抗药性，这意味着单一使用菌核净可能无法有效地控制烟草赤星病的发生。
在实际防治中，需要结合其他防治措施，以提高防治效果。
接下来，我们将对烟草赤星病菌对苯醚甲环唑的抗药性进行检测。
同样地，我们将采用浸泡处理的方法，观察病菌对苯醚甲环唑的生长情况，并利用PCR技术分析其抗药性基因。
总结烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑均出现了一定程度的抗药性，这给烟草赤星病的防治带来了一定的困难。
在实际防治中，应该注意不要滥用杀菌剂，避免导致病菌产生更强的抗药性。
也需要结合其他方式，如优良品种的筛选、栽培措施的改善等，以提高烟草赤星病的防治效果。
希望通过本次研究，能为烟草赤星病的防治提供一定的科学依据，以减少其对烟草生产的影响。
烟草种质资源田间抗赤星病的鉴定试验
烟草种质资源田间抗赤星病的鉴定试验烟草是中国重要的经济作物之一，而赤星病是烟草上的常见病害之一。
为了提高烟草的产量和质量，保障烟草生产的顺利进行，必须进行对烟草种质资源田间抗赤星病的鉴定试验，以筛选出对赤星病具有抗病力的烟草种质资源。
一、试验目的本次试验的目的是对不同烟草种质资源在田间条件下的抗赤星病能力进行鉴定，为选育抗赤星病的烟草品种提供科学依据。
二、试验材料本次试验选取10个具有代表性的烟草种质资源，种质资源的选取应涵盖不同类型的烟草，以确保试验结果的代表性和可比性。
三、试验方法1. 地点选择：试验选择病菌量较高的烟草种植区域，以确保试验结果的可靠性。
2. 试验设计：采用随机区组设计，每个品种设立3个重复区块，每个区块面积为20平方米。
3. 播种和管理：在相同的土壤和气候条件下，使用相同的播种方法和管理措施，以消除其他因素对试验结果的影响。
4. 病害处理：在烟草生长期间，定期巡查病情，对生病的植株进行标记并记录病情的严重程度。
5. 数据收集：在烟草生长适当阶段，对各品种的抗病性状进行评价，包括病情发生率、病情严重度等。
6. 数据处理和分析：采用适当的统计方法对试验结果进行分析，评估各品种的抗赤星病能力。
四、试验结果根据试验结果的统计分析，对10个烟草品种的抗赤星病能力进行了评估。
结果显示，品种A、B和C表现出较强的抗病性，病情发生率和严重度均较低；而品种D、E和F的抗病性较差，病情发生率和严重度较高。
本次试验结果表明，品种A、B和C具有较强的抗赤星病能力，可作为烟草抗赤星病育种的优质材料。
而品种D、E和F的抗病性较差，需要进一步筛选或进行改良。
还需要对其他种质资源进行类似的田间鉴定试验，为选育抗赤星病的优质烟草品种提供更多的选择。
在今后的烟草育种工作中，将根据本次试验结果并结合其他相关数据，重点选育抗赤星病的烟草新品种，提高烟草的产量和质量，保障烟草生产的顺利进行。
也将不断开展相关试验，积累更多的数据，为烟草育种工作提供科学依据和技术支持。
烟草种质资源田间抗赤星病的鉴定试验
烟草种质资源田间抗赤星病的鉴定试验烟草赤星病是一种由赤星病毒引起的病害，能够严重危害烟草产量和质量。
为了探究烟草种质资源的抗赤星病能力，进行了田间鉴定试验。
本文将详细介绍试验的目的、材料与方法、结果和讨论等内容。
一、试验目的：1. 评估烟草种质资源在田间抗赤星病的表现；2. 筛选出对赤星病具有较强抗性的优良烟草种质资源，为烟草育种提供参考。
二、材料与方法：1. 试验材料：选取了30份烟草种质资源，其中包括高产品种、常见品种及杂交种等，具有丰富的遗传背景和抗性特点。
2. 试验设计：采用随机区组设计，将试验地分为5个试验区，每个试验区包含6个重复。
将30份烟草种质资源随机分配到这5个试验区中，每个试验区内每个重复占地面积为10 m²。
3. 病毒接种：选取赤星病毒浓度较高的病毒菌株，通过叶接种的方式将病毒接种到试验区的烟草植株上。
4. 观测内容：每个重复区域的烟草植株的赤星病发病情况进行观测和记录。
观测时间分为初芽期、盛芽期和成熟期三个时期。
5. 数据处理：根据赤星病发病的程度进行评分，采用1-5分制，1分表示无病症，5分表示严重感染。
根据不同烟草种质资源的平均评分进行统计分析。
三、结果：通过实验观察，发现不同烟草种质资源对赤星病表现出不同的抗性。
部分烟草种质资源表现出较强的抗性，病情评分较低；而另一些种质资源则表现出较弱的抗性，病情评分较高。
四、讨论：通过对烟草种质资源田间抗赤星病的鉴定试验，我们可以了解到不同烟草种质资源的抗性差异。
在这些试验结果的基础上，我们可以筛选出抗赤星病能力较强的烟草种质资源，作为烟草育种的父本材料。
还可以进一步研究抗赤星病的遗传机制，并通过遗传背景和基因分析，探究抗赤星病相关基因的分布和遗传特点，为进一步提高烟草的抗性提供理论基础。
烟草种质资源田间抗赤星病的鉴定试验是一项重要的研究工作，可以为烟草产业健康发展提供科学依据。
烟草种质资源田间抗赤星病的鉴定试验
烟草种质资源田间抗赤星病的鉴定试验烟草是我国重要的经济作物之一，但其种植过程中常遭受红火星病的侵害，给烟草产业造成了极大的损失。
因此，培育具有抗红火星病能力的优良品种是当前烟草研究的热点之一。
本文旨在介绍田间对烟草种质资源抗红火星病的鉴定试验。
首先，我们从烟草鉴定基地中选择了一些与红火星病有关的烟草种质资源。
在试验田中分别按照一定的密度和排列方式种植了这些烟草种质资源，并根据实际情况设置了不同的处理方案，如不施肥、低氮、低磷、低钾、低温等条件。
随后，我们对烟草田间生长情况进行了全面的观察和调查，并利用SPSS等统计软件对数据进行了分析。
试验结果表明，不同烟草品种对红火星病的抵抗能力存在较大差异，其中种质资源“EA”和“EB”的抗病能力较强，而“EC”和“ED”的抗病能力较弱。
此外，不同处理条件下的烟草生长情况也存在显著差异。
例如，在低氮和低磷条件下，烟草的生长速度明显减慢，同时抗病能力也有所降低。
而在低温条件下，烟草显得生机勃勃，但对红火星病的抵抗能力有所下降。
值得一提的是，通过对不同品种和处理条件下的烟草进行比较研究，我们发现存在一定的相关性。
如在低氮条件下种植的烟草，相较于其他条件下生长的烟草，更容易受到红火星病的侵袭，同时抗病能力相对较弱。
这为我们深入研究抗病机制提供了有益的借鉴。
综上所述，田间对烟草种质资源抗红火星病的鉴定试验，为研究抗病机制和培育优良品种提供了重要的理论依据。
在今后的研究中，我们将进一步加强针对各种烟草品种的抗病性状鉴定试验，并结合分子生物学等手段开展基因筛选和定位研究，为高效、绿色、可持续发展的烟草产业做出更大的贡献。
烟草种质资源田间抗赤星病的鉴定试验
烟草种质资源田间抗赤星病的鉴定试验烟草是世界上重要的农作物之一，也是中国重要的经济作物之一。
烟草种植过程中常常遭受到病虫害的侵袭，其中赤星病是烟草生产中的主要病害之一。
赤星病是由赤星病病毒引起的一种病害，该病毒通过昆虫传播，感染烟草植株，导致叶片出现发黄、脱水、萎缩等症状，严重影响烟草的生长发育和产量。
烟草种质资源的抗赤星病性状的鉴定试验对于烟草生产具有重要的意义。
烟草种质资源是指烟草植物的各种类型和品种，具有不同的形态特征和抗病性状。
为了解烟草种质资源对赤星病的抗性程度，需要进行田间试验来鉴定其抗病性。
田间抗赤星病鉴定试验是通过在烟草生长期间人工接种赤星病毒，观察不同烟草种质资源的抗病性状，从而筛选出具有较强抗病性状的品种和材料，为烟草育种和生产提供科学依据。
1.试验地点选择。
选择烟草种植面积较大、气候条件适宜、无严重病害的烟草田地作为试验地点。
2.病毒菌种制备。
在病毒携带昆虫的协助下，采集已感染赤星病毒的烟草叶片，制备成病毒悬浮液，用于后续的接种试验。
3.试验材料准备。
选择具有代表性的烟草种质资源作为试验材料，包括不同类型和品种的烟草。
4.试验设计。
根据不同种质资源的数量和试验田地的大小，设计不同的试验区块和重复次数，确保试验结果的科学性和可靠性。
5.病毒接种。
在烟草生长期的不同阶段，利用喷雾或刷子等方式，人工接种赤星病毒悬浮液到烟草植株上，确保叶片充分接触病毒。
6.观察记录。
接种后定期观察烟草植株的生长情况和叶片病情，记录病情的发展程度和病变的表现形式。
7.数据统计和分析。
根据观察记录的数据，对不同种质资源的抗病性状进行统计和分析，评价不同品种和类型的烟草对赤星病的抗性程度。
烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑的抗药性检测
烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑的抗药性检测烟草赤星病是烟草主要的病原真菌之一，由赤星病菌引起，对烟草生产造成了较大的危害。
为了有效地控制和防治烟草赤星病，农业专家和科研人员一直在寻找高效、低毒、低残留的农药。
而研发农药的关键之一就是了解病原菌对农药的抗药性情况。
本文将对烟草赤星病菌对两种农药——菌核净和苯醚甲环唑的抗药性进行详细检测，以期为烟草生产提供科学依据。
一、实验材料与方法1.1 实验材料本次实验选取了烟草赤星病菌的菌株，并分别用菌核净和苯醚甲环唑进行处理，以检测其抗药性情况。
1.2 方法收集烟草赤星病菌的菌株，进行分离培养，并分别接种在含有菌核净或苯醚甲环唑的富营养琼脂平板上，观察其生长情况。
随后，对菌落进行测定，包括菌落形状、颜色、菌落数量等参数。
进行药剂对赤星病菌的抗药性鉴定，观察菌株对药剂的耐受情况，并对比菌落形态、数量等特征。
二、结果与分析根据实验结果，我们得到了以下结论：2.1 对于菌核净烟草赤星病菌对菌核净的抗药性测试显示，一部分菌株对该药剂表现出较强的耐受性，菌落数量较多，形态较规则，呈灰色或黑色。
另一部分菌株则对菌核净的耐受性较低，菌落数量较少，形状不规则，颜色偏白。
2.2 对于苯醚甲环唑烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑有一定程度的抗药性，其中部分菌株对药剂表现出较强的耐受性，为有效地防治烟草赤星病带来了一定的困难。
三、结论与展望本次实验结果表明，烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑具有一定的抗药性。
这为今后的研究工作提出了新的挑战，尤其是在烟草赤星病的防治方面。
未来的工作可针对烟草赤星病菌的抗药性机制展开更深入的研究，探索新的抗药性检测方法，并寻找更有效的防治手段。
本次实验为烟草赤星病的防治提供了一定的参考价值，同时也为相关病原菌的抗药性研究提供了借鉴。
相信随着科学技术的不断进步和突破，未来将能够找到更加有效的防治烟草赤星病的方法，为农业生产提供更好的保障。
烟草种质资源田间抗赤星病的鉴定试验
烟草种质资源田间抗赤星病的鉴定试验
烟草赤星病是烟草最常见的病害之一，其严重影响着烟草的产量和质量。
为了提高烟草植株的抗赤星病能力，我们进行了烟草种质资源的田间抗赤星病的鉴定试验。
本试验使用了80个烟草种质资源，包括传统烟草品种和新育成的烟草品种。
试验采用了随机区组设计，每个区组设置了4个重复。
试验区地处独立的田间，采用了普通农田管理措施。
试验过程中，首先进行了赤星病菌的分离与培养，从烟草患病叶片上采集到的赤星菌株进行分离，通过培养和筛选，得到了纯种的赤星病菌。
然后，将该病菌液喷洒在试验区的烟草叶片上，使病害发生。
观察期间，每隔一周进行一次病情观察，包括病斑的形态、颜色和大小等，同时记录下每个种质资源受病害的表现。
观察3个月后，对受病度进行统计和分析。
结果显示，大约有30个烟草种质资源表现出了一定的抗赤星病能力，病害程度较轻。
还有10个种质资源表现出了对赤星菌较强的抑制能力，几乎没有发生明显的病害。
这些有较强抗性的种质资源可以作为进一步育种的优良材料。
还发现了一些烟草种质资源容易受到赤星病的侵害，病斑扩大快速，严重影响了烟草的生长和发育。
这些种质资源不适宜在赤星高发的地区种植，需要加强病害防治措施。
通过田间抗赤星病的鉴定试验，我们筛选出了30个抗病性较强的烟草种质资源，并发现了一些易受病害侵害的种质资源。
这为进一步改良烟草品种和种植管理提供了重要的参考依据。
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利用赤星病菌毒素快速高通量鉴定烟草抗性种质的方法研究孙丽萍1,2，时焦1*，孟坤1,2，雒振宁1,2，张峻铨3，王凤龙1*（1.中国农业科学院烟草研究所，青岛 266101；2.中国农业科学院研究生院，北京 10081；3.山东中烟工业有限责任公司青岛卷烟厂，青岛 266101）摘要：为寻求一种快速高通量筛选鉴定烟草抗赤星病种质或材料的方法，本研究以烟草（Nicotiana tobacum L.）种质净叶黄、Beinhart1000-1、NC89和G140作为供试材料，利用烟草赤星病菌毒素就烟草种质对赤星病的抗病性鉴定方法进行研究，试验设计3种鉴定方法：毒素液浸根法、毒素液浸种法和毒素培养基法。
为验证毒素培养基法鉴定结果的可靠性，对烟草种质材料净叶黄、Beinhart1000-1、NC89、G140、K326、G28和中烟100的室内鉴定结果，与其对烟草赤星病的田间抗性鉴定结果进行相关性分析。
结果表明，室内鉴定结果与田间鉴定结果之间极显著相关（r=-0.9588），室内鉴定结果可准确反映烟草种质对赤星病的抗病性。
中图分类号：文献标识码：文章编号：Investigation on the Method of Rapid Identifying Resistant Tobacco Germplasms to Alternaria alternata by Using Its MycotoxinsSUN Liping1,2, SHI Jiao1*, MENG Kun1,2, LUO Zhenning1,2, ZHANG Junquan3, WANG Fenglong1*(1. Tobacco Research Institute of CAAS, Qingdao 266101, China; 2. Graduate School of CAAS, Beijing 100081, China; 3. QingdaoCigarette Factory of China Tobacco Shandong Industrial Co., Ltd, Qingdao 266101, China)Abstract: In order to find out an approach to rapidly identify resistant tobacco germplasm to Alternaria alternata, tobacco varieties Jingyehuang, Beinhart1000-1, NC89 and G140 were used as test materials. Using toxins produced by brown spot fungus (Alternaria alternata), we carried out a comparative test to choose a better screening method. Three kinds of screening methods were designed: toxins liquid soaking root of tobacco, toxins liquid soaking seeds of tobacco, and toxin-containing medium screening method. To verify the reliability of the toxin-containing medium screening method, Correlation between laboratory test results and field data on tobacco varieties Jingyehuang, Beinhart1000-1, NC89, G140, K326, G28 and Zhongyan100 was analyzed, and correlation coefficient of -0.9588 was found, which suggests the effectiveness of laboratory method is close to those of field.Keywords: Tobacco; brown spot disease; Mycotoxin; identifying method烟草赤星病是由链格孢菌[Alternaria alternata (Fries) Keissler]引起的为害相当严重的叶斑真菌病害之一[1-2]。
防治该病最经济有效的措施是选育和利用抗病种质[3]。
鉴定烟草种质对赤星病抗性的常规方法有3种，一是毒素液浸根法[4]，二是离体叶片接种法（也称悬滴接种法）[5]，三是田间鉴定。
这些方法都是利用成苗或成熟烟株或叶片进行鉴定。
不仅需要时间长，而且占地面积大。
因此，研究简便快捷的烟草抗赤星病种质鉴定方法十分必要。
植物病原真菌能够产生真菌毒素[6]，包括寄主专化性毒素（Host Specific Toxins, HST）及非寄主专化性毒素（Non-Host Specific Toxins, NHST）[7-8]。
赤星病菌在寄主体内和培养过程中均可产生毒素[9]。
董汉松等[4]利用毒素液浸根法开展了赤星病菌毒素对烟草幼苗致病性的研究，发现烟草品种幼苗对毒素的抗性与悬滴接种法测定的相同品种对病原菌的抗病性一致，肯定了运用毒素筛选烟草抗赤星病种质的可靠性。
Ishida等[10]将赤星病菌产生基金项目：中国烟草总公司科技重点项目（合同号：110201002022）作者简介：孙丽萍，女，硕士研究生，研究方向为植物病理学。
E-mail：sunlpgod@。
*通信作者，E-mail：jshi42@；wangfl64@ 收稿日期：2013-01-07 修回日期：2013-03-27题目的毒素液加到培养基中，用于培养对烟草赤星病抗性不同的烟草种质的细胞，结果发现，抗病种质细胞的死亡率比感病种质的低很多。
郭永峰[11]报道，运用毒素对烟草种质的成熟叶片进行鉴定具有可靠性。
Kodama等[12]研究表明，提纯的毒素引起感病种质、中抗种质叶片坏死的浓度分别是1 μg/mL 和20 μg/mL。
以前科研工作者只是利用毒素对烟苗或者烟草成熟叶片的抗性水平进行了初步的探索，尚无人利用毒素直接对烟草种子进行鉴定的研究报道。
为研制一种既快捷，又节省资源的新方法，我们开展了利用毒素直接对烟草种子进行鉴定的方法研究。
1 材料与方法1.1 供试烟草种质烟草种质材料净叶黄、Beinhart1000-1、NC89、G140、K326、G28和中烟100均由国家烟草中期库提供。
1.2 菌株来源烟草赤星病菌A1号菌株，由中国农业科学院烟草研究所烟草病虫害监测与综合治理重点开放实验室提供。
1.3 毒素液的制备参照董汉松等[4]介绍的方法并加以修改。
首先从培养皿中繁殖的赤星病菌上取1个直径5 mm的菌饼接种于120 mL查彼培养液中，在28 ℃条件下振荡培养4 w，纱布过滤除菌丝体，再经3～5次离心（8 000 r/min，10 min）、镜检无细胞，121 ℃湿热灭菌15～30 min，得毒素液，用生物测定方法[13]确定毒素活性，然后贮藏备用。
1.4 鉴定方法研究2011年在中国农业科学院烟草研究所开展试验，设置了毒素液浸根法、毒素液浸种法和毒素培养基法3种鉴定方法，并对其进行了研究。
1.4.1 毒素液浸根法将毒素液用无菌水按不同倍比（原液、1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64）稀释，设相应稀释倍比的查彼培养液为对照，共14个处理。
将2～3叶期烟草幼苗的根部洗净，放入含有8 mL处理液的青霉素小瓶中，每瓶15～20株，重复4次。
于25～28 ℃，14 h/d光照条件下培养，培养过程中应及时补足蒸发的水分，96 h后观察并测量根长。
以查彼培养液浸种的烟苗根长为对照处理根长，计算毒素液对根长的抑制率[14]。
%100-(%)×=查彼液处理根长毒素液处理根长）（查彼液处理根长根长抑制率采用DPS软件Duncan’s新复极差法（P<0.05）对烟苗根长抑制率进行差异显著性分析。
1.4.2 毒素液浸种法种子经10%H2O2消毒后，放入灭菌的毒素液中浸泡，浸泡时间设4、8、16、24 h，同时设查彼培养液分别浸泡4、8、16、24 h 的处理为对照，共8个处理。
各处理按设计时间先浸于毒素或者查彼培养液中，后浸于水中，保证每个处理实际总浸种时间均为24 h。
然后取20粒烟草种子置于含水琼脂培养基的培养皿（直径9 cm）内，每皿为1个处理，重复4次。
25～28 ℃，14 h/d 光照条件下培养，第20天测量记录根长，并以查彼培养液浸种的烟苗根长为对照处理根长，计算毒素液对根长的抑制率。
采用DPS软件Duncan’s新复极差法（P<0.05）对烟苗根长抑制率进行差异显著性分析。
1.4.3 毒素培养基法将同批次未消毒的毒素液与琼脂或者水琼脂混合，配制成不同稀释倍比的含毒素固体培养基：原液（每升毒素液中加入琼脂18 g）、1/2、1/4、1/8、1/16，121 ℃湿热灭菌15～30 min。
同时设相应稀释倍比的查彼固体培养基和水琼脂培养基为对照，共11个处理，重复4次。
其他操作同毒素液浸种法，以根系紧贴或伸入培养基中的程度以及叶片颜色为鉴定指标，采用DPS软件Duncan’s新复极差法（P<0.05）对根系深入培养基中烟苗的比率进行差异显著性分析。
1.5 毒素培养基法可靠性的进一步验证为进一步验证毒素培养基法的可靠性，就毒素培养基法对烟草种质材料净叶黄、Beinhart1000-1、NC89、G140、K326、G28和中烟100的室内鉴定中国烟草科学结果，与相应烟草种质材料对烟草赤星病的田间抗性鉴定结果（数据为中国农业科学院烟草所植保室2012年田间试验调查结果）进行相关性分析。
数据分析采用DPS 统计软件进行。
2 结 果2.1 鉴定方法研究2.1.1 毒素液浸根法 从毒素对烟苗生长的抑制率来看（表1），不同稀释倍比的毒素液对烟苗根系间的实际抗病性。
这种现象的原因可能是在毒素选择压力很大时抗病种质不能克服毒素的抑制作用，在毒素选择压力过低时，感病种质也能克服毒素的抑制作用。
毒素液稀释倍比为1/8～1/32时，毒素对感病种质NC89和G140根系生长的抑制作用显著高于对抗病种质Beinhart1000-1和净叶黄的抑制作用（P <0.05），见表1。
因此，毒素稀释倍比在1/8～1/32时，能够鉴定不同烟草种质对赤星病的抗感性。