生物化学实验
生物化学实验原理和方法
生物化学实验原理和方法
生物化学实验是研究生物体内化学反应的实验方法，主要用于研究生物体内分子结构、代谢途径、蛋白质结构和功能等方面的问题。
生物化学实验的基本原理是利用生物体内的生物分子（如蛋白质、核酸、酶等）进行化学反应或与其他物质相互作用，从而检测、分离或定量这些分子。
生物化学实验主要包括以下几个方面的原则和方法：
1. 分离与纯化：将某一特定生物分子从其他组分中分离出来，获得纯净的样品。
常用方法包括离心、电泳、柱层析、过滤等。
2. 分析与测定：对生物分子的含量、结构和性质进行定量或定性的研究。
常用方法包括分光光度法、荧光法、比色法、拉曼光谱等。
3. 酶反应：酶是生物体内催化生物化学反应的一类蛋白质，其活性与底物浓度、温度、pH值等因素有关。
通过测定底物转化率来研究酶的活性。
常见的酶反应方法有酶解反应、酶促进反应等。
4. 蛋白质分析：蛋白质是生物体内最为重要的分子之一，可以通过电泳、质谱、Western blot等方法进行分析，从而了解蛋白质的结构、含量和功能。
5. 核酸分析：核酸是生物体内遗传信息的主要载体，可以通过PCR、凝胶电泳、
Southern blot等方法进行分析，用于检测基因的突变、限制性片段长度多态性等。
以上是一些常用的生物化学实验原理和方法，实际的生物化学实验会根据具体的研究目的和问题而选择适合的方法和技术。
生物化学实验
⽣物化学实验实验⼀1、糖类的颜⾊反应1. α-萘酚反应糖在浓⽆机酸（硫酸或盐酸）作⽤下，脱⽔⽣成糠醛及糠醛衍⽣物，后者能与α-萘酚⽣成紫红⾊物质。
注意：因糠醛及糠醛衍⽣物对此反应均呈阳性，不是糖类的特异反应。
2. 间苯⼆酚反应在酸作⽤下，酮糖脱⽔⽣成羟甲基糠醛，后者再与间苯⼆酚作⽤⽣成红⾊物质。
此反应是酮糖的特异反应。
因为醛糖在同样条件下呈⾊反应缓慢，只有在糖浓度较⾼或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。
2、还原作⽤许多糖类由于其分⼦中含有⾃由的或潜在的醛基或酮基，因此在碱性溶液中能将铜、铁、银等⾦属离⼦还原，同时糖类本⾝被氧化成糖酸及其他产物。
糖类这种性质常被利⽤于检测糖的还原性及还原糖的定量测定。
本实验所⽤的试剂为斐林试剂和本尼迪克特试剂。
它们都是Cu2＋的碱性溶液，能使还原糖氧化⽽本⾝被还原成红⾊（颗粒⼤）或黄⾊（颗粒⼩）的Cu2O沉淀。
实验⼆脂肪碘值的测定碘值（价）是指100g脂肪在⼀定条件下吸收碘的克数。
碘值是鉴别脂肪的⼀个重要常数，可⽤以判断脂肪所含脂肪酸的不饱和程度。
脂肪中常含有不饱和脂肪酸，不饱和脂肪酸具有⼀个或多个双键，能与卤素起加成作⽤⽽吸收卤素。
常⽤碘与脂肪中不饱和脂肪酸的双键起加成作⽤。
脂肪的不饱和程度越⾼，所含的不饱和脂肪酸越多，与其双键起加成作⽤的碘量就越多，碘值就越⾼。
故可⽤碘值表⽰脂肪的不饱和度。
I2+－CH=CH－－CHI－CHI－本实验⽤溴化碘(Hanus试剂)代替碘。
⽤⼀定量(必须过量)溴化碘和待测的脂肪作⽤后，⽤硫代硫酸钠滴定的⽅法测定溴化碘的剩余量，然后计算出待测脂肪吸收的碘量，求得脂肪的碘值。
加成作⽤：IBr+－CH=CH－－CHI－CHBr－剩余溴化碘中碘的释放：IBr + KI KBr + I2再⽤硫代硫酸钠滴定释放出来的碘：I2 +2Na2S2O3 2Na2S4O6+2NaI思考题：何谓空⽩溶液和空⽩实验？空⽩实验有何意义？在各种分析⽅法中，为消除⼲扰，⽤与测定试样时完全⼀致的条件进⾏测定的溶液。
生物化学实验
生物化学实验一、糖的颜色反应及还原作用实验一：糖的颜色反应实验1.1 莫氏实验一、目的掌握莫氏（molisch）实验鉴定糖的原理和方法。
二、原理糖经浓无机酸（浓硫酸、浓盐酸）脱水产生糠醛或糠醛衍生物，后者在浓无机酸作用下，能与α-萘酚生成紫红色缩合物，在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环，因此又称“紫环反应”，其反应如下图：利用这一性质可以鉴定糖。
三、实验器材1、棉花或滤纸。
2、吸管1.0ml(*4)、2.0ml(*1)。
3、试管1.5*15cm(*4)。
四、实验试剂1、莫氏试剂：称取α-萘酚5g，溶于95%乙醇并稀释至100ml。
此试剂需新鲜配置，并贮于棕色试剂瓶中。
2、1%蔗糖溶液：称取蔗糖1g，溶于蒸馏水并定容至100ml。
3、1%葡萄糖溶液：称取葡萄糖1g，溶于蒸馏水并定容至100ml.4、1%淀粉溶液：讲1g可溶性淀粉与少量冷蒸馏水混合溶液合成薄浆状物，然后缓缓倾入沸蒸馏水中，边加边搅。
最后以沸蒸馏水稀释至100ml。
五、操作于4支试管中，分别加入1ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液和少许纤维素（棉花或滤纸浸在1ml水中）。
然后各加莫氏试剂2滴1，摇匀，讲试管倾斜，沿管壁慢慢加入浓硫酸1.5ml(切勿振摇！)硫酸层沉于试管底部与糖溶液分成两层，观察液面交界处有无紫色环出现。
六、注意事项1、试管中加入各种糖后，应做好标记，浓硫酸加入的方式应保持一致。
2、莫氏反应非常灵敏，所用的试剂应洗净，不可再样品中混入纸屑等杂物。
3、当糖浓度过高时，由于浓硫酸对他的焦化作用，将呈现红色及褐色而不呈现紫色，需稀释后再做。
思考题：1、解释α-苯酚反应的原理。
2、用莫氏试验鉴定糖时需注意哪些？试验1.2 塞氏试验一、目的掌握塞氏（Seliwanoff）实验鉴定酮糖的原理和方法。
二、原理酮糖在浓酸的作用下，脱水生产5-羟甲基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色反应，有时亦同时产生棕色沉淀，此沉淀溶于乙醇，呈鲜红色沉淀2，以果糖为例，其反应如下：三、实验器材1、吸管0.5ml(*3)、5.0ml(*1)。
生物化学实验
3、显色剂50～100mL
1.1％水合茚三酮正丁醇溶液。
五、操作
1.将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中。
2.取层析滤纸(长22cm、宽14 cm)一张。在纸的—端距边缘2～3cm处用用铅笔划一条直线，在此直线上每间隔2cm作一记号如图。
5.显色用喷雾器均匀喷上O.1％茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5分钟(100℃)或用热风吹干即可显出各层析斑点。
6.计算各种氨基酸的只Rf值。
思考题
1、何谓纸层析法?
2、何谓片Rf值?影响Rf值的主要因素是什么?
3、怎样制备扩展剂?
4、层析缸中平衡溶剂的作用是什么？
实验二小麦萌发前后淀粉酶活力的比较
实验一纸层析法分离鉴定氨基酸
一、目的
通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。
二、原理
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。
层析溶剂由有机溶剂和水组成。
物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值(比移)来表示的：
…
在一定的条件下某种物质的只Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。
休眠种子的淀粉酶活力很弱，种子吸胀萌动后，酶活力逐渐增强，并随着发芽天数增加而增加。
本实验观察小麦种子萌发前后淀粉酶活力的变化。
三、器材
1.25mL刻度试管 2. 吸管
3.离心管 4.乳钵
5.分光光度计 6.恒温水浴
7.离心机
四、试剂和材料
1、小麦种子
2、o.1％标准麦芽糖溶液
生物化学课内实践教学(3篇)
第1篇一、前言生物化学作为一门研究生物体内化学反应及其调控规律的学科，在生命科学领域具有极其重要的地位。
为了让学生更好地理解和掌握生物化学的理论知识，提高学生的实验技能和科学素养，我们开展了生物化学课内实践教学活动。
本文将对本次实践教学进行总结和分析。
二、实践内容1. 蛋白质鉴定实验（1）实验目的：掌握蛋白质的鉴定方法，了解蛋白质在生物体内的作用。
（2）实验原理：蛋白质具有特定的氨基酸序列，通过特定的化学反应，可以产生具有特定颜色的化合物，从而实现对蛋白质的鉴定。
（3）实验步骤：①制备蛋白质样品；②加入双缩脲试剂，观察颜色变化；③加入Folin-酚试剂，观察颜色变化；④计算蛋白质含量。
2. 酶活性测定实验（1）实验目的：掌握酶活性测定的方法，了解酶在生物体内的作用。
（2）实验原理：酶活性是指酶催化特定反应的能力，通过测定酶催化反应的速度，可以评估酶的活性。
（3）实验步骤：①制备酶反应体系；②测定酶催化反应的速度；③计算酶活性。
3. 核酸提取实验（1）实验目的：掌握核酸提取的方法，了解核酸在生物体内的作用。
（2）实验原理：核酸是生物体内的重要遗传物质，通过特定的方法可以将核酸从细胞中提取出来。
（3）实验步骤：①破碎细胞；②提取核酸；③检测核酸。
4. 脂质分离实验（1）实验目的：掌握脂质分离的方法，了解脂质在生物体内的作用。
（2）实验原理：脂质具有不同的极性，可以通过特定的方法将其分离。
（3）实验步骤：①制备脂质样品；②加入氯仿，观察分层现象；③分离脂质。
三、实践总结1. 通过本次实践教学，我们掌握了蛋白质、酶、核酸和脂质的鉴定、提取和分离方法，提高了我们的实验技能。
2. 在实验过程中，我们学会了如何设计实验方案、操作实验仪器和记录实验数据，为今后的科研工作打下了基础。
3. 通过实验，我们深入了解了生物体内化学反应及其调控规律，增强了我们对生物化学理论知识的理解。
四、实践反思1. 实验过程中，我们发现部分同学对实验原理掌握不牢固，导致实验结果不准确。
生物化学实验报告
生物化学实验报告实验目的，通过本次实验，掌握生物化学实验的基本方法和技能，了解生物化学实验的原理和应用，提高实验操作能力和实验结果分析能力。
实验原理，生物化学实验是利用生物化学原理和方法，对生物体内的化学成分和代谢过程进行研究的实验。
其中包括蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子的分离、鉴定和定量分析。
实验材料和仪器，本次实验所需材料包括，蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子样品；试剂，酚酞、硫酸、氢氧化钠、蛋白质定性试剂、酶定性试剂等；仪器，分光光度计、离心机、电泳仪、显微镜等。
实验步骤：1. 蛋白质的定性实验，取少量蛋白质样品，加入蛋白质定性试剂，观察颜色变化并记录结果。
2. 核酸的定性实验，取少量核酸样品，加入核酸定性试剂，观察颜色变化并记录结果。
3. 酶的定性实验，取少量酶样品，加入酶定性试剂，观察反应情况并记录结果。
4. 碳水化合物的定性实验，取少量碳水化合物样品，加入酚酞试剂，观察颜色变化并记录结果。
5. 生物分子的定量分析，利用分光光度计、离心机、电泳仪等仪器，对生物分子进行定量分析。
实验结果分析，根据实验结果，可以对样品中的蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子进行鉴定和定量分析，从而了解生物体内的化学成分和代谢过程。
实验结论，通过本次实验，掌握了生物化学实验的基本方法和技能，了解了生物分子的定性和定量分析方法，提高了实验操作能力和实验结果分析能力。
实验意义，生物化学实验是生物化学理论与实践相结合的重要环节，通过实验可以加深对生物化学原理和方法的理解，为今后的科研工作和实验教学提供了重要的基础。
在本次实验中，我们不仅学会了生物分子的定性和定量分析方法，还培养了实验操作能力和实验结果分析能力，为今后的科研工作和实验教学打下了良好的基础。
通过本次实验，我们对生物化学实验的原理和应用有了更深入的了解，提高了实验操作能力和实验结果分析能力，为今后的科研工作和实验教学打下了良好的基础。
生物化学实验(整理版)
生物化学实验（整理版）一、实验目的1. 了解生物化学实验的基本原理和方法。
2. 掌握实验操作技能，提高实验技能。
3. 培养科学探究能力，提高分析问题和解决问题的能力。
4. 深入了解生物体的化学组成、结构、功能及其相互关系。
二、实验内容1. 氨基酸的分离与鉴定2. 蛋白质的结构与性质3. 酶的催化作用与活性测定4. 糖类的分离与鉴定5. 脂类的提取与鉴定6. 核酸的分离与鉴定7. 代谢途径的探究三、实验操作1. 实验前的准备工作：了解实验原理、实验目的、实验步骤、实验所需试剂和仪器等。
2. 实验过程中的注意事项：严格按照实验步骤进行操作，注意实验安全，保持实验环境的整洁。
四、实验报告1. 实验报告的格式：包括实验目的、实验原理、实验步骤、实验结果、实验讨论、实验结论等部分。
2. 实验报告的要求：内容完整、条理清晰、数据准确、分析深入、讨论充分、结论明确。
五、实验拓展1. 结合实验内容，查阅相关文献，了解生物化学领域的最新研究进展。
2. 尝试设计新的实验方案，对生物化学现象进行深入探究。
3. 参加学术讲座、研讨会等活动，拓宽生物化学知识面。
生物化学实验（整理版）一、实验目的1. 了解生物化学实验的基本原理和方法。
2. 掌握实验操作技能，提高实验技能。
3. 培养科学探究能力，提高分析问题和解决问题的能力。
4. 深入了解生物体的化学组成、结构、功能及其相互关系。
二、实验内容1. 氨基酸的分离与鉴定2. 蛋白质的结构与性质3. 酶的催化作用与活性测定4. 糖类的分离与鉴定5. 脂类的提取与鉴定6. 核酸的分离与鉴定7. 代谢途径的探究三、实验操作1. 实验前的准备工作：了解实验原理、实验目的、实验步骤、实验所需试剂和仪器等。
2. 实验过程中的注意事项：严格按照实验步骤进行操作，注意实验安全，保持实验环境的整洁。
四、实验报告1. 实验报告的格式：包括实验目的、实验原理、实验步骤、实验结果、实验讨论、实验结论等部分。
生物化学实验
生物化学实验一、糖的颜色反应及还原作用实验一：糖的颜色反应实验1.1 莫氏实验一、目的掌握莫氏（molisch）实验鉴定糖的原理和方法。
二、原理糖经浓无机酸（浓硫酸、浓盐酸）脱水产生糠醛或糠醛衍生物，后者在浓无机酸作用下，能与α-萘酚生成紫红色缩合物，在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环，因此又称“紫环反应”，其反应如下图：利用这一性质可以鉴定糖。
三、实验器材1、棉花或滤纸。
2、吸管1.0ml(*4)、2.0ml(*1)。
3、试管1.5*15cm(*4)。
四、实验试剂1、莫氏试剂：称取α-萘酚5g，溶于95%乙醇并稀释至100ml。
此试剂需新鲜配置，并贮于棕色试剂瓶中。
2、1%蔗糖溶液：称取蔗糖1g，溶于蒸馏水并定容至100ml。
3、1%葡萄糖溶液：称取葡萄糖1g，溶于蒸馏水并定容至100ml.4、1%淀粉溶液：讲1g可溶性淀粉与少量冷蒸馏水混合溶液合成薄浆状物，然后缓缓倾入沸蒸馏水中，边加边搅。
最后以沸蒸馏水稀释至100ml。
五、操作于4支试管中，分别加入1ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液和少许纤维素（棉花或滤纸浸在1ml水中）。
然后各加莫氏试剂2滴1，摇匀，讲试管倾斜，沿管壁慢慢加入浓硫酸1.5ml(切勿振摇！)硫酸层沉于试管底部与糖溶液分成两层，观察液面交界处有无紫色环出现。
六、注意事项1、试管中加入各种糖后，应做好标记，浓硫酸加入的方式应保持一致。
2、莫氏反应非常灵敏，所用的试剂应洗净，不可再样品中混入纸屑等杂物。
3、当糖浓度过高时，由于浓硫酸对他的焦化作用，将呈现红色及褐色而不呈现紫色，需稀释后再做。
思考题：1、解释α-苯酚反应的原理。
2、用莫氏试验鉴定糖时需注意哪些？试验1.2 塞氏试验一、目的掌握塞氏（Seliwanoff）实验鉴定酮糖的原理和方法。
二、原理酮糖在浓酸的作用下，脱水生产5-羟甲基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色反应，有时亦同时产生棕色沉淀，此沉淀溶于乙醇，呈鲜红色沉淀2，以果糖为例，其反应如下：三、实验器材1、吸管0.5ml(*3)、5.0ml(*1)。
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本科生实验报告实验课程学院名称专业名称学生姓名学生学号指导教师实验地点实验成绩二〇一五年月二〇一五年月实验一氨基酸的分离鉴定----纸层析法一、实验目的通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及实验方法。
二、实验原理纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。
滤纸纤维上的羟基具有亲水性，因此吸附一层水作为固定相，而通常把有机溶剂作为流动相。
纸层析法是根据不同氨基酸在两相间的分配比不同而进行分离的：在固定相分配的比例大的氨基酸，随流动相移动的速度慢，而在流动相分配的比例大的则随流动相流动的速度快。
层析溶剂由有机溶剂和谁组成。
物质被分离后用比移值（Rf值）来衡量各组分的分离情况，如图所示。
根据图得到：Rf=a\b其中：a为原点到层析点中心的距离（cm），b为原点到溶剂前沿的距离（cm）。
在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。
Rf值最大等于1，即该组分随溶剂一起上升，Rf值最小等于0，即该组分基本上留在原点不动。
Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和温度等因素有关。
本实验利用纸层析法分离氨基酸。
三、实验药品、实验器材1.扩展剂：将20mL正丁醇和5mL冰醋酸放入分液漏斗中，与15mL水混合，充分震荡，静置数分层后，放出下层水相。
取分液漏斗内的扩展剂约5mL置于小烧杯中作为平衡溶剂，其余的倒入杯中备用。
2.氨基酸溶液：赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液（各组分浓度均为0.5%），各5mL。
3.显色剂：0.1%水合茚三酮正丁醇溶液。
4.层析缸：毛细管，喷雾剂，培养皿，层析滤纸，分液漏斗，针，线。
四、实验方法1.将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中，使展开剂达到饱和。
2.取层析滤纸（长22cm，宽14cm）一张。
在纸的一端距边缘2cm处用铅笔画一条直线，在此直线上每间隔2cm作一记号。
3.点样：用毛细管将氨基酸样品分别点在这6个位置上，吹干后再点一次。
注意没点再纸上扩散的直径最大不超过3mm。
4.扩展：用线将滤纸沿长边缝成筒状，纸的两边不能接触。
将盛有约20mL扩展剂的培养皿迅速置于密闭的层析缸中，并将滤纸直立于培养皿中。
点样的一端在下，滤纸下端侵入扩展剂0.5cm为宜，并且注意扩展剂的页面需低于点样线1cm。
待溶剂上升15~20cm时即取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿界限，自然干燥或用热风吹干。
5.显色：层析滤纸用喷雾器均匀喷上0.1%茚三酮正丁醇溶液；然后置烘箱中烘烤5min（100）或用热风吹干即可先出各层析斑点。
6.计算各种氨基酸的Rf值。
7.注意事项：实验过程应带带胶手套，不可用手直接接触滤纸，以防止皮肤分泌物的污染。
五、实验记录与数据处理实验二蛋白质及氨基酸的呈色反应一、呈色反应蛋白质的呈色反应是由于蛋白质中某些氨基酸特殊集团与一定的化学试剂作用而呈现的各种颜色反应。
呈色反应不是蛋白质的专一反应。
蛋白质的呈色反应可作为检查蛋白质是否存在的参考。
由于不同的蛋白质中，氨基酸的种类及含量各不相同，而在某些蛋白质中还可能缺乏某种颜色反应的氨基酸，因此不但不同的蛋白质呈色反应的强度各不相同，而且有些呈色反应，某种蛋白质中可能不存在。
二、实验目的1、了解构成蛋白质的基本结构单位及主要链接方式。
2、了解蛋白质的某些氨基酸的呈色反应原理。
3、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。
三、双缩脲反应（一）实验原理将尿素加热至180度左右，生成双缩脲并放出一分子氨。
双缩脲在浓碱液中能与Cu2+ 结合生成紫色或者紫红色化合物，这一呈色反应称为双缩脲反应。
凡含有两个肽键（-CO-NH-)以上的化合物都有双缩脲反应，蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。
双缩脲反应不仅为含有两个以上肽键的物质所有，除肽键外，有些基团如含有一个肽键和一个-CS-NH2或-CH2-NH2或-CRH-NH2或-CH2-NH-CHNH2-CH2OH或-CHOHCH2NH2等基团的物质以及乙二酰二胺等物质也有此反应。
NH3也干扰此反应，因NH3与Cu2+生成暗蓝色的络离子Cu（NH3）42+干扰此反应。
因此，一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。
(二）实验药品①尿素②10%氢氧化钠溶液③1%硫酸铜溶液 ④2%卵清蛋白溶液 （三）实验方法1，取少量尿素结晶，放在干燥试管中。
用微火加热使尿素熔化。
熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。
冷却后，加10% NaOH 约1ml ，振荡混匀，再加1% 硫酸铜 1滴，再振荡。
观察出现的粉红颜色。
避免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。
,2，向另一试管加卵清蛋白溶液约 1ml 和10% NaOH 约2ml ，摇匀，再加1% 硫酸铜 2滴，随加随摇。
观察紫玫瑰色的出现。
四、茚三酮反应(一）实验原理凡含有自由氨基的化合物，如蛋白质，多肽，各种氨基酸（除脯氨酸，羟脯氨酸与茚三酮反应产生的黄色物质外）和伯胺化合物（包括氨）与茚三酮共热时，都能生成紫色化合物，这种反应称为茚三酮反应。
所有α—氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。
该反应十分灵敏，1∶1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。
茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。
反应机理如下：（二）实验药品1,、蛋白质溶液2%卵清蛋白或新鲜鸡蛋清溶液（蛋清∶水=1∶9） 2、0.5%甘氨酸溶液3、0.1%茚三酮水溶液4、0.1%茚三酮-乙醇溶液（三）实验方法1、取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液1ml，再各加0.5ml0.1%茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1~2分钟，观察颜色由粉色变紫红色再变蓝。
2、在一小块滤纸上滴一滴0.5%甘氨酸溶液，风干后，再在原处滴一滴0.1%茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色，观察紫红色斑点的出现。
（四）实验记录五、黄色反应（一）实验原理含有苯环结构的氨基酸，如络氨酸和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化成黄色物质，该化合物在碱性溶液中进一步形成深橙色的硝醌酸钠。
反应式如下：苯酚硝基酚（黄色）邻硝醌酸钠（橙黄色）多数蛋白质分子含有带苯环的氨基酸，所以都会发生黄色反应。
苯丙氨酸不易硝化，需加少量浓硫酸后才能够发生黄色反应。
（二）实验药品①鸡蛋白溶液100ml:讲鲜鸡蛋的蛋白与蒸馏水按1：20混匀后，用六层纱布过滤；②大豆提取液100ml：将大豆浸泡充分吸胀后研磨成浆状用纱布过滤；③头发；④指甲；⑤ 0.5%苯酚溶液；⑥浓硝酸；⑦0.3%色氨酸溶液；⑧0.3%酪氨酸溶液；⑨10%氢氧化钠溶液；（三）实验方法按下表所示顺序和剂量向7个试管中分别加入试剂，观察各管出现的现象，有的试管反应慢可略放置或用微火加热。
待各管出现黄色后，于室温下逐滴加入10%氢氧化钠溶液至碱性，观察颜色变化。
蛋白质和氨基酸的黄色反应实验（四）实验记录六、坂口反应（一）实验原理1、 精氨酸和许多胍代化合物与，α－萘酚在碱性次溴酸钠溶液中发生反应，产生红色物质。
精氨酸是唯一呈正反应的氨基酸，反应极为灵敏，该反应可用于定性鉴定含有精氨酸的蛋白质和定量测定精氨酸。
（二）实验药品（1）0.3%精氨酸溶液10mL（2）蛋白质溶液100mL（配法见黄色反应）（3）20%氢氧化钠溶液100mL（4）1% α－萘酚－乙醇溶液20mL（临用时配制）（5）次溴酸钠溶液10mL（三）实验方法本实验十分灵敏。
α－萘酚要过量。
次溴酸钠及蛋白质均不可过多，过多的次溴酸钠可继续氧化有色物质使其颜色消失。
分别按下表所示顺序和剂量向各试管中加入试剂，记录出现的现象。
七、乙醛酸反应（一）反应原理在浓硫酸存在的情况下，色氨酸与乙醛酸反应生成自身物质，反应机理尚不清楚，可能是一分子乙醛酸与两分子色氨酸脱水缩合形成与靛蓝相似的物质。
含有色氨酸的蛋白质也有此反应。
（二）实验药品1．鸡蛋白溶液（鸡蛋清：水=1：20）；2．0.03%色氨酸溶液；3. 冰醋酸4. 浓硫酸（分析纯）（三）实验方法取3支试管编号。
分别按表所示顺序和剂量加入鸡蛋白溶液、色氨酸溶液和水，然后各加入冰醋酸2ml，混匀后倾斜试管，沿管壁分别缓缓加入浓硫酸约1ml，静置。
观观察各管液面间紫色环的出现。
若不明显，可于水浴中微热（注意本实验极为灵敏，色氨酸和蛋白质的量不宜过多）。
（四）实验记录八、偶氮反应（一）实验原理偶氮化合物与酚核或咪唑环结合产生有色物质。
它与络氨酸和组氨酸反应的产物分别为红色和樱桃红色。
含有络氨酸和组氨酸的蛋白质也有此反应。
（二）实验药品1.鸡蛋白溶液（鸡蛋清：水=1：1）；2.0.3%组氨酸溶液；3.0.3%络氨酸溶液；4.20%氢氧化钠溶液；5.重氮试剂：溶液A：取5g亚硝酸钠溶于1000ml水中。
溶液B：取5g对氨基本磺酸溶于900ml水中，溶解后，再加入5ml浓硫酸，然后定容至1000ml。
溶液A、B分别保存在密闭瓶中，用时以等体积混合。
（三）实验方法取三支试管编号。
按表2-4所示顺序和剂量加入试剂，并观察产物的形成。
九、醋酸铅反应及亚硝基铁氰化钠反应（一）实验原理蛋白质分子中常含有半胱氨酸和胱氨酸，含硫蛋白质在强碱条件下，可分解形成硫化钠。
硫化钠与醋酸铅反应生成黑色的硫化铅沉淀。
若加入浓盐酸，就生成有臭味的硫化氢气体（蛋白质和氨基酸对强碱稳定，不发生此反应）。
反应式如下：R-SH+2NaOH----R-OH+NaS+H2ONaS+Pb2+---PbS+2Na+PbS+2HCl---PbCl2+H2S含有巯基的半胱氨酸在碱性条件下与亚硝基铁氰化钠反应形成玫瑰色物质。
反应式如下：[Fe(CN)5NO]2-+SH----[Fe(CN)5NOSH]3-[Fe(CN)5NOSH]3---OH----[Fe(CN)5NOS]4-+H2O(二)实验药品1.50ml鸡蛋白溶液（鸡蛋清：水=1:1);2.0.3%半胱氨酸溶液；3.10%氢氧化钠溶液；4.浓盐酸；5.0.5%醋酸铅溶液；6.5%亚硝基铁氰化钠溶液；7.醋酸铅试纸：用10%醋酸铅水溶液浸泡滤纸条后晾干。
（三）实验方法1.向试管中加入0.5%醋酸铅溶液1ml，再加入10%氢氧化钠溶液至产生的沉淀完全溶解为止，摇匀，加入鸡蛋溶液（1：1）0.4ml，混匀小心加热，至溶液变黑后，加入浓盐酸数滴，嗅气味，并将湿润醋酸铅试纸置于管口，观察其颜色变化。
2.将一滴0.3%半胱氨酸溶液滴加在白瓷盘中，加10%的氢氧化钠三滴，再滴加5%亚硝基铁氰化钠溶液3滴，观察玫瑰红颜色的生成（此颜色不稳定，很快消失）。