色谱常见问题解答
色谱问题解答
1.流动相：流动相首选甲醇-水，其比例根据被测药物的极性而定，被测药物的极性小则70％甲醇先试，被测药物的极性大，则30％甲醇先试，被测药物的极性中等，则50％甲醇先试，当然还要根据药物结构的不同，选用一些添加剂和缓冲盐等。
色谱柱：柱子以ODS柱，即C18为通用。
被测药物的极性小，可用C8或氰基柱等，被测药物的极性大，则可选用氨基柱或能用纯水洗的改性柱。
检测波长：如果所测药物不是在近UV区<215nm，波长只要能满足检测需要，应以靠长波方向及不是坡度太大之处为宜，这是药品分析与生物分析的不同之处。
匆此。
我再补充些:流动相:还可通过调节缓冲液的PH来改善峰型,如酸性的药物可加入适当的酸如磷酸、乙酸等,碱性药物可加入适当的碱如三乙胺等柱：同时还要考虑不同柱之间的差异，同样ODS或C8会有不同的适合范围，可看柱说明书。
波长：当然还要考虑杂质的吸收，测含量可照上。
由于在反相色谱中，极性大的先出峰，所以可减小有机相来增加RT2.回应：我想请教安捷仑1100色谱仪B泵的泵头压力(PURGR压力)比A泵的高30BAR(使用用一溶剂情况下),咋回事?你可以检查一下A、B各流路的管道、泵或者滤头等是否有堵塞的问题，也许是某个地方脏了。
问：为什么进样器内的玻璃衬套会对色谱行为造成影响？答：进样器内的玻璃衬套主要有下列作用：1．提供一个温度均匀的汽化室，防止局部过热。
2．玻璃的惰性不不锈钢好，减少了在汽化期间样品分解的可能性。
3．易于拆换清洗，以保持清洁的汽化室表面，一些痕量非挥发性组分会逐渐积累残存于汽化室，高温下会慢慢分解，使基流增加，噪声增大，通过清洗玻璃衬套可以消除这种影响。
4．可根据需要选择管壁厚度及内径适宜的玻璃衬套，以改变汽化室的体积，而不用更换整个进样加热块。
从以上几个方面可以知道玻璃衬套对色谱行为造成影响的原因。
问：毛细管色谱分流进样时，非线性分流的主要原因是什么？答:1．进样器温度太低，样品汽化不完全，发生分级分流。
色谱常见故障及排除方法
色谱常见故障及排除方法1、柱压升高色谱柱入U滤片被流动相或样品中颗粒堵住。
样品组分在滤片上沉淀堵住滤片。
卸下入口接头的滤片，使用1：1的硝酸溶液超声清洗5min，再用水、甲醇清洗除去水份。
样品及流动相使用0．45µm滤膜除去微量杂质。
使用流动相作溶剂配制样品。
2、新柱柱效低柱外死体积大.样品在流动相中溶解不好，影响传质过程。
更换连接管，重新连接色谱柱，降低死体积。
使用合适的流动相或使用流动相溶解样品。
3、旧色谱柱柱效低，分离不好，柱入口床层塌陷。
填料被流动相溶蚀而流失。
用同型填料填补柱效可部分恢复。
对硅胶质填料，流动相PH 值在2—7范围内，否则可能被溶蚀。
4、旧色谱柱柱效低分离不好，有时出现双峰。
入门填料被污染变质所致。
用强溶剂冲洗。
刮除被污染的床层，用同型的填料填补柱效可部分恢复。
污染严重，则废弃或重新填装。
5、新柱接到仪器上后，柱头漏液。
柱接头与仪器之间连接管的压环变形量不够。
用扳手顺时针方向拧紧1／4圈直到不漏液为止。
6、新柱接到仪器上后，启动仪器没有柱压降。
柱放置时间过长柱内充装的液体己挥发干。
继续开泵，用流动相将柱内气体置换掉。
7、新柱接到仪器上后，检测器出口不断有小气泡出现。
①同上。
②流动相脱气不彻底特别是MeOH／H20体系由于氢键作用很容易出现气泡。
①同上。
②配好流动相后一定要进行脱气处理。
8、新柱接到仪器上后柱压降不断增加，甚至超过仪器的耐压限。
柱入口滤片被固体颗粒堵塞(或被毒菌堵塞)。
更换或清洗柱入口滤片；用0．45µm 过滤膜过滤流动相除去微小颗粒物。
9、进样次数增加柱压降逐渐增加。
.①样品中含有不溶于流动相的微小颗粒物。
②样品在流动相中析出微小结晶。
①用0．45μm过滤膜过滤样品。
②推荐使用流动相溶解样品。
10、使用—段时间后，柱效下降，分离不好。
①柱填料被流动相溶解而流失。
②柱填料被样品杂质污染。
①推荐使用予柱。
如柱床层塌陷，用相同型号填料填补。
高效液相色谱常见故障及解决方案
高效液相色谱常见故障及解决方案1.压力过高或过低-压力过高可能是由于柱堵塞或流动阻力增加所致。
解决方案包括更换柱、清洗柱或检查管路是否存在问题。
-压力过低可能是由于泵的磁力搅拌器不工作或进样器封堵所致。
解决方案包括检查泵的磁力搅拌器是否工作正常，清洗进样器。
2.峰形不对称-峰形不对称可能是由于进样量不均匀或柱温度过高所致。
解决方案包括确保进样量均匀和降低柱温度。
3.峰尾或前肩-峰尾可能是由于柱温度过高、流速过快或流动相pH值不合适所致。
解决方案包括降低柱温度、减慢流速或调整pH值。
-前肩可能是由于流动相中存在杂质或柱堵塞所致。
解决方案包括更换流动相或清洗柱。
4.杂峰或基线噪声-杂峰可能是由于样品纯度不高、固定相老化或试剂污染所致。
解决方案包括提高样品纯度、更换固定相或检查试剂是否污染。
-基线噪声可能是由于进样器密封不良、流动相气泡或电噪声所致。
解决方案包括检查进样器密封情况、减少流动相中的气泡或检查电子设备是否存在干扰。
5.柱寿命短-柱寿命短可能是由于样品预处理不彻底、柱收尾不当或流动相pH值不合适所致。
解决方案包括增加样品预处理步骤、正确收尾柱或选择合适的流动相pH值。
6.流量不稳定-流量不稳定可能是由于柱堵塞、进样器密封不良或流动相流速波动所致。
解决方案包括清洗柱、检查进样器密封情况或调整流动相流速稳定性。
7.进样量偏差-进样量偏差可能是由于进样器封堵、进样器针头磨损或进样器流速不稳定所致。
解决方案包括清洗进样器、更换进样器针头或调整进样器流速稳定性。
8.柱温度不稳定-柱温度不稳定可能是由于温控系统故障或环境温度变化所致。
解决方案包括检查温控系统是否工作正常或采取措施保持恒定环境温度。
这些是HPLC常见故障及其解决方案的例子。
在实际操作中，操作人员应该根据具体情况诊断和解决故障，并遵循相关的操作规程和安全操作指南。
色谱岗位基础知识问答
色谱岗位基础知识问答1、什么是气相色谱？答：用气体做载气的色谱法称为气相色谱法。
2、气相色谱分离原理是什么？答：根据气化样品中的各组分在色谱柱中的流动相和固定相间分配系数或吸附能力不同进行分离。
3、气相色谱仪主要分为哪几部分？答：进样系统、分离系统、检测系统三部分。
4、气相色谱有哪些特点？答：高性能、高选择性、高灵敏度、分析速度快、样品用量少、应用范围广。
5、气相色谱常用载气有哪些？答：氮气、氢气、氦气、氩气等。
6、什么是色谱图？答：色谱柱流出物通过检测器系统时产生的响应信号。
7、什么是基线？答：基线是指仅有载气通过检测器系统时产生的响应信号。
8、什么是死时间？答：不被固定相滞留的组分（如空气或甲烷）从进样到出现峰最大值所需的时间称为死时间。
9、什么是保留时间和调整保留时间？答：组分从进样到出现峰最大值所需的时间称为保留时间，调整保留时间就是保留时间减去死时间。
10、什么是保留指数？答：保留指数是定性指标的一种参数。
通常以色谱图上位于待测组分两侧的相邻正构烷烃的保留值为基准，用对数内插法求得。
11、气相色谱对载气有何要求？答：作为载气要求其不能与被分析样品和固定相发生反应，载气必须纯净，价格便宜容易得到，并且载气必须与所使用的检测器匹配。
12、什么是分离度？答：分离度是指两个相邻色谱峰的分离程度，它是以两个组分保留值之差与其平均峰宽值之比（R）表示：R=2（t R2-t R1）/（W1+W2）13、什么是检测器的灵敏度？答：灵敏度是指被检测物质通过检测器时，物质量变化时响应信号的变化率。
14、常用的检测器有哪几种？答：浓度型检测器：热导池检测器（TCD）、电子捕获检测器（ECD）等。
质量型检测器：氢火焰离子化检测器（FID）、火焰光度检测器（FPD）、氮磷检测器（NPD）等。
15、什么是检测限？答：检测限是指随单位体积的载气或单位时间内进入检测器的组分所产生的信号等于基线噪声信号二倍时的量，用D表示。
色谱那些常见问题你会解决了么？
色谱那些常见问题你会解决了么？1、用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，缘由何在?如何解决? 答：关于漂移问题：a、温度掌握不好，解决方法是采纳恒温装置，保持柱温恒定；b、流淌相发生变化，解决方法是防止流淌相发生蒸发、反应等；c、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡。
关于快速变化问题：a、流速发生变化，解决方法是重新设定流速，使之保持稳定；b、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出；c、流淌相不合适，解决方法为改换流淌相或使流淌相在掌握室内进行适当混合。
2、色质联用中毛细柱的选择应留意什么问题?答：柱效要高、热稳定性好、化学惰性强。
详细选择应留意：a、柱极性：依据分析样品选择不同极性的柱子进行分析；b、柱子内径：内径大小打算柱容量；c、液膜厚度：分析样品温度一不一样，对膜厚有不同要求，温度高液膜要厚，温度低液膜要薄；d、柱长度：柱越长，柱效越高，分别效果越好，但也存在吸附问题，柱子过长，分析时间长，因此要依据样品考虑柱子长度；e、外涂层(柱体)的选择；f、另外还有仪器型号、分析对象等因素。
3、液相色谱中峰消失拖尾或消失双峰的缘由是什么?答：a、筛板堵塞或柱失效，解决方法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子；b、存在干扰峰，解决方法为使用较长的柱子，改换流淌相或更换选择性好的柱子。
4、从那些方面可以简洁判别毛细管柱子的热稳定性好坏?答：a、安排容量(或容量因子)K：好的柱子在高温运行后，安排容量K不应有明显的下降，否则，说明柱子的热稳定性不好；b、理论塔板数n：热稳定性好的柱子经受高温后，理论塔板数应基本保持恒定；c、柱子的极性：热稳定性好的柱子，高温前后极性变化不大，详细表现为保留指数I值没有大的变化；d、噪声：热稳定性好的柱子在高温下使用后，噪声不能增加；e、柱子的去活层：毛细管柱子涂固定液前内部一般要用去活性试剂去活以增加惰性，质量好的毛细管柱子高温后，去活层不应当变化，表现在对强极性样品或酸碱性样品的吸附性不能增加。
液相色谱常见问题及其对策
HPLC如何得到好的结果 …
• 流动相
• 缓冲液 / 溶剂选择, 梯度优化, 流速选择 • 脱气，流速稳定, 流动相制备
•柱
• 高柱效, 二级作用力, lot variation, 温度控制
• 检测
• 灵敏度, 选择性, 温度波动影响
• 样品
• 提取方法选择, 样品溶剂选择, 氧气影响
• 仪器
吸滤头
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液相色谱容易出问题的部件
吸滤头 材料：不锈钢烧结，孔径10um 故障：堵塞 表现：管路中不断有气泡生成 措施：用5％～20％的稀硝酸，超声波清洗，
再用蒸馏水清洗 注意点：吸滤头拆下时不必将塑料管剪断
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液相色谱容易出问题的部件
LC-10ATvp泵：串联 式往复泵
LC-10ADvp泵：并联式 往复泵
泵漏液 1、单向阀松动 2、泵密封损坏 3、放空阀损坏 4、接头松动（不要拧的太紧）
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液相色谱常见问题及其对策－漏液
进样阀漏液 可能原因 1、转子密封损坏 2、定量环堵塞 3、进样口密封松动 4、进样针尺寸不合适 5、废液管产生虹吸 6、废液管堵塞
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液相色谱常见问题及其对策－漏液
检测器漏液 可能原因 1、流通池垫片损坏 2、流通池透镜破碎 3、手紧接头处漏液 4、废液管堵塞 5、流通池堵塞
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液相色谱容易出问题的部件 柱子
故障：系统高压、峰型变差（拖尾峰、前沿峰、分叉 峰），保留时间的改变
解决措施：清洗
正相柱，正庚烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇 反相柱，甲醇、乙腈、氯仿、异丙醇、0.05M稀硫酸
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液相色谱容易出问题的部件
峰产生有肩或分叉的原因
1. 柱子劣化 （进口处产生不均匀的空隙）
气相色谱常见问题及解决
气相色谱常见问题及解决1：基线不稳的可能因素1. 进样针受污染。
清洗进样针；做一浓缩试验，载气线路可能也要清洗。
2. 色谱柱受污染。
烘焙色谱柱，限定时间1-2h。
3. 检测器不平衡。
检测器一般需要24h才能得到平衡。
4. 在程序升温的时候改变载气流速2.1 ：基线噪音1. 进样针受污染。
清洗进样针；做一浓缩试验，载气线路可能也要清洗。
2. 色谱柱受污染。
烘焙色谱柱，限定时间1-2h。
3. 检测器不平衡。
清洗检测器，通常噪音不是突然增大而是逐渐产生。
4. 污染或载气质量降低。
使用高质量的载气或检查气体是否泄露。
一般在换载气钢瓶的时候会突然发生。
5. 柱子安装太过。
可重新安装。
6. 载气流速不合适。
重新设定流速。
7. 与MS、ECD、TCD联用时发生漏洞，查找并消除漏洞即可。
8. 检测器的灯或电子倍增管老化。
2.21. 电器方面的原因首先将检测器信号线断开，在采集状态下观察基线运行情况，如果基线波动很大则可判断该故障是电器方面的原因，此时，需要进一步检查仪器接地是否良好（接地电阻应小于 5 Ω）、线路板及各插件是否松动等。
2. 测量系统污染断开信号线后，在采集状态下检查基线运行的情况，如果基线运行正常则证明测量系统污染。
需要检查色谱柱是否失效（需活化处理）、柱进口是否污染（更换玻璃丝、玻璃衬管等）、检测器污染，主要是离子头的污染，3：分离度下降1. 柱温不同。
检查柱温。
2. 不同的色谱柱的维数和相位。
核实色谱柱的特性。
3. 改变载气流速。
4. 色谱柱受污染，应用溶媒清洗柱子。
5. 进样器的改变。
检查进样器的设置。
6. 样品的浓度或溶解能力的改变。
试用一个不同的浓度。
4：峰形改变答：1. 检测器响应改变。
检查气体流速、温度和设置。
2. 样品的浓度改变。
检查并检验样品的浓度，样品的蒸发或成分的改变都可能引起。
3. 色谱柱受污染。
5：进样器或载气被污染1. GC 在40- 50℃保持8 小时或8 小时以上。
色谱操作过程中遇到的问题及处理方法
五、分流和尾吹有什么作用？
• 分流的作用：减小柱容量，减小柱污染。 • 分流的原因：因为毛细管相对柱容量很小，并
且很容易污染，所以用分流，把进进去的样品大 部分分到外面，只有小部分留经柱子。
• 尾吹的作用：增加柱出口到检测器载气速度以
减小这段死体积的影响，使仪器的灵敏度与峰形 有所改善。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
四、气相色谱仪在使用一段时间后，其灵敏 度降低了，可能是什么原因？
可能出现原因有：
（1）进样垫是否漏气了。 （2）柱子连接端口是否有漏气。 （3）进样针是否坏了，特别是使用1ul 进样针， 在进粘度相对较大的样品时时常会出现。 （4）FID 中的喷嘴有漏气，火焰太大。
（5）在使用毛细管柱时，分流端漏气，尾吹堵、 漏气也会使灵敏度下降。 （6）TCD 中电流的下降。 （7）FID 中，极化线圈氧化。 （8）TCD 中钨丝氧化不平衡。
图1 正常的峰型
（1）前伸峰、拖尾峰
• 定义： • 峰前沿较后沿平缓的不对称峰叫前伸峰， 后沿较前沿平缓的不对称峰称为拖尾峰。
图2 前伸峰
图3 拖尾峰
• 产生拖尾峰的原因是：
• • • • • A、进样室温度过低 B、柱温过高 C、进样技术差 D、色谱柱对试样组分有吸附 E、色谱系统死体积大。
排除办法：
一、不规则基线的原因是什么？
基线不能调节是由于三方面原因引起的： 1、基流太大 2、放大器有故障 3、检测器元件有故障。
二、用气相色谱法进行分析，把试样制备好后进样， 进样后不出峰，应从哪几个方面考虑排除此故障？
• （1）从气路方面考虑：检查是否漏气（包括进样口）， 微量进样器是否有毛病。 • （2）从检测器考虑：如果是使用氢火焰检测器，应检查 火焰是否点燃或熄火。如果是热导池检测器，应检查热丝 是否燃断，电源开关是否有问题。
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色谱常见问题解答问题1:为什么有些峰出现拖尾答:①这可能是由于进样口或色谱柱不干净,或色谱柱切割不正确.冷却进样口,关闭气流并更换或清洁进样口部件,包括进样口衬管和金密封垫.取出色谱柱.切掉一段色谱柱以清除不挥发性残留物,隔垫碎屑和密封圈碎片.这段色谱柱的长度可以是 1 英寸到 1 米,如果需要的话,可以更长.使用正确的切割工具来切割色谱柱.如果切割不好,则可能导致样品吸收.使用黄铜刷子或氧化铝粉末等软质研磨剂擦洗进样口钢质内壁.在重新安装其他部件前,要确保已将进样口清洗干净.对于5890,卸下分流出口管路并用溶剂清洗是比较好的方式.②在不分流方式下进行分析时,不分流时间过长可能导致拖尾.通常时间应在0.5 至 1 分钟范围内.③未吹扫(死)体积也可能导致拖尾.确保在进样器和检测器中色谱柱安装正确.④如果考虑色谱柱部分流失,则可以使用色谱柱前的保留间隙(制备色谱柱).如果没有降低色谱柱效率,则可以将其切割掉或更换掉,并可延长色谱柱的寿命.但要注意保留间隙和分析色谱柱的连接可能引起泄漏和样品吸收.问题2:如何改善峰形(前伸峰,拖尾峰)答:前伸峰是由于色谱柱过载.当一种或多种化合物的进样量超过色谱柱固定相容量时,可能发生这种情况.液相膜越薄,色谱柱中保留的每种化合物就越少. 这涉及到进样体积和进样中每个峰的化合物浓度.通过减少进样量,分流样品或进样浓度较低的样品,可减小进样体积.问题3:什么原因导致峰比原来大,而且出现的早答:过快,过大的峰通常是由于从分流口和隔垫吹扫口排出的载气减少,而更多的进入色谱柱;因此增加柱头压力,可降低分流比.检查分流出品的气体流量,如需调整分流比则对调整此流量.如果问题依然存在,可卸下并清洁分流口.这个问题也可能由于柱头压调节阀有问题而引起.问题4:何时需更换隔垫或衬管答:通常比较好的隔垫至少能保证100 次进样不发生问题. 当色谱特征说明衬管有问题时,需要更换衬管.影响隔垫寿命的因素有注射器尺寸,进样口温度和压力,当然受压力影响的程度比较小.影响衬管寿命的因素通常是样品的清洁度.应该根据仪器维护历史记录来选择色谱需要的特定程序.问题5:随着进样室温度升高,对分析物分解有影响吗答:如果化合物热稳定性差,分析物分解可能会带来一些问题.这在制药工业中比较常见.如果药物或中间体热分解温度低于进样口温度,则分析结果中将出现特殊的峰或与目标分析物发生反应.问题6:排除色谱柱流失问题的最佳方法是什么答:诊断色谱柱是否存在流失问题的最佳方法是第一次在方法条件下安装色谱柱时,做一次空白色谱图,然后将最近的运行和空白运行色谱图对比.如果在空白运行中产生了很多峰,则色谱柱性能改变,这可能是由于载气中含有氧气,也可能是由于样品残留.如果有GC-MS,则低极性色谱柱的典型流失离子(例如DB/HP-1 或5)质/荷比m/z 将为207,73,281,355 等,大多数为环硅氧烷.问题7:如何得知分流/不分流进样口的进样体积不超过进样口衬管反应室的容积答:如果不是多次重复进样引起精度问题,则不会经常发生这个问题.精度问题经常是由于不合适的进样体积引起.因为分流进样的进样口流速比较高,样品进出进样口比不分流快得多.同样地,由于溶剂没有时间扩散到衬管外,因此分流模式进样体积要求没有那么严格.实际上,1 微升是比较合适的,由于降低分流比对增大峰面积比增加进样量更有效.然而,不分流进样要求要严格的多,建议使用蒸汽体积计算器估算最终的扩散体积.问题8:排除色谱柱流失问题的最佳方法是什么答:诊断色谱柱是否存在流失问题的最佳方法是第一次在方法条件下安装色谱柱时,做一次空白色谱图,然后将最近的运行和空白运行色谱图对比.如果在空白运行中产生了很多峰,则色谱柱性能改变,这可能是由于载气中含有氧气,也可能是由于样品残留.如果有GC-MS,则低极性色谱柱的典型流失离子(例如DB/HP-1 或5)质/荷比m/z 将为207,73,281,355 等,大多数为环硅氧烷.问题9:色谱分析运行时,标样和样品的峰均随时间加宽,这正常吗答:如果保留时间没有很大区别,只是加宽的峰拖尾,可能表明有活化点.如果加宽的峰是对称的,可能是由于正常的色谱柱"损耗和流失".如果峰前伸,说明色谱柱过载.问题10:为什么在空白运行中出现了我的样品组分峰答:有可能是由于样品制备或系统清洁问题.尝试在样品和空白样品制备中使用新溶剂,并在样品清洗瓶中装上新溶剂.尝试使用新的注射器和隔垫.取出并清洗分流出口管路.在未进样情况下运行以观察仅加热色谱柱有无峰出现.问题11:什么原因导致基线不稳和干扰答:1. 进样针受污染.清洗进样针;做一浓缩试验,载气线路可能也要清洗.2. 色谱柱受污染.烘焙色谱柱,限定时间1-2h.3. 检测器不平衡.检测器一般需要24h才能得到平衡.4. 在程序升温的时候改变载气流速(在很多情况下为正常现象).问题12:什么原因导致过多的基线噪音答:1. 进样针受污染.清洗进样针;做一浓缩试验,载气线路可能也要清洗.2. 色谱柱受污染.烘焙色谱柱,限定时间1-2h.3. 检测器不平衡.清洗检测器,通常噪音不是突然增大而是逐渐产生.4. 污染或载气质量降低.使用高质量的载气或检查气体是否泄露.一般在换载气钢瓶的时候会突然发生.5. 柱子安装太过.可重新安装.6. 载气流速不合适.重新设定流速.7. 与MS,ECD,TCD联用时发生漏洞,查找并消除漏洞即可.8. 检测器的灯或电子倍增管老化.问题13:什么原因导致峰形改变答:1.检测器响应改变.检查气体流速,温度和设置.2.样品的浓度改变.检查并检验样品的浓度,样品的蒸发或成分的改变都可能引起.3. 色谱柱受污染.问题14:如果分离度下降,如何处理1.柱温不同.检查柱温.2.不同的色谱柱的维数和相位.核实色谱柱的特性.3.改变载气流速.4.色谱柱受污染,应用溶媒清洗柱子.5.进样器的改变.检查进样器的设置.6.样品的浓度或溶解能力的改变.试用一个不同的浓度.问题15:如果出现分裂峰,如何处理1.试着改变一下进样方法.2.改变溶媒,使其成为单一的溶媒.3.重新安装色谱柱.4.减小进样温度.问题16:如果怀疑进样器或载气被污染了,应采用何种检测1. GC在40-50℃保持8小时或8小时以上.2. 运行一个空白分析(开启GC,但不进样).3. 收集空白分析的色谱图.4. 第一个空白分析完成以后立即开始第二次,二者间隔时间不要超过5min.5. 收集第二次空白分析的色谱图,并与第一次的图谱进行比较.6. 假如在第一次时,峰图包含了大量的色谱峰,而且基线不稳定,那就暗示了毛细管柱被污染了(进样器或载气被污染).7. 假如两次色谱峰图都包含少数的峰或基线的微小漂移,那就可以假定进样器或载气是比较干净的.假如8. 假如两次色谱峰图都包含重大数量的噪音和(或)基线漂移,那通常也就表明了进样器或载气被污染了.问题17:保护柱应为多长比较有代表性的保护柱柱长为0.5-10m.虽然没有确定的长度适合所有的样品,但是以下一些建议也可以参考.假如样品相对来说比较纯净,溶质为极性,保护柱应该在0.5-1.0m之间;若样品相对来说不纯净,保护柱应该适当长些.5-10m长的主要是为了维护单一系统.长保护柱允许使用者减去大约1m而代替整个保护柱安装.问题18.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？关于漂移问题：①温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定②流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等③柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题①流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定②泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。
③流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合问题19.液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？①筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。
②存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子③可能柱超载，减少进样量。
问题20.HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法①样品量不足，解决办法为增加样品量②样品未从柱子中流出。
可根据样品的化学性质改变流动相或柱子③样品与检测器不匹配。
根据样品化学性质调整波长或改换检测器④检测器衰减太多。
调整衰减即可。
⑤检测器时间常数太大。
解决办法为降低时间参数⑥检测器池窗污染。
解决办法为清洗池窗。
⑦检测池中有气泡。
解决办法为排气。
⑧记录仪测压范围不当。
调整电压范围即可。
⑨流动相流量不合适。
调整流速即可。
⑩检测器与记录仪超出校正曲线。
解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。
问题21.做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？①泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理；②比例阀失效，更换比例阀即可；③泵密封垫损坏，更换密封垫即可；④溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法；⑤系统检漏，找出漏点，密封即可；⑥梯度洗脱，这时压力波动是正常的。
问题22.我最近更换了另一种牌号的ODS柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不能重现，为什么？这是因为被分析物可能具有形成氢键的能力。
尽管过去几年来，填料的制造技术有了极大的提高，但不同的厂商的ODS填料表面硅醇基的浓度不同。
正是这些硅醇基可能与样品发生相互作用。
因此，同一被分析物中的各组分在不同牌号的ODS柱上的相对保留时间就可能不同。
在流动相中加入少量竞争物，如三乙基胺（TEA），将会使硅醇基的成键能力饱和，从而能保证不同牌号柱子上的相对保留时间具有较好的重现性。
如分离情况可以，系统稳定，达到系统适用性要求，就不必保留时间的重现。
问题23.我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。
其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。
①拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；②把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查；③将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。
这时，如果柱压仍不下降，再检查；只用于使用过的柱子。
④更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。
若柱压还高，请与厂商联系。
一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE提供的Rheodyne 7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。