真核细胞裂解和总蛋白提取试验的标准操作规程
蛋白质提取操作流程(细胞裂解)
蛋白质提取操作流程(细胞裂解)蛋白质提取操作流程（细胞裂解）
概述
细胞裂解是一种常用的方法，用于从生物样本中提取蛋白质。
本文档介绍了蛋白质提取的操作流程。
材料
- 细胞样品
- 细胞裂解缓冲液
- 蛋白酶抑制剂
- 蛋白质稳定剂
- 超声波处理设备
- 冷冻离心机
步骤
1. 将冷冻的细胞样品取出并迅速转移到冰上。
2. 加入适量的细胞裂解缓冲液，并配制成细胞样品的适当浓度。
3. 加入蛋白酶抑制剂和蛋白质稳定剂，以保护蛋白质的完整性
和稳定性。
4. 将样品放入超声波处理设备中，进行超声波处理，用于破碎
细胞并释放蛋白质。
5. 将超声波处理后的样品置于冷冻离心机中，以去除细胞碎片
和残余的细胞组分。
6. 将离心后的上清液收集，并继续进行后续的蛋白质提取实验。
7. 根据实验需要可以进一步对蛋白质进行纯化、浓缩和分析等
处理。
注意事项
- 在细胞裂解过程中，应确保样品保持在低温环境下，以避免
蛋白质的降解和失活。
- 在超声波处理过程中，应注意操作时间和功率，以免对蛋白
质造成过度破坏。
- 细胞裂解缓冲液的选择应根据实验需求和细胞类型进行优化。
- 在蛋白质提取过程中，应避免受到外部污染和杂质的影响，
以保证提取到高质量的蛋白质样品。
总结
本文档介绍了蛋白质提取的操作流程，包括细胞裂解、超声波
处理和离心等步骤。
正确的操作方法和注意事项对于获得高质量的
蛋白质样品至关重要。
提取蛋白质的具体步骤
提取蛋白质的具体步骤全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：提取蛋白质是生物科学研究中非常重要的一个步骤，它能够帮助研究人员深入了解蛋白质的结构和功能。
下面将为您介绍一些常用的提取蛋白质的具体步骤，希望能对您有所帮助。
1. 选择样本：在进行蛋白质提取前，首先需要选择合适的样本。
样本可以是动植物组织、微生物、细胞等。
在选择样本时，需要考虑到所需提取的蛋白质种类和含量。
2. 细胞破碎：将样本破碎是提取蛋白质的第一步。
通过机械或化学方法破碎细胞壁，释放出蛋白质。
常用的方法包括超声波破碎、研钵研磨、高压破碎等。
3. 细胞裂解：将破碎后的细胞溶液进行裂解是提取蛋白质的下一步。
裂解可使蛋白质从细胞内释放出来。
常用的裂解方法包括离心、温度变化、酸碱处理等。
4. 蛋白质沉淀：裂解后的细胞溶液含有大量的蛋白质和其他杂质，需要进行沉淀分离。
常用的方法包括盐析、醇沉、酸沉淀等。
5. 蛋白质纯化：通过进一步的分离和纯化步骤，可以得到纯度较高的蛋白质。
常用的方法包括柱层析、凝胶电泳、亲和纯化等。
6. 蛋白质鉴定：最后一步是对提取得到的蛋白质进行鉴定和分析。
常用的鉴定方法包括质谱分析、Western blotting等。
以上就是提取蛋白质的具体步骤。
通过这些步骤，研究人员可以有效地提取并纯化蛋白质，为后续的实验和研究提供重要的支持。
希望以上内容对您有所帮助，谢谢！第二篇示例：蛋白质是生物体中重要的基本分子，具有多种生物学功能，包括结构支持、酶催化、信号传导等。
提取蛋白质是生物学研究中常用的实验方法之一。
下面我将介绍提取蛋白质的具体步骤。
1. 样品的制备首先要准备待提取的生物样品，可以是细胞、组织或者生物体。
样品的制备包括收集、洗涤、离心等步骤，确保样品的纯度和完整性。
2. 细胞破碎对于细胞样品，需要先将细胞破碎以释放蛋白质。
常用的细胞破碎方法包括超声波破碎、高压破碎、冻融破碎等，选择适合样品的方法进行破碎。
3. 蛋白质溶解破碎后的细胞溶液需要进行蛋白质溶解，这可以通过添加盐溶液、表面活性剂或有机溶剂等方法来实现。
细胞提取蛋白步骤
细胞提取蛋白步骤细胞提取蛋白是生物学研究中常用的实验方法之一，通过提取细胞内的蛋白质，可以进一步进行蛋白质分析、鉴定和功能研究。
下面将详细介绍细胞提取蛋白的步骤。
一、细胞培养和采集在进行细胞提取蛋白实验之前，首先需要进行细胞培养。
常用的细胞培养基有DMEM、RPMI-1640等，根据实验需要选择合适的培养基。
将细胞培养在含有适宜浓度的培养基中，放置在恒温培养箱中，保持适宜的温度、湿度和二氧化碳浓度。
当细胞生长到适当密度时，可以进行下一步的细胞采集。
二、细胞裂解将培养好的细胞放入离心管中，用PBS或生理盐水进行洗涤，去除细胞外的干扰物。
然后加入裂解缓冲液，常用的裂解缓冲液有RIPA 缓冲液、NP-40缓冲液等。
裂解缓冲液中含有蛋白酶抑制剂、磷酸酯酶抑制剂等，可以保护蛋白质不被降解。
将细胞裂解液置于冰上，用超声波仪或搅拌器进行充分裂解，直至细胞完全破碎。
三、离心分离将裂解后的细胞溶液离心，以去除细胞碎片、细胞核和细胞膜等残渣。
离心分离的条件根据实验需要进行调整，一般在12000×g的条件下离心10-15分钟。
离心后，上清液即为含有目标蛋白质的提取液。
四、蛋白质浓度测定使用BCA法、Lowry法或Bradford法等方法，测定蛋白质的浓度。
根据实验需要，可以使用不同的测定方法。
五、蛋白质保存和分析将提取的蛋白质分装到离心管中，并存储在-80摄氏度的冰箱中。
根据实验需要，可以进行蛋白质的分析和鉴定。
常用的方法有SDS-PAGE电泳、Western blotting、质谱分析等。
这些方法可以用来确定蛋白质的分子量、表达量以及与其他蛋白质的相互作用等。
细胞提取蛋白是一项复杂的实验技术，需要注意以下几点：1. 实验前要准备好所需的试剂和设备，确保实验过程的顺利进行。
2. 在细胞裂解过程中，要注意避免蛋白质的降解和氧化，可以添加蛋白酶抑制剂和抗氧化剂等。
3. 细胞裂解后的提取液要尽量避免冻融，以免对蛋白质的活性造成影响。
组织总蛋白提取步骤
组织总蛋白提取步骤
总蛋白提取是从细胞或组织中提取出的所有蛋白质的混合物。
总蛋白
的提取对于生物学研究和许多实验室技术都至关重要。
以下是一般的总蛋
白提取步骤：
1.组织的收集和处理：
a.收集需要提取总蛋白的组织样品，并尽快处理以防止蛋白质降解。
b.使用冰凉的无菌生理盐水将组织样品洗涤以去除任何外部污染物。
c.如有必要，将组织样品研磨成细小的粉末状，以提高蛋白质的释放。
2.细胞破碎和裂解：
a.使用合适的细胞破碎方法（如液氮研磨、机械破碎器或超声波处理）破碎细胞膜，释放细胞中的蛋白质。
b.加入破碎缓冲液（通常是一种含有盐和蛋白质保护剂的缓冲液），
并将样品在低温下裂解，以避免蛋白质的降解。
3.离心：
a.将处理后的样品进行高速离心，以去除细胞碎片和其他杂质。
b.将上清液（含有总蛋白）转移到干净的离心管中。
4.测定蛋白质浓度：
a. 使用适当的蛋白质浓度测定方法（如二维凝胶电泳、BCA法、Bicinchoninic Acid法）测定总蛋白的浓度。
b.根据测定的浓度进行相应的稀释或浓缩。
5.进一步处理或分析：
a.根据具体实验目的，可以进一步处理总蛋白提取物，如进行蛋白酶消化、亲和层析或其他分离纯化方法。
b. 可以使用各种蛋白质分析技术（如SDS-凝胶电泳、Western blotting、质谱等）对总蛋白进行定性和定量分析。
总蛋白的提取步骤中，诸如细胞破碎方法、破碎缓冲液的配制、离心条件和测定蛋白质浓度的方法等，都需要根据具体需求和实验目的进行优化和调整。
同时，注意使用无菌操作和低温条件，以保证蛋白质的完整性和稳定性。
WB实验组织总蛋白提取方法
WB实验组织总蛋白提取方法总蛋白提取是生物学实验中常用的一种方法，主要用于从细胞或组织中提取所有蛋白质。
提取总蛋白的目的是为了进一步分析蛋白质的功能和结构，例如Western blot分析等。
下面是一种常用的总蛋白提取方法。
实验材料和试剂：1.已培养的细胞或组织样品2. RIPA裂解液：含有非离子界面活性剂（Tween-20或Triton X-100）、蛋白酶抑制剂（如苯甲砜）和磷酸酯酶抑制剂（如磷酸酯酶）3.低温高速离心管4.超声波细胞破碎仪或机械研磨器5.10%SDS-凝胶电泳试剂6.蛋白加载缓冲液7.高压电泳设备实验步骤：1.将细胞样品从培养皿中用PBS缓冲液洗涤一次，用PBS轻轻冲洗组织样品。
2.吸去PBS缓冲液，加入足够的RIPA裂解液使细胞或组织完全浸没。
注意：RIPA裂解液的加入量需根据样品的大小进行调整。
3.将细胞或组织样品转移到低温高速离心管中。
4.使用超声波仪器或机械研磨器对样品进行破碎。
这一步旨在使细胞或组织的细胞膜破裂，释放出胞浆中的蛋白质。
5.离心样品以除去细胞碎片和细胞核等大颗粒。
将离心管置于低温离心机中进行离心，离心条件需根据实验需要进行调整。
6. 将上清液转移至新的离心管中，得到总蛋白提取物。
可以根据需要进行蛋白质浓度的测定，常用的方法有BCA法、Lowry法等。
7.将总蛋白提取物加入相应的蛋白加载缓冲液，并在沸水中加热变性。
8.蛋白质经过热变性后，将其进行SDS-凝胶电泳分离。
9. 将凝胶中的蛋白质转移到PVDF或NC膜上，通过Western blot分析来检测目标蛋白质。
总蛋白提取方法的关键是裂解液的配方和破碎细胞或组织的方式。
裂解液中的各种成分旨在破坏细胞膜、解离蛋白质和保护蛋白质不被降解。
破碎细胞或组织的方式可以选择超声波破碎、机械研磨或冷冻-解冻法等。
总蛋白提取方法的优化可根据实验需要进行调整。
例如，在一些情况下，可以添加磷酸酯酶抑制剂、蛋白酶抑制剂或还原剂等成分来保护蛋白质的完整性。
生物化学实验操作指南
生物化学实验操作指南一、实验前的准备工作在进行生物化学实验之前，我们需要做一些准备工作，以确保实验的顺利进行。
首先，我们需要检查实验室的安全设施是否完备，如灭火器、安全眼镜、实验台等。
其次，我们需要准备实验所需的试剂和设备，包括试管、移液器、天平等。
同时，我们还需要检查这些试剂和设备的质量和完整性，以免对实验结果产生干扰。
最后，我们需要阅读实验操作指南，了解实验的目的、步骤和注意事项。
二、实验步骤1. 实验前的样品处理在进行生物化学实验之前，我们通常需要对样品进行处理。
例如，如果我们要提取蛋白质，我们需要将样品细胞破碎，并使用离心机将细胞碎片和细胞核分离。
如果我们要提取核酸，我们需要使用酶来消化细胞壁，并使用离心机将细胞碎片和细胞核分离。
2. 试剂的配制与标定在进行生物化学实验中，我们通常需要配制一些试剂。
例如，我们可以配制缓冲液、酶液等。
在配制试剂之前，我们需要准确称取所需的化学品，并按照实验操作指南中的比例配制。
同时，我们还需要标定试剂的浓度，以确保实验结果的准确性。
3. 实验操作在进行生物化学实验时，我们需要按照实验操作指南中的步骤进行操作。
例如，如果我们要进行酶活性测定实验，我们首先需要将样品和试剂加入试管中，然后在适当的温度和pH下进行反应。
在反应过程中，我们需要定时取样，并使用分光光度计等设备测定反应的吸光度。
最后，我们需要根据实验数据计算出酶的活性。
4. 数据处理与分析在完成实验后，我们需要对实验数据进行处理和分析。
例如，我们可以使用统计学方法对数据进行统计分析，并绘制图表来展示实验结果。
同时，我们还可以使用生物信息学工具对实验数据进行进一步的分析，如序列比对、结构预测等。
三、实验注意事项在进行生物化学实验时，我们需要注意以下几点：1. 实验操作要规范，遵守实验室的安全操作规程，如佩戴实验服和手套，避免接触有害物质等。
2. 试剂的使用要准确，按照实验操作指南中的比例使用，避免使用过量或不足。
蛋白裂解和提取的protocol
这是偶整理的蛋白裂解和提取的protocol，希望对大家有所帮助。
10ml 三去污裂解液配方如下：50 mmol/L Tris-cl (pH 8.0)：0.07882g150 mmol/L NaCl：0.08775g0.2 g/L叠氮钠：0.002g1 g/LSDS 0.01g100 mg/L Aprotin 0.001g10 g/L NP-40 0.1g5 g/L去氧胆酸钠0.05g100 mg/L 苯甲基磺酰氟(PMSF) 0.001g总蛋白抽提程序：1.PBS洗细胞3 次2.加入裂解缓冲液（1.5x106个细胞大约加入100µL 裂解液，或100ml细胞瓶中加入100µL 裂解液），冰上放置20min3.收集裂解液4.离心，12000转，2~10min5.吸取上清，蛋白定量，分装，保存在-80度备用裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解。
化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法，通常会很少使DNA 断裂。
这两种方法（包括SDS 和溶菌酶处理等）提取纯化DNA中常用的方法。
机械裂解可以更均一的裂解细胞，同化学裂解相比，机械处理具有更高的裂解效率和更低的选择性。
机械处理可以更剧烈和全面的裂解细胞，但也会造成DNA 的断裂。
一、机械裂解法主要有以下两中：1、热休克（Thermal shock），既反复冻溶法，是一种常用的机械裂解方式比，通常由冷冻和解冻两部分组成（freezing and thawing）,。
原理：由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。
冷冻通常在液氮或-20°C冰上进行，解冻可以在37、50、65 或100℃水浴中进热休克比化学裂解温和，但是很有效，有资料表明用热休克和溶菌酶与SDS的方法获得了90%的细胞裂解率。
2、超声波处理（Ultrasonication）既利用超声加热的方法，把细胞破碎。
但这种处理会导致DNA 的断裂，所以加热不宜过剧烈，要设定好超声时间和间隙时间，一般超声时间不超过5秒，间隙时间最好大于超声时间，这些都有利于保护酶的活性。
细胞的总蛋白质提取全过程及经验
细胞的总蛋白质提取全过程及经验Hessen was revised in January 2021细胞的总蛋白质提取全过程及经验如果你要自己裂解细胞的时候，需要注意的事项：师兄给你的细胞要赶紧裂解，当然了，你还要看是带瓶子给你还是消化好给你的。
一般我使用的时候，是将细胞统一从几个培养瓶中消化收集起来，然后赶紧4 度下离心，用预冷的PBS 或者生理盐水洗涤细胞。
也有人喜欢在培养瓶中直接加裂解液，这个一般都是做 western 什么用的，需要的蛋白量不是很多，而且大部分时候都是要有活性的蛋白的。
一般1000rpm 足够离心了，转速太快，细胞会破碎，然后会损失蛋白。
PBS 洗涤的最后一遍，记得将细胞转移到超声管中，也许是由于普通的10mL 离心管有可能承受不了超声的能量吧，我们师兄师姐一般都用超声管来自装细胞，然后加入裂解液直接超声。
3s 每次，间歇3s 60 次，400W，重复工作复位2 次，总共超声180 次就差不多了。
裂解后的细胞要赶紧在2500g 下离心30-60min，超声管是没有盖子的，可以直接在上面加一层封口膜离心。
在离心的时候，去配制沉淀液，丙酮：无水乙醇：冰乙酸=50:50:，体积比。
一般我加的是裂解液体积的5 倍。
沉淀液要预冷，我喜欢将沉淀液放在-20 度下。
细胞离心后，上清液加入到沉淀液中，就会看到比较多的白色沉淀出现，-20 度沉淀>2h，然后就可以高速沉淀下蛋白了。
这里我们用的体积比较大，一般的离心管不能用，要用 beckman 专用的那种50mL 离心管，25000g，15-30min。
Beckman 离心管比较大，底部是平的，所以蛋白在底部并不是很牢固，在弃去上清液的时候，一定要注意用枪头缓慢的吸出！然后用5mL 做有的丙酮洗涤一遍，再用75%酒精将蛋白转移到4mL 的离心管中，当然，如果你的蛋白很少，的EP tube 也可以使用。
之所以用4mL 是因为我每次提取的蛋白量大概>10mg，而冻干后的蛋白复溶后测定浓度，一般要求在5-6mg/mL 之间，所以buffer 的体积也会比较的大。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
真核细胞裂解和总蛋白提取试验的标准操作规程（编号：032）
1、目的及适用范围
该SOP用来规范真核细胞裂解以及细胞中总蛋白提取的操作。
2、主要仪器
细胞刮刀、冰盒、冷冻台式高速离心机、垂直混匀仪、微量移液器
3、试剂及配制方法
3.1 PBS（pH7.4）：NaCl 8g、KCl 0.2g、Na2HPO4·12H2O 3.58g、 KH2PO4 0.24g，定容至1L。
3.2细胞裂解液：1% NP40、150mM NaCl、20mM Hepes pH7.5、10% glycerol、mM EDTA；使用时在每40mL细胞裂解液中加入1片蛋白酶抑制剂cocktail，保存于-20℃。
4、相关器皿的预处理
所有相关容器和器具均需要预冷
5、操作步骤
5.1 吸出要收获的细胞的培养基。
5.2 用PBS洗细胞2次，以完全除去培养基，置于冰上。
5.3 加入合适体积的细胞裂解液（具体加入的量可参照问题向导2），用细胞刮刀将细胞刮下后用移液器将细胞裂解液收集至离心管中。
5.4 将离心管置于冰上10min。
5.5 将离心管放入垂直混匀仪，于4℃中快速垂直混匀30min，以使细胞充分裂解。
5.6 30min后，将离心管拿出，于4℃下12000rpm离心15min。
5.7 吸取上清于新的离心管中，上清即为收获的细胞总蛋白；弃去沉淀，沉淀为细胞核和未破碎的
细胞。
6、问题向导
6.1如果要收取的蛋白为核内蛋白，可以在细胞裂解液里加入0.1%-0.5% 的Triton-100，以裂解核膜，释放核蛋白。
6.2加入的细胞裂解液的量根据收获细胞的培养皿规格以及想要获得的目的蛋白的浓度来决定，正常情况下的比例为：
100mm 皿：1.0mL-1.2mL
63。