水中大肠菌群的检测
水中总大肠菌群检测方法
水中总大肠菌群检测方法
水中总大肠菌群检测一般采用以下方法：
1. 高级培养基方法：将取样的水样加入适当的营养培养基中，培养出细菌，并计数大肠菌群的数量。
常用的培养基有大肠杆菌培养基、MacConkey培养基等。
2. 荧光定量PCR方法：通过PCR技术检测水中大肠菌群的DNA，使用荧光探针结构标记大肠杆菌特异性基因，通过测定荧光信号进行定量分析。
3. 流式细胞仪方法：将水样进行染色，然后通过流式细胞仪分析计数大肠菌群的数量。
常用的染色方法有DAPI染色法、荧光活菌染色法等。
4. 基于微生物生物传感器的方法：利用微生物细胞对特定细菌的识别和响应能力，设计合成生物传感器来监测水中大肠菌群的存在和数量。
以上方法可根据实际需要选择使用，各自具有不同的优缺点。
在进行水环境监测时，可以结合多种方法进行检测，以获得准确和可靠的结果。
多管发酵法测定水中大肠菌群
多管发酵法测定水中大肠菌群
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2）平皿分离（证实试验）
水中除大肠菌群外, 还有其它细菌可能引发 糖类发酵, 所以需要深入证实。
将初发酵管中已发酵菌液接种于伊红美兰 培养基, 37 ºC培养24 h, 依据菌落特征（带关键、 有金属光泽深紫色菌落）, 挑取可能为大肠菌 群菌落制片, 经革兰氏染色, 深入证实是否为大 肠菌群。
划线接种于伊红美蓝琼脂平板上, 再于37 ℃培养 18～24 h, 将符合以下特征菌落进行染色镜检。
深紫黑色, 有金属光泽； 紫黑色, 不带或略带金属光泽； 淡紫红色, 中心颜色较深。
多管发酵法测定水中大肠菌群
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（3）复发酵试验 将镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌菌株重复初
步发酵试验。并依据初发酵管试验阳性管查表, 即得大肠菌群数。
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二、试验原理
发酵法: 又称多管发酵法或三步发酵法
1) 初发酵（推测试验）:
将不一样稀释度水样，分别接种于 含有乳糖等糖类培养液中（3倍或1倍乳 糖液），经37 ºC培养24 h，观察产酸产 气情况，培养基内加有溴甲酚紫作为 PH指示剂，细菌产酸后，培养基即由 原来紫色变为黄色，以初步判断是否有 大肠管发酵法测定水中大肠菌群
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多管发酵法测定水中大肠菌群
一、试验目标 二、试验原理 三、试验材料 四、试验步骤 五、试验汇报
多管发酵法测定水中大肠菌群
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一、试验目标
1、学习测定水中大肠菌群数量多管发酵法。 2.了解大肠菌群数量在饮水中主要性。
多管发酵法测定水中大肠菌群
多管发酵法测定水中大肠菌群
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10ml×100 1ml×100 1ml×10-1 1ml×10-2
3×
水中大肠菌群的检测
水中大肠菌群的检测法——（多管发酵法）一、实验原理大肠菌群是评价水质好坏的一个重要的卫生指标，也是反映水体被生活污水污染的一项重要监测项目。
大肠菌群是一群以大肠埃希氏菌（Escherichia coli）为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，在37℃生长时，能在48小时内发酵乳糖并产酸产气。
我国生活饮用水卫生标准中规定一升水样中总大肠菌群数不超过三个。
多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。
发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管。
乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。
本实验为精简实验，所以省略了平板分离和复发酵试验后两部分，直接通过第一部分初发酵试验的颜色变化进行判断是否存在大肠菌群。
初发酵试验水样接种于发酵管内，37℃下培养，24小时内小套管中有气体形成，并且培养基混浊，颜色改变，说明水中存在大肠菌群，为阳性结果。
48小时后仍不产气的为阴性结果。
二、实验器材1.水样中心湖的湖水2．试剂三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管3．仪器及其它用品移液枪，16支试管（16支德汉氏小套管）三、实验步骤初发酵试验取16支发酵管，其中10支用移液管加入10ml一倍的乳酸蛋白胨培养液，5支加入5ml三倍乳糖蛋白胨培养液，1支加入9ml自然水。
然后往16支试管各倒置一支汉氏小套管。
完成后包装好，于121℃高压灭菌锅中灭菌30min 左右。
将取回来的中心湖水样稀释20倍。
待试管冷却后，在无菌操作条件下，向装有三倍的乳酸蛋白胨培养液的5支试管加入10ml水样，向装有一倍的乳糖蛋白胨培养液的5支试管中加入1ml水样，向装有一倍的乳酸蛋白胨培养液的另5支试管中加入1ml 10-1水样。
将各试管充分混均，置于37℃恒温箱中培养24h。
四、实验结果同时观察其他两组也是用中心湖水样的，其结果全都是显示为黄色。
初步得出，取回来的水样的大肠菌群严重超标，比检测表的上限还要高，已经失去检测的意义了。
水中耐热大肠菌群检测方法
水中耐热大肠菌群检测方法水中耐热大肠菌群检测是一种用于评估水质和判断水域环境卫生安全的重要方法。
下面是关于水中耐热大肠菌群检测的10条基本信息以及详细描述：1. 流式细胞术：流式细胞术是一种通过将水样中的细菌标记并通过流式细胞仪进行检测和计数的方法。
适用于快速分析水样中的大肠菌群含量。
2. 膜过滤法：膜过滤法通过将水样通过膜滤器，筛选并集落大肠菌群，并在适当的培养基上进行培养，可用于定量检测水样中的大肠杆菌。
3. PCR技术：PCR技术通过引物对大肠菌群的DNA进行扩增，从而快速检测水样中的大肠菌群的数量和种类。
可以利用PCR技术进行快速筛选和检测水质。
4. 培养方法：传统的培养方法通过将水样中的细菌在适当的培养基上进行培养，进行形态和生理特性的观察，并通过计数菌落形成单位(CFU)来评估水样中大肠菌群的含量。
5. 颜色指示法：这种方法通过将水样与专门的指示剂配合使用，观察颜色变化以识别大肠菌群污染。
可以通过比较颜色的深浅程度来估计水样中大肠菌群的含量。
6. 微生物生化方法：利用大肠菌群的特定生化反应，如气体产生、酶反应等来判断水样中是否存在大肠菌群污染。
适合用于水样中大肠菌群含量的快速筛查。
7. 荧光显微镜技术：荧光显微镜技术利用特定的荧光探针标记细菌，通过显微镜观察细菌的形态和分布情况，可以用来定性检测大肠菌群。
8. 免疫学检测方法：免疫学检测方法通过检测水样中的大肠菌群特异性抗原或抗体来判断细菌的存在与否。
可以利用快速免疫层析法或ELISA法进行大肠菌群的快速检测。
9. 流动细胞技术：流动细胞技术将水样通过流动细胞仪，利用荧光标记的细胞特异性探针检测水中的大肠菌群。
可用于快速检测水质中大肠菌群的含量和分布。
10. 分子生物学方法：分子生物学方法可以通过分析水样中的DNA或RNA序列，利用特定的引物对大肠菌群进行特异性检测。
使用16S rRNA基因扩增子测序技术可以鉴定水样中的大肠菌群种类和丰度。
水中大肠菌群的测定
实验水中大肠菌群的测定及结果分析一、目的要求1、学习测定水中大肠菌群检测程序、方法.2、掌握大肠菌群检测结果的报告方式.二、实验原理大肠菌群是评价水质好坏的一个重要的卫生指标,也是反映水体被生活无水污染的一项重要监测项目。
大肠菌群是一群以大肠埃希氏菌为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌,在37℃生长时，能在48小时发酵乳糖并产酸才产气。
食品中大肠菌群数是以每100mL（g)检样内大肠菌群最近似数(The most probable number，简称MPN）表示。
据此含义，所有食品卫生标准中所规定的大肠菌群均以100mL(g）食品内允许含有大肠菌群的实际数值为报告标准。
检查大肠菌群数,一方面能表明食品中有无粪便污染，另一方面还可以根据数量的多少，判定食品受污染的程度。
我国生活饮用水卫生标准中规定一升水样中总大肠菌群数不超过3个。
多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。
发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管.乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。
三、实验器材1、培养基：乳糖胆盐发酵管、伊红美蓝琼脂、乳糖发酵管2、器皿：1ml吸管、10ml吸管、试管（15×150）、三角锥瓶500ml、三角锥瓶500ml（内装蒸馏水250ml）3、其他：酒精灯，牛皮纸或报纸,棉花，高压蒸汽菌锅，水浴锅，显微镜，香柏油，二甲苯等四、操作方法1、水样的采取池水、河水或湖水应取距水面10—15㎝的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中,然后翻转过来,除去玻璃塞，水即流入瓶中,盛满后,将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查,否则需放入冰箱中保存.2、检样稀释（1)以无菌操作，将检样25mL放于含有225mL灭菌蒸馏水水的三角锥瓶中，摇匀,做成1：10的均匀稀释液。
(2）取一支lmL吸管插入吸取1∶10稀释液1mL注入含有9mL灭菌水的试管内，振摇试管,混合均匀，做成1∶100稀释液。
水中大肠菌群的测定
实验三（设计性）：九龙江水大肠菌群的测定XXX（学校系别班级学号）摘要：所谓大肠菌群，是指在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌的总称。
水的大肠菌群数是指100mL水检样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群最近似数(MPN)表示。
水中大肠菌群的检验方法，常用多管发酵法和滤膜法。
多管发酵法可运用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要时间长。
滤膜法仅适用于自来水和深井水，操作简单、快速，但不适用于杂质较多、易于阻塞滤孔的水样。
关键词：大肠肝菌群、江水、测定THE DETERMINATION OF COLIFORM BACTERIA IN JIULONG RIVERXXX(09food science in Biology Department, ZhangZhou Normal University 091304103) Abstract:Coliform bacteria, the generic terms of amphimicrobian, Gram-negative and non-spore-bearing bacillus which can ferment lactose to produce acid and gas at 37℃ in 24 hours. Coliform bacteria in water is the actual numerical value of escherichia coli in 100mL tested water , is showed by the most approximate number(MPN) of coliform bacteria. The method of inspection of coliform bacteria in water ,always to be multibarrel fermentation and filtrer membrance. The method of multibarrel fermentation can use in the test of all kinds of water, but it is verbose and needs much time. The method of filtrer membrance just applicables to tap water and deep well water,it is easy and fast to operate, but it is not suitable for the water which has much impurity and is easy to block filtration pore.Key word:coliform bacteria、water in river、determination水中的病原菌多数来源于病人与病畜的粪便。
水的大肠菌群检测方法
水的大肠菌群检测方法水是生命的重要组成部分，也是人类日常生活中不可或缺的资源。
然而，水源的安全性和水质的卫生问题一直备受关注。
其中，水中的大肠菌群含量是衡量水质卫生程度的重要指标之一、大肠菌群是指肠道中的一类细菌，其中的分支肠杆菌是最常见的一种。
高含量的大肠菌群在水中存在，可能表明水源受到了粪便或下水道污染。
因此，检测水的大肠菌群含量对评估水源卫生问题至关重要。
以下是一些常见的水的大肠菌群检测方法：1. 集菌法（Most Probable Number Method，MPN）：这是一种传统的大肠菌群检测方法，常用于饮用水和游泳池水的监测。
该方法通过在不同稀释度的水样中进行培养，并观察菌落形成的情况来估算大肠菌群的含量。
这种方法的优点是简单易行，可以适用于一定量的水样，但需要较长的培养时间和专业实验室。
2. 膜过滤法（Membrane Filtration Method）：这是一种常用的水质检测方法，也常用于大肠菌群的检测。
该方法通过过滤水样，将其中的微生物捕捉在膜上，然后将膜转移到含有营养物质的培养基上进行培养。
通过计数培养基上的菌落数量，可估算出水样中的大肠菌群含量。
这种方法的优点是可以对大体积的水样进行检测，并且具有较高的准确性和灵敏度。
3. PCR法（Polymerase Chain Reaction）：PCR法是一种基于DNA分子的检测方法，可以快速检测和测定大肠菌群的含量。
该方法通过提取水样中的DNA，然后使用特定的引物和DNA聚合酶，在反应管中进行一系列温度变化的循环，扩增目标DNA片段。
最后通过凝胶电泳等技术，可以直接观察到扩增产物，从而判断水样中的大肠菌群含量。
PCR法具有高效快速、高灵敏度和高特异性等优点。
同时，PCR法还可以结合实时荧光定量PCR技术，通过测量荧光强度来定量水样中的大肠菌群含量。
4. 流式细胞仪法（Flow Cytometry Method）：流式细胞仪是一种高效、灵敏的细胞计数和分类技术。
实验十水中大肠菌群含量测定
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复发酵实验结果----产酸、产气
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五、实验报告
（1）自来水 100ml水样的阳性管数是多少？ 10ml水样的阳性管数是多少？ 查表ⅪⅤ-2得每升水样中大肠菌群数是多少？ （2）池水、河水或湖水 阳性结果记“+”；阴性结果记“-”。 查表ⅪⅤ-3得每升水样中大肠菌群数是多少？ 查表ⅪⅤ-4得每升水样中大肠菌群数是多少？
2、仪器或其他用具 载玻片，灭菌带玻璃塞 空瓶，灭菌吸管，灭菌试管等。
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四、操作步骤
1．水样的采取 1)自来水 先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌， 再开放水龙头使水流5min后，以灭菌三角烧瓶接 取水样，以待分析。 2）池水、河水或湖水 应取距水面10～15cm的 深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸 入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入 瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出。最 好立即检查，否则需放入冰箱充分冷却。
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六、思考题
（1）大肠菌群的定义是什么？ （2）为什么要选择大肠菌群作为水源被肠 道病原菌污染的指示菌？ （3）EMB培养基含有哪几种主要成分？ 在检查大肠菌群时，各起什么作用？ （4）经检查，水样是否合乎饮用标准？
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（a）深紫黑色、有金属光泽。
（b）紫黑色、不带或略带金属光泽。
（c）淡紫红色、中心颜色较深。
（3）复发酵试验经涂片、染色、镜检，如为革兰 氏阴性无芽孢杆菌，则挑取该菌落的另一部分， 重新接种于普通浓度的乳糖蛋白胨发酵管中，每 管可接种来自同一初发酵管的同类型菌落1～3个， 37℃培养24小时，结果若产酸又产气，即证实 有大肠菌群存在。
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水中大肠菌群的检测法
——（多管发酵法）一、实验原理
大肠菌群是评价水质好坏的一个重要的卫生指标，也是反映水体被生活污水污染的一项重要监测项目。
大肠菌群是一群以大肠埃希氏菌（Escherichia coli）为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，在37℃生长时，能在48小时内发酵乳糖并产酸产气。
我国生活饮用水卫生标准中规定一升水样中总大肠菌群数不超过三个。
多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。
发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管。
乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。
本实验为精简实验，所以省略了平板分离和复发酵试验后两部分，直接通过第一部分初发酵试验的颜色变化进行判断是否存在大肠菌群。
初发酵试验
水样接种于发酵管内，37℃下培养，24小时内小套管中有气体形成，并且培养基混浊，颜色改变，说明水中存在大肠菌群，为阳性结果。
48小时后仍不产气的为阴性结果。
二、实验器材
1.水样
中心湖的湖水
2．试剂
三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管
3．仪器及其它用品
移液枪，16支试管（16支德汉氏小套管）
三、实验步骤
初发酵试验
取16支发酵管，其中10支用移液管加入10ml一倍的乳酸蛋白胨培养液，5支加入5ml三倍乳糖蛋白胨培养液，1支加入9ml自然水。
然后往16支试管各倒置一支汉氏小套管。
完成后包装好，于121℃高压灭菌锅中灭菌30min左右。
将取回来的中心湖水样稀释20倍。
待试管冷却后，在无菌操作条件下，向装有三倍的乳酸蛋白胨培养液的5支试管加入10ml水样，向装有一倍的乳糖蛋白胨培养液的5支试管中加入1ml水样，向装有一倍的乳
酸蛋白胨培养液的另5支试管中加入1ml 10-1水样。
将各试管充分混均，置于37℃恒温箱中
培养24h。
四、实验结果
同时观察其他两组也是用中心湖水样的，其结果全都是显示为黄色。
初步得出，取回来的水样的大肠菌群严重超标，比检测表的上限还要高，已经失去检测的意义了。
根据剩余两组行政楼旁水样的检测结果，只能得出我们所取水样的大肠菌群比行政楼旁的水样的超标还要来严重很多倍。
实际上，中心湖的水质要比行政楼旁边的小湖的水质要好很多。
所以我们有理由相信此水样不是来自中心湖的。
五、思考题
为什么要选择大肠菌群作为水源被肠道病原菌污染的指示菌
1.来历相关：大肠菌群与病原菌都是来自温血动物的肠道的，都是可以在其粪便中可以检
测出来的；
2.抗逆性一致：大肠菌群与病原菌对不利条件的承受力都是相同的，只要一方死亡，另一
方也必定会死亡。
所以只要是大肠菌群不能存活的地方，病原菌一定不会存活。
3.大肠菌群的检测较病原菌简易可靠：病原菌的数量要较大肠菌群的数量少很多，如果是
直接检测病原菌，比较困难，而且误差会很大。
大肠菌群出现频率高：大肠菌群经常会出现，但是病原菌不常出现，所以只要检测到大肠菌群没有出现，基本可以代表病原菌也是不存在的。
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