氯霉素(CAP)快速检测试剂盒
1 氯霉素氯霉素（（CAPCAP））酶联免疫酶联免疫分析分析分析（（ELISA） 试剂试剂盒使用说明书盒使用说明书盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 1 使用目的使用目的：： 本试剂盒用于水产、鱼、虾和肉类组织（如鸡、牛肉和猪肉）中氯霉素（CAP）残留的定量检测。 2 实验原理 本试剂盒采用竞争ELISA方法，在微孔板包被有氯霉素（CAP）偶联抗原，加入氯霉素（CAP）标准品或样品，游离氯霉素（CAP）与微孔条上预包被的氯霉素（CAP）偶联抗原互相竞争抗氯霉素（CAP）抗体酶标记物，用TMB底物显色，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在450nm波长下进行检测，吸光值与样品中氯霉素（CAP）含量成反比，通过标准曲线计算样品中氯霉素（CAP）的含量。 3 试剂盒组成 3.1 预包被的氯霉素（CAP）偶联抗原的可拆酶标板：1块（12孔×8条）。 3.2 氯霉素（CAP）标准品：6瓶（1ml/瓶），含量分别是：0ng/ml, 0.025ng/ml,0.1ng/ml,0.25ng/ml,1ng/ml,4ng/ml 3.3抗氯霉素（CAP）抗体酶结合物：1瓶（6ml）。 3.4显色液A：1瓶（6ml）。 3.5显色液B：1瓶（6ml）。 3.6终止液：1瓶（6ml），2M硫酸。 3.7样本稀释液：1瓶（10×, 6ml），用于样品稀释用。 3.8浓缩洗涤液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。 3.9说明书一份。 4 需要而未提供的材料 4.1 设备 4.1.1波长450nm酶标仪。 4.1.2粉碎机。 4.1.3量筒。 4.1.4振荡器。 4.1.5漏斗。 4.1.6Whatman No 1或相当的滤纸。 4.1.7微量移液器。 4.2 试剂 4.2.1去离子水或蒸馏水。 4.2.2 甲醇。 5 贮存 5.1 试剂盒贮存于2~8℃，切勿冷冻 5.2 未用完的微孔板应该密封干燥保存 6 注意事项 6.1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。
2 6.2 不要使用过期试剂盒。 6.3 试剂盒使用前，将试剂恢复至室温（25±2℃），建议至少回温2小时。 6.4 标准品中含有氯霉素（CAP），使用时应特别注意，操作时应带手套。 6.5 终止液中含有硫酸，使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。 6.6 不同标准品、样品所用吸头不能混用，否则会影响试验结果。 6.7 不同批号试剂盒中的试剂不得混用；不同标准品、样品所用吸头不得混用，否则会影响实验结果。 6.8 稀释样本时必须用本试剂盒中的样本稀释液，否则会影响实验结果 6.9 混合试剂时应避免起泡。 7 工作液准备 7.1 氯霉素（CAP）标准品溶液：0ng/ml, 0.025ng/ml,0.1ng/ml,0.25ng/ml,1ng/ml,4ng/ml 7.2 浓缩洗涤液：用蒸馏水按1:20(1+19)稀释备用 7.3 样本稀释液：用蒸馏水按1:10(1+9)稀释备用 7.3 显色剂：已备用，避免光线直照 7.4 反应终止液：已备用 8 样品处理程序样品处理程序（样品在提取过程中，要严格按说明书操作，提取过程中应准确稀释，否则会出现结果不准确，样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存） 8.1取10g粉碎的样品，加 20ml 70%甲醇溶液 8.2强力振荡3分钟 8.3用Whatman No 1滤纸过滤 8.4取25µl处理后的样品，加入25µl样本稀释液于反应孔中（样本稀释倍数为2） 9 酶免分析步骤 9.1 实验须知 9.1.1 实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温（25±2℃），时间约2小时。回温至室温（25±2℃）后再取出微孔条，多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存 注：一定保证回温充分，否则影响检测的精确度和准确度。 9.1.2 使用后请立即将试剂放回2~8℃保存 9.1.3 请不要改变分析程序 9.1.4 请使用精确的微量移液器 9.1.5 操作一旦开始，请不要中断任何程序 9.1.6 ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序，请严格按照要求操作 9.1.7 为避免交叉污染，每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样 9.1.8 加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面 9.2 分析步骤 9.2.1 预先进行编号，标记B0、标准品和样品的位置，推荐进行双孔检测 9.2.2 取所需数量的微孔（微孔条可拆），将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存 9.2.3 样品稀释液（10×）、浓缩洗涤液（20×）稀释成工作液(蒸馏水或去离子水稀释) 9.2.4 在B0孔中加入50µl0.0 ng/ ml标准品溶液 9.2.5 在各标准孔中加入50µl的标准品溶液 9.2.6 在各样品孔中加入50µl样品溶液 9.2.7 在所有孔中加入50µl的抗氯霉素（CAP）抗体酶结合物 9.2.8 轻轻晃动反应板几秒钟。 9.3 37℃温浴30min （温浴过程中不时轻拍反应板，可以减少双孔误差）
3 9.3.1 甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板5次，最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。 9.4 反应 9.4.1 洗涤程序完成后，立即用微量移液器在每个微孔中先加入50µl显色液A，再加 50µl显色液B；轻微晃动反应板使之彻底混匀 9.4.2 37℃温浴10min 9.4.3 每孔中加入50µl终止液，混匀 9.4.4 在450nm下检测吸光度，结果在5min内读取。 10 结果计算 10.1定量分析 10.1.1所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以第一个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。 B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值 B0—0µg/L标准溶液的平均吸光度值 10.1.2以氯霉素（CAP）浓度的对数值为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标准曲线图。根据样品百分吸光度值，可从曲线上得到对应点的横坐标，即为氯霉素（CAP）浓度的对数值，求得反对数即为测定液中氯霉素（CAP）浓度C（ppb） 10.1.3由于样品经过了预先稀释，因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数。 10.2 半定量测定 10.1.1目测半定量测定：首先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准品吸光度值的高低比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。 10.1.2仪器半定量测定：首先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准品颜色深浅比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。 11 特异性 物质 交叉反应 Chloramphenicol（氯霉素） 100% Thiamphenicol（甲砜霉素） < 0.1% Chloramphenicol base（脱酰氯霉素） < 0.1% 12 试剂盒参数 本试剂盒检测下限为0.05ppb B0吸光度最佳值应大于1.0 试剂盒吸光度板内误差小于8％，板间误差小于15％。 用本说明书提供的组织样本提取方法回收率大于80％。 13 试剂盒提供的标准曲线范围为0ng/ml~4ng/ml。 14 分析限制 本试剂盒检测为阳性的样品应该用另一种方法如HPLC或GC/MS加以确证。
利用酶联免疫法检测水产品中氯霉素残留的结果分析
利用酶联免疫法检测水产品中氯霉素残留的结果分析
作者：刘万学
来源：《黑龙江水产》 2015年第5期
刘万学
（黑龙江省水产技术推广总站 黑龙江 哈尔滨 150018）
随着水产养殖业的快速发展，人们对水产品质量安全日益关注。滥用抗生素、激素等药物防治水产动物疾病，导致水产品的质量下降，使用禁用渔药而导致水产品药物残留超标。国家投入大量的人力物力对食品安全进行监督抽查，确保餐桌上的安全。氯霉素就是水产品质量安全监督抽查中的重要一项抗生素。
氯霉素最初是由委内瑞拉链丝菌（Streptomyces Venezuela）的培养液中提取制得，是一种常用的广谱抗生素，曾在畜牧业中广为应用，治疗畜禽肠道感染有特效，至今已有50年的使用历史。但氯霉素有较强的副作用和毒性作用，如果氯霉素在食用动物中残留，可通过食物链传给人类。长期微量摄入氯霉素会引起多种疾病，氯霉素抑制骨髓造血功能造成过敏反应，对人体的造血系统危害很大，容易引起再生障碍性贫血。此外该药还可引起肠道菌群失调及抑制抗体的形成，还会引起视神经炎、皮疹等不良反应，对人类的健康造成危害。氯霉素已在国外较多国家禁用，是禁用抗生素。世界上许多国家禁止此药用于生产食品动物，并规定了在畜产品中氯霉素不得检出。中国农业部已将氯霉素从2000年版《中国兽药典》中删除并将其列为禁药。而欧盟的进口食品卫生标准规定氯霉素含量标准为不得检出。
目前的氯霉素的检测方法是依据《水产品中氯霉素残留量的测定气相色谱法》使用气相色谱仪进行检测，其检测结果可靠，但是分析速度较慢。因此，大都先使用酶联免疫法进行筛选，筛选结果为阳性的样品再使用气相色谱法进行确定。酶联免疫法具有灵敏度高、特异性强、高通量、成本低等优点，因而适合于水产品中氯霉素日常检测。但是在使用过程中，由于使用不同厂家的试剂盒和其精密度和灵敏度不同，而检测出的阳性结果比率不同，阳性结果过多，这样需要经过气相色谱法进行确定，最终确定为假阳性。针对假阳性比率偏高采用两个不同厂家的试剂盒（一个是进口的，一个是国产的）做了个比对试验：
氯霉素单克隆抗体免疫金标快速检测试纸的研制及性能测定
华北农学报・２００６，２１（５）：１２７—１ ３１
氯霉素单克隆抗体免疫金标快速检测试纸的
研制及性能测定
王自良 ，张改平２，杨艳艳２，张海棠 ，杨继飞２，刑广旭２，柴书军２
（１．河南科技学院动物科学学院，河南新乡４５３００３；２．河南省农业科学院生物技术研究所，河南郑州４５０００２）
摘要：以分泌抗氯霉素单克隆抗体（ＣＡＰ ｍＡｂ）杂交瘤细胞株的建立为基础，应用胶体金免疫层析试验（ＧＩＣＡ）成功 研制出ＣＡＰ残留快速检测试纸（ＣＡＰ—Ｓｔｒｉｐ），并对其性能进行了测定。结果表明，ＣＡＰ—ｓｔ邱．的标准曲线呈典型的Ｓ型， 符合４参数ｌｏｇｉｔ曲线拟合，目测检测限为Ｏ．５ ｇ／Ｌ；与氯霉素琥珀酸钠的交叉反应为１６０％，与其他酰胺醇类和抗菌药 物无交叉反应；其敏感性与竞争ＥＬＩＳＡ试剂盒相当，符合率为１００％；１０ ｍｉｎ内显示结果，具有快速、敏感、特异、简便等 特点，适合ＣＡＰ残留快速检测的推广应用。 关键词：氯霉素；单克隆抗体；胶体金免疫层析试验；快速检测试纸 中图分类号：Ｓ８５９．８４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１０００—７０９１（２００６）０５—０１２７—０５
Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｔｒａｉｔ Ｉｄｅｎｔｉｆｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ Ｇｏｌｄ．Ｌａｂｅｌｅｄ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ
Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｓｔｒｉｐ ｆｏｒ Ｒａｐｉｄ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ
ＷＡＮＧ Ｚｉ—ｌｉａｎｇ ，ＺＨＡＮＧ Ｇａｉ—ｐｉｎｇ２，ＹＡＮＧ Ｙａｎ．ｙａｎ ，ＺＨＡＮＧ Ｈａｉ．ｔａｎｇ ，
ＹＡＮＧ Ｊｉ—ｆｅｉ ，ＸＩＮＧ Ｇｕａｎｇ．ＸＵ ，ＣＨＡＩ Ｓｈｕ．ｊｕｎ
（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｈｅｎａｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ ４５３００３，Ｃｈｉｎａ；
氯霉素残留一步式化学发光酶免疫法的建立
氯霉素残留一步式化学发光酶免疫法的建立
马玲;关忠谊;吴健敏;黄红梅;张启模;蒋维维
【期刊名称】《南方农业学报》
【年(卷),期】2011(042)002
【摘 要】【目的】建立一种简便、快速、精确的氯霉素（CAP）残留检测方法。【方法】在常规两步式化学发光酶免疫法（CLEIA）的基础上，同时加入一抗和二抗，并进一步优化抗原包被条件、抗体工作浓度、竞争反应时间等试验参数，建立了检测CAP残留的一步式CLEIA。【结果】该方法最佳检测范围为0．045．128μg/L，检测灵敏度达3．16μg／L，最低检测限为0．01μg/L，可检出国际规定的CAP残留标准底限值以下的残留量。与常规两步法相比，在不影响检测限和灵敏度的前提下，可缩短反应时间1．5h。【结论】采用一步式CLEIA检测CAP残留，与常规两步式CLEIA的检测效果相近．日．耗时短．更符合怏涑柃测的要求。
【总页数】4页(P205-208)
【作 者】马玲;关忠谊;吴健敏;黄红梅;张启模;蒋维维
【作者单位】
【正文语种】中 文
【中图分类】TS251.7
【相关文献】 1.西门子机械传动(天津)有限公司佛山服务中心正式投入运营——西门子机械传动进一步在中国建立分散式服务网络2.氯霉素残留一步式化学发光酶免疫法的建立3.抗氯霉素单克隆抗体的制备及其化学发光酶免疫法的建立4.金刚烷胺残留化学发光酶免疫法的建立5.直接竞争化学发光酶免疫法检测氟喹诺酮类药物方法的建立
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胶体金免疫层析法快速测定蜂胶及蜂胶乙醇提取物中氯霉素残留
胶体金免疫层析法快速测定蜂胶及蜂胶乙醇提取物中氯霉素残留
周萍;李樱红;尹志红;吕泽田;尹君;王静;徐初
【摘 要】建立了胶体金免疫层析法快速测定蜂胶及蜂胶乙醇提取物中氯霉素残留的检测方法.样品在碱性条件下溶解稀释,20％高氯酸溶液除杂过滤后,加入碱化剂适量,经乙酸乙酯提取,盐析净化后,再用乙酸乙酯提取吹干,加入正己烷和复溶液溶解后,用胶体金快速检测试剂板快速检测.结果表明,胶体金免疫层析法对蜂胶及蜂胶提取物中氯霉素残留量的检测限分别为0.1μg/kg和0.2μg/kg.经高效液相色谱-串联质谱确证,假阳性率和假阴性率均为0％.该方法操作简单、灵敏度高、准确可靠,可用于加工蜂胶及蜂胶乙醇提取物过程中对氯霉素残留量的质量控制.
【期刊名称】《中国蜂业》
【年(卷),期】2019(070)005
【总页数】5页(P68-72)
【关键词】蜂胶;蜂胶乙醇提取物;氯霉素;胶体金免疫层析法
【作 者】周萍;李樱红;尹志红;吕泽田;尹君;王静;徐初
【作者单位】杭州碧于天保健品有限公司,桐庐311500;浙江省食品药品检验研究院,杭州310052;杭州碧于天保健品有限公司,桐庐311500;中国蜂产品协会蜂胶专业委员会,北京100050;杭州碧于天保健品有限公司,桐庐311500;杭州碧于天保健品有限公司,桐庐311500;杭州碧于天保健品有限公司,桐庐311500
【正文语种】中 文
蜂胶是工蜂采集胶源植物树脂等分泌物与其上颚腺、蜡腺等分泌物混合形成的胶黏性物质[1]。蜜蜂主要用蜂胶堵塞蜂巢缝隙，以防止有害细菌、病毒或真菌的入侵，保证蜂箱洁净卫生。蜂胶的化学成分复杂，含有多种活性物质，其功效成分主要为黄酮类、酸类、酯类化合物等[2]。《中华人民共和国药典》（2015年版一部）载明蜂胶补虚弱，化浊脂，止消渴；外用解毒消肿，收敛生肌；用于体虚早衰，高脂血症，消渴；外治皮肤皲裂，烧烫伤[3]。蜂胶凭借独特的医疗保健作用，正越来越受到消费者的青睐。蜂胶的活性成分和安全性已成为研究热点。
郑州市农产品质量检测流通中心农产品检测试剂采购项目
郑州市农产品质量检测流通中心农产品检测试剂采购项目
单一来源采购文件
编 号：郑财单一[2015]N005号
招 标 人:郑州市农产品质量检测流通中心
招标代理机构:河南省伟信招标管理咨询有限公司
日 期:二○一五年六月
目 录
第一章 单一来源采购公告 ........................................................................ 2
第二章 采购须知 ........................................................................................ 4
一 采购费用 .......................................................................................... 4
二 采购资质 .......................................................................................... 4
三 采购文件 .......................................................................................... 4
四 采购资质 .......................................................................................... 4
五 采购程序 .......................................................................................... 6
氯霉素残留检验实验报告
一、实验目的
本实验旨在通过胶体金免疫层析法对食品中的氯霉素残留进行快速、准确的检测，为食品安全监管提供技术支持。
二、实验原理
氯霉素残留检验实验采用胶体金免疫层析法，该方法基于抗原抗体特异性结合的原理。当氯霉素样品与标记有抗氯霉素单克隆抗体的胶体金颗粒混合时，如果样品中含有氯霉素，则氯霉素会与抗氯霉素单克隆抗体结合，形成抗原抗体复合物。复合物在层析膜上通过毛细作用向前移动，与固定在层析膜上的抗氯霉素抗体结合，形成金标记的抗原抗体复合物，最终在层析膜上形成两条色带：控制线（C）和测试线（T）。如果样品中氯霉素浓度超过检测限，则在测试线上形成明显的色带；如果样品中氯霉素浓度低于检测限，则测试线上无色带。
三、实验材料与仪器
1. 实验材料：
（1）氯霉素标准品
（2）阴性对照样品
（3）阳性对照样品
（4）氯霉素残留样品
（5）胶体金免疫层析试纸条
（6）试剂：缓冲液、洗涤液、封闭液等
2. 实验仪器：
（1）电子天平
（2）恒温培养箱
（3）移液器
（4）微量加样器
（5）一次性无菌手套
四、实验方法 1. 样品处理
（1）准确称取氯霉素残留样品0.1g，加入1ml缓冲液，涡旋混匀，室温下放置10min。
（2）取1ml样品溶液，加入1ml洗涤液，涡旋混匀，室温下放置5min。
（3）重复步骤（2）两次。
2. 检测
（1）取一条胶体金免疫层析试纸条，将样品加样孔浸入样品溶液中，室温下放置5min。
（2）取出试纸条，观察结果。
五、实验结果与分析
1. 阳性对照实验
阳性对照样品在测试线上形成明显的色带，说明试纸条的性能良好。
2. 阴性对照实验
阴性对照样品在测试线上无色带，说明试纸条对阴性样品具有良好的检测效果。
3. 样品检测
根据实验结果，氯霉素残留样品在测试线上形成明显的色带，说明样品中氯霉素残留量超过检测限。
六、实验结论
本实验采用胶体金免疫层析法对食品中的氯霉素残留进行检测，结果表明该方法具有快速、简便、准确的特点，适用于食品中氯霉素残留的现场快速检测。
氯霉素
氯霉素合成论文
分子印迹技术（molecularly imprinting technique）是对目标化合物具有特定识别能力的一种聚合物制备技术。分子印迹聚合物（molecularly imprinted polymers，MIPs）是一种具有较强分子识别能力的新型高分子仿生材料，其具有类抗体的特异性、高选择性、高强度等优点，另外还具有制备简单、成本低、模板分子可回收重复利用等特点，使其在色谱分离、传感器、模拟酶催化、膜分离及固相萃取等许多领域得到了广泛的应用。 氯霉素（Chloramphenicol，CAP）是一种杀菌力极强的广谱抗生素，由于其优良的抗菌性、稳定的药性、低廉的价格，而广泛作为饲料添加剂，用于治疗细菌性疾病。但研究发现CAP对骨髓和新生儿有较大的毒性，易引起人体血中毒，导致不可逆的再生障碍性贫血等严重的毒副作用，对人类的健康构成巨大的潜在威胁。因此，欧盟、美国均在法规中规定CAP的残留限量标准为“零容许量”。我国农业部规定CAP及其盐、脂等在食品动物的所有可食组织中不得检出。CAP的检测方法主要有微生物法、免疫分析法、气相色谱法、色谱质谱联用法、超临界流体色谱法以及免疫荧光毛细管电泳技术等等。由于样品中的CAP残留浓度低，基体成分复杂，且常规样品前处理方法步骤繁琐，严重限制了常规快速检测方法和仪器分析方法对样品中CAP残留的有效检测。 样品的提取、富集和净化是残留物分析的关键步骤，固相萃取（solid-phase extraction，SPE）、基质固相分散（matrixsolid-phase dispersion，MSPD）等样品预处理技术近年来得到了越来越广泛的应用。SPE是兽药残留分析常用的样品处理与富集方法之一。常规的基于反相或离子交换作用的固相萃取材料在兽药残留检测应用中往往选择性较差，给后面的仪器分析造成困难。利用MIP的分子识别能力，将其作为固相萃取材料，可望实现有选择的固相萃取，克服生物样品体系复杂、预处理手续繁琐等因素，在富集待分析物的同时，除去大部分干扰组分，从而方便仪器分析，是发展痕量分析方法的重要途径。MSPD是一种新的样品处理技术，其基本操作是将样品（固态或液态）直接与固相萃取材料一起混合研磨，使样品均匀分散于固定相颗粒的表面，形成独特的色谱固定相装柱，然后依靠所选定的溶剂洗脱样品。它浓缩了传统样品的均化、组织细胞裂解、提取、过滤、净化等过程，使样品的预处理变得简单快捷，不仅测试样品和溶剂用量减少，而且也避免了目标物的损失。 本研究以氯霉素（CAP）为模板分子，甲基丙烯酸二乙氨基乙酯（DEAEM）为功能单体，乙二醇二甲基丙烯酸酯（EDMA）为交联剂，偶氮二乙丁腈（AIBN）为引发剂，四氢呋喃为溶剂，采用本体聚合的方法制备氯霉素分子印迹聚合物（CAP-MIP），通过吸附动力学曲线等优化了聚合物的合成条件，由此制备的MIP对CAP有很好的吸附能力，通过将MIP对CAP、甲砜霉素（thiamphenicol，TAP）和氟甲砜霉素（florfenicol，FF）的吸附性进行比较研究，显示由此方法制备的CAP-MIP对CAP有较好的特异性吸附能力。 将上述方法制备的CAP-MIP作为填料建立了CAP的分子印迹固相萃取方法，结果表明：CAP-MIP对CAP的吸附率高于94.7％，CAP-MIP的最大吸附量达4670μg/g。同时，本研究首次将CAP-MIP作为基体固相扩散吸附剂（MIP-MSPD）分离富集牛奶中的氯霉素残留，使用MIP-MSPD和HLB固相萃取柱共同处理样品以及仅用MJP-MSPD两种方法处理样品。最终用HPLC进行检测。在优化条件下，不使用固相萃取柱净化的方法的检出限为0.15ng/mL，定量限为0.5ng/mL。不同氯霉素添加量的平均回收率高于89.7％，相对标准偏差小于10.1％。该方法操作简单快速，准确度好，精密度高且无需大量有机溶剂。 在本体聚合方法合成CAP-MIP的基础上，利用沉淀聚合法合成了CAP分子印迹聚合物微球（（molecularly imprinted polymeric microspheres，MIPM）。由于本体聚合法得到的大块聚合物需要研磨粉碎，费时费力，且最终得到聚合物的大小不均匀；悬浮聚合、分散聚合需要特殊的分散剂；两步溶胀法操作繁琐；而沉淀聚合法无需特殊分散剂，能够一步制备聚合物微球，用途非常广泛。在本研究以甲基丙烯酸（MAA）为功能单体采用沉淀聚合合成CAP-MIP，并通过扫描电镜照片对聚合产物形态进行分析。研究结果表明：此方法合成的聚合物大小均匀，粒径较小，比表面较大，理论上比本体聚合法合成的聚合物对模板分子的吸附性好且其固相萃取柱的装填性能也要优于本体聚合法合成的聚合物
水产品中氯霉素残留胶体金免疫层析法快速检测技术
豌国 目圃鼹 实用技术
水产品中氯霉素残留胶体金免疫层析法快速检测技术
赵芸邹礼根柳爱春 （杭州市农业科学研究院实验中心，浙江杭州３１００２４）
氯霉素是一种广谱抗生素，抗菌效果好且价格
低廉，曾广泛应用于预防和治疗水产、畜牧等动物疾
病。但是，随着研究的深入，发现氯霉素存在严重毒
副作用，可在动物性食品中残留并通过食物链在人
体内富集，可引起再生障碍性贫血、粒状白细胞缺乏
症、新生儿灰色综合症等疾病，而且低浓度药物残留
会诱发致病菌的耐药性，严重危害人类健康。因此，
氯霉素残留问题引起国际组织和世界上许多国家和
地区的高度重视，纷纷出台禁令。２００２年，我国农业
部２３５号公告《动物性食品中兽药最高残留限量》中 规定氯霉素为禁止使用的药物，在动物性食品中不
得检出。近年来，快速筛查水产品中氯霉素药物残留
成为保证水产品质量安全的重要手段之一。胶体金
免疫层析法因具有简便、快速、灵敏、特异性高等优
点，也不需要复杂的仪器，能在短短的几小时内检
测几十到几百个样品，适用于水产品药物残留大规
模的快速检测和现场监控。为了规范水产品中氯霉
素残留胶体金免疫层析法快速检测技术，杭州市农
业科学研究院实验中心制定了快速检测技术规范，
便于广大基层和企业检测人员按照规程进行标准
化操作。 酸纤维素（ＮＣ）膜为载体，利用微孔膜的毛细管作
用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移。在移
动的过程中，会发生相应的抗原抗体反应，并通过免
疫金的颜色而显示出来。
２ 适用范围
本技术规程适用于水产品中氯霉素残留量的快
速筛选检测，最低检出限为０．３￣ｔｇ／ｋｇ。
３试剂和材料
３．１提取剂、净化剂、复溶液
提取剂为乙酸乙酯溶液，净化剂为正己烷溶液、
复溶液为ＰＢＳＴ缓冲液，在商品化试剂盒中，以上试
剂均已配好，分装在对应试剂瓶中，使用前将以上溶
液恢复至室温（２０～３０ｃＣ）。按照下面检测步骤直接
使用即可。
３．２氯霉素胶体金免疫层析试剂板
食品中兽药残留的检测技术(常用版)
一、 食品中兽药残留的检测技术（常用版）
(可以直接使用，可编辑 完整版资料，欢迎下载） 食品中兽药残留的检测技术
我国食品安全检测主要应用技术的研究及现状
食品工业科技VOL24，（12），2003张志洁 林清玉
现状分析
随着集约化畜牧业的发展，兽药的作用范围也在扩大，有的药物如抗生素、磺胺药、激素等已广泛用于促进畜禽的生长、减少发病率和提高饲料利用率、促进同期发情。在饲料添加剂中，抗生素用量占有相当大的比重。兽药的广泛应用使畜牧业在增产的同时，也带来了兽药残留的问题。八十年代，欧美等国已开始建立了兽药残留检测体系，并制定了较为完善的兽药用量、休药期及有关法律法规。我国兽药残留检测体系尚不够完备，时常发生因畜产品中药物残留超标而被外国拒绝进口的事件，给我国农产品出口造成很大的经济损失。
“十五”期间，我国将重点加强兽药监察体系和兽药残留检测体系的建设。农业部每年投入1755
万元用于兽药残留监控，发展了近75 种单个兽药在饲料监控和动物源食品中残留的测定方法。国家质检总局每年也投入大量资金，针对出口和欧盟监控的需要，建立一些兽药残留的检测方法。但对于某些禁用兽药（主要是")兴奋剂和激素），其分析方法的灵敏度尚不能满足需要，或大量监控的成本难以承受。
克伦特罗（瘦肉精）的检测方法
欧盟和美国FDA立法禁止克伦特罗在肉用畜禽中的使用;规定牛和马肝中的最大残留限量必须小于0.5µg/kg。我国2001年也实施了鲜冻禽产品不准检出克伦特罗的标准。对于克伦特罗，农业部已经颁布了采用高效液相色谱筛选和气)质联机验证的饲料测定方法（NY428-2001），但未使用国际认可的确证方法（稳定性同位素稀释技术）。卫生部组织了肉中克伦特罗中毒控制方法的探索研究，营养与食品安全所和北京市疾病控制中心分别建立了HPLC-紫外与电化学检测方法和GC-MS 方法， 正在探索HPLC-MS/MS串联检测方法。营养与食品安全所、南京农大、华中农大和河南农科院均进行了ELISA试剂盒国产化的研究。但是，用HPLC或GC-MS
ELISA方法检测鸡蛋中的氯霉素
ELISA方法检测鸡蛋中的抗生素
赵兰青，邓明镜，高阳
（北京科技大学，化学与生物工程学院，生技0901班，100083）
[摘要] 建立了以间接竞争酶联免疫吸附分析法为基础，经过包被抗原，加氯霉素标准品溶液和待测样品溶液后，再加抗体，然后加酶标记二抗和反应底物，最后加终止液后测量490nm下吸光度值等操作步骤后，测定了氯霉素浓度的检测下限为5ng/mL，定量范围为：5-50ng/mL。氯霉素浓度的对数值Log10（vtg）与结合率B/B0(%)的标准曲线方程为：y = -45.952x + 115.48，R² = 0.9943，根据0-50
ng/mL相对应的曲线计算了未知样的浓度vtgS1=1.199ng/mL，vtgS2=386.1ng/mL，但是与实际浓度相差较大，且回收率异常。最后对实验结果和干扰因素进行了分析，以及对失败原因的探索，并进一步研究了实验条件的优化。
[关键词] 间接竞争ELISA方法 氯霉素 分光光度法
1 引言
ELISA属于标记免疫学技术的一种，1971年由瑞典的EngVall 和荷兰Van
Weeman等人提出，1974年Voller等用聚苯乙烯微量反应板作为吸附载体吸附抗体（抗原），再与相应的酶标记物结合，使ELISA操作更方便、易重复，灵敏度可高达ng至pg，因而成为生物化学，临床医学检验的常规测定方法之一；原则上ELISA可用于检测一切抗原、抗体及半抗原，可以直接定量测定体液中的可溶性抗原。因为其操作过程简单易行并可以定量，从而使其在食品安全和卫生检测中得到了广泛的应用。
ELISA常用的测定方法主要有直接法和间接法两种：直接法是酶标记抗体与待检测样本中固相抗原直接作用，加入底物后，显色；间接法是使已知抗原吸附在固相载体上，与待检测样本中的抗体作用，再加入酶标记抗同种动物抗体的免疫球蛋白（二抗），使与特异抗原抗体复合物的抗体作用，加入酶底物，显色。ELISA有许多改良方法，如夹心法、双抗夹心法、竞争法、酶—抗酶法和均质法等。常用方法大致可分为三类：（a）测定抗体的间接法；（b）测定抗原的双抗夹心法；（c）测定抗原的竞争法。前两种方法主要用于测定抗体和大分子抗原，适用于临床诊断上，而竞争法是测定小分子抗原的方法，因而尤其适用于食品分析。