蒽酮-硫酸法测残糖含量
微生物残糖实验
生物工程专业：综合大实验报告书学生姓名：范振辉学号：3092106230班级：生工2092专业：生物工程指导教师：葛老师2013 年1月10号安徽工程大学实验报告书学生姓名：范振辉学号：3092106230 专业班级：生工2092实验类型：□验证□综合□设计□创新实验日期：1.8~1.10 实验成绩：一、实验目的三、实验原理3.1 培养基配制3.2厌氧发酵培养3.3培养液pH测定3.4微生物生长曲线测定3.5培养液残糖测定四、材料与方法4.1 原料、药品以及仪器设备4.2分析测定方法五、实验结果与分析六、讨论七、参考文献八、要求1.遵守实验室纪律，保持实验室卫生，每天实验结束后将实验室彻底打扫，离开实验室时保证水、电的安全，并注意关闭窗，门。
2.实验态度严肃，认真，实验前要对实验所用仪器、设备的使用方法和注意事项弄清楚，熟悉实验方法，购买所需原料、试剂，配制所需的溶液，实验前后认真清洗仪器设备。
3.实验采用分组方式，实验内容按任务书要求完成，如更改必须在指导教师同意下进行。
4.严格按照工艺流程和工艺参数进行操作；5.值班时定时取样，按标准分析方法，进行认真测定；填好试验纪录表，试验数据真实。
6.对原始记录进行必要的分析、整理。
包括实验数据与理论值的比较，产生误差的原因及减小误差的方法，实验故障原因的分析等。
总结试验结果，认真完成综合实验报告并附原始记录表，用打印纸打印装订。
一培养基配制1原理本实验采用的是纳豆菌，纳豆菌属于细菌。
一般采用葡萄糖蛋白胨液体培养基用于种子培养和发酵培养。
其中葡萄糖为主要碳源，蛋白胨为氮源，酵母膏、NaCl，KH2PO4，K2HPO4作为无机盐，为微生物提供钾，磷，镁，钠离子等。
培养基配好后，用稀酸或稀碱将pH调至所需酸碱度或自然pH。
2仪器与设备三角烧瓶，烧杯，玻璃棒，分析天平，牛角匙，pH计，高压蒸汽灭菌锅，废报纸，纱布和麻绳等。
3培养基配方1）种子培养基配制培养基配方如下：葡萄糖0.5g蛋白胨0.5g酵母膏0.25g水50mlpH 7.02）发酵培养基配制培养基配方如下：葡萄糖30g蛋白胨7.5gNaCl 7.5gK2HPO4 6gKH2PO4 3g水1500mlpH 7.04操作步骤1）称量2）熔化3）调pH4）分装5）包扎6）灭菌二厌氧发酵培养1原理厌氧微生物在自然界中分布广泛，种类繁多，作用也日益引起人们的重视。
蒽酮法测定可溶性糖方法[仅供参考]
![蒽酮法测定可溶性糖方法[仅供参考]](https://img.taocdn.com/s3/m/d594d35c7375a417876f8f16.png)
蒽酮法测定可溶性糖方法（一) 实验原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量。
糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区吸收峰为630 nm，故在此波长下进行比色。
（二）材料、仪器设备及设计1 材料12种源砂生槐叶片，2种处理，4个重复，共96个样。
2 仪器设备分光光度计，恒温水浴锅，20 ml刻度试管，5 ml和1 ml刻度吸管，5 ml和1 ml的移液枪，记号笔，吸水纸适量。
3 试剂（1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1 g，溶于50 ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，如有结晶析出，可微热溶解。
（2）100 ug/L蔗糖溶液：1%蔗糖标准液：精确称取蔗糖1.000 g，加入少量水溶解，移入100 ml容量瓶，加0.5 ml 浓硫酸，定容至刻度线。
100 ug/L蔗糖溶液的配制：用移液枪精确吸取1%蔗糖标准液1 ml，加入到100 ml容量瓶，加蒸馏水定容。
（3）浓硫酸（比重1.84）（三）实验步骤1．标准曲线的制作：按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5 ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5 ml 浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1 min取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630 nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。
管号试剂0 1，2 3,4 5,6 7,8 9,10100µg.1-1蔗糖0 0.2 0.4 0.6 0.8 1/ml水/ml 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1 蔗糖量/µg 0 20 40 60 80 1002．取样取不同种源砂生槐幼苗，用蒸馏水冲洗干净，随后用吸水纸吸干水分。
将叶片切下，用锡箔纸包住，放入液氮中冷冻。
取完后将样品放入-80℃冰箱中保存。
蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量
蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量
操作步骤
葡萄糖标准曲线的制作
取6支具塞试管，按下表数据精密配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液，每个浓度做2个重复：
管号0 1 2 3 4 5
标准葡萄糖溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
蒸馏水/mL 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0
在每支试管中立即加入蒽酮试剂4mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热10min。
取出，迅速浸于冰水浴中冷却10min。
在652nm波长下以第1管为空白，迅速测定其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量( g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。
样品的测定
将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。
取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。
在652nm波长下迅速测定各管吸光值。
根据葡萄糖含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。
Cri-J。
蒽酮法测定可溶性糖方法[仅供参考]
蒽酮法测定可溶性糖方法（一) 实验原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量。
糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区吸收峰为630 nm，故在此波长下进行比色。
（二）材料、仪器设备及设计1 材料12种源砂生槐叶片，2种处理，4个重复，共96个样。
2 仪器设备分光光度计，恒温水浴锅，20 ml刻度试管，5 ml和1 ml刻度吸管，5 ml和1 ml的移液枪，记号笔，吸水纸适量。
3 试剂（1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1 g，溶于50 ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，如有结晶析出，可微热溶解。
（2）100 ug/L蔗糖溶液：1%蔗糖标准液：精确称取蔗糖1.000 g，加入少量水溶解，移入100 ml容量瓶，加0.5 ml 浓硫酸，定容至刻度线。
100 ug/L蔗糖溶液的配制：用移液枪精确吸取1%蔗糖标准液1 ml，加入到100 ml容量瓶，加蒸馏水定容。
（3）浓硫酸（比重1.84）（三）实验步骤1．标准曲线的制作：按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5 ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5 ml 浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1 min取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630 nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。
管号试剂0 1，2 3,4 5,6 7,8 9,10100µg.1-1蔗糖0 0.2 0.4 0.6 0.8 1/ml水/ml 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1 蔗糖量/µg 0 20 40 60 80 1002．取样取不同种源砂生槐幼苗，用蒸馏水冲洗干净，随后用吸水纸吸干水分。
将叶片切下，用锡箔纸包住，放入液氮中冷冻。
取完后将样品放入-80℃冰箱中保存。
无花果可溶性糖含量测定
无花果可溶性糖含量测定作者：苏云婷潘世会来源：《食品安全导刊》2024年第05期摘要：為了建立一个可靠且高效的测定方法，专门用于测量不同成熟度无花果中的可溶性糖含量，深入探索并精确改进蒽酮-硫酸比色法。
根据研究目的，针对性优化了显色时间、蔗糖标准液浓度与冷却比色时间，建立了可用于无花果果实可溶性糖含量测定的蒽酮-硫酸比色法。
实验结果显示，最佳显色时间为10 min，最佳蔗糖标准溶液浓度为100 μg·mL-1，最佳冷却比色时间为20 min。
回归方程y=0.005x+0.153 4（R2=0.998 2）。
通过检测不同成熟度的无花果，发现糖度变化趋势与可溶性糖含量变化趋势一致，可溶性糖含量可作为无花果产品质量控制指标。
关键词：无花果；可溶性糖；蒽酮-硫酸比色法Method for Determination of Soluble Sugar Content in FigSU Yunting1， PAN Shihui2*（1. Weihai Vocational College， Weihai 264200， China; 2. Shandong University， Weihai 264209， China）Abstract： In order to establish a reliable and efficient assay specifically for measuring the soluble sugar content in figs of different ripenesses， the anthone-sulfate colorimetric method was explored in depth and precisely improved. According to the purpose of the study， the color development time， the concentration of sucrose standard solution and the cooling colorimetric time were optimized， and an anthone-sulfate colorimetric method was established for the determination of soluble sugar content in fig fruit. The experimental results showed that the optimal color development time was 10 min， the optimal concentration of sucrose standard solution was 100μg·mL-1， and the optimal cooling colorimetric time was 20 min. The regression equationy=0.005x+0.153 4 （R2=0.998 2）. By detecting figs with different ripeness， it was found that the change trend of sugar content was consistent with the change trend of soluble sugar content， and the soluble sugar content could be used as a quality control index for fig products.Keywords： fig; soluble sugar; anthrone-sulfuric acid colorimetry可溶性糖在水果和蔬菜中的重要性是显而易见的，主要由单糖和寡糖组成。
蒽酮_硫酸法测定板栗多糖含量
河北科技师范学院学报 第24卷第2期,2010年6月Journa l of H ebe iN o rm al U niversity of Science&T echno l ogy V o l.24N o.2June2010蒽酮 硫酸法测定板栗多糖含量李润丰,常学东,狄小丽(河北科技师范学院食品科技学院,河北秦皇岛,066600)摘要:采用蒽酮 硫酸法测定板栗多糖含量并对其测定条件进行优化。
结果表明,蒽酮 硫酸法测定板栗多糖的适宜操作条件为:加入2g/L蒽酮 硫酸溶液4mL,在沸水浴中加热3m i n,自来水冷却40m i n后在10 m i n内于波长600n m下读取吸光度。
蒽酮 硫酸溶液需要现配现用。
多糖含量控制在0.02~0.06g/L之间为宜。
蒽酮 硫酸法测定板栗多糖含量的精密度实验RSD值为0.792%,平均加样回收率为107.2%,R SD值为4.6%。
用本方法测定板栗中多糖含量为12.67%。
关键词:板栗多糖;蒽酮 硫酸法;测定中图分类号:R284.1 文献标志码:A 文章编号:1672 7983(2010)02 0054 06板栗是中国栽培最早的果树之一,约已有2000~3000年的栽培历史。
板栗营养价值很高,甘甜芳香,含淀粉51%~60%,蛋白质5.7%~10.7%,脂肪2.0%~7.4%,多糖、粗纤维、胡萝卜素、维生素A、B、C及钙、磷、钾等矿物质,可供人体吸收和利用的养分高达98%。
栗果具有养胃健脾、补肾强筋、活血止血之功效,因而又具有较高的医疗保健价值,深受国内外消费者的青睐[1]。
目前,板栗作为一种营养价值高又具有重要的养生保健功能、药食两用的果中珍品,其营养和保健价值还远未得到有效开发、利用。
因而充分运用现代科学技术手段对板栗的营养保健功能的物质进行系统分析,对功能成分进行提取和开发,使之商品化、产业化,生产理想保健食品,进行深加工和新产品研究,提高附加值,具有重要的意义,开发应用前景将十分广阔[2、3]。
植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮法)
Ⅳ、植物组织中可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、目的掌握蒽酮法测定糖的原理和技术。
二、原理糖类（包括单糖、双糖、寡糖）在浓硫酸存在下，脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，然后蒽酮与糠醛或羟甲基糠醛经脱水缩合，生成蓝绿色的糠醛衍生物，颜色深浅与糖浓度成正相关。
其反应式如下：显色反应与反应温度、加热时间、反应系统中水和硫酸比例有关。
本实验通过控制反应系统中水和硫酸比例，利用硫酸与水发生水合作用释放的热能，使反应系统自行升温而达到显色效果免去外加热步骤。
蒽酮法具有很高灵敏度，适用于糖的微量测定，且试剂简单，操作简便，因而得到普遍应用。
三、材料、仪器设备及试剂1.材料：烘干材料粉末（过筛100目）或剪碎混匀鲜样品。
2.仪器设备: 分光光度计；电子分析天平；水浴锅；100ml容量瓶；试管；漏斗；剪刀；移液管；洗耳球等。
3.试剂及配制：蒽酮试剂：称取蒽酮200mg溶于100ml浓硫酸中。
该试剂不能久贮，宜用前配制。
100μg·ml－1蔗糖标准母液：准确称取蔗糖100mg于烧杯加少量水溶解后，洗入100ml容量瓶中定容至刻度。
四、实验步骤1.蔗糖标准曲线制作1.1取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0～100μg蔗糖标准液加入表中试剂后，向各管沿管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml，并立即摇动使混合均匀，置试管架上室温下显色，冷却后倒入比色杯，以0号管作空白对照，在620nm波长处，以多点校准总量法，制作标准曲线。
2.样品提取称取干样品粉末100mg或剪碎混匀的鲜样品1g,放入试管中，加入蒸馏水10ml，置于沸水浴中提取20min，冷却后过滤入100ml容量瓶中，以热水冲洗残渣2～3次，一并滤入容量瓶中，待冷至室温，定容至刻度，即为样品待测液。
3.糖含量测定吸取待测液0.2ml（含糖量30～80μg）,加入试管中，再加蒸馏水2.3ml，摇匀。
随后沿试管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml,立刻摇动混合均匀，置于试管架上显色，冷却至室温后，以空白管作对照，在620nm波长处，按多点校准定量法测定待测管中提取液糖含量。
蒽酮-硫酸比色法测定甘草残渣中多糖含量
３ 实验结果 与分析
３１ 标准 曲线的 绘制 ．
２ 实验方法
２１ 甘 草 多 糖 的 提 取 ．
分 别 量 取 葡 萄 糖 标 准 溶 液 ０ ０１ ０２ ０３ ０４ 、 ．、．、 ．、．、
精 密 称 取 提取 过 甘 草 酸后 的甘 草 残渣 ５ ， ０ｇ 石 油 醚 回流脱 脂 ２ｈ 回收 石油 醚 ， 渣挥 干 溶 剂后 用 ， 残
２２ 溶液 的配 制 ． ２２１ 标 准溶 液 的配制 ．．
甘草是 临床 常用 中草药材 之一 ， 药用根 ， 其性 甘、 ， 平 具有 补 气 健脾 、 热 解毒 、 清 润肺 止 咳之 功 效 。 甘 草 中的有 效 药 用成 分很 多 ， 甘 草 酸 、 如 甘草 多 糖 、 甘草黄酮等＿ ｌ Ｊ 。本实验为提高甘草的利用率 ， 从提取 过甘草酸后 的甘草残渣 中提取 出了药用价值较高 的水溶性甘草多糖 ， 并采用蒽酮一 硫酸 比色法［ 其 ２ １ 对
３ ｉ， ０ ｎ 过滤合并滤液 ， ｍ 减压浓缩至 １０ｍ ， ５ Ｌ 用氯仿 萃取多次 ， 以除去蛋 白质 ， 过滤后 ， 滤液加入 ９％乙 ５
醇 使 乙醇 含 量达 ８％， 置 过夜 ， 淀多 糖并 过 滤 ， ０ 静 沉 滤 饼 依 次 用 无 水 乙醇 、 酮 、 醚 多 次 洗 涤 ， 丙 乙 干燥 ，
线 ， 图 １ 见 。 由图 １ 看 出 ， ００ ５７ ００ ５８ｍ ／ 可 在 ． － ． ｅｍＥ范 围 ０ ４
收 稿 日期 ： ０ ０ ０ — ３ ２ １—５２
８ ％乙醇 浸 泡 ３ｈ 于 ８ ０ ， ０℃下 加 热 １ ， 滤 ， 药渣 ｈ过 将 用 １５０ｍＬ蒸馏 水浸 泡过 夜 ，然 后 于 ９ ０ ０℃温 浸提 取 １ ，再 用 ５ ０ｍＬ蒸 馏 水 于 ９ ｈ ０ ０℃重 复 温浸 提 取
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蒽酮-硫酸法测残糖含量
（1）原理
糖类与浓硫酸脱水生成糖醛或其衍生物，可与蒽酮试剂缩合产生颜色物质，反应后溶液呈蓝绿色，于620nm处有最大吸收，显色与多糖含量有线性关系。
（2）试剂
①蒽酮试剂。
溶解0.2g蒽酮于浓硫酸（A.R.95.5%）100ml中，当日配制试用。
具体实验
过程中，应视样品分数多少来准备蒽酮试剂的配置量。
比如实测样品有50份，为了保证结果的可靠性，安排个份样品试验重复数为3。
因为每个试验点实测需要4ml蒽酮试剂，所以至少应配置的体积为4×3×50＝600ml。
此时还应考虑预实验和实验差错所消耗蒽酮试剂量。
②标准糖试剂。
葡聚糖溶液（可加数滴甲苯防腐）
（3）操作及其注意事项
分别取0.1g/l的葡萄糖溶液0.05，0.10，0.20,0.30,0.40,0.60,0.80ml，用蒸馏水补到1.00ml，分别加入4.00ml蒽酮试剂，迅速进入冰水浴中冷却，各管加完后一起浸入沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。
自水浴重新煮沸开始计时，准确煮沸10min，冷却后进行比色。
以光密度为纵坐标，糖的含量微克数为横坐标，制作标准曲线。
或使用计算器进行一元回归得出计算式，以便于计算使用。
（4）样品含量测定
取糖浓度为50μg/ml左右的样品溶液1.00ml，一式3份分别置于不同试管中，对照加入1.0ml 蒸馏水，然后给各管加入蒽酮试剂，以标准曲线方法进行比色测定。
根据标准曲线和样品浓度计算含量。
色氨酸含量较高的蛋白质对显色反应有一定的干扰。
此外，试管在加入蒽酮试剂过程中，移液管尖端在试管中所停留的高度对于加入蒽酮试剂的速度影响较大，而且对反应产生颜色的深浅都会产生一定的影响。
因此，实验操作应该注意。