TEM操作步骤及注意事项
TEM操作步骤及注意事项
精品文档FEI TECNAI20透射电镜目录电镜操作面板................. - 2 - 使用步骤：................... - 4 -一.放置样品................ - 4 -二.合轴.................... - 4 -三.拍形貌.................. - 5 -四.踩带轴.................. - 6 -五、拍衍射................. - 6 -六、能谱分析............... - 7 -七、高分辨................. - 7 -八、拔样品杆及关机......... - 8 -电镜操作面板镜筒注意事项1. 使用电镜时，首先要观察电镜的状态。
2. 有黄色背景的按钮，要谨慎。
3. 观察一系列数值，包括：最佳电流值、Spot size 、样品各坐标是否都归零等。
使用步骤：一.放置样品1.放样品时，夹子不能碰到银环，放置后，用手振动玻璃管，使样品至中间状态，然后用螺丝帽压紧（不可过紧，固定住即可）2.插入样品杆时，要使杆上小柱的位置对准左上角螺丝，插至凹槽完全进入，然后连上数据线。
确认在双束（双倾台不是双束）下，点两下回车。
打开抽真空示意图→Vacuum Overview，开始抽真空。
3.两次抽真空完毕后，逆时针旋转小柱对准Close，插入。
抽真空共分成两段时间，第二个倒计时结束后，即红灯一灭，必须在20秒内将样品杆逆时旋入。
旋入样品杆时，要一手拿着，一手托着，放置进入过快。
然后点Tube on。
然后点Col Values Closed。
检查4．关灯，取下蒙皮。
5.点击→Search，即可看到样品所在位置。
开始找样品中心空洞。
二.合轴1.在Spot size为1，低倍（6200X或8700X）下找到薄区（朝着光亮处找）。
然后调焦。
选择最佳物镜电流值92.5854（按Eucentric focus）。
透射电镜生物样本制备流程及注意事项
透射电镜生物样本制备流程及注意事项透射电镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是一种使用电子束而不是光束进行成像的显微镜。
它可以提供高分辨率的图像，因此被广泛应用于生物样本的观察和研究。
然而，由于其特殊的工作原理和生物样本的复杂性，透射电镜生物样本的制备过程需要注意一些关键的步骤和细节。
下面将逐步介绍透射电镜生物样本制备流程及注意事项。
一、样品固定1.选择合适的固定剂：固定剂的选择应根据所研究的样本类型和要观察的细胞结构而定。
常用的固定剂包括戊二醛（glutaraldehyde）、乙酰化亚胺（acrolein）、纤维蛋白素（formaldehyde）等。
2.采取合适的固定时间和固定温度：固定时间和温度应根据固定剂的要求和样本的特性进行优化。
通常情况下，固定时间为数小时至数天，温度在4℃至25℃之间。
3.注意透射电镜样品的固定深度：样品应保持较小的厚度以便透射电子束的穿透。
二、样品剖解1.剖解细胞膜：通常采用超声波振荡或冷冻断裂等方法来剖解细胞膜。
超声波振荡可用于含有细胞膜的细胞或组织，而冷冻断裂则适用于脆弱细胞和膜脂体系。
2.剖解细胞核：利用离心裂解法可以将细胞核分离出来。
离心裂解可分为机械法和渗透法两种，机械法利用高速离心的作用将细胞核分离，而渗透法则是通过渗透剂将细胞核溶胀并破碎。
三、样品固化1.脱水：样品在固定后需要进行脱水处理，以便在后续的步骤中更好地渗透和浸透。
常用的脱水剂有乙醇、丙酮和乙醚等，脱水过程往往需要进行多次重复。
2.浸透：在脱水后，样品需要在树脂中进行浸透，使其固化为坚硬的样品。
通常采用环氧树脂或比较稳定的丙烯酸树脂来进行浸透。
这一步骤通常需要较长时间，如数小时甚至数天。
3.树脂填充：浸透后的样品需要在模具中进行树脂填充，并在适当的温度下进行固化。
树脂填充的过程需要注意排除气泡和避免过度填充。
四、样品切片1.选择合适的切割工具和方法：样品通常使用切片机和切片刀进行切割。
透射电镜制样步骤以及注意事项
透射电镜制样步骤以及注意事项透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是目前最常用的高分辨率电子显微镜，可以用于观察物质的微观结构。
制备TEM样品的过程非常重要，下面将详细介绍TEM制样的步骤以及需要注意的事项。
制备TEM样品的步骤一般包括样品的选择、固定与固化、切片、薄化、网格制备和贴膜等。
第一步是样品的选择，样品应具有研究价值且适合观察。
例如，生物样品可以是细胞、组织或器官的薄片，金属样品可以是扁平的块状、粉末或薄膜等。
第二步是固定与固化。
对于生物样品，常用的固定方法包括浸泡法、灌注法和切片冷冻法；对于无机样品，可以使用固定剂将样品固定在固定剂中。
第三步是切片。
将固定好的样品切割成薄片，一般要求薄片的厚度在100 nm以下，通常使用超薄切片机来进行切割。
第四步是薄化。
将切割好的样品进行薄化处理，使其达到TEM观察所需的薄度。
常见的薄化方法有机械薄化、电化学薄化和离子薄化等。
第五步是网格制备。
将薄化好的样品放置在铜网格上，网格的选取应该根据所研究样品的性质和需要进行选择。
最后一步是贴膜。
将组织切片或带有样品的网格进行贴膜，以保护样品并提高图像的对比度。
在以上步骤中，需要注意的事项有：1.样品在制备过程中要避免受到污染或氧化，尽量在纯净无尘的环境中进行操作。
2.固定剂的选择要合理，不同的样品可能需要使用不同的固定剂，应根据需要进行选择。
3.切片时要注意刀片的尖锐度和切割角度，以免对样品造成损伤或变形。
4.薄化过程中要控制好加工参数，以保证样品的均匀薄化。
5.制作网格时应选择合适的网格尺寸和类型，以适应观察需求。
6.贴膜时要使薄膜均匀平整，并避免出现气泡或杂质。
总之，TEM制样是一项复杂而关键的过程，要保证样品的质量和可观察性，需要仔细选择方法、控制操作参数、注意样品的保护与处理。
合理的样品制备能够获得高质量的TEM图像，并提供准确的实验数据和结论。
tem 衍射斑 标定 标尺
tem 衍射斑标定标尺
【引言】
作为透射电子显微镜（TEM）的重要操作之一，衍射斑标定标尺对于保证TEM分析结果的准确性和可靠性具有至关重要的作用。
标定过程看似复杂，但只需掌握基本原理和方法，即可轻松完成。
本文将详细介绍TEM衍射斑标定的相关知识。
【二、tem衍射斑标定的原理】
要了解TEM衍射斑标定，首先需要了解衍射斑的形成原理。
当电子束照射到晶体上时，晶体中的原子会对其产生衍射，形成衍射斑。
标定的目的就是为了确定电子束与样品之间的距离关系，从而实现对样品的高分辨率成像。
【三、标定过程及注意事项】
在进行TEM衍射斑标定时，首先需要准备标定样品，通常选择具有高度规律性的样品，如多晶硅或金属网格。
接着选择适当的标定模式，如点阵标定、球差标定等。
在标定过程中，需要关注标定结果的准确性和可靠性，避免因操作不当导致的误差。
【四、标尺的选择和使用】
标尺是标定过程中的重要工具，选择合适的标尺对于获得准确的标定结果至关重要。
标尺的种类繁多，有单晶标尺、多晶标尺、薄膜标尺等。
在使用标尺时，需要根据实际需求选择合适的标尺，并确保其干净、无划痕，以便正确测量衍射斑的位置。
【五、标定在tem分析中的应用】
在TEM分析中，影响成像质量的因素众多，如电子束的聚焦、散焦、球差等。
通过衍射斑标定，可以有效校正这些因素，提高成像质量。
同时，标定结果也会对TEM分析结果产生影响，如晶格参数的测量、薄膜厚度的计算等。
【六、总结】
总之，TEM衍射斑标定在TEM分析中具有重要意义。
只有掌握了标定的原理和方法，才能保证TEM分析结果的准确性和可靠性。
TEM操作步骤及注意事项
精品文档FEI TECNAI20透射电镜目录电镜操作面板................. - 2 - 使用步骤：................... - 4 -一.放置样品................ - 4 -二.合轴.................... - 4 -三.拍形貌.................. - 5 -四.踩带轴.................. - 6 -五、拍衍射................. - 6 -六、能谱分析............... - 7 -七、高分辨................. - 7 -八、拔样品杆及关机......... - 8 -电镜操作面板镜筒注意事项1. 使用电镜时，首先要观察电镜的状态。
2. 有黄色背景的按钮，要谨慎。
3. 观察一系列数值，包括：最佳电流值、Spot size 、样品各坐标是否都归零等。
使用步骤：一.放置样品1.放样品时，夹子不能碰到银环，放置后，用手振动玻璃管，使样品至中间状态，然后用螺丝帽压紧（不可过紧，固定住即可）2.插入样品杆时，要使杆上小柱的位置对准左上角螺丝，插至凹槽完全进入，然后连上数据线。
确认在双束（双倾台不是双束）下，点两下回车。
打开抽真空示意图→Vacuum Overview，开始抽真空。
3.两次抽真空完毕后，逆时针旋转小柱对准Close，插入。
抽真空共分成两段时间，第二个倒计时结束后，即红灯一灭，必须在20秒内将样品杆逆时旋入。
旋入样品杆时，要一手拿着，一手托着，放置进入过快。
然后点Tube on。
然后点Col Values Closed。
检查4．关灯，取下蒙皮。
5.点击→Search，即可看到样品所在位置。
开始找样品中心空洞。
二.合轴1.在Spot size为1，低倍（6200X或8700X）下找到薄区（朝着光亮处找）。
然后调焦。
选择最佳物镜电流值92.5854（按Eucentric focus）。
TEM操作步骤及注意事项
FEI TECNAI 20透射电镜目录电镜操作面板...................................... - 2 - 使用步骤：.......................................... - 4 -一.放置样品 ..................................... - 4 -二.合轴 ............................................. - 4 -三.拍形貌 ......................................... - 5 -四.踩带轴 ......................................... - 6 -五、拍衍射 ...................................... - 6 -六、能谱分析 .................................. - 7 -七、高分辨 ...................................... - 7 -八、拔样品杆及关机 ...................... - 8 -电镜操作面板镜筒注意事项1. 使用电镜时，首先要观察电镜的状态。
2. 有黄色背景的按钮，要谨慎。
3. 观察一系列数值，包括：最佳电流值、Spot size 、样品各坐标是否都归零等。
使用步骤：一.放置样品1.放样品时，夹子不能碰到银环，放置后，用手振动玻璃管，使样品至中间状态，然后用螺丝帽压紧（不可过紧，固定住即可）2.插入样品杆时，要使杆上小柱的位置对准左上角螺丝，插至凹槽完全进入，然后连上数据线。
确认在双束（双倾台不是双束）下，点两下回车。
打开抽真空示意图→Vacuum Overview ，开始抽真空。
3.两次抽真空完毕后，逆时针旋转小柱对准Close ，插入。
抽真空共分成两段时间，第二个倒计时结束后，即红灯一灭，必须在20秒内将样品杆逆时旋入。
高分辨电镜(TEM)分析操作指南
JEM2100F操作注意事项：1.抽拔样品杆时置KV档，抽真空<2×10-5Pa才可以开beam阀。
2.抽拔样品杆1）先置KV档2）将样品杆归零（如果是双倾台，拔下Y线）3）抽拔样品杆到不能动位置向内旋置顶端再抽拔一次再旋置顶端4）真空开关调下，听到放气声再全部拔出。
3.关机时，降高压160KV，即Stand By.4.下班前烘液氮：插加热棒；调KV档;maintenance--ACD Bake---ACD heat: on 开机步骤1：如果开始的光斑不是一个，而是多个类似衍射斑点的话，需要先调整Z方向将光斑缩小成一个点。
步骤2：照明系统合轴2.1. 电子枪合轴：1.开电子枪，按下STD FOCUS，倍率x40k，spot 1，Alpha 3；2.Maintenace---Alignment：调出面板，选择Anode+Gun3.调节DEF/STIG X，Y，直到光斑同心收缩（所有按钮旁边的CRS按键：按亮为粗调，暗为细调）4.关掉Anode2.2 Spot1-spot5合轴（1-5和轴）：1.Maintenance-Alignment 选取DEF Selector-Gun，转动BRIGHTNESS，将光斑束缩小之后，将Spot size 调至1，以Shift X,Y将光斑移到荧光屏中心2. Maintenance-Alignment 选择DEF Select-CLA (condenser lensaperture)，将Spot size 调到5，以Shift X,Y将光斑移到荧光屏中心。
3.重复上面两步，直到光斑不动，保持在中心为止。
2.3 聚光镜光阑校正：将光斑散开到与荧光屏相似大小，通过聚光镜光阑机械位置调节光斑位置到与荧光屏同心：调节Brightness，光斑能够同心收缩2.4 聚光镜消象散：1.顺时针调节Brightness，将光斑散开2.按下Cond STIG，调整DEF/STIG X,Y使光斑呈圆形。
TEM-2010操作步骤总结,可借鉴
透射电镜培训‐操作步骤总结先看冷却水水箱温度。
设定值是18℃。
正常在27℃以下都可以，高于27℃的时候，最好灭灯丝关lens，等一段时间，等到水箱温度降低之后，再接着做，以免电镜过热停机。
记录初始真空值以及各种附件。
上样品准备工作：样品杆分为单倾和双倾。
使用V栅样品时，要保证在电镜中V栅正面朝上。
单倾台上V栅的时候，正面朝上；双倾台上V栅的时候，反面朝上。
V栅反面边缘是亮的。
操作步骤：先用洗耳球将工作台面吹干净，将电镜纸摊开，放在合适的位置（离桌面边缘15厘米左右），左手按住纸的中心下部边缘，用洗耳球吹净。
将样品盒拿到合适的位置，打开，左手拿出样品杆，右手将支架取出，注意支架放的位置，支架右端位于电镜纸偏右3/4处，下边缘压住电镜纸的上边缘。
然后将样品杆放在支架上。
注意密封圈要在右边支架外面。
左手拿样品杆尾部，右手抬着样品杆中部，左手放手之后，攀到右手右边，左手抬着样品杆，然后右手扶住托盘，调整位置。
注意事项：样品杆上的帽要拔，不要转，拔的时候右手虎口冲向样品杆，以免拔掉帽之后手碰到样品杆，造成污染。
样品杆放在架子上的时候，不要碰到密封圈。
样品杆的盒子要锁好，移动之前先检查是否锁上。
上下样品的时候要坐着，坐稳。
每做一步都要将用完的东西整理好再做下一步。
怎么稳当怎么做，不要怕麻烦。
样品杆的帽拔掉之后，手不要再从样品杆上面过，要从旁边绕。
上样品杆：条件：1.看零；2.6灯OK；3.各个皮拉尼规的示数位于平衡值；4.离子泵运行指示灯亮。
动作即相应变化：第1步：将测角台上的开关置于pump，真空表置于SPEC 位置，准备好倒计时。
将样品杆上的销与测角台上的槽对好位，缓慢将样品杆送入预抽室，等销进去之后，用右手手掌将样品杆推进去，推到黄灯指示灯亮。
然后等到听到机械泵工作的响声之后，放手。
这时看真空表读数，指针从右向左移动，开始计时20分钟，看绿色指示灯是否亮，这两个条件都满足后，进行下一步。
这一步阀门变化：首先是机械泵抽预抽室，V2,V5B,V13关闭，V14,V12,V21开，之后扩散泵抽预抽室，V14，V12关，V8，V13开。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
FEI TECNAI 20透射电镜
目录
电镜操作面板...................................... - 2 - 使用步骤：.......................................... - 4 -
一.放置样品 ..................................... - 4 -
二.合轴 ............................................. - 4 -
三.拍形貌 ......................................... - 5 -
四.踩带轴 ......................................... - 6 -
五、拍衍射 ...................................... - 6 -
六、能谱分析 .................................. - 7 -
七、高分辨 ...................................... - 7 -
八、拔样品杆及关机 ...................... - 8 -
电镜操作面板
镜筒
注意事项
1. 使用电镜时，首先要观察电镜的状态。
2. 有黄色背景的按钮，要谨慎。
3. 观察一系列数值，包括：最佳电流值、Spot size 、样品各坐标是否都归零等。
使用步骤：
一.放置样品
1.放样品时，夹子不能碰到银环，放置后，用手振动玻璃管，使样品至中间状态，然后用螺丝帽压紧（不可过紧，固定住即可）
2.插入样品杆时，要使杆上小柱的位置对准左上角螺丝，插至凹槽完全进入，然后连上数据线。
确认在双束（双倾台不是双束）下，点两下回车。
打开抽真空示意图→Vacuum Overview ，开始抽真空。
3.两次抽真空完毕后，逆时针旋转小柱对准Close ，插入。
抽真空共分成两段时间，第二个倒计时结束后，即红灯一灭，必须在20秒内将样品杆逆时旋入。
旋入样品杆时，要一手拿着，一手托着，放置进入过快。
然后点Tube on 。
然后点Col Values Closed 。
检查
4．关灯，取下蒙皮。
5.点击→Search ，即可看到样品所在位置。
开始找样品中心空洞。
二.合轴
1.在Spot size 为1，低倍（6200X 或8700X ）下找到薄区（朝着光亮处找）。
然后调焦。
选择最佳物镜电流值9
2.5854（按Eucentric focus ）。
2.放大倍数至86000X ，然后将光斑移至孔区域，开始合轴。
观察光斑是否为圆形，非圆形时要进行调圆→condenser ，调圆后点→
None
3.即2.6合轴。
在Tune菜单下进行操作。
（1）Spot size 2→Gun shift→光斑移至中间→Done
（Spot size大小用R3和L3进行加减。
）
（2）Spot size6→Beam shift→光斑移至中间→Done
重复以上步骤，直至光斑在中间位置。
（3）然后将Spot size 降至1→光斑缩小并移至中心(确认光斑在顺时针放大逆时针缩小状态)→点击
Beam shift PPX→调动多功能钮至两个圆重合→Done
Beam shift PPY→调节多功能钮至两个圆重合→Done （4）移动样品杆，将样品边缘对准中间小黑点，然后抬起左侧的小镜子→Rotation Center→调节多功能钮至视野中样品上下跳动（不能左右晃动）→Done
三.拍形貌
1.找空洞
2．2、6合轴，散开光斑。
3.倍数在2250X—86000X下都可以进行拍摄。
套上物镜光阑，先用最大的光阑找区域，然后换成小号。
用物镜光阑套住感兴趣的区域。
4.然后将光斑散开，时刻注意右边的红绿条，要保证方框始终在绿色区域（其目的是为了保护相机）。
5.相机参数：Camera View 为0.5，Camera Acquire为1.0。
按钮
R1进行抬屏，然后点Start view，加载相机，调焦，然后点Acquire，进行拍照。
6.拍完后点击stop view R1放下屏幕。
在拍照期间禁止调节放大倍数。
四.踩带轴
1、2，6合轴，调焦。
2、86000X，找到薄区且带有特点易记的区域（踩带轴过程中样品会动，这样便于识别出自己感兴趣的区域）。
3、将光斑汇聚到一点。
4、按diffraction，寻找菊池线。
菊池线汇聚的焦点一般为一正带轴，菊池线汇聚数目越多，晶带指数越低。
再按diffraction，散开光斑。
用左键盘左上角四个按钮调节样品位置，不断按diffraction查看带轴是否踩正。
不断调节，直至踩正，踩正后的衍射斑点中心在屏幕小黑点处，并且周围斑点亮度应对称。
五、拍衍射
1.先调数值，Camera View为0.03，Camera Acquire为0.3.
2.踩正带轴，低指数。
3.加上选区光阑，亮斑套住要拍衍射区域。
4.调Spot size大于等于5，在底屏看不见，在抬起的小屏上可看
见。
5.点Start view加载相机→左手抬屏→Stop view→立即放下屏。
6.查看光强，Analysis→Statics→Mininum→min and max，观察最大值不超过50000，如过大应继续散开光斑或者继续调大spot size。
7.确认最大强度不超过50000时，即可进行拍照。
8.关闭选区光阑、关闭Diffication、降低Spot size到1（具体看下一步操作的要求）。
六、能谱分析
1.找感兴趣的点
2.把光斑缩小到一点，放大倍数86000倍，spotsize调到6以上。
Cps值小于20000（先RTEM Control in才能看CPS值）。
3.点击电脑屏幕下方RTEM Contor→in→Acquire(左上方，区别于拍形貌及衍射时的acquire)。
4.能谱中最高峰到2000时，点击Acquire停止。
5.若换别的区域做EDS，直接移样品杆移动到相关区域。
重复Acquire→最高峰到2000→Acquire。
若不再做EDS，点击out，降低spotsize到1，散开光斑。
七、高分辨
1、感兴趣的区域，踩正带轴吗，越正越好。
2、最佳物镜电流值。
3、用Z调焦（略欠焦）。
4、放大倍数在25万倍消象散（在44万倍以上拍高分辨像），采用一般的照相模式，相机常数0.5和1.0。
5.点击左下角MF X: image shift x（做完高分辨时记得调回Beam shift X）。
7.点击start view
8.点击Process→live→FFT
9.调焦距，用多功能钮将光斑移到样品边缘（不可用样品杆移动样品），一般样品边缘呈非晶态。
调到欠焦时的一个圆环的样式。
10.点击Tune中的objective，用多功能钮将非晶环调圆，欠焦过程是中心白圆不断扩大，过焦状态时白圆缩小。
11.用高分辨图片与FFT图片确定好正焦后，按左键盘L2使Defoucs归0，我们一般的最佳欠焦值是-70。
12.消象散后将放大倍数调到44万倍，拍高分辨像。
八、拔样品杆及关机
1、将倍数调至6200×
2、将光斑散开
3、Search—Holder
4、Setup—Col Valued Closed（若有事临时外出可暂时保留在此状态）。
5、盖上蒙皮，开灯。
6.拔样品杆：取下数据线→往外轻拔样品杆（此时有一个微弱的吸力）
→露出凹槽（与进入时看见的相同）→顺时针旋转，将小柱转到底（大概左上角螺丝）→轻轻彻底拔出样品杆（控制好力度，应一下拔出但
又不至于力过大使样品杆拔出时甩飞样品）→（当天电镜不再
使用时才倒液氮烘烤，烘烤会持续4小时左右）倒液氮→点击→cryo →cryo cycle（烘烤电镜）等大约5分钟colum真空度掉到99变红可离开。