LB培养基中所用抗生素终浓度
抗生素筛选浓度
①以水为溶剂的抗生素贮存液应用0.22卩山滤器过滤除菌；
②用乙醇溶解的抗生素溶液无须过滤除菌；
③所有抗生素贮液都应放于不透光的容器中保存。
注意：镁离子是四环素的拮抗剂。
对于以四环素为筛选抗性的细菌，应使用不含镁离子的培养基，如LB 培养基。
下面是常用抗生素的贮液浓度及工作浓度
氨苄青霉素：贮液浓度50 mg/ml溶于水-20 C保存工作浓度20卩g/ml （严紧型质粒）60卩g/ml （松弛型质粒）
羧苄青霉素：贮液浓度50 mg/ml溶于水-20 C保存工作浓度20卩g/ml （严紧型质粒）60卩g/ml （松弛型质粒）
氯霉素：贮液浓度34 mg/ml溶于乙醇-20 C保存工作浓度25
卩g/ml （严紧型质粒）170卩g/ml （松弛型质粒）
卡那霉素：贮液浓度10 mg/ml溶于水-20 C保存工作浓度10
卩g/ml （严紧型质粒）50卩g/ml （松弛型质粒）
链霉素：贮液浓度50 mg/ml溶于水-20 C保存工作浓度10
卩g/ml （严紧型质粒）50卩g/ml （松弛型质粒）
四环素：贮液浓度5 mg/ml溶于乙醇-20 C保存工作浓度10
卩g/ml （严紧型质粒）50卩g/ml （松弛型质粒）质粒类型：。
LB培养基怎样配制
L B培养基怎样配制 IMB standardization office【IMB 5AB- IMBK 08- IMB 2C】L B培养基怎样配制LB一般被解释为Luria-Bertani，然而根据其发明人贝尔塔尼(GiuseppeBertani)的说法，这个名字来源于英语lysogenybroth，即溶菌肉汤。
LB培养基是近年来用于培养基因工程受体菌(大肠杆菌)的常用培养基之一。
LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称普通培养基，含有酵母提取物、胰化蛋白胨和NaCl。
酵母提取物：酵母经破壁后将其中蛋白质、核酸、维生素等抽提，再经生物酶解的富含小分子的氨基酸、肽、核苷酸、维生素等天然活性成分的淡黄色粉末，其中氨基酸含量30%以上，总蛋白50%以上，核苷酸10%以上，广泛用作生物培养基和食品调味品制造原料。
胰化蛋白胨：一种优质蛋白胨，是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，浓缩干燥而成的白色粉末，含有丰富的氮源、氨基酸等。
酵母提取物为微生物提供碳源、能源、磷酸盐、生长因子、维生素等;蛋白胨主要提供氮源;NaCl主要提供微生物生长环境(如渗透压)，其次是提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或垫以石棉网直接煮沸溶化。
琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。
固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
LB培养基配方(每升)酵母提取物5g胰化蛋白胨10g氯化钠10gNaOH调pH至，121℃、20min高压灭菌。
LB固体培养基LB培养基1L琼脂粉15gNaOH调pH至，121℃、20min高压灭菌。
有时需在培养基中添加抗生素，琼脂凝固点为40℃，所以添加抗生素最好在50～55℃。
LB培养基用途：用于一般细菌培养，特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养。
LB培养基怎样配制
LB培养基怎样配制之马矢奏春创作LB一般被解释为Luria-Bertani, 然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法, 这个名字来源于英语lysogeny broth, 即溶菌肉汤.LB培养基是近年来用于培养基因工程受体菌(年夜肠杆菌)的经常使用培养基之一.LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基, 有时又称普通培养基, 含有酵母提取物、胰化卵白胨和NaCl.酵母提取物：酵母经破壁后将其中卵白质、核酸、维生素等抽提, 再经生物酶解的富含小分子的氨基酸、肽、核苷酸、维生素等天然活性成份的淡黄色粉末, 其中氨基酸含量30%以上, 总卵白50%以上, 核苷酸10%以上, 广泛用作生物培养基和食品调味品制造原料.胰化卵白胨：一种优质卵白胨, 是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化, 浓缩干燥而成的白色粉末, 含有丰富的氮源、氨基酸等.酵母提取物为微生物提供碳源、能源、磷酸盐、生长因子、维生素等;卵白胨主要提供氮源;NaCl主要提供微生物生长环境(如渗透压), 其次是提供无机盐.在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂.琼脂在经常使用浓度下96℃时溶化, 一般实际应用时在沸水浴中或垫以石棉网直接煮沸溶化.琼脂在40℃时凝固, 通常不被微生物分解利用.固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的分歧而有所分歧.由于这种培养基多用于培养细菌, 因此, 要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性, 以利于细菌的生长繁殖.LB培养基配方(每升)酵母提取物 5g胰化卵白胨 10g氯化钠 10gNaOH调pH至7.0, 121℃、20min高压灭菌.LB固体培养基LB培养基 1L琼脂粉 15gNaOH调pH至7.0, 121℃、20min高压灭菌.有时需在培养基中添加抗生素, 琼脂凝固点为40℃, 所以添加抗生素最好在50～55℃.LB培养基用途：用于一般细菌培养, 特别用于分子生物学试验中年夜肠杆菌的保管和培养.LB培养基使用原理：卵白胨、酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;葡萄糖提供碳源;琼脂是培养基的凝固剂.LB培养基配制方法配制每升培养基, 应该在950 ml去液态lb培养基离子水中加入：胰化卵白胨10g 酵母提取物5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至1L.在15psi高压下蒸汽灭菌20min.2.抗生素的加入：高压灭菌后, 将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中, 待培养基温度降到55℃时(手可触摸)加入抗生素, 以免温渡过高招致抗生素失效, 并充沛摇匀.3.倒板：一般10ml倒1个板子.培养基倒入培养皿后, 翻开盖子, 在紫外下照10-15分钟.4.保管：用封口胶封边, 并颠倒放于4℃保管, 一个月内使用. 配400ml的话成份按比例减少就行了, pH还是要按规定的.。
常用培养基配制
Na3citrate x H2O
88.2 g
15 mM
H2O
至800 ml
1M HCl调节pH值至7.0
H2O
至1升
20X SSPE
/升
终1 X浓度
NaCl
175.3 g
150 mM
NaH2PO4xH2O
27.6 g
10 mM
Na2EDTA
7.4 g
10 mM
H2O
至800 ml
10 M NaOH调节pH值至7.4
/升
终1 X浓度
Na2HPO4x7H2O
64 g
47.8 mM
KH2PO4
15 g
22 mM
NaCl
2.5 g
8.6 mM
NH4
5 g
18.7 mM
添加剂
/升
终1 X浓度
抗生素(如果需要)
氨苄青霉素
50 µg/ml
氯霉素
20 µg/ml
卡那霉素
30 µg/ml
四环素
12 µg/ml
半乳糖苷(如果需要)
寡聚腺苷酸
oligo(dT)
寡聚脱氧胸苷酸
OMP
乳清苷(一磷)酸
Pi
无机磷酸
PAAG
聚丙烯酰胺凝胶
PAGE
聚丙烯酰胺凝胶电泳
PBS
磷酸盐缓冲液
PCR
聚合酶链式反应
PEI
聚乙烯亚胺
PEG
聚乙二醇
PIPES
哌嗪-1,4-二乙磺酸
PNK
多聚核苷激酶
pNPP
对硝基苯磷酸
poly(A)
多聚腺苷酸
poly(A)+
质粒转染实验步骤
质粒转染实验步骤质粒转染大肠杆菌材料试剂：胰化蛋白胨，酵母提取物，琼脂，NaCl，NaOH（调pH），氨苄青霉素，卡那霉素，质粒提取试剂盒仪器：高压灭菌锅，42℃恒温水浴锅，，恒温摇床（37℃,225rpm），无菌培养板，消毒1.5ml离心管，消毒枪头，无菌操作台实验步骤：1. LB 培养基的配制：在950 ml 去离子水中加入: 胰化蛋白胨10g 酵母提取物5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH 调pH 至7.0.用去离子水定容至1L.在15psi 高压下蒸汽灭菌20min. 固态培养基LB 固体培养基及倒板：（1）.配制：100mlLB 培养基加入1.5g 琼脂粉（2）.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB 固体培养基置与55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时（手可触摸）加入氨苄抗生素（终浓度为50 g/ml），以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。
（3）.倒板：一般10ml 倒1 个板子。
培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟。
（4）.保存：用封口胶封边，并倒置放于4℃保存，一个月内使用。
2. 从-70℃冰箱中取200 l 感受态细胞悬液，室温下使其解冻，解冻后立即置冰上。
3. 加入质粒DNA 溶液（含量不超过50ng，体积不超过10 l），轻轻摇匀，冰上放置30分钟后。
4. 42℃水浴中热击45s/90s，热击后迅速置于冰上冷却3-5 分钟。
5. 向管中加入1ml LB 液体培养基（不含Amp），混匀后37℃振荡培养1 小时，使细菌恢复正常生长状态，并表达质粒编码的抗生素抗性基因（Ampr ）。
6. 将上述菌液摇匀后取100 l 涂布于含Amp 的筛选平板上，正面向上放置半小时，待菌液完全被培养基吸收后倒置培养皿，37℃培养16-24 小时。
同时做两个对照：对照组1：以同体积的无菌双蒸水代替DNA 溶液，其它操作与上面相同。
此组正常情况下在含抗生素的LB 平板上应没有菌落出现。
细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法
细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法、常用培养基1、LB 培养基将下列组分溶解在0.9L 水中：蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用INNaOH （〜1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。
注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
2 、SOB 培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1mol/L 氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。
分成100ml的小份，高压灭菌。
培养基冷却到室温后，再在每100ml 的小份中加1ml 灭过菌的1mol/L 氯化镁。
3、SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml 灭过菌的1mol/L 氯化镁外，再加2ml 灭菌的1mol/L 葡萄糖（18g 葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。
4 、TB 培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。
冷却到60 C , 再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4 的溶液（2.31g 的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。
高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。
5、2X Y培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要用INNaOH (〜1ml )调整pH 至7.0，再补足水至1L 。
注：琼脂平板需添加琼脂粉 12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L 。
6、YPD 培 养基将下列组分溶解在 0.9L 水中： 蛋白胨 20g 酵母提取物 10g 葡萄糖 20g用水补足体积为 1L 后，高压灭菌。
建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基 添加1.6g 色氨酸，因为 YPD 培养基是色氨酸限制型培养基。
常用培养基配制
限制-修饰
rRNA
核糖体核糖核酸
RT
逆转录
RT-PCR
逆转录聚合酶链式反应
SAM
S-腺苷蛋氨酸
SAP
虾碱性磷酸酶
SDA
链置换扩增
/升
终1 X浓度
Na2HPO4x7H2O
64 g
47.8 mM
KH2PO4
15 g
22 mM
NaCl
2.5 g
8.6 mM
NH4
5 g
18.7 mM
添加剂
/升
终1 X浓度
抗生素(如果需要)
氨苄青霉素
50 µg/ml
氯霉素
20 µg/ml
卡那霉素
30 µg/ml
四环素
12 µg/ml
半乳糖苷(如果需要)
2.Sambrook, J., et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, A1.2-A2.12, 2001.
0.1% (w/v)
H2O
至1升
稀释溶液的pH至8.3
5X Tris-三(羟甲基)甲基甘氨酸-SDS电泳缓冲液
/升
终1 X浓度
普通使用的抗生素的贮液和工作液浓度
普通使用的抗生素的贮液和工作液浓度下面的内容摘自《分子克隆》第三版附录2①以水为溶剂的抗生素贮存液应用0.22 μm滤器过滤除菌；②用乙醇溶解的抗生素溶液无须过滤除菌；③所有抗生素贮液都应放于不透光的容器中保存。
注意：镁离子是四环素的拮抗剂。
对于以四环素为筛选抗性的细菌，应使用不含镁离子的培养基，如LB培养基。
下面是常用抗生素的贮液浓度及工作浓度氨苄青霉素贮液浓度 50 mg/ml 溶于水 -20℃保存工作浓度 20 μg/ml （严紧型质粒） 60 μg/ml （松弛型质粒）羧苄青霉素贮液浓度 50 mg/ml 溶于水 -20℃保存工作浓度 20 μg/ml （严紧型质粒） 60 μg/ml （松弛型质粒）氯霉素贮液浓度 34 mg/ml 溶于乙醇 -20℃保存工作浓度 25 μg/ml （严紧型质粒） 170 μg/ml （松弛型质粒）卡那霉素贮液浓度 10 mg/ml 溶于水 -20℃保存工作浓度 10 μg/ml （严紧型质粒） 50 μg/ml （松弛型质粒）链霉素贮液浓度 50 mg/ml 溶于水 -20℃保存工作浓度 10 μg/ml （严紧型质粒） 50 μg/ml （松弛型质粒）四环素贮液浓度 5 mg/ml 溶于乙醇 -20℃保存工作浓度 10 μg/ml （严紧型质粒） 50 μg/ml （松弛型质粒）利福平，Rifampicin (INN) 简写为Rif。
分子式：C43H58N4O12，相对分子质量为822.94022 [g/mol]。
化学名 3-[[(4-甲基-1-哌嗪基)亚氨基]甲基]-利福霉素利福平是一种半人工合成的抗生素，最初从地中海氏拟无枝菌酸菌（Amycolatopsis mediterranei）中获得。
利福平为利福霉素类半合成广谱抗菌药，对多种病原微生物均有抗菌活性。
该药对结核分枝杆菌和部分非结核分枝杆菌（包括麻风分枝杆菌等）在宿主细胞内外均有明显的杀菌作用。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
抗生素的贮液和工作液浓度
①以水为溶剂的抗生素贮存液应用
0.22 μm滤器过滤除菌；
②用乙醇溶解的抗生素溶液无须过滤除菌；
③所有抗生素贮液都应放于不透光的容器中保存。
注意：
镁离子是四环素的拮抗剂。
对于以四环素为筛选抗性的细菌，应使用不含镁离子的培养基，如LB培养基。
下面是常用抗生素的贮液浓度及工作浓度
氨苄青霉素贮液浓度50 mg/ml溶于水-20℃保存工作浓度20 μg/ml（严紧型质粒）60 μg/ml（松弛型质粒）
羧苄青霉素贮液浓度50 mg/ml溶于水-20℃保存工作浓度20 μg/ml（严紧型质粒）60 μg/ml（松弛型质粒）
氯霉素贮液浓度34 mg/ml溶于乙醇-20℃保存工作浓度25 μg/ml（严紧型质粒）170 μg/ml（松弛型质粒）
卡那霉素贮液浓度10 mg/ml溶于水-20℃保存工作浓度10 μg/ml（严紧型质粒）50 μg/ml（松弛型质粒）
链霉素贮液浓度50 mg/ml溶于水-20℃保存工作浓度10 μg/ml（严紧型质粒）50 μg/ml（松弛型质粒）
四环素贮液浓度5 mg/ml溶于乙醇-20℃保存工作浓度10 μg/ml（严紧型质粒）50 μg/ml（松弛型质粒）
质粒类型：
DNA construct
Plasmids
pUC vectors
pBluescript? vectors
pGEM? vectors
pTZ vectorsOrigin of Replication Copy number Classification pMB1*
ColE1
pMB1*
pMB1*500–700
300–500
300–400
>1000high copy
high copy
high copy
high copy
pBR322 and derivatives pMB1*
pACYC and derivativesp15A
pSC101 and derivatives pSC101
Cosmids
SuperCos
pWE15pMB1*
ColE115–20 10–12
~5
10-20
10-20low copy low copy very low copy low copy
low copy。