牛乳中氯霉素的检测
液相LC原理
系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、 记录仪等几部分组成。 储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液 经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固 定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具 有不同的分配系数, 被分离成单个组分依次从 柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电 信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。
气-质联用GC-MS和液-质联用 LC-MS
GC /MS法和LC /MS法集高效分离和结构鉴定 于一体, 成为复杂混合物中痕量组分定性和定 量的有力工具。 GC /MS技术能够非常准确地确证食品中残留的 氯霉素, 但样品处理过程中必须进行衍生化反 应, 使该方法的应用受到了限制。近年来LC /MS 仪器的普及率逐年提高, LC /MS 有逐渐取 代GC /MS, 成为确证氯霉素残留分析方法的趋 势。
LC检测CAP的特点
优点：CAP 都有很强的紫外吸收, 可以直 接用HPLC /UVD测定, 用C18柱, 样品制 备不需要衍生化过程, 操作简单。 缺点：UVD选择性较差, 具有紫外吸收的 杂质都会产生干扰,故此方法的检测限不 够理想。 措施：采用FIU检测器，其检测限可达 0.1Ug /L。
展望
我国是产奶大国，但奶品质量问题不断， 奶牛养殖过程中滥用CAP,成为一个严重 的安全问题。 由于我国尚未有成本较低、疗效较好的 能够完全替代氯霉素的药物产品, 氯霉素 依然会在部分地区被非法使用。
解决方案
加快新药开发, 提高养殖户的食品安全意 识, 合理用药。 政府加强对食品中氯霉素残留的检测与 监测。 开发其它一些廉价、简便的氯霉素残留 快速检测技术及产品, 以满足不同层次的 检测需求。
ELISA检测CAP的特点
优点：最低检测可达到0.02ug /kg左右， 方法灵敏度较高, 特异性强, 试样预处理 简单, 分析时间短, 也不需要复杂的仪器 设备, 使用方便。 缺点：由于抗体的批次不同, 测定结果可 能出现微小差异。
液相色谱法（LC）
根据检测器的不同，分为三种方法
高效液相色谱-二极管阵列法(HPLC-PDA) 高效液相色谱-荧光法( HPLC-FLU ) 高效液相色谱-紫外法(HPLC-UV)
氯霉素曾经作为兽药使用
氯霉素在动物中的应用是很有吸引力的，因为 动物对它有良好的耐受性，而且氯霉素在组织 和体液中有良好的分布，半衰期长，而且价格 便宜。
禁令
◇美国规定在动物性食品中不得检出氯霉素。 ◇欧盟已明文规定氯霉素不再作为兽药使用。 ◇香港卫生署也提出输港生牛奶中不能有抗生素残留
不含有抗生素残留的牛奶已 成为国际市场原料奶收购标准。
国家标准
2001年9月我国农业部发布了《无公害食 品生鲜牛奶》行业标准，这个标准对生 鲜牛乳的卫生指标明确不得检出抗生素。 2002年起国家禁止将氯霉素用于所有食 品动物。
牛奶中残留氯霉素的检测方法
竞争酶联免疫法 (ELISA) 气相色谱&质谱联用 (GS-MS) 高效液相色谱&质谱 联用(HPLC-MS) 高效液相色谱&荧光 检测法(HPLC-FL)
牛奶中残留氯霉素的检测
2011级食品工程 张韵
氯霉素（CAP）
氯霉素是一种广谱抗生素，它能够对人 类造成致命的血液疾病。如抑制人体骨 髓造血功能而引起再生障碍性贫血症和 粒状白细胞缺乏症等疾病。 因此当没有其他替代品可用的时候，才 会被应用作为治疗严重感染。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ霉素（CAP）
通常情况下，氯霉素 仅仅作为外用制剂使 用，比如氯霉素滴眼 液。
其中，美国FDA推荐 使用的确证方法是气 -质联用(GS-MS)和液 -质联用(HPLC-MS)
竞争酶联免疫法(ELISA)
利用抗体抗原反应。 微孔板包有氯霉素抗体，加入氯霉素标记物、 标准和样品溶液。游离氯霉素与氯霉素酶标记 物竞争氯霉素抗体。没有连接的酶标记物在洗 涤步骤中被洗去。将酶基质（过氧化尿素）和 发色剂（四甲基联苯胺）加入到孔中并孵育； 结合的酶标记物将无色的发色剂转化成蓝色的 产物。加入反应停止液后使颜色由蓝变为黄， 在450 nm处测量，吸光度与样品的氯霉素浓度 成反比。
结束语
提高国产奶制品质量任重道远，需要我们共同 的努力！
谢谢大家！
气相GC原理
气相色谱系统由惰性固体上涂着液体的 固定相和不断通过管柱的气体的流动相 组成。 利用固定相对样品中各组分吸附或溶解 能力不同，即各组分在固定相和流动相 分配系数的差别，从而达到分离的目的。
GC检测CAP的特点
采用样品提取后衍生化, 再用氮吹干、定 容的方法进行气相色谱检测。 优点：高分离效能、高选择性、高灵敏 度、快速、应用广。 缺点：氯霉素分子中含有硝基、羟基, 分 子极性大, 需繁琐的衍生化步骤。
DB51T 676-2007 牛奶中氯霉素残留检测方法-高效液相色谱-串联质谱(LC-MS-MS)法
ICS：65.020.30DB 备案号：四川省地方标准DB51/T 676—2007牛奶中氯霉素残留检测方法－高效液相色谱-串联质谱（LC-MS-MS）法Determination of chloramphenicol residues in milkby high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry目次前言 (II)1 范围 (1)2 规范性引用文件 (1)3 制样 (1)3.1 样品的制备 (1)3.2 样品的保存 (1)4 测定方法 (1)4.1 方法提要或原理 (1)4.2 试剂和材料 (1)4.3 仪器和设备 (2)4.4 测定步骤 (2)4.5 结果计算和表述 (3)5 检测方法灵敏度、准确度、精密度 (4)5.1 灵敏度 (4)5.2 准确度 (4)5.3 精密度 (4)附录 A （资料性附录）氯霉素特征离子质量色谱图、特征离子质谱图 (5)I前言本标准按GB/T1.1—2000 《标准的结构和编写规则》进行编制本标准附录是资料性附录本标准由四川省畜牧食品局提出并归口本标准由四川省质量技术监督局批准本标准起草单位：四川省兽药残留监控中心、四川省兽药监察所本标准主要起草人：彭莉、岳秀英、高岚、熊浩山、官艳丽、王海波、吴晓岚II牛奶中氯霉素残留检测方法－高效液相色谱-串联质谱（LC-MS-MS）法1 范围本标准规定了牛奶中氯霉素残留量检测的制样和高效液相色谱-串联质谱（LC-MS-MS）测定方法。
本标准适用于牛奶中氯霉素的残留量测定。
检出限为0.05µg/L。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
高效液相色谱_质谱_质谱联用法快速检测牛奶中的氯霉素_吴宇伉
0． 3
0
100． 0
0． 3
80． 0
20． 0
0． 3
80． 0
20． 0
0． 3
1． 2． 2 质谱条件 离子源： 电喷雾电离（ ESI） ； 扫描 方式： 负离子扫描； 监测模式： 多反应监测（ MＲM） ； 挥 发气温度： 350 ℃ ； 毛细管温度： 300 ℃ ； 鞘气： 13 L / min； 辅助气： 6 L / min； 喷雾电压： 2 500 V。氯霉素质谱分 析的条件参数见表 2。
时间（ min） 0． 00 0． 50 1． 50 2． 00 2． 50 4． 50 5． 00 6． 00
表 1 流动相成分梯度表
A（ % ）
B（ % ）
流速（ ml / min）
80． 0
20． 0
0． 3
80． 0
20． 0
ห้องสมุดไป่ตู้
0． 3
40． 0
60． 0
0． 3
5． 0
95． 0
0． 3
0
100． 0
度：
C
=1
000cV m
式中： C － 牛奶中氯霉素残留浓度，μg / kg； c － 测
定结果，μg / ml； V － 最后定容体积，0． 5 ml； m － 称取的
牛奶样品质量，1． 0000 g。
2结果
2． 1 测定范围与最低检出浓度 将逐级稀释的标准 系列工作液分别进样 5 μl，测定结果经线性回归，测 定范围为 0． 25 μg / kg ～ 1． 25 μg / kg。回归方程为 y = 0． 24625x + 0． 073069（ y 为峰面积； x 为浓度，ng / ml） ； 线性相关系数 r 为 0． 9978； 进空白样，以基线 3 倍噪 声值在标准曲线中查得结果计算，测得该方法检出限 为 0． 004 μg / kg。 2． 2 质谱条件的优化 首先采用 50 ng / ml 的氯霉素 标准溶液在负离子模式下进行母离子全扫描，确定氯 霉素的分子离子为 m / z 321． 0。按照欧盟委员会指令
ELISA法检测牛奶中氯霉素残留的前处理方法
１５０ １３２．７６ １５３．５２ １２８．８０ １３８．３６ １４６．５４ １６２．５５ １２９．２ｌ １４６．１０
表２ ２种前处理方法氯霉素的回收试验
添加 浓度实测浓度
（ｎｇ／ｋｇ）
查鳖！
回收率 平均回收率
（％）
（ｉ±５，％）
方法２
实测浓度 回收率 （ｎｇ／ｋｇ） （％）
ｓபைடு நூலகம்ｕｒｃｅｓ．
Ｋｅｙ Ｗｏｒｄ
ＥＵＳＡ：Ｓａｍｐｌｅ ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ；Ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ；Ｍｉｌｋ
氯霉素（Ｃｈｌｏｒｍｎｐｈｅｎｉｃｏｋ，ＣＡＰ）是针状或片状结晶，性质稳 定。微溶于水，易溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂，在酸性 或中性溶液中较稳定。作为一种高效广谱抗生素，ＣＡＰ经常用 于治疗奶牛的乳腺炎，在泌乳期使用，必将造成牛奶中ＣＡＰ的 残留…。虽然我国农业部在２００２年就发布公告禁止使用ＣＡＰ， 但仍有一些畜牧养殖户使用ＣＡＰ来治疗奶牛疾病。从上世纪 ７０年代ＣＡＰ残留分析方法建立以来，已经有微生物学方法、免 疫分析方法、色谱分析方法等忙Ｊ。酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ） 法口。在实验室操作中具有简单、快速、灵敏度较高、重复性好、 处理样品量大等优点，现在市场有试剂盒供应，可以直接用于生 产实践，适用于大规模ＣＡＰ残留筛选检测，在检测过程中样品 的前处理的是否得当将直接影响检测结果，为此，笔者专门针对
ＷＵ Ｌｉｎｇ—ｌｉｎｇ，心ＮＧ Ｎａｎ（Ｈａｎｇｚｈｏｕ Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ ａｎｄ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
１００２０，Ｃｈｉｎａ ｌ
Ａｂｓｔｒａｃｔ
Ｓａｍｐｌｅ ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｉｓ ａ ｐｉｖｏｔａｌ ｓｔｅｐ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ ｒｅｓｉｄｕｅ ｉｎ ｍｉｌｋ ｂｙ ＥＬＩＳＡ．，１１】ｉｓ
荧光衍生化法测定牛奶中氯霉素残留的研究_潘莹宇
摘 要: 研究氯霉素荧光衍生化反应的实验条件, 建立荧光分光光度法测定牛
奶中氯霉素残留的新方法。牛奶中的氯霉素, 用乙酸乙酯超声提取 3 次, 浓缩,
盐水溶解, 正己烷脱脂, 再经乙酸乙酯反萃取, 氮气吹干, 经还原, 用荧光胺衍
生化测定。氯霉素衍生化产物质量浓度在 12. 5~ 500 ngPmL 范围内, 相对荧光强
疫法、色谱法( 气相色谱、液相色谱、薄层色谱) 、质 谱联用法[ 3] 。而利用荧光分光光度法检测动物性 食品中氯霉素残留国内外未见报道。
荧光胺( 4- 苯基螺环- 呋喃- 2- ( 3H)- 1c酞烷- 3, 3c二酮, Fluorescamine) 本身无荧光, 水解产物亦无荧 光, 但能在温和条件下与伯胺反应得到强荧光产 物, 且仲胺不发生类似反应[ 4] 。氯霉素本身不发 荧光, 但其苯环上的硝基经还原为芳香伯胺与荧光 胺反应形成具有荧光的物质以达到痕量检测的目 的。据此, 建立了荧光衍生化法测定牛奶中氯霉素 残留的方法。
度) 。并按照下式计算样品中氯霉素的残留量: Qx = ( Q@ 2) PV
式中: Qx - 样品中 CAP 的残留量( ngPmL) ; Q- 样
品在标准曲线求得的质量浓度( ngPmL ) ; V - 牛奶 取样量( mL) 1. 2. 4 最佳反应条件的正交实验设计 在荧光衍 生化反应中, 影响 衍生化的主要因 素有溶液的酸 度、荧光胺的用量、反应所需时间等, 本文按三因素 三水平的正交设计考察最佳反应条件, 正交设计的 因素水平见表 1。 2 结果与讨论 2. 1 样品提取、净化条件的选择
因素 荧光胺( B) 用量 VPmL
0. 30 0. 40 0. 50
反应时间( C) tPmin 5 8 12
液相色谱串联质谱法检测乳制品中氯霉素的方法研究
乙酸 乙酯对样 品进行提取 ，再对３ 种 固相萃取柱净化效
（ 以上实际均为色谱纯 ，科密欧 ）；超纯水。
果进 行 比较 ，最终 确 定 适合 奶 制 品中氯 霉 素测 定 的最 佳 １ ． ２ 色谱 务件
净化方式。该方法样品处理简单 、准确度高 ，在针对奶 粉、婴幼儿配方奶粉 、液态奶等奶制品中氯霉素的检测
固相 萃 取 仪 ；分 析 天 平 ；旋 转 蒸 发 仪 ；氮 吹 仪 ；碎 裂 电压 ：１ ２ ５ Ｖ；氯 霉 素定 性 离 子对 ：ｍ／ ｚ ３ ２ １ ／ ２ ５ ７（ 碰 撞 电压 ５ Ｖ ），ｍ／ ｚ
国 ９ 卞 圈 ｔ Ｊ 奶 Ａ 斗 Ｉ １ ２ … ０ Ｉ １ Ｙ ３ ・ １ Ａ ０ Ｎ Ｄ Ｓ Ａ Ｆ Ｔ ｇ
口口 液相色谱 串联质 谱法检测乳制
口
厂 ＋ １
氯霉 素 的方法研 究
邢宇 ，郭丽娜 ，孙伟
（ 黑龙江省质量监督检测研 究院，哈尔滨 １ ５ ０ ０ ５ ０ ）
中图分类号 ：Ｔ Ｓ ２ ５ ２ ． ７ 文献标识码 ：Ａ 文章编号 ：１ ０ ０ ４ — ４ ２ ６ ４（ ２ ０ １ ３）１ ０ — ０ ０ ４ ６ — ０ ３
摘
要 ：本研 究建立 了液 态奶 、全脂奶粉 、婴 幼儿配方奶粉 中氯霉素 的液相 色谱 串联 质谱分析 法 ，采 用Ｃ１ ８
分 离柱 （ １ ５ （ ） Ｘ ４ ． ６ ０ ｍｍ ×５ １ ＂ １ ＂ １ ）、 乙腈 ： ０ ． １ ％甲酸 （ ３ ５： ６ ５ ）作为 流动相 ，对不 同的提取 方式 、不 同的净化
效 果 良好 ，可 用于乳 制 品 中氯霉 素 的检验 。
液 相条 件 ： 色 谱 柱 ：分 离 柱 Ｃ１ ８（ １ ５ ０×４ ． ６ ０ ｍｍ ｘ ５ ｕ ｍ，
Charm 氯霉素快速检测条-牛奶
配体免疫反应进行检测（受体是细胞在进化过程中形成的细胞蛋白组分，能识别周围环境中某种微量 化学物质；配体是能与受体特异性结合的物质） 。检测条具有两条俘获带，其中一条为检测带（T，由 配体组成） ，另一条为质控带（C） 。当样品与被标记的受体混合后，受体将在俘获带上被俘获，并显 出红色，随后可以通过反应后俘获带颜色的深浅来判定结果。 2.产品性能 检测限：0.1ppb。 灵敏度和特异性：检测无氯霉素牛奶样品，阴性检测率为 90%，置信度为 95%。 交叉反应： 以下兽药残留在浓度为100ppb时不会干扰检测：氨基糖苷类、其他酰胺醇类、-内酰胺/头孢 菌素类、氟喹诺酮类、大环内脂/林可胺类、硝基呋喃类、四环素、磺胺类药物、或氯噻嗪、氟 美松、安乃近、呋喃苯胺酸、伊佛霉素、新生霉素、催产素、对氨基苯甲酸、苯基丁氮酮、三 氯噻嗪和噻苯咪唑。体细胞浓度为106 SCC/ml或细菌浓度为3105 cfu/ml时对检测无干扰。 3.试剂盒组份及另需的材料 试剂盒组份 氯霉素快速检测条：100 条 0.1 ppb 氯霉素阳性标准品 用户手册 4. 试剂制备和储存 将试剂盒保存在 0-7℃条件下，不要冷冻！ 检测条 保存在密封的箔罐中，每次检测前取出所需数量的检测条后，将箔罐密封好重新放回冰箱。避免保存 在高湿度条件下。箔罐中有一包湿度防潮剂，正常情况下，防潮剂中颗粒呈蓝色，若颗粒变为紫色或 红色时则说明湿度太高，检测条已经变质。检测条在室温条件下可保存 12 小时。 阴性质控 使用氯霉素阴性牛奶作为阴性质控，用于进行性能监控以及复原阳性质控。阴性质控检测 T 线颜色比 枪头 另需的材料 耗材 设配 ROSA 孵育器（40℃） ROSA 读数仪（可选） 打印机（可选） 300 μ L 移液器（可选）
C 线深。阴性质控可冷藏 72 小时。 阳性质控 未水化时和试剂条一样干燥低温保存。 用 10ml 阴性奶溶解成浓度为 0.1ppb 的氯霉素阳性质控，冷藏或冰浴放置 5min，用前振荡混匀。 阳性质控可在冷藏条件下保存 48 小时。在-15℃条件下可保存 2 个月。 样品和质控液的长期储存 将样品混匀，分成小份（至少为 0.5ml）放在小瓶中冷冻。 质控液应在复原 6 小时内以 1ml 为单位分装并冷冻。 冷冻后的样品和质控液在-15℃条件下可保存 2 个月。 在冷藏条件下或冰水中过夜缓慢解冻，振荡摇匀。解冻后的样品，冷藏条件下可保存 24 小时。如果 出现明显的蛋白沉淀，说明样品变质。未用完的样品请丢弃，请勿重复冷冻。 5.注意事项 1) 2) 3) 4) 5) 高脂肪样品（>6.5%）可能导致结果不可用，需离心处理后检测。 检测条上的碎片影响读数仪光学性能，因此在将检测条插入读数仪前，应擦去检测条上的灰尘 和牛奶残渣,以保持设备清洁。 孵育器应保持清洁和水平，孵育器的温度必须是 402℃。用前要预热 10 分钟，达到合适的温 度。 样品在检测前冷藏放置（0-4.4℃） 。检测在取样 5 天内进行。 在室温环境下（10-30℃）进行检测。
乳及乳粉中氯霉素残留量的测定方法
乳及乳粉中氯霉素残留量的测定方法超高效液相色谱-串联质谱法标准操作程序1 安全提示本试验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性，操作时须小心谨慎！如溅到皮肤上应立即用水冲洗，严重者应立即治疗。
2 方法提要本标准操作程序是本实验室参照GB/T 18932.19-2003和《残留检测质量控制指南》的有关要求制定。
本方法适用于乳及乳粉中氯霉素残留量的测定和确证。
3 实验部分3.1 原理试样中氯霉素残留用乙酸乙酯提取后，用正己烷脱脂、HLB固相萃取柱净化后，用超高效液相色谱-串联质谱联用仪检测，外标法定量。
3.2 检测限、测定低限、线性范围、回收率范围和精密度表1 方法的检测限、测定低限、线性范围、回收率范围和精密度化合物名称检测限（μg/kg）测定低限（μg/kg）线性范围（μg/L）回收率（%）RSD（%）氯霉素0.1 0.2 3.3 仪器和设备3.3.1 液相色谱-质谱联用仪。
3.3.2分析天平：感量0.1mg、0.01g。
3.3.3机械振荡器。
3.3.4 离心机。
3.3.5 涡旋混匀器。
3.3.6 固相萃取仪。
3.3.7 氮吹浓缩仪。
3.3.8 移液枪：50 ~1000μL。
3.4 试剂与材料除另有说明外，所有试剂均为分析纯，水为高纯水。
3.4.1 试剂3.4.1.1 乙腈。
3.4.1.2 乙酸乙酯。
3.4.1.3 甲醇。
3.4.1.4 氯化钠。
3.4.2 溶液3.4.2.1 氯化钠溶液（4%）：取20 g氯化钠，用适量水溶解后，用水定容至500 mL。
3.4.2.2 乙腈-水溶液（1 + 4）：取20mL乙腈与80 mL水混合均匀。
3.4.2.3 乙腈-水溶液（1 + 7）：取20mL乙腈与140 mL水混合均匀3.4.3 标准物质与标准溶液3.4.3.1 标准物质表2 标准物质列表标准物质英文名称纯度氯霉素Chloramphenicol ≥99.0%3.4.3.2氯霉素标准溶液：储备液100 μg/m L，用甲醇溶解定容，储存在4±4℃。
高效液相色谱法测定牛奶中氯霉素残留的研究综述_李红
河南畜牧兽医２００７年（第２８卷）第２期综合版专论综述专论综述高效液相色谱法测定牛奶中氯霉素残留的研究综述李红１，张莹蕾２，李永军１，马伟华１（１．河南省乳品工程技术研究中心，河南郑州４５０００８；２．河南三鹿花花牛乳业有限公司）中图分类号：Ｓ８５９．８４文献标识码：Ｂ文章编号：１００４－５０９０（２００７）０３－００１１－０１氯霉素抗菌谱较广，能抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，由于其价格低廉、抗菌性能好，是预防和治疗牛乳房炎等疾病的主要药物，但其残留对人体健康的危害不容忽视，它能够导致严重的再生障碍性贫血，并且其发生与使用剂量和频率无关。
因此，近年来美国和欧盟对动物食品中的氯霉素残留量都制定了严格的限制指标，残留量不得超过０．１μｇ／ｋｇ。
我国农业部已禁止使用该药，无论内销还是出口的畜产品，氯霉素残留都是必检项目。
到现在为止，氯霉素残留的检测已相继建立了气相色谱、液相色谱、薄层色谱、放射性分析、微生物法及免疫学检测等方法。
高效液相色谱法是一种快速有效的分离分析技术，它引入了气相色谱理论，在技术上采用高压泵、高效固定和高灵敏度检测器，实现了分离速度快、效率高和操作自动化。
高效液相色谱法测定牛奶中的氯霉素残留都要经过提取、层析柱净化、浓缩以及残留药物分离和检测。
该文就从这四个方面对高效液相色谱法测定牛奶中氯霉素的残留进行概述。
１样品的提取与净化１．１样品的提取牛奶中含有大量蛋白质、脂肪、糖类、维生素、无机盐、水分等，这些样品基质的存在不但干扰待测物的检测，而且污染仪器和降低设备使用寿命，因此需要选择合理有效的提取方法。
为了从牛奶样品中提取氯霉素，首先要使蛋白质变性，破坏其胶体状态。
从牛奶中提取氯霉素使用最多的是乙酸乙酯和乙腈，乙酸乙酯既能有效提取氯霉素，又能减少牛奶中蛋白质等水溶性杂质被萃取到溶剂中。
乙腈能够有效除去牛奶中的蛋白质，但萃取效率没有乙酸乙酯高。
使用高氯酸溶液能有效地净化残留物，减少对氯霉素的干扰。
胶体金免疫渗滤法检测淡水鱼及牛乳中氯霉素残留
（ 天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津市食品营养与安全重点实验室，天津 ３０５ ） ０４７
摘要：制备 了 平均粒径 ２ ｌ的胶体金，用以标记抗氯霉素多克隆抗体；将氯霉素半抗原与卵清蛋 白的偶联物 包 在硝酸纤维 ０ Ｔ ｎｌ 被 素膜 Ｅ 作为检测带， 羊抗兔二扳 为质控带， 作 依据免疫竞争法原理， 建立通过免疫胶体金渗滤式试纸条检测六种淡水鱼及牛乳 中氯霉 素残留的方法。 样品前处理 方法简便，方法灵敏度为 １ Ｌ 峙／，只需 １ １ ｍｎ ０ ５ ｉ即可 目测判断结果， ￣ 可以作为淡水鱼及牛乳 中 氯霉素残
Ｄｏ ｍ ｍ ｕｎ ｇ ｌ ｌｒ ｔｏ Ａｓ ａ ｔＩ ｏ ｏ ｄ Ｆｉ ａ ｉ ｎ ｓ ｙ ｔ
Ｗ ＡＮＧ Ｗ ｅ， ｉＺＨＡＮＧ Ｙ ｎ Ｌ Ｕ Ｊ ｎ ｗｅ， Ａ Ｇ ＬｉＷ Ａ Ｇ Ｆ ｎ － ｉ ， Ａ Ｇ Ｓ ｕ ａ ， Ｉ ｕ － ｉＷ Ｎ ， Ｎ ｅ ｇ ｘａ Ｗ Ｎ ｈ ｏ
（ Ｖ ） ｄ ｅ ｈｅ ｅｅ ｉ ｅｓｄｏ ｎｔ ｃｌ ｌ ｅ（ Ｃ ｍｅ ｒｎ ｏｍｉｇ ｅｅｔ ｏｅＧｏｔ ｔｒｂ ｉＩＧｗａ ｃｏｅ ｓ ｎｒｌ ｅ Ｏ Ａ ａ ｔ ｎｔ ｙＷ Ｔ ｄｓ ｒ ｎ ｈ ｐ ｅ ｎａ ｉｏｅｕｏ Ｎ ） ｍｂａｅｆ ｎ ｔ ｔ ｚｎ． ａａｉ ａ ｂ ｇ ｒ ｌ ｓ ｒ ｈ ｓ ｎ － ｔ ｓ ｈｓ ａ ｃ ｔ 础 ｏ ｏ Ｔ ｅｍｅ ｏ ａ ｉ ｌ ａｄｆ ｔ １－５ｍｉ ｔ ） ｔ ｅｓｎｉｖｔ ｏ ｈ ｔ ｄＷ ｓ ｅ ｓ （０１ ｎ ｅ ｗｈ ｔ ｅｓ ｉ ｆ１峙／， ｈｃ ｏｌ ｅｗ ｄｌ ｓｄｔ ｅｅｔ ｅＣ Ｐｒｓ ｕｓｉ ｈ ｓ ｍｐ ｎ ａ ｕ ｓｉ ｈ ｉ ｔ ｙ Ｌ ｗ ｉｈｃｕｄｂ ｅ ｕｅ ｄｔ Ａ ｉ ｅ ｉ ｙ ｏ ｃｔ ｈ ｅｄ ｎ
超高效液相色谱_串联质谱法测定牛奶中的氯霉素残留
部共建重点实验室开放课题资助。 作 者 简 介 ：栗 旸 （1976— ），女 ，工 程 师 ，硕 士 ，主 要 从 事 卫 生 检 验
工作。 通 讯 作 者 ：胡 秋 芬 （1973— ），女 ，教 授 ，博 士 ，主 要 研 究 方 向 为 分
氯霉素对人体有严重的副作用它能抑制人体骨髓造血功能而引起再生障碍性贫血症和粒状白细胞缺乏症等疾病21多个国家现已规定在蛋鸡和乳牛中禁止使用氯霉素h
畜牧与饲料科学
Animal Husbandry and Feed Science
2010 ，31 （8 ）:91-92
超高效液相色谱-串联质谱法测定牛奶中的氯霉素残留
氯 霉 素 残 留 量 的 测 定 方 法 有 酶 联 免 疫 法 ［5］、气 相 色 谱 法 ［6］、气 质 联 用 法 ［7］、液 相 色 谱法 ［8］和 液 质 联 用 法 等 ［9-12］ 多 种 方法。酶联免疫法适用于样品的快速筛查，但定性及定量的 准确度差。 气相色谱法和气质联用法均需要对样品进行衍 生化，其前处理繁琐且耗时较长。液相色谱方法的灵敏度较 差，且容易出现假阳性结果。液质联用方法则是一种高灵敏 度、高选择性的检测方法，特别是液相色谱-串联质谱系统 可进一步提高检测的灵敏度和选择性， 大大降低了检测限 和假阳性检测结果的出现概率 。 ［13-16］ 该研究用液相色谱-串 联质谱法测定牛奶中的氯霉素，取得了满意的结果 。 ［17-27］ 1 材料与方法 1.1 试剂与材料 氯霉素标样购于瑞士 Fluka 公司；乙腈、 乙酸乙酯为色谱纯试剂 ，购于美国 Fisher 公司；18.2 MΩ 超 纯水由 Milli-Q Advantage A10 超纯水处理系统处理 ； 牛奶 样品购买于云南省昆明市某农贸市场。 1.2 仪器及工作条件 IKA T25 型高速匀浆机， 德国伊卡