全自动细胞计数和活力分析系统

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细胞生物学细胞计数法和MTT法

实验题目：细胞增殖和活力的检测方法一、摘要：细胞增殖是生物体生长和繁殖的基础，当细胞增殖发生异常时往往会导致疾病的发生，比如肿瘤的发生就是细胞增殖失控的结果。

掌握细胞增殖和活力的检测是从事细胞生物学研究的一个重要方面。

针对细胞增殖和活力的检测方法有很多，这些方法除了能用于细胞本身增殖特性的研究、还能应用于药物毒副性检测，生长因子对细胞增殖和活力的影响等。

二、实验原理：〔1〕细胞计数法：最简单直接的方法：传统细胞计数的方法是用血球计数板，原理：将一定量的细胞悬液载入固定体积的玻片夹层中，在显微镜下数出细胞数量，然后换算出原始的细胞悬液浓度。

使用自动化细胞计数器，它通过拍下计数界面照片，利用软件程序设定去识别细胞，实现自动化计数。

好处:这种方法能兼容台盼蓝染色，染上蓝色的细胞视为死细胞，直接观察就能大致判断细胞的活力状态，计数后能定量分析细胞存活率。

缺点:①它的灵敏度低②线性范围太窄，细胞浓度低于 10 万个/ml 则计数不准确。

〔2〕 MTT 法MTT 称为噻唑蓝，是一种黄颜色染料。

定义：MTT 比色法是一种通过检测细胞代谢活性间接反映细胞增殖的方法。

原理：活细胞线粒体里的酶能够将外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中，活细胞数量越多，形成的有色沉淀越多，通过测定颜色的深浅也就是吸光值来反映细胞代谢活性的强弱，而细胞代谢活性与细胞数量呈正比，从而反映细胞数量的多少。

缺点： MTT被还原形成的有色沉淀需要溶解后才能比色，检测用时较长，检测结果会受到沉淀溶解效果的影响。

三、实验材料和用品：细胞计数法：待测细胞悬液、细胞计数板、盖玻片、普通光学显微镜、微量移液器及枪头、酒精棉球、吸水纸、台盼蓝染液MTT法：贴壁细胞（A549 肺癌细胞株）酶标仪、酶标板振荡器、超净工作台，倒置显微镜，CO2培养箱、96 孔培养板，EP 管及管架，微量移液器及枪头、5mg/ml MTT 溶液，DMSO 溶液，1640 完全培养液四、实验操作（细胞计数法）：实验过程分为四个环节：（首先）清洁细胞计数板及盖玻片—（然后）镜检计数室—（接着）细胞加样—（最后）细胞计数具体操作细节如下：1、清洁细胞计数板及盖玻片：用 75%酒精棉球仔细擦拭细胞计数板的计数室区域，接着擦拭盖玻片，放置吸水纸上自然晾干；2、镜检计数室：1）细胞计数板和盖玻片干燥后，将盖玻片覆盖到细胞计数板的计数室部位；2）在显微镜下观察擦拭效果，确定计数室区域已擦拭干净、能清晰看到计数室的大方格及中方格3）直接平行移出计数板，平放在实验台上；3、待测细胞加样：1）将待测细胞悬液混匀后，吸取 10ul 细胞悬液加入 EP 管，然后再吸取10ul台盼蓝染液加入 EP，混匀，染色静置 2 分钟。

Countstar 细胞计数仪介绍

10µl
30s 活细胞和死细胞浓度，总细胞浓度，细胞存活率，细胞的平均大小，细胞图像
10µl
30s 活细胞和死细胞浓度，总细胞浓度，细胞存活率，细胞的平均大小，细胞图像
通量染料 CCD分辨率调焦技术细胞结团校正结果输出格式
8 台盼蓝 2592 x 1944(500万像素）自动定焦粗略校正单一文本格式
样本混匀，加样
插入计数板
自动计数结果
宽广的样品检测范围
• 测量浓度范围：1×104~3×107/ml。 • 直径范围：5-180µm大小的各种原代细胞及传代细胞、干细胞、肿瘤细胞、血细胞、昆虫细胞、藻类及部分浮游动物。
CHO
MCF7
4T1
Human lymphocyte
MSC
HepG2
微囊藻
隐甲藻
进行相关操作，确保数据的安全性和客观性。
数据输出功能
Countstar细胞计数仪检测结果可以通过JPEG/PDF/EXCEL多格式数
据输出，确保数据的客观真实性，并可以进行后期数据分析和处理。
系统参数
◆ 细胞浓度：1×104－3×107/ml
◆ 细胞直径：5－180μm ◆ 细胞活率范围：0-100% ◆ 样本体积：20μl
Countstar细胞计数仪与人工计数对比
Countstar细胞计数仪与血球计数板计数细胞活率结果一致，两种方法计数结果差异无统计学意义(Y=1.0072x;R2=0.9937)
Countstar细胞计数仪与人工计数对比
Countstar细胞计数仪与血球计数板分别对CHO、MCF-7、HepG2、 MDCK、Vero细胞计数细胞浓度，两种方法计数结果一致，Countstar 细胞计数仪计数结果更准确，重复性测量标准偏差更小。误差线代表精度

Cellometer全自动细胞计数分析仪

Cellometer®全自动细胞计数分析仪Nexcelom Cellometer ®全自动细胞计数分析仪具有以下优势：小型化：可放入超净台样本需要量低：15-20 uL/样品全自动操作，避免人工误差快速：<30s/样品*，每天（8小时）可计数900次以上无需洗涤，无堵塞和交叉污染问题与同类产品相比，使用成本最低无需特殊试剂稀释样品读数时间成像时间<5s ，计数时间<30s* 输出数据细胞图像活细胞计数细胞直径均值细胞存活率活细胞浓度细胞大小柱状图图像特征样品量性能（CV%）实时观察细胞数据与图像可存储区分成簇细胞手动调整15 uL- 20 uL2%-5% 举例：Jurkat:2.27% YAC-1:3.17% H460:5.57% SW620:2.79%美国Cellometer®全自动细胞计数分析仪采用世界领先的细胞成像技术，可以进行细胞计数，及细胞存活率分析，同时可绘制细胞大小柱状图。

全自动操作，避免人为误差。

无需额外试剂，无堵塞及交叉污染。

步骤1: 加样20µL步骤2: 插入计数板步骤3: 读取数据即插即用，省时省力功能举例：1. 细胞浓度，细胞存活率检测Cellometer®细胞自动计数分析仪既可检测细胞浓度和细胞大小（下左），也可以通过台盼蓝染色检测活细胞浓度及细胞存活率（下右）。

2. 细胞大小直方图Cellometer®软件可以获得细胞大小直方图用于鉴别样本中不同的细胞类型或者监测细胞培养过程中细胞大小的改变。

PBMC培养所得在细胞大小直方图中显示两个细胞群。

一个细胞群被设置检测DC细胞的浓度，而另一个细胞群被设置检测更小的细胞。

SF9细胞被病毒感染后细胞显著变大。

绿色所示为有效计数细胞绿色显示活细胞，红色为死细胞3. 细胞簇分析功能针对一些成簇的细胞，Cellometer®软件可以准确区分并精确计数。

血液科实验室常用仪器与设备介绍

血液科实验室常用仪器与设备介绍血液科实验室是医院中不可或缺的重要部门，负责进行各种与血液相关的检验与分析。

为了提高工作效率和准确性，血液科实验室常使用各种专业的仪器与设备。

本文将介绍几种常用的血液科实验室仪器和设备，以及它们的功能和应用。

一、全自动血细胞分析仪全自动血细胞分析仪是血液科实验室中最常见的仪器之一。

它能够对血液中的各种细胞进行计数、分类和测量。

该仪器使用光学原理，通过激光照射血液样本，测量细胞的大小、形状和数量，并根据数据生成血液细胞分布图。

全自动血细胞分析仪具有高效、快速、准确的特点，可以极大地提高血液检测的效率。

二、血凝分析仪血凝分析仪主要用于血液凝固功能的检测。

它通过检测血浆中的凝血因子和凝血酶原时间等参数，评估患者的凝血功能状态。

血凝分析仪广泛应用于血液科实验室中的血栓疾病诊断、抗凝治疗监测等方面。

它的自动化程度高，操作简便，结果准确可靠。

三、电解质分析仪电解质分析仪主要用于血液中电解质和酸碱平衡的检测。

它能够同时测量血液中的钠、钾、氯等离子浓度，并根据测量结果分析患者的酸碱平衡状态。

电解质分析仪具有高度的自动化程度和准确性，对于血液电解质异常的检测和诊断具有重要意义。

四、血气分析仪血气分析仪是血液科实验室的重要设备之一。

它能够快速测量血液中的氧、二氧化碳、酸碱平衡等指标，评估患者的氧合功能和酸碱平衡状态。

血气分析仪操作简便、快速，可以提供实时的血气分析结果，对于急重症监测与治疗具有重要意义。

五、华仪华仪是一种用于血清离心的设备，主要用于分离血液中的血清和红细胞。

血清是血液中含有丰富生物标志物的液体，通过对血清的分离和分析，可以获取患者的生化信息。

华仪操作简单，用途广泛，是血液科实验室中不可或缺的重要设备之一。

六、离心机离心机是血液科实验室中的常见设备，主要用于血液样本和试剂的离心分离。

通过离心，可以使液体分层，从而方便进行样本的取样和分析。

离心机操作简单，适用于各种离心工作，成为血液科实验室中常用的通用设备。

细胞计数方法

细胞计数方法细胞计数是生物学和医学领域中非常重要的实验技术，它可以帮助科研人员了解细胞的数量、生长状态和活力等重要信息。

在实验室中，有多种方法可以用来进行细胞计数，每种方法都有其特点和适用范围。

本文将介绍常见的几种细胞计数方法及其优缺点，以帮助读者选择合适的方法进行细胞计数。

显微镜计数法是最常见的细胞计数方法之一。

它通过将待计数的细胞悬浮液置于载玻片上，利用显微镜在统一的视野范围内计数细胞数量。

这种方法简单直观，不需要复杂的设备，但需要有一定的操作经验和耐心。

此外，由于显微镜计数法对操作者的要求较高，容易出现人为误差，因此在进行细胞计数时需要谨慎操作，尽量避免出现计数偏差。

自动计数仪是近年来发展起来的一种高效、准确的细胞计数方法。

它利用先进的光学技术和图像分析算法，可以快速、精准地完成大量细胞的计数工作。

相比显微镜计数法，自动计数仪具有计数速度快、结果准确、操作简便等优点。

然而，自动计数仪的价格较昂贵，对于一些实验室来说可能不太实际。

此外，对于特殊形态的细胞，自动计数仪的适用性也有一定限制。

另外，流式细胞仪也是一种常用的细胞计数方法。

它通过将待计数的细胞悬浮液注入流式细胞仪中，利用流式细胞仪的激光技术和多通道检测系统，可以实现对细胞数量、大小、形态等多个参数的快速检测和计数。

流式细胞仪计数方法具有高通量、高精度、多参数分析等优点，适用于对大批量细胞进行快速计数和分析。

然而，流式细胞仪的价格昂贵，对于一般实验室来说可能不太实际，而且操作也需要一定的专业技能。

除了上述几种常见的细胞计数方法外，还有一些其他方法，如电阻计数法、比色计数法等。

每种方法都有其适用的场景和特点，科研人员在选择细胞计数方法时需要根据实际需求和条件进行综合考虑。

总的来说，细胞计数是生物学和医学研究中不可或缺的一部分，选择合适的计数方法可以帮助科研人员更好地进行实验和研究工作。

在进行细胞计数时，需要根据实际情况选择合适的方法，并严格按照操作规程进行操作，以确保结果的准确性和可靠性。

PBMCs细胞的精确计数和活性分析

PBMC 细胞的精确计数和活性分析一、 PBMC 细胞计数的现状 1. 目前，绝大多数的科研工作者仍在使用血球计数板在显微镜下进行手工计数 PBMCs； 2. 但是显微镜下由于白细胞和红细胞大小非常接近，不能完全区分白细胞和红细胞； 3. 通过红细胞的双凹形形态鉴别红细胞，需要经验丰富的操作者，且不停地调焦来鉴别；可想而知要把每个红细胞鉴别出来，要耗费多长的时间，需要多强的工作量。

PBMC 样本的差异性大由于个体的差异（如正常人和病人）和人工分离提取的差异，红细胞和血小板污染的程度差异性非常大，因此我们经常看到分离后的 PBMC 样本千差万别，这也大大增加了在同一条件下，简单快速准确计数 PBMC 的难度和检测 PBMC 活性的难度。

二、 PBMC 精确计数或活力分析的重要性 PBMC（外周血单个核细胞）是免疫学功能研究中最常用的细胞模型，如细胞增殖、细胞毒性、细胞因子分泌等。

如在癌症免疫治疗领域中，需从病人全血中分离出 PBMC，分离的 PBMC 进一步扩增或进行不同的功能检测。

激活扩增后的细胞再回输到病人体内进行细胞治疗。

在整个流程中，从分离到检测，到培养，到回输等过程，细胞浓度和细胞活力都是必须监测的参数。

密度梯度分离液是从外周血、骨髓，及脐血分离单个核细胞最常用的方法。

但是不可避免的，分离后的细胞中，会有残存的红细胞及血小板混合在单个核细胞中。

残存的红细胞和血小板的多少，与个体的差异，以及分离的效果相关；但是不管分离的技术多高超，经验多丰富，都不可避免会存在红细胞和血小板的污染。

PBMC 实验的特征 1. 随着时间的延长，细胞质量下降； 2. 临床试验相关的样品量很大； 3. 细胞样品不纯，分离之路依赖病人样本和操作者如何精确、快速、简便计数 PBMC 以及精确分析 PBMC 活力，是免疫学研究以及免疫治疗领域至关重要的步骤。

1. 使用血球计数板在显微镜下进行手工计数 PBMC，即耗时耗人力，更不能达到精确计数的目的。

细胞计数及细胞活力检测

细胞计数
当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

1.将血球计数板及盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上；
2.将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间；
3.静置3分钟；
4.镜下观察，计算计数板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的,然后按下式计算：
细胞数/ml＝4大格细胞总数/4×稀释倍数×104
注意：镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团占10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。

细胞计数板
细胞活力测定
在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力，由组织中分离细胞一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是否有损伤作用。

复苏后的细胞也要检查活力，了解冻存和复苏的效果。

用台盼兰染细胞，死细胞着色，活细胞不着色，从而可以区分死细胞与活细胞。

1.将细胞悬液以0.5ml加入试管中；
2.加入0.5ml0.4%台盼兰染液，染色2-3分钟；
3.死细胞能被台盼兰染上色，镜下可见深兰色的细胞，活细胞不被染色，镜下呈无色透明状。

细胞存活率为：活细胞数÷总细胞数×100％。

注意：活力测定可以和细胞计数合起来进行，但要考虑到染液对原细胞悬液的加倍稀释作用。

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全自动细胞计数和活力分析系统：
中标产品必须逐条响应以下技术参数：
1.细胞直径范围：2μm -70μm
2.细胞浓度：5x104-1x107个/毫升
3.细胞存活率：0-100%
4.操作系统：Windows XP
5.具有自动取样装置
6.样品量：≤0.5 ml
7.有精确进样系统
8.分析时间周期（包括自动进样，作样，清洗全过程）：≤2.5 分钟
9.自动聚焦FIREWIRE CCD：≥1394 X 1040
10.可实时采集细胞图像
11.图形具有缩放功能
12.样品抽取及台盼蓝染料混合可变量
13.浓度高低可自动报警，废液过多可自动报警
14.符合21CFR PART 11 准则
15.有生物处理3D，旋转绘图
16.可将多重结果输出至EXCEL 文件
17.用户可自行定义非存活细胞分团选项
18.有提高圆度检测功能，可分离细胞碎片
19.可提供的数据：细胞存活率；总细胞数；存活细胞数；总细胞浓度；存活细胞
浓度；细胞的直径及分布；细胞的平均直径；细胞圆度及分布；细胞平均圆度；
细胞的生长速度；细胞倍增时间；细胞生长曲线
连续波长微孔板分光光度计
中标产品必须逐条响应以下参数：
常规参数
孔板类型：6-,12-,24,48,96和384-孔标准微孔板，大小128mm×86mm，最高0.8英寸。

可选配件：Take3TM微孔板适配器，可进行微量检测、BioCell TM、标准比色杯检测
软件：Gen5软件控制，兼容各种版本，包括中文软件
检测模式：终点法，动力学法，波长扫描发和孔域扫描法
检测性能
波长范围：200-999nm，可选1nm步进
波长准确性：＋/-2nm
波长重复性：＋/-0.2nm
吸收光检测范围：0-4 OD
吸收光分辨率：0.0001
带宽：5nm
OD准确性：0-2 OD：+/-1% +/-0.010 OD
2-2.5OD：+/-3% +/-0.010 OD
重复性：0-2 OD：+/-1% +/-0.005 OD
0-2 OD：+/-3% +/-0.005 OD
线性：0-2 OD：+/-1% +/-0.010 OD
2-2.5 OD: +/-3% +/-0.010 OD
读板速度：96孔≤50秒（标准）；≤40秒（快速）；≤15秒（扫描）
384孔≤170秒（标准）；≤135秒（快速）；≤35秒（扫描）
物理参数
连接：USB串口连接电脑控制
化学兼容性：所有暴露表面均耐受0.5%次氯酸钠、70%乙醇或异丙醇进行消毒
符合条款：EN 61326-1:2006;EN61326-2-6:2006;EN61000-4-2; EN61000-4-3; EN61000-4-4; EN61000-4-5; EN61000-4-6; EN61000-4-11
梯度PCR仪
中标产品必须逐条响应以下技术参数：
1主要技术指标
1.1拥有应用生物系统公司颁发的PCR许可证。

1.2灵活而简单的编程：梯度功能、可调节的速度变化率、时间和温度递增模式、
孵育模式、原位模式、链接功能、暂停功能。

1.3程序升级，通过Internet可更新。

1.4样品容量：96 x 0.2 ml PCR管、>75 x 0.5 ml PCR管或8 x 12 PCR板。

1.5温控范围：4－99℃。

1.6梯度温度范围：30-99℃，温差范围为1～20℃，不仅能够优化退火温度，而
且可以在每个PCR操作步骤中使用梯度功能。

1.7模板均一性：20℃－72℃：±0.4℃。

1.8温控精确度：≤±0.2℃。

1.9温控速率：约3℃/秒（加热），约2℃/秒（冷却）。

1.10程序数目：≥100种。

1.11最大循环数：≥90次。

1.12个人卡：存储10程序。

2保修期：贰年免费保修。

配置：主机一台，个人卡1个。