网织红细胞染色液(Reticulocyte Stain)说明书
网织红细胞报告
网织红细胞报告引言网织红细胞（reticulocyte）是指还保留有核的红细胞前体细胞，其通过骨髓释放入循环中，并最终成熟为无核的红细胞。
网织红细胞反映了人体红细胞的再生能力和骨髓功能的活跃程度。
本文将介绍网织红细胞的意义、影响因素以及相关的检测方法。
网织红细胞的意义网织红细胞作为红细胞再生的指标，可以用来评估人体骨髓功能和红细胞的更新速度。
正常情况下，网织红细胞的百分比是很低的，但在某些疾病状态下，这个比例会显著增加。
因此，通过检测网织红细胞的比例，可以评估红细胞再生的活跃程度，进而判断疾病的类型和程度。
影响网织红细胞比例的因素1. 缺铁性贫血缺铁性贫血是指机体缺乏足够的铁元素，导致红细胞无法正常合成血红蛋白的一种贫血类型。
在这种情况下，骨髓会释放更多的网织红细胞来进行红细胞的再生，以弥补缺铁造成的红细胞数量减少的情况。
因此，在缺铁性贫血患者中，网织红细胞比例往往会显著增加。
2. 贫血贫血是指血液中红细胞数量减少或者红细胞功能异常，无法满足组织需氧的状态。
在贫血患者中，由于红细胞的量减少，骨髓会增加网织红细胞的合成和释放，以弥补红细胞的减少。
因此，贫血患者的网织红细胞比例也会显著增加。
3. 血液失血大量的血液失血会导致红细胞数量急剧减少，进而刺激骨髓释放更多的网织红细胞来进行红细胞再生。
因此，在血液失血的情况下，网织红细胞比例也会升高。
4. 骨髓异常骨髓异常可以导致红细胞生成障碍，进而影响网织红细胞的生成和释放。
例如，骨髓增生异常综合症（MDS）等疾病可以导致网织红细胞比例明显增加。
网织红细胞的检测方法网织红细胞的检测可以通过流式细胞仪或者显微镜等方法进行。
以下是常用的流式细胞仪的检测步骤：1.准备血液样本：采集适量的静脉血，将血液样本放入抗凝剂处理。
2.处理血液样本：将血液样本进行稀释处理，使白细胞和红细胞分散均匀。
3.流式细胞仪检测：将样本放入流式细胞仪中进行检测。
流式细胞仪通过使用荧光染料或抗体标记网织红细胞，以便于识别和计数。
一、网织红细胞(Ret)计数
【临床意义】
（1） 评价骨髓造血功能： ① RET↑是红系造血功能活跃的反映。表示骨髓造血功能旺
盛，见于增生性贫血，以溶贫最为显著（6～8%，急性溶血 可达20%，严重者可达40～50%）；急性失血可明显↑ ；缺 铁和巨贫RET正常或轻度↑ 。
② RET↓表示骨髓造血功能减低，多见于再障，尤以急性再
血红蛋白测定
血红蛋白组成 珠蛋白肽链（4条）,每条折叠的珠蛋白肽链结合1个 亚铁血红素，分子量64458（不带O2）。 珠蛋白肽链 珠蛋白肽链 珠蛋白肽链 珠蛋白肽链 亚铁血红素 亚铁血红素 亚铁血红素 亚铁血红素
原卟啉 Fe 2+ 原卟啉 Fe 2+ 原卟啉 Fe 2+ 原卟啉 Fe 2+
血 红 蛋 白
3 1
A
控制Ret计数CV=10% (ICSH推荐)需镜检的RBC数
Ret（%） １～２ ３～５ ６～10 11～25 窥盘小方格内镜检RBC数 1000 500 200 100 相当镜检RBC总数 9000 4500 1800 900
【正常参考值】
方 法 年龄组 相对值（%）
显微镜 计数
成人、儿童 新生儿
染色后，使含有RNA的RBC被计数，自动计算出RET的%及绝对数。优点：
测量细胞多，避免主观因素、方法易于标准化。国外已广泛使用，国 内逐步推广使用。但成本高。
近年来，新型多参数血细胞分析仪具有Ret计数功能。
【质量控制】
1.抗凝血最好在4h内处理，保存在4º C，可延长至8h. 2.染色温度控制在37º C为宜，无论何种染液，室温（25º C） 以下染色时，RET检出率明显减低，故要求37º C恒温染 色。 3. 玻片法容易使血液中的水分蒸发，造成涂片困难，受染料沉 淀的干扰，故已少用。 4. 试管法为手工RET计数的首选方法，染液与血液的比例以 1:1为宜，严重贫血时可适当增加血液比例。 5. 推制血膜不宜太薄或太厚，否则会造成RET分布不均。 6. ICSH推荐使用Miller窥盘作Ret计数，其CV=10%±
临检--网织红细胞计数(Ret)
网织红细胞计数（Ret）【定义】网织红细胞是晚幼红细胞脱核后到完全成熟红细胞间的过渡细胞，属于尚未完全成熟的红细胞，其胞质中残存嗜碱性物质核糖核酸（RNA），经活体染色后，嗜碱性物质凝聚成蓝黑色颗粒，颗粒与颗粒连缀成线，线连接成网，故而得名。
【分型】根据网织红细胞发育阶段分为4型，分别是：Ⅰ型（丝球型）：红细胞充满网状物，见于骨髓。
Ⅱ型（网型）：红细胞网状物结构松散，见于骨髓。
Ⅲ型（破网型）：红细胞网状物结构稀少，呈不规则枝点状排列，见于外周血。
Ⅳ型（点粒型）：红细胞内为分散的细颗粒、短丝状网状物，见于外周血。
【检测原理】1.普通光学显微镜法2.网织细胞计数仪法和血液分析仪法【操作方法】1.显微镜试管法操作（1）加染液：于试管中加入10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液2滴，再加新鲜血2滴，立即混匀，置37℃下15～20min。
（2）制片：取1小滴制成薄血涂片，自然干燥。
（3）观察：在低倍镜下选择红细胞分布均匀的部位进行观察。
（4）计数：在油镜下计数至少1000个红细胞中网织红细胞数。
（5）计算：网织红细胞分数=（计数的网织红细胞数）/1O00，网织红细胞绝对值（×109/L）=红细胞数×1012/L×网织红细胞分数。
2.显微镜法注意事项（1）网织红细胞必须活体染色，WH0推荐使用新亚甲蓝染液，其染色力强且稳定。
煌焦油蓝染液操作简单、费用低廉，但易产生沉淀、工作效率不高、精度差。
染液与血液比例以1:1为宜，严重贫血时，可适量增加血量。
（2）为提高网织红细胞计数精度和速度，ICSH推荐使用Miller窥盘，方法是将Miller 窥盘置于目镜内，选择红细胞散在且分布均匀的部位（3）用小方格（A）计数红细胞，大方格（B）计数网织红细胞，按下式计算：（4）注意鉴别网织红细胞与HbH包涵体。
Ret为蓝绿色网状或点粒状物质，分布不均，HbH包涵体为蓝绿色圆形小体，均匀散布于整个红细胞内。
网织红细胞计数操作规程
网织红细胞计数操作规程目的：本实验旨在规范网织红细胞计数的标准操作，以确保实验数据的准确性。
原理：网织红细胞是未完全成熟的红细胞，其包体较一般红细胞稍大，胞浆中尚有嗜碱性残留物质，可被煌焦油蓝等染成蓝色颗粒状、线状及网状结构物。
网织红细胞的数量可用百分率或每立方毫米血液中的绝对值数来表示。
材料：煌焦油蓝（灿烂甲酚蓝）、枸橼酸钠、生理盐水、香柏油、载物片（玻璃片）、推片（磨去边的玻璃片）、试管（2ml）、毛细吸管或枪头（200微升）、光学显微镜。
操作规程：染色液配制：将煌焦油蓝0.4g和3.5%枸橼酸钠20ml研磨溶解后加入生理盐水至100ml，过滤备用。
室温下可保存6个月。
血膜片制备：1.染色：取试管一支，用毛细管或枪头于其中加入染液2～5滴，然后再加入新鲜血液1滴轻摇混合，染色10～15min。
2.制片：取载物片一片，用毛细管或枪头吸取血液染色液1小滴于载物片上，并用推片约45度角推制成舌型血膜片，自然干燥备用。
3.观察：用显微镜观察，取血膜片滴入香柏油1滴，将血膜片置于显微镜载物台，用油镜观察网织红细胞。
4.计数：取计数器在油镜下检查计数红细胞，即计数红细胞中网织红细胞的数量，检查计数1000个红细胞中网织红细胞的数量，并得出千分率再除以10即为百分率。
计算公式：百分率=1000个红细胞中网织红细胞的数量/1000注意事项：1.载物片使用前必须经过酸或碱液浸泡脱脂处理后方可使用。
2.血膜片制备需要反复练推片，熟练推制血膜片的技巧。
3.血膜片的厚薄要适中，过厚或过薄均无法进行观察。
4.室温过低时，血液染色时间要适当延长，以确保细胞着色更充分。
5.血膜片需在3天内检查计数，否则其网状结构会褪色，不易观察清晰。
网织红细胞计数标准操作程序
网织红细胞计数标准操作程序1.检验目的通过对网织红细胞计数，判断机体造血功能的旺盛程度。
2.检验原理网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞质内尚有嗜碱性的RNA物质，经新亚甲蓝或煌焦油蓝活体染色后呈浅蓝色或深蓝色网状结构。
3.标本ETDA-K2抗凝血或新鲜外周血。
4.试剂新亚甲蓝枸橼酸氯化钠染色液。
5.操作步骤5.1在小试管中加入染色液2滴；再加入静脉血（或末梢血）2滴，混匀后放置37℃恒温水箱中。
5.2 温育15分钟后取1滴混悬液制成涂片。
5.3在油镜下直接观察1000个红细胞中Ret数。
6.结果计算直接观察法：网织红细胞比例=计数1000个红细胞中的网织红细胞数/10007.生物学参考区间网织红细胞比例：成年人：0.005~0.015；新生儿：0.03~0.06；儿童:0.005~0.015。
8.实验室解释8.1增加表示骨髓造血功能旺盛。
见于各类增生性贫血，溶血性贫血增加尤为显著；巨幼细胞贫血、缺铁性贫血分别应用维生素B12、叶酸或铁剂治疗后显著增多，表示有治疗效果；也是放疗和化疗以及骨髓移植和EPO治疗后骨髓造血功能恢复的指标。
8.2减少常见于骨髓增生受抑抑制、再生障碍性贫血和纯红细胞再生障碍。
9.变异的潜在来源标本应在4小时内进行处理。
置于清洁的棕色瓶中保存，染色液应无沉淀。
新亚甲蓝染料为WHO所推荐，着色强且稳定，背景清晰，利于计数；室温<15℃时，放37℃恒温水箱；用瑞士-吉姆萨染液复染后，可使Ret计数结果减少。
10.参考文献10.1尚红、王毓三、申子瑜《全国临床检验操作程序》，第四版，人民卫生出版社。
网织红细胞计数检测标准操作规程
网织红细胞计数检测标准操作规程1.【目的】为了规范化操作，保证检测结果准确可靠。
2.【职责】2.1实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.2本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
3.【样本类型及实验前准备】3.1样本类型：静脉血2ml（标本应新鲜，注意避免污染，避免溶血，注意有无血凝块）。
3.2患者准备：要求患者处于安静状态精神、体力、情绪等因素的影响较小。
3.3容器添加剂类型：EDTA-2K3.4实验试剂：煌焦油蓝或新亚甲蓝染液4.【测定原理】网织红细胞是晚幼红细胞到完全成熟红细胞之间的过渡型细胞，由于其细胞浆中尚存在嗜碱性的RNA物质，用煌焦油蓝或新亚甲蓝进行活体染色后，RNA中的负电荷基团与带正电荷的有色基团结合，胞浆中镜检可见有浅蓝色或深蓝色的点状.丝状或网状结构。
5.【操作步骤】5.1样本要求新鲜全血或EDTA抗凝全血。
5.2将网织红细胞染色液与病人全血1：1比例混匀，静置室温20分钟或更久。
制成血涂片，于显微镜下观察，判读。
5.3先在低倍镜下浏览，了解染色好坏和细胞分布情况。
选择涂片体尾交界处染色良好的区域，在油镜下观察1000个红细胞，算出网织红细胞的百分率。
6.【生物参考区间】儿童成人：0.05—0.15%新生儿：0.3—0.6%7.【临床意义】网织红细胞增加见于各种增生性贫血，溶贫尤为显著，巨幼贫和缺铁贫在治疗后显著曾生，表示有治疗效果;减少常见于再生障碍性贫血。
7.1增高提示骨髓造血功能旺盛，见于各种增生性贫血（溶血性、缺铁性、巨幼细胞性、急性失血性贫血）及经相应药物治疗有效时；急性溶血时可高达0.6～0.8；急性失血后5～10d网织红细胞达高峰，2周后恢复正常；恶性贫血或缺铁性贫血使用维生素B12或供铁质后显著增多，表示有疗效。
7.2减低提示骨髓造血功能低下，见于再生障碍性贫血、溶血性贫血再生危象时。
2018年(三)网织红细胞计数-2019年医学文档资料
目前，FCM检测网织红细胞主要用于 1）预测骨髓移植的效果； 2）解释各种红系增长低下性贫血的 发病原因; 3）评价某些新的重组生物制剂的治 疗效果。
三、操作步骤
1. 染色：于载玻片的一端加煌焦油蓝 酒精溶液1滴，任其自然凉干后备用， 取末梢血或抗凝血一滴，于已干燥的 染料上，用推片角混匀后，将两玻片 盖合（玻片法）；试管法取染液2滴入 试管，加血2滴混匀，封闭好，待15 分钟以上时间， 2. 推片：取混合液1小滴于载玻片的 一端，推制成薄而均匀的血膜，
（3）放、化疗监测 机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制，早期HFR和 MFR降低，然后才检测到网织红细胞的降低。而停止放、 化疗，骨髓功能恢复后，又见上述指标依次上升。可指导 临床医师适时调整治疗方案，避免造成严重的骨髓抑制。
网织红生成指数（Reticulocyte production index,RPI）
RPI=病人网织红细胞（%）/2 * 病人HCT/正常人HCT（男 0.45，女0.40） 临床应用： ＞3提示溶血性贫血或急性失血性贫血；
八、思考题
一溶血性贫血患者，红细胞计数 2.6x1012/L，血细胞比容0.29，网织红 细胞计数相对值为35%，如何报告网织 红细胞检测结果？
外周血网织红细胞计数（百分数和绝对 值）是一反映骨髓红系增生活性的常用 指标。许多学者先后提出应用FCM和不 同的RNA特异性荧光染料自动计数网织 红细胞的方法，如派若宁Y、AO、溴化 乙啶、thiazole orange等。 目前最普遍应用的是 thiazoie orange 染色法，这种特异性RNA 的激 发波（488nm）测量的特点，与人工计
Miller窥盘
将Miller窥盘放在显微镜目镜 中,通过窥盘中大小方格间的9 比1比例关系计算RBC数和Ret 数。
网织红细胞计数标准操作程序
网织红细胞计数标准操作程序1 方法试管染色法。
2 原理网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后呈浅蓝色或深蓝色的网状结构。
网织颗粒越多，表示红细胞越未成熟。
3 试剂网织红细胞染色液：3.1品牌：珠海贝索生物技术有限公司（BASO diagnostic, Inc）3.2包装规格：2瓶×100ml3.3主要成份：新亚甲蓝3.4储存条件：室温（15℃～30℃），相对湿度不大于80%，无腐蚀性气体和痛风良好的室内保存。
3.5使用期限：2年（开瓶后效期为6个月）。
3.6注意事项：避免高、低温环境及阳光直射。
4 实验器材显微镜、滴管、载玻片、推片、香柏油、擦镜纸、乳胶手套、试管架、移液器等。
5 标本要求5.1标本必须为末梢血或EDTA-K2抗凝的静脉血。
静脉采血后立即与抗凝剂混匀，放置室温立即送检。
5.2 标本在室温下最多保留4小时。
不能在4小时内检测的标本，放置于冷藏冰箱（2℃~8℃）中保存，8小时内标本有效，使用前从冰箱中取出回复室温后检测。
6 操作步骤6.1于0.5ml 试管内加入20μl网织红细胞染色液。
6.2取血液20μl，加入试管内，混匀，盖紧盖子，并标记相应标本号。
6.3静置20分钟或更久。
6.4推成薄片2张，待干。
6.5在油镜下选择红细胞分布均匀，染色较好部位，每张片子检查1000个红细胞中网织红细胞数，算出百分率，以均值报告。
7 计算网织红细胞数（%）= 1000个红细胞中网织红细胞的数目×1001000如：玻片1：油镜下计数1000个红细胞时见10个网织红细胞，则网织红细胞的相对比值为：网织红细胞数1（%）=10×100=1.0 % 1000玻片2：油镜下计数1000个红细胞时见12个网织红细胞，则网织红细胞的相对比值为：网织红细胞数2（%）=12×100=1.2 % 1000最终，网织红细胞数（%）= 1.0% + 1.2%×100=1.0 % 28 参考范围0.5% -1.5%9 临床意义网织红细胞的多少可反映骨髓造血功能的情况。
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网织红细胞染色液(Reticulocyte Stain)说明书
货号：G1400
规格：50mL/100mL
保存：室温，避光保存。
有效期12个月。
产品简介：
网织红细胞是晚幼红细胞到完全成熟的红细胞之间的过度型细胞，由于其细胞浆中尚存在嗜碱性的RNA物质，用网织红细胞染色液进行活体染色后，胞浆中镜检可见有浅蓝色或深蓝色的网状结构。
网织红细胞染色液有新亚甲蓝或煌焦油蓝等组成，呈中性，用于网织红细胞活体染色，利用本染色液所染出的结果，背景颜色明亮清晰，而且不受长时间染色的影响。
该染色液仅用于科研领域，不用于临床诊断或其他用途。
自备材料：
1.新鲜全血或EDTA抗凝血全血
2.细胞计数板
3.显微镜
操作步骤（仅供参考）：
1.将Reticulocyte Stain与病人全血以1:1比例混合，室温静置10-15min或更久。
2.按常规做成血液涂片。
3.显微镜下观察或油镜下计数至少1000个红细胞中网织红细胞数。
染色结果：染色后网织红细胞胞浆中含有浅蓝色或深蓝色的网状结构。
计算：
网织红细胞百分数=计数1000个红细胞中的网织红细胞数/1000
网织红细胞绝对数（个/L）=网织红细胞百分数×红细胞数/L
注意事项：
1.该染色法仅限试管法操作。
2.染色时间要充足，混合后不易立即涂片，当室温较低时，染色时间应相应延长。
3.血涂片应厚薄均匀，不使红细胞重叠，以免影响染色效果。
4.血细胞涂片染色要求新鲜全血或EDTA抗凝血。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。