超声波破碎细胞的常见问题

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细胞破碎技术—超声波破碎

细胞破碎技术——超声波破碎法摘要：细胞破碎技术的基本概念及其基本方法，重点介绍了从超声波破碎仪及超声波破碎常见的问题与解决方法上介绍了超声波破碎法。

关键词：细胞破碎方法超声波破碎仪常见问题正文：一、细胞破碎阻力细菌——几乎所有细菌的细胞壁都是由肽聚糖（peptidoglycan）组成，它是难溶性的聚糖链（glycan chain），借助短肽交联而成的网状结构，包围在细胞周围，使细胞具有一定的形状和强度。

短肽一般由四或五个胺基酸组成，如L-丙氨醯-D-谷氨醯-L-赖氨醯-D-丙氨酸。

而且短肽中常有D-胺基酸与二氨基庚二酸存在。

破碎细菌的主要阻力是来自于肽聚糖的网状结构，其网结构的致密程度和强度取决于聚糖链上所存在的肽键的数量和其交联的程度，如果交联程度大，则网结构就致密。

酵母菌——酵母细胞壁的最里层是由葡聚糖的细纤维组成，它构成了细胞壁的刚性骨架，使细胞具有一定的形状，覆盖在细纤维上面的是一层糖蛋白，最外层是甘露聚糖，由1,6一磷酸二酯键共价连接，形成网状结构。

在该层的内部，有甘露聚糖-酶的复合物，它可以共价连接到网状结构上，也可以不连接。

与细菌细胞壁一样，破碎酵母细胞壁的阻力主要决定于壁结构交联的紧密程度和它的厚度。

真菌——霉菌的细胞壁主要存在三种聚合物，葡聚糖（主要以β-1,3糖苷键连接，某些以β-1,6糖苷键连接），几丁质（以微纤维状态存在）以及糖蛋白。

最外层是α-和β-葡聚糖的混合物，第2层是糖蛋白的网状结构，葡聚糖与糖蛋白结合起来，第3层主要是蛋白质，最内层主要是几丁质，几丁质的微纤维嵌入蛋白质结构中。

与酵母和细菌的细胞壁一样，真菌细胞壁的强度和聚合物的网状结构有关，不仅如此，它还含有几丁质或纤维素的纤维状结构，所以强度有所提高。

植物细胞——对于已生长结束的植物细胞壁可分为初生壁和次生壁两部分。

初生壁是细胞生长期形成的。

次生壁是细胞停止生长后，在初生壁内部形成的结构。

目前，较流行的初生细胞壁结构是由Lampert等人提出的“经纬”模型，依据这一模型，纤维素的微纤丝以平行于细胞壁平面的方向一层一层敷着在上面，同一层次上的微纤丝平行排列，而不同层次上则排列方向不同，互成一定角度，形成独立的网路，构成了细胞壁的“经”，模型中的“纬”是结构蛋白（富含羟脯氨酸的蛋白），它由细胞质分泌，垂直于细胞壁平面排列，并由异二酪氨酸交联成结构蛋白网，径向的微纤丝网和纬向的结构蛋白网之间又相互交联，构成更复杂的网路系统。

超声波细胞破碎仪安全操作及保养规程

超声波细胞破碎仪安全操作及保养规程超声波细胞破碎仪作为一种常用的实验设备，广泛应用于生物医学领域中的细胞解释、基因转染、蛋白质提取等多个方面。

然而，由于超声波破碎过程中产生的高强度振动和热能，操作人员和设备本身可能会受到一定的危害。

为了确保操作人员的人身安全和设备的长期稳定运行，本文将介绍超声波细胞破碎仪的安全操作规程和保养维护要点。

超声波细胞破碎仪安全操作规程1. 防护措施超声波破碎过程中，高频振动和热解作用对人员和设备都可能产生危害。

因此，操作人员需要采取一定的防护措施：•戴上耳罩和手套：超声波破碎仪产生的高强度声波振动会影响到人的听觉，甚至引起耳膜破裂。

因此，在操作时一定要戴上耳罩。

此外，还需戴上手套，避免手部接触到破碎池中的有害物质。

•穿戴实验室工作服：尽管超声波破碎仪使用中不会产生较大的气体或液体飞溅，但穿戴实验室工作服可有效地防止操作人员的衣物被卡在超声波破碎仪中，以及防止意外溅入裸露的皮肤或黏膜。

2. 操作规程超声波细胞破碎仪操作规程主要包括以下几个方面：•准备工作：在操作超声波破碎仪前，需要核对设备是否完好，调整好操作参数，准备好所需的实验仪器和试剂。

•使用聚四氟乙烯(PTFE)破碎池：破碎池选用PTFE材质是为了防止一些实验样品与皮肤或器件产生化学反应，同时也能够有效地减少超声波振动对池体的损耗和噪音。

•操作流程：打开设备电源并调整超声波振动频率和功率，将实验样品加入破碎池中，然后进行超声波破碎处理。

在整个操作过程中，不要在破碎池中添加过多或过少的实验材料，减少振动对池体的损耗，并避免引起起泡、爆裂等事故的发生。

•操作结束：操作结束后，需要关闭设备电源，然后清洗破碎池和工作台等区域，保证实验环境卫生干净。

3. 操作禁忌超声波细胞破碎仪的操作禁忌包括：•不能使用硬质材质破碎池，以免振动引起破裂。

•不能将手放入破碎池内进行摸索或干预，以免引起意外伤害。

•不能在超声波破碎过程中乱动或随意干扰，以免影响实验结果或损伤设备。

超声波细胞粉碎机的安全操作及保养规程

超声波细胞粉碎机的安全操作及保养规程背景介绍超声波细胞粉碎机是一种常用的实验设备，广泛应用于生命科学、医药、食品科学、环保等领域。

其工作原理是利用超声波振动效应，将试样内的细胞、细菌等微生物破碎。

虽然在实验中提高工作效率，但使用不当会对试验人员造成伤害，因此应加强对超声波细胞粉碎机的安全操作及保养规程的学习。

安全操作1. 确认试样是否适宜在使用超声波细胞粉碎机前，需要确认试样是否适宜。

此类设备通常用于破碎细胞、细菌等微生物及其它细小物质。

若试样过大或物种不适合，则容易产生振动失衡、超声波反弹而损坏设备或对试验人员造成伤害。

在操作前应阅读设备说明书和试样制备方法，以确定试样是否适宜并制定合适的加工方案。

2. 穿戴安全防护用品使用任何实验设备都需要穿戴安全防护用品，超声波细胞粉碎机也不例外。

在操作时，应穿戴实验服、手套、护目镜等，以减少对试验人员的伤害。

3. 操作前确认设备稳定在操作前，应先将设备放在平稳的工作台上，并确认设备是否稳定。

如若设备不稳定，会导致超声波波动失衡，甚至破坏设备，增加工作人员受伤风险。

使用时要保持设备平稳，且在加工时不要发生晃动，以免降低加工效果。

4. 控制加工时间和超声波强度加工时间和超声波强度的选择需要根据不同试样进行组合选择。

控制加工时间和超声波强度，以达到破碎细胞、细菌等微生物的效果。

但不同的微生物对超声波的适应性不同，故需要调节加工时间、超声波强度和设备最大功率，正确设置工艺参数。

5. 超声波点聚集和水浴温度的影响在使用超声波细胞粉碎机的过程中，超声波点聚集可能会导致加工不均或损坏设备。

可以通过颠倒、松动振荡或手动搅拌等方法来防止超声波点聚集。

且在操作过程中加热水浴会提高象声波波动效果，但过高的水温会危及试验人员的安全和设备寿命，因此需保持良好的通风条件和控制水温警示。

6. 操作后要及时关机在操作完毕后，应该及时关闭设备电源，并拆卸超声波振荡器。

操作完毕后，应对设备进行清洗和消毒，以防止交叉污染的发生。

超声波细胞破碎仪使用注意事项

欧诺仪器
超声波细胞破碎仪使用注意事项：
1 、切记空载（一定要将超声变幅杆插入样品后才能开机,）
2、变幅杆（超声探头）入水深度：1.5Cm 左右，液面高度最好有30mm以上，探头要居中，不要贴壁。

超声波是垂直纵波，插入太深不容易形成对流，影响破碎效率。

3、超声参数设置：设置键好仪器工作参数（具体设置见说明书或来电咨询），对于对温度要求比较敏感的样品（比如细菌）一般外面采用冰浴，实际温度肯定是低于25度，蛋白核酸肯定不会变性。

1）时间：超声时间每次最好不要超过5秒，间隙时间应大于或等于超声时间，以便于热量散发。

时间设定应以超声时间短，超声次数多原则，可延长超声机子以及探头的寿命。

2）超声功率：不宜太大，以免样品飞溅或起泡沫，如小于10ml样品容量，功率应在200w以内,选用2mm超声探头，另将面板后面的变幅杆选择开关打到相应挡；10-200ml样品容量的功率在200－400w，选用6mm超声探头，另将面板后面的变幅杆打到相应挡；200ml以上的样品容量功率在300-600w之间，选用10mm超声探头，另将面板后面的变幅杆打到相应挡；（2MM的小探头功率严禁超过350W） 3）容器选择：有多少的样品就选多大的烧杯，这样也是有利样品在超声中对流，提高破碎效率。

例如；20ML
的处理量最好用20ML的烧杯。

如100ml大肠杆菌样品设置参数：超声5秒／间隙5秒次数70次（总时间为10分钟）。

功率300W（仅供参考）500ML左右的量，功率开到500W-800W左右
4、若样品放在1.5ml的EP管里请一定要将EP管固定好，以防冰浴融化后液面下降导致空载
5、日常保养：用完后用酒精擦洗探头或用清水进行超声.
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超声波细胞破碎仪的维护和保养需要注意哪些方面

超声波细胞碎裂仪的维护和保养需要注意哪些方面超声波细胞碎裂仪是一种利用超声波在液体中的分散效应，使液体产生空化作用，从而使液体中的固体颗粒或细胞组织碎裂的设备。

该机被广泛应用于生物化学、微生物学、药物化学、表面化学、物理学、动物学、考古、地质、海洋等领域。

超声波细胞碎裂仪的维护和保养是确保其正常运行和延长使用寿命的关键。

以下是维护和保养超声波细胞碎裂仪时需要注意的几个方面：1、定期清洁设备是至关紧要的。

在使用完毕后，应及时清除设备表面的样品残渣和杂质，避开其对设备造成腐蚀或影响性能。

清洁时，应避开使用刺激性或腐蚀性的清洁剂，以免对设备造成损害。

同时，还需要注意设备的存放环境，保持其干燥、通风良好，避开潮湿和霉变对设备的影响。

2、定期检查设备的电源线是否完好，如有破损应及时更换，以确保设备的安全使用。

同时，要确保设备接地良好，防止触电事故的发生。

设备的传动部分也需要定期检查，如发现松动或磨损，应及时紧固或更换。

3、对于超声波细胞碎裂仪的换能器和变幅杆，也需要特别注意。

换能器在支架上要固定牢靠，防止从立杆上滑下。

变幅杆末端切勿碰撞以防止变形或损伤。

在使用一段时间后，变幅杆末端可能会因空化腐蚀而发毛，这时可以使用锉刀轻轻锉平。

另外，变幅杆在插入液体时需注意深度，并避开在空载状态下开机，以免损坏换能器或超声发生器。

4、设备的保养还包含定期校准和检查设备的性能。

假如发现设备性能下降或存在异常情况，应及时联系专业人员进行维护和修理。

同时，对于易损件，如探头等，需要依据使用情况进行及时更换。

5、在使用超声波细胞碎裂仪时，操作人员需要遵从正确的操作规程和安全规范，避开因操作欠妥导致设备损坏或安全事故的发生。

超声波细胞碎裂仪的维护和保养需要从清洁、检查、校准和更换易损件等多个方面进行，以确保设备的正常运行和延长使用寿命。

同时，操作人员也需要严格遭守操作规程和安全规范，确保使用过程的安全和运行稳定。

超声破碎细胞问题汇总

超声破碎细胞问题汇总2008年12月11日星期四 15:31大肠杆菌表达外源蛋白，在超声破碎的时候，用含有1%triton-X-100的PBS悬浮，然后超声的效果较好，1%triton-X-100的作用还是很明显的，对其他的一些细菌同样起作用，比如链霉菌。

细菌沉淀直接加样品1buffer，再加5ul的巯基乙醇，混匀，离心，煮沸10min，直接上样，染色脱色步骤如下:将胶放入适量的染色液微波炉里加热1min(下次适当补点醋酸即可),将染色液换成大量的水(自来水即可)在微波炉煮10min 就可以.在表达重组蛋白后超声波破碎细胞，采用冰浴，400w，破2s停1s，但是不一会就产生大量泡沫，影响了破碎功率，pbs和tris缓冲液都是这样，最后都是破碎不完全，而我的目的蛋白就在这些未破碎的细胞中。

？1*会产生气泡是因为你的探头位置没放好。

探头一定要接近底部，约1cm（我一般是距底部0.5mm）。

功率根据仪器不同会有所不同，但你可以观察液面，有波动但不要太剧烈就好。

2*破3S停10S，破个二三十次看看。

3*变幅杆位置摆放也要注意，听声音如果不对的话就要及时调整。

另外可以从菌浓度方面考虑。

在破碎时试着加大体积,强度最好不要超过60%.4*尝试超8s停8s,对有些菌体蛋白来说，你的方法很难散热，导致蛋白变性产生气泡，最好停顿时间稍长一些，这种情况多见于包涵体形式的蛋白。

链霉菌（放线菌）超声破碎的，用的方法条件是什么？前处理一般就是配置成一定浓度的菌悬液。

使用超声破碎时采用的具体条件是：(1)取细菌的24 h培养液于5 000 r／min 下离心5 min收集菌体．(2)用pH 7．5的Na2HPO -NaH2PO 缓冲液洗涤3次，再用该缓冲液将菌体配成1：3的菌悬液．置于40 mL大塑料试管内．(3)将大塑料试管置于冰浴中，采用超声波破碎(功率200 W，1／2”探头，破碎30 s，间歇30 S)．(4)破碎液于12 000 r／min下高速冷冻离心30 min，收集细胞碎片和上清夜．超声破菌流程与上述基本一致，就是洗涤菌体也可以用预冷的生理盐水或pH8的Tris－HCl，洗涤一次就可以。

超声波细胞粉碎机使用的注意事项粉碎机如何做好保养

超声波细胞粉碎机使用的注意事项粉碎机如何做好保养超声波细胞粉碎机使用的注意事项如下:温度保护设置点必需比室温或样品温度高5℃以上。

当发生温度保护时可按SET健4秒以上，重新设置保护值。

设错温度时也可按SET键4秒以上复位。

对各种细胞碎裂量的多少，时间长短，功率大小，有待用户依据各种不同细胞再摸索确定，选取JIA值。

此仪器输出功率较大，如选用Ф2、Ф3或Ф6变幅杆时，应把功率开得小些，以免变幅杆过载而断裂。

使用应有良好的接地。

用确定时间后变幅杆末端会被空化腐蚀而毛，可用油石或锉刀锉平，否则会影响工作效果。

严禁在变幅杆未插入液体内（空载）时开机，否则会损坏换能器或超声波发生器。

变幅杆选择开关的使用变幅杆选择开关是用来匹配不同规格的变幅杆与发生器的频率，阻抗的一致性。

如换能器组件的频率与发生器的阻抗不一致时，超声波就不能工作。

新仪器或新配变幅杆时，选择开关应打在对应的位置。

当变幅杆磨损后可拨动开关至超声工作正常为止，此时档位与变幅杆规格不愿定对应。

超声波细胞粉碎机的变幅杆选择开关出厂时一般打在与变幅杆相对应的位置，当变幅杆磨损后，用户可自由选择档位至超声工作正常为止，此时档位与变幅杆规格不愿定对应。

在超声碎裂时，由于超声波在液体中起空化效应，使液体温度会很快上升，用户对各种细胞的温度要多加注意。

建议接受短时间（每次不超过5秒）的多次碎裂，同时可外加冰浴冷却。

超声波细胞粉碎机接受无工频变压器的开关电源，在打开发生器机壳后切勿乱摸，以防触电。

本仪器性能牢靠，一般不易损坏。

实践表明：短时间的多次工作，工作时间1—2秒，间隙时间1—2秒，比连续长时间工作的效果要好。

为防止液体发热，可设定较长的间隙时间。

另外，不间断长时间工作简单形成空载，缩短仪器的使用寿命。

超声波细胞粉碎机应安置在干燥，无潮湿、无阳光直射、无腐蚀性气体的地方工作。

粉碎机该如何排出故障粉碎机利用动齿和固定齿之间的相对运动，使被粉碎物料在粉碎腔里面，经过和动齿与静齿的高速碰撞、敲击、摩擦，以及物料之间的碰撞、敲击和摩擦，从而获得粉碎，粉碎后的物料通过筛网落进粉碎腔下方的集料桶内或者布袋内。

超声波细胞粉碎机使用说明书

超声波细胞粉碎机使用说明书一、引言超声波细胞粉碎机是一种高效、安全的实验室设备，广泛应用于生物医学研究领域。

本文将详细介绍超声波细胞粉碎机的使用方法和注意事项。

二、设备介绍超声波细胞粉碎机是一种利用超声波振荡原理将生物样本细胞破碎的实验设备。

它由以下几个主要部分组成： 1. 超声波发生器：产生高频超声波信号； 2. 超声波探头：将超声波信号传递给样本； 3. 操作面板：用于设置超声波的参数和控制设备。

三、使用方法1. 准备工作在使用超声波细胞粉碎机之前，需要进行以下准备工作： - 确保设备已连接电源并处于正常工作状态； - 清洁超声波探头，确保其表面干净； - 准备待处理的生物样本。

2. 设置参数在操作面板上设置超声波的参数，包括： - 超声波功率：根据样本的特性和所需破碎程度进行调整； - 超声波时间：设置超声波处理的时间； - 工作模式：选择连续工作模式或脉冲工作模式。

3. 进行样本处理将待处理的生物样本放置在超声波探头下方的样本槽中，确保样本与超声波探头接触良好。

然后按下启动按钮，超声波细胞粉碎机开始工作。

4. 注意事项•在操作过程中，避免将手指或其他物体接触到超声波探头；•根据样本的特性和所需破碎程度，适时调整超声波的参数；•定期清洁超声波探头，避免污染样本；•在处理高浓度样本时，可以适当降低超声波功率，以防止样本过热。

四、常见问题解答1. 超声波细胞粉碎机可以处理哪些样本？超声波细胞粉碎机可以处理多种生物样本，包括细胞、组织等。

2. 如何选择超声波的功率和时间？选择超声波的功率和时间需要根据样本的特性和所需破碎程度来决定。

一般来说，样本越难破碎，需要使用更高的功率和更长的时间。

3. 超声波细胞粉碎机是否需要定期维护？是的，超声波细胞粉碎机需要定期清洁超声波探头，避免污染样本。

同时，也需要定期检查设备的工作状态，确保其正常运行。

4. 超声波细胞粉碎机是否适用于敏感样本？超声波细胞粉碎机在处理敏感样本时需要谨慎操作，可以降低超声波的功率，以避免样本受损或过热。

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超声波破碎细胞的常见问题
大肠杆菌表达外源蛋白，在超声破碎的时候，用含有1%triton-X-100的PBS悬浮，然后超声的效果较好，1%triton-X-100的作用还是很明显的，对其他的一些细菌同样起作用，比如链霉菌。

细菌沉淀直接加样品1buffer，再加5ul的巯基乙醇，混匀，离心，煮沸10min，直接上样，染色脱色步骤如下:将胶放入适量的染色液微波炉里加热1min(下次适当补点醋酸即可),将染色液换成大量的水(自来水即可)在微波炉煮10min 就可以。

在表达重组蛋白后超声波破碎细胞，采用冰浴，400w，破2s停1s，但是不一会就产生大量泡沫，影响了破碎功率，pbs和tris缓冲液都是这样，最后都是破碎不完全，而我的目的蛋白就在这些未破碎的细胞中。

1*会产生气泡是因为你的探头位置没放好。

探头一定要接近底部，约1cm（我一般是距底部
0.5mm）。