高效液相色谱-荧光检测法同时测定人体尿液中的多种蝶呤类化合物
四种原花青素含量测定方法比较
四种原花青素含量测定方法比较一、本文概述原花青素（Procyanidins）是一类广泛存在于植物中的多酚类化合物，因其强大的抗氧化和生物活性，近年来在营养学、食品科学、医药学等领域受到了广泛关注。
其中，四种主要的原花青素——儿茶素（Catechin）、表儿茶素（Epicatechin）、没食子儿茶素（Gallocatechin）和表没食子儿茶素（Epigallocatechin）的含量测定对于评估食品营养价值、研究药物作用机制以及监控产品质量具有重要意义。
本文旨在比较和分析目前常用的四种原花青素含量测定方法，包括高效液相色谱法（HPLC）、紫外可见分光光度法（UV-Vis）、荧光光谱法（Fluorometry）和质谱法（MS），以期为相关领域的研究和实践提供有益的参考。
通过比较这些方法的准确性、灵敏度、操作简便性以及成本效益等方面的优劣，我们期望能为科研人员和企业选择最适合的原花青素含量测定方法提供指导。
二、方法概述原花青素（Procyanidins）是一类广泛存在于植物中的多酚类化合物，具有强效的抗氧化性能，对多种疾病具有预防和治疗作用。
由于其生物活性的重要性，对原花青素含量的准确测定显得尤为重要。
目前，常用的原花青素含量测定方法主要包括高效液相色谱法（HPLC）、紫外可见分光光度法、薄层色谱法（TLC）和毛细管电泳法（CE）。
这些方法各有优缺点，适用于不同的样品类型和实验条件。
高效液相色谱法（HPLC）具有高分辨率、高灵敏度、高重现性等优点，可以同时分离和测定多种原花青素。
但是，该方法需要昂贵的仪器设备和专业的操作人员，且样品处理过程繁琐，分析时间较长。
紫外可见分光光度法是一种简便、快速的测定方法，适用于大量样品的初步筛选。
然而，该方法只能测定总原花青素的含量，无法区分不同种类的原花青素，且易受样品中其他色素的干扰。
薄层色谱法（TLC）是一种基于原花青素在薄层板上的分离和显色进行测定的方法。
高效液相色谱_-内标法测定香辛料中15_种多环芳烃类污染物(PAHs)
高效液相色谱-内标法测定香辛料中15种多环芳烃类污染物（PAHs）侯美玲*，冯桂蓉，蔡小钦，黄丹丹，董宪兵（重庆市食品药品检验检测研究院，国家市场监管重点实验室（调味品监管技术），重庆 401121）摘要：该研究建立了高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）同时分析香辛料中15种多环芳烃类污染物（Polycyclic Aromatic Hydrocarbons，PAHs）含量的内标检测方法。
样品经氢氧化钠溶解，乙腈萃取，正己烷复溶后，过弗罗里硅土（Florisil）小柱净化浓缩，供HPLC 检测，苯并[a]芘-D12作为内标定量。
该方法在0~100 ng/mL内线性关系良好，辣椒中PAHs检出限：0.5~3.0 μg/kg；定量限2.0~10.0 μg/kg；花椒中检出限：0.5~1.0 μg/kg；定量限2.0~3.0 μg/kg。
在2.0、10.0、50.0 μg/kg 3个浓度水平，辣椒中回收率范围为60.58%~119.48%，相对标准偏差（Relative Standard Deviations，RSD）（n=6）为1.25%~9.61%，花椒中回收率为60.46%~119.24%，RSD （n=6）为1.10%~8.56%。
5种地产香辛料中∑PAHs含量由高到低为：青花椒（561.2 μg/kg）＞二荆条（448.8 μg/kg）＞红花椒（358.3 μg/kg）＞石柱红（353.6 μg/kg）＞小米辣（243.5 μg/kg），区县种植基地污染较严重的为璧山、江津和荣昌，∑PAHs分别为721.5、626.6和621.0 μg/kg，PAHs中污染较严重的化合物为菲、荧蒽和芘，平均含量分别为215.10、80.25和75.35 μg/kg。
该研究建立的内标法准确度高，重复性好，适用于香辛料及制品中PAHs检测。
关键词：多环芳烃；污染物；内标法；高效液相色谱；香辛料文章编号：1673-9078(2024)04-331-340 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2024.4.0429Determination of 15 Polycyclic Aromatic Hydrocarbon (PAH) Pollutants in Spices by an Internal Standard High Performance Liquid Chromatography (HPLC) HOU Meiling*, FENG Guirong , CAI Xiaoqin , HUANG Dandan, DONG Xianbing (Chongqing Institute for Food and Drug Control, Key Laboratory of Condiment Supervision Technology for StateMarket Regulation, Chongqing 401121, China)Abstract: An internal standard HPLC method was established for simultaneous determination of 15 kinds of PAHs in spices by. The samples were dissolved in sodium hydroxide, extracted with acetonitrile, redissolved by n-hexane, cleaned and concentrated by the Florisil SPE cartridge, and determined by HPLC, with benzo[a] pyrene D12 being used as the internal standard. This method had a good linear relationship in the range of 0~100 ng/mL, with the detection limits of PAHs in Capsicum being 0.5~3.0 μg/kg and the limits of quantitation as 2.0~10.0 μg/kg. The limits of detection and limits of引文格式：侯美玲,冯桂蓉,蔡小钦,等.高效液相色谱-内标法测定香辛料中15种多环芳烃类污染物（PAHs）[J].现代食品科技,2024,40(4): 331-340.HOU Meiling, FENG Guirong, CAI Xiaoqin, et al. Determination of 15 polycyclic aromatic hydrocarbon (PAH) pollutants in spices by an internal standard high performance liquid chromatography (HPLC) [J]. Modern Food Science and Technology, 2024, 40(4): 331-340.收稿日期：2023-04-10基金项目：重庆市市场监督管理局科研计划项目（CQSJKJ2022006）作者简介：侯美玲（1987-），女，硕士，工程师，研究方向：食品加工过程中污染物检测，E-mail：331quantitation of PAHs in Zanthoxylum were 0.5~1.0 μg/kg and 2.0~3.0 μg/kg, respectively. When the spiked levels were 2.0, 10.0 and 50.0 μg/kg, the recoveries in the two spices were 60.58%~119.48% and 60.46%~119.24%, with the RSD (n=6) being 1.25%~9.61% and 1.10%~8.56%. The concentration of ∑PAHs in the five spices from high to low were : green Zanthoxylum (561.2 ųg/kg) > erjingtiao (448.8 μg/kg) > red Zanthoxylum (358.3 μg/kg) > shizhuhongi (353.6 μg/kg) > chilli (243.5 μg/kg). The more seriously polluted areas of Chongqing were Bishan, Jiangjin and Rongchang, with ∑PAHs being 721.5, 626.6 and 621.0 μg/kg, respectively. The more seriously polluted compounds in PAHs were phenanthrene, fluoranthrene and pyrene, with their average contents being 215.10, 80.25 and 75.35 μg/kg, respectively. The internal standard method established in this study has high accuracy and good repeatability, which is suitable for the determination of PAHs in spices.Key words: Polycyclic Aromatic Hydrocarbons (PAHs); pollutant; internal standard method; high performance liquid chromatography; spices多环芳香族碳氢化合物（Polycyclic Aromatic Hydrocarbons，PAHs）是一类具有“致畸、致癌、致突变”特性的环境污染物，因其危害性较大，美国环保署已将其中的16种列为监测重点对象，欧盟食品安全局也对其中8种做了限量要求，并选取了4种（䓛、苯并[a]芘、苯并[b]荧蒽和苯并[a]蒽）作为评价食品中PAHs污染的指标[1] 。
离子色谱法及其在药物分析中的应用
离子色谱法及其在药物分析中的应用吴燕;米亚娴【摘要】离子色谱(ion chroroatograpy,IC),是20世纪70年代发展起来的一种新型液相色谱分析技术,具有操作简便、灵敏快速、精密度高、抗干扰能力强、分析结果准确可靠等优点.本文简要综述近年来离子色谱在药物及合成中间体的分析、复杂组分中的某一组分鉴定、药物离子的价态及形态分析等方面的应用,为扩大离子色谱技术在药物分析领域中的应用提供参考.【期刊名称】《天津药学》【年(卷),期】2011(023)004【总页数】4页(P50-53)【关键词】药物分析;离子色谱法【作者】吴燕;米亚娴【作者单位】天津市药品检验所,天津,300070;天津市药品检验所,天津,300070【正文语种】中文【中图分类】R979.5离子色谱法是美国Small等人在离子交换色谱法的基础上建立起来的一种离子分离分析液相色谱技术，具有操作简便、灵敏快速、精密度高、抗干扰能力强、分析结果准确可靠等优点。
自20世纪70年代中期问世到今天，该项技术已成为检测无机阴阳离子的最有力的分析手段。
近年来，随着离子色谱本身的技术发展，离子色谱在药物分析中又有许多新的进展，在药物及合成中间体的分析、复杂组分中的某一组分鉴定、药物离子的价态及形态分析等方面都起了很大的作用[1]。
1 离子色谱法基本原理及研究进展1.1 离子色谱法的基本原理[2] 离子色谱法按分离模式分3种类型：离子交换色谱法、离子排斥色谱法和离子对色谱法。
离子交换色谱法，分离是基于发生在流动相和键合在基质上的离子交换基团之间的离子交换过程，也包括部分非离子的相互作用，这种分离方式可用于有机和无机阴离子和阳离子的分离。
离子排斥色谱法，分离是基于固定相和被分析物质之间3种不同的作用——Donnan排斥、空间排斥和吸附作用，这种分离方式主要用于弱的有机和无机酸的分离。
离子对色谱法，分离是基于被分析物在分离柱上的吸附作用。
分析柱的选择性主要取决于流动相的组成和浓度，流动相除了加入有机改进剂之外，还需加入离子对试剂，这种分离方式可用于表面活性阴离子和阳离子以及过渡金属络合物的分离。
人血浆中甲氨蝶呤的高效液相色谱法测定及其代谢物的质谱定性分析
人血浆中甲氨蝶呤的高效液相色谱法测定及其代谢物的质谱定性分析王漪璇;毋丹;曹军宁;钱隽【摘要】目的：建立固相萃取‐高效液相色谱法测定人血浆中的甲氨蝶呤浓度，用于临床治疗的监测，并通过质谱对甲氨蝶呤的人体代谢物进行定性分析。
方法血浆样本经C18固相萃取小柱净化洗脱后直接进样，以Diamonsil C18分析柱（150mm×4．6mm，5m）分离，流动相为甲醇和0．5％乙酸溶液（含0．3％三乙胺），采用梯度洗脱；流速为1．0ml／min；紫外检测波长为306 nm。
通过质谱全扫描（QLMS）和多反应监测‐信息关联采集‐增强子离子扫描（MRM‐IDA‐EPI）获得甲氨蝶呤代谢物的质谱信息。
结果甲氨蝶呤在0．05～100μmol／L范围内线性关系良好（r＝0．9999），提取回收率＞95％，准确度在97％～105％之间，日内与日间精密度（RSD ）均＜5％。
分析甲氨蝶呤代谢物的质谱信息，推断该代谢物为7‐羟基甲氨蝶呤。
结论本方法灵敏度高、重现性好、操作简便，适用于甲氨蝶呤的血药浓度监测。
%Objective To develop an SPE‐HPLC method for the determination of methotrexate (M TX) in human plasma to monitor the clinical drug use of M TX ,and to identify the human metabolite of M TX by mass spectrometry .Methods M TX was extracted from human plasma using C18 SPE column and analyzed directly after elution .The separation of MTX was per‐formed on Diamonsil C18 column (150 mm × 4 .6 mm ,5 m) with a gradient mobile phase of methanol and0 .5% acetic acid solu‐tion (containing 0 .3% triethylamine) at a flow rate of1 .0 ml/min .The detection wa velength was 306 nm .QLMS and MRM‐IDA‐EPI scan modes were used to obtain the mass spectrum of MTXmetabolite .Results The calibration curve of MTX in plasma was linear over the range of 0 .05‐100 μmol/L(r=0 .999 9) .The extraction recovery was above 95% an d accuracy was between 97% and 105% .Both intra‐and inter‐day precision were less than 5% .7‐OH MTX was identified to be the metabolite through the analysis of the mass spectrum .Conclusion The method is sensitive ,reproducible ,easy to operate and suits for monitoring the concentration of M TX in clinical practice .【期刊名称】《药学实践杂志》【年(卷),期】2015(000)002【总页数】5页(P143-146,158)【关键词】甲氨蝶呤;高效液相色谱法;固相萃取;代谢物【作者】王漪璇;毋丹;曹军宁;钱隽【作者单位】复旦大学附属肿瘤医院肿瘤内科，复旦大学上海医学院肿瘤学系，上海200032;复旦大学附属肿瘤医院肿瘤内科，复旦大学上海医学院肿瘤学系，上海200032;复旦大学附属肿瘤医院肿瘤内科，复旦大学上海医学院肿瘤学系，上海200032;复旦大学附属肿瘤医院肿瘤内科，复旦大学上海医学院肿瘤学系，上海200032【正文语种】中文【中图分类】R917.1·论著·Determination of methotrexate in human plasma by HPLC and qualitativeanalysis of its metabolite by mass spectrometryWANG Yixuan, WU Dan, CAO Junning, QIAN Jun(Department of Medical O ncology,Cancer Hospital Affilliated to Fudan University; Department of Onc ology, Shanghai Medical College, Fudan University, Shanghai 200032, Chin a)[Key words] methotrexate; HPLC; solid phase extraction; metabolite甲氨蝶呤(methotrexate, MTX)为抗叶酸类抗肿瘤药，临床上广泛用于白血病、淋巴瘤、骨肉瘤的化疗。
固相萃取_高效液相色谱法测定人体尿液中邻苯二甲酸酯及其代谢物
DOI ：10．3724/SP．J．1096．2011．00877固相萃取-高效液相色谱法测定人体尿液中邻苯二甲酸酯及其代谢物林兴桃1王小逸*1夏定国2吴琼1赵靖强11（北京工业大学环境与能源工程学院，北京100124）2（北京大学工学院，北京100871）摘要建立了同时测定人体尿液中邻苯二甲酸酯及其代谢物的分析方法。
对洗脱剂种类、洗脱体积、洗脱流速等影响因素进行考察，确定了最佳洗脱剂及洗脱体积为2mL 乙腈、2mL 乙酸乙酯和1mL 乙醚-正己烷（1ʒ19，V /V ），洗脱流速1mL /min 。
在最优化的固相萃取-液相色谱条件下测定5种邻苯二甲酸酯及其5种相应的单酯代谢物，线性范围为20 10000μg /L ，相关系数均大于0．99；检出限为3．8 7．0μg /L ；加标回收率为72．2% 102．3%；相对标准偏差均小于8%。
利用本方法对5名育龄女性的尿液进行分析，除了邻苯二甲酸二甲酯和邻苯二甲酸二乙酯外，其余8种物质均在尿液中检出。
关键词固相萃取；液相色谱；邻苯二甲酸酯；代谢物；尿液2010-09-29收稿；2011-03-18接受本文系北京市教委科技发展计划基金（No．KM200710005025）、北京工业大学青年科研基金（No．X1005211200801）资助项目*E-mail ：wangxiaoyi@bjut．edu．cn1引言邻苯二甲酸酯（Phthalic acid esters ，PAEs ）是一类内分泌干扰物，具有类雌激素作用和抗雄激素作用，可干扰机体内分泌系统，导致生殖发育系统异常，并且具有一定的肝脏毒性和致癌作用［1］。
PAEs 是塑料行业常用的增塑剂，在塑料中的含量可高达20% 30%，广泛存在于各种塑料制品中，如儿童玩具、容器、医疗器具等。
由于PAEs 不以化学键形式与产品中的化学物质结合，在适当的条件下，可不断地向周围环境释放，造成环境污染。
大量的研究表明，在食品、饮用水、土壤、大气等环境中均不同程度的存在PAEs 污染［2 4］。
固相萃取—高效液相色谱—荧光法测定人体尿液中单胺类神经递质
固相萃取—高效液相色谱—荧光法测定人体尿液中单胺类神经递质作者：高慧邢燕汪洋来源：《中国测试》2017年第02期摘要：建立一种快速、准确测定人体尿液中肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺及5-羟色胺4种单胺类神经递质的方法。
尿液样品以Waters Oasis WCX固相萃取柱富集，依次用2 mL 20 mmol/L乙酸铵-甲醇溶液、2 mL甲醇淋洗杂质，最后用5 mL含2%甲酸的乙腈水溶液（85∶15，ν∶ν）提取被分析物。
经Agilent C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）分离，以甲醇与乙酸钠溶液的不同配比设置流动相梯度，在荧光检测激发波长280 nm，发射波长340 nm条件下，测定人体尿液中4种单胺类神经递质的含量。
结果表明：4种单胺类神经递质的回收率为92.2%～104.8%，相对偏差为1.6%～3.1%，检出限为0.002～0.05 μg/mL。
该方法稳定、快速、简便，能满足人体尿液中多种单胺类神经递质的含量测定。
关键词：单胺类神经递质；固相萃取；高效液相色谱；荧光检测文献标志码：A 文章编号：1674-5124（2017）02-0060-040 引言神经递质是神经末梢分泌的化学物质，在化学突触传递中担当信使的作用。
单胺类物质（MNTs）是最早发现的一类神经递质，包括多巴胺（DA）、肾上腺素（E）、去甲肾上腺素（NE）和5-羟色胺（5-HT）。
MNTs在中枢神经系统、外周植物神经系统和激素介导的内分泌及外分泌活动中起着极其重要的作用[1]。
固相萃取（solid-phase extraction，SPE）是近年发展起来的一种样品预处理技术，主要用于样品的分离、纯化和浓缩，与传统的液液萃取法相比较可以提高分析物的回收率，更可将分析物与干扰组分有效分离，正成为复杂样品纯化、富集的有效手段。
人体尿液中单胺类神经递质含量的准确检测，对嗜铬细胞瘤等相关疾病诊断、新药研制开发、药物疗效评价等方面有重要意义。
高效液相色谱-荧光检测法测定土壤中的多环芳烃
高效液相色谱-荧光检测法测定土壤中的多环芳烃
多环芳烃在环境中广泛分布，其中通常含有强致癌有毒性质的基因毒性，因此关注其含量的测定是重要的。
高效液相色谱-荧光检测法（HPLC-FLD）是目前用于测定土壤中多环芳烃的有效方法。
HPLC-FLD测定多环芳烃的优点在于出色的灵敏性和选择性，它可以对多环芳烃的活性幅度在微量水平进行检测。
而且可以通过调整其条件来得到高分辨率和良好的稳定性。
HPLC-FLD测定多环芳烃的操作步骤也相对简单，无九醛长效保存剂和抗菌剂的使用，可以提高分析的准确性。
在使用HPLC-FLD进行多环芳烃分析时，首先需要对原样品进行加标、配制和调整处理。
经过样品预处理，将样品加入色谱柱，随后就可以进行检测。
使用荧光检测器进行峰特征定量，判断多环芳烃的浓度。
HPLC-FLD结合多环芳烃检测是一种有效的方法，准确度高、特异性强、快速灵敏，可以有效提高多环芳烃的检测精度和效率，为环境保护提供详细的资料。
超高效液相色谱-串联质谱筛查确证尿液中磺胺、喹诺酮与四环素抗生素
第42 卷第 10 期2023 年10 月Vol.42 No.101343~1350分析测试学报FENXI CESHI XUEBAO（Journal of Instrumental Analysis）超高效液相色谱-串联质谱筛查确证尿液中磺胺、喹诺酮与四环素抗生素张楠1，唐增煦2，王莉莉1，孙开奇1，赵榕1*，范赛1*（1．北京市疾病预防控制中心，北京市预防医学研究中心，北京100013；2．中国疾病预防控制中心营养与健康所，北京100050）摘要：建立了超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）同时测定尿液中磺胺类、四环素类、喹诺酮类共45种抗生素的检测方法。
尿液样品经提取后，采用HLB固相萃取柱（200 mg/6 mL）净化，使用ThermoAccu⁃core RP-MS（100 mm×2.1 mm，2.6 µm）色谱柱进行分离，以乙腈-0.02%甲酸溶液为流动相梯度洗脱。
在正离子扫描模式下（ESI+），以选择反应监测模式（SRM）检测，外标法定量。
45种目标化合物在3个加标水平（2.0、5.0、10.0 µg/L）下的回收率为78.6%~114%，相对标准偏差为0.60%~18%；方法的检出限为0.1~0.5 µg/L，定量下限为0.3~1 µg/L。
将所建方法用于280个尿液样品中抗生素的检测，均未检测到抗生素残留。
所建方法的精密度和准确度高，操作简单便捷，为尿液中抗生素残留的筛查提供了方法支持。
关键词：抗生素；尿液；超高效液相色谱-串联质谱法；磺胺；喹诺酮；四环素中图分类号：O657.7；S816.73文献标识码：A 文章编号：1004-4957（2023）10-1343-08Study on the Method for the Identification of Sulfanilamide，Quino⁃lone and Tetracycline in Urine by Ultra-high Performance LiquidChromatography-Tandem Mass SpectrometryZHANG Nan1，TANG Zeng-xu2，WANG Li-li1，SUN Kai-qi1，ZHAO Rong1*，FAN Sai1*（1．Beijing Center for Disease Control and Prevention，Beijing Center for Preventive Medicine Research，Beijing 100013，China；2．Institute of Nutrition and Health，Chinese Center for Disease Control and Prevention，Beijing 100050，China）Abstract：A confirmatory test for the simultaneous determination of sulfonamides，tetracyclines，and quinolones in urine totalling 45 antibiotics by ultra-high performance liquid chromatography-tan⁃dem mass spectrometry（UPLC-MS/MS） was developed. The urine samples were extracted and then cleaned up by an HLB solid phase extraction column（200 mg/6 mL），and the separation of the target was performed on a ThermoAccucore RP-MS column（100 mm×2.1 mm，2.6 µm）using acetoni⁃trile-0.02%formic acid aqueous solution with gradient separation elution，detected in positive ion scanning mode（ESI+） in multiple selected reaction monitoring（SRM） and quantified by external stan⁃dard method. The recoveries of a total of 45 target compounds from three classes of antibiotics at three spiked levels（2.0，5.0 and 10.0 µg/L） were in the range of 78.6 %-114% with the RSDs in the range of 0.60%-18%，and the limits of detection（LODs） and the limits of quantification（LOQs） of the method were in the range of 0.1-0.5 µg/L and 0.3-1 µg/L，respectively. The developed meth⁃od was applied to 280 urine samples for the detection of antibiotics，none of which detected antibiot⁃ics residues in excess of limit. The results showed that the established method was highly precise and accurate，simple and convenient，and included commonly used antibiotic species，which can sup⁃port the screening antibiotic residues in urine.Key words：antibiotic；urine；ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spec⁃trometry；sulfonamides；quinolones；tetracyclines四环素类、磺胺类和喹诺酮类广谱抗生素是常见的既可治疗人类疾病，又可作为生长促进剂促进doi：10.19969/j.fxcsxb.23061602收稿日期：2023－06－16；修回日期：2023－07－22基金项目：国家重点研发计划（2017YFC160050002）∗通讯作者：赵 榕，主任技师，研究方向：食品安全，E-mail：lxyue@范 赛，博士，研究员，研究方向：食品安全，E-mail：fansai@第 42 卷分析测试学报动物生长的化学物质［1］，因此在医药卫生及动物养殖行业得到了广泛使用。
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Ｖ０１．２７ Ｎｏ．１
分析科学学报
ＪＯＵＲＮＡＩ。（）Ｆ ＡＮＡＩ。ＹＴＩ（、ＡＩ，Ｓ（、ＩＥＮＣＥ
２０１１年２月
Ｆｅｂ． ２０１ １
文章编号：１００６—６１４４（２０１１）ｏｌ—００２ｌ—０５
高效液相色谱一荧光检测法同时测定人体尿液中的
多种蝶呤类化合西南昌３３００４７） 摘要：建立了高效液相色谱一荧光检测法同时测定人体尿液中的蝶呤、新蝶呤、生物蝶 呤和墨蝶呤。尿液在酸性条件下经碘一碘化钾溶液氧化３０ ｍｉｎ，滴加抗坏血酸还原液 后，可进行液相色谱分析。色谱柱为Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ Ｃ１８柱，用体积比９：１０的水一甲醇为流动
第２７卷
蝶呤、新蝶呤、生物蝶呤和墨蝶呤标准品均购自于美国Ｓｉｇｍａ公司；甲醇、乙腈为色谱纯；其他试剂均
为分析纯；水为超纯水。 １．２标准溶液的配制
准确称取适量的蝶呤、新蝶呤、生物蝶呤和墨蝶呤的标准品分别置于４个２５ ｍＩ。的棕色容量瓶中，加 数滴１．Ｏ ｍｏｌ／Ｌ Ｎａ（）Ｈ溶液溶解，用超纯水稀释至刻度，摇匀，配成浓度分别是：蝶呤８４．８＂ｇ／ｍＩ。、新蝶 呤９０．Ｏ ｐｇ／ｍＩ。、生物蝶呤８０．Ｏ ｐｇ／ｍＬ和墨蝶呤７４．Ｏ ｐｇ／ｍＬ的标准储备液，置于冰箱内４℃保存，使用
１．４色谱条件
Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ
Ｃ，。色谱柱（２５０×４．６ ｍｍ，５弘ｍ）；柱温为室温；流动相：水一甲醇一９０：１０（Ｖ／Ｖ）；流速为１．ｏ
ｎｍ，Ａ。＝４４５ ｎｍ。
ｍＬ／ｍｉｎ；进样量为１０“Ｌ；荧光检测波长为Ａ。。＝３６０
２结果与讨论
２．１流动相的组成及流速的选择
分别采用甲醇一水、乙腈一水、甲醇一磷酸盐缓冲溶 液（ｐＨ＝６．５６，７．０，７．４３）作流动相，考察了不同流 动相配比及流速对四种蝶呤类化合物色谱分离行为 的影响。结果表明：乙腈一水体系作流动相时，墨蝶 呤的荧光响应强度不高，且四种蝶呤类化合物的保 留时间过小，尿液中的共存物质对其检测干扰较大； 甲醇一磷酸盐缓冲溶液（ｐＨ＝６．５６，７．Ｏ，７．４３）作流 动相时，生物蝶呤和蝶呤的分离效果不够理想；甲 醇一水体系作流动相且当甲醇：水一ｌＯ：９０（Ｖ／Ｖ），流
ｍＬ、Ｏ．００２ ｐｇ／ｍＬ、Ｏ．００１弘ｇ／ｍＬ和Ｏ．１５ ｐｇ／ｍＬ。
２．３样品前处理方法的选择
人体尿液成分复杂，为保证分析结果的准确性，考察了以下三种样品前处理方法：（１）取晨尿１．ｏ
ｍＬ，
经０．４５肛ｍ的微孔滤膜过滤，定容至５ ｍＬ容量瓶中，待测。（２）取晨尿１．ｏ ｍＬ置于５ ｍＩ。塑料离心管
ｓ棚ｐｌ器ｆｒｏｍ啪ｃｅｒ
ｐａｔｉｅｎｔｓ（一＝６）
Ｓａｍｐｌｅ
Ｎｅｏｐｔｅｒｉｎ
Ｂｉｏｐｔｅｒｉｎ
Ｐｔｅｒｉｎ
Ｓｅｐｉａｐｔｅｒｉｎ
（弘ｇ／ｍＬ）
３ Ｏ１ ５
Ｏ
（“ｇ／ｍＬ）
３ ４４７ Ｏ ２４ １
０
（“ｇ／ｍＬ）
Ｏ ４７２ Ｏ ４３
Ｏ
ｏｏ
（ｐｇ／ｍＬ）
ＮＤ ＮＤ ＮＤ ＮＤ ＮＤ ＮＤ
ｉ
万方数据
１．Ｎｅｏｐｔｅｒｉｎ（Ｏ．１ （Ｏ．１
ｐｇ／ｍＩ，）；４．Ｓｅｐｉａｐｔｅｒｉｎ（１．５ ｐｇ／ｍＩ。）．
蝶呤的色谱分离效果较好，荧光响应强度较高，分析 时间较短，尿液中共存物质对其测定无影响且系统压力不高。四种蝶呤类化合物的色谱图见图１。
２．２标准曲线与检出限
取适量的标准储备液，分别配制一系列不同浓度的标准工作液，按选定的色谱分离条件进行分析，并 以峰面积对浓度作图。结果表明：新蝶呤、生物蝶呤、蝶呤和墨蝶呤的含量分别在Ｏ．００５～１．５肛ｇ／ｍＬ、
ｌｉｐｏｒｅ公司）。
收稿日期：２０１０一０６一０８ 修回日期：２０１０—０９一０２
基金项目：国家自然科学基金（Ｎｏ．２０７６５００２）；江西省自然科学基金（Ｎｏ．０６２００４９）
。通讯作者：万益群，男，教授，博士研究生导师，研究方向：生命化学及色谱分析．
２１
万方数据
第１期
崔盼盼等：高效液相色谱一荧光检测法同时测定人体尿液中的多种蝶呤类化合物
１．Ｏ
ｍｏｌ／Ｌ的盐酸和５ｍｇ二氧化锰，摇匀，于暗处放置３０
ｍｉｎ，取上清液振荡１０ 瓶中，待测。
ｒ／ｍｉｎ下离心１０ ｍｉｎ，经ｏ．４５肛ｍ的微孑Ｌ滤膜过滤，定容至５ ｍＬ容量
将上述三种方法处理得到的空白尿样及添加蝶呤、新蝶呤、生物蝶呤和墨蝶呤标准溶液的尿样按选定
２２
万方数据
第１期
分析科学学报
第２７巷
实验部分
１．１仪器与试剂 Ａｇｉｌｅｎｔｌｌｏｏ高效液相色谱仪（美国，Ａｇｉｌｅｎｔ公司），配荧光检测器，Ａｇｉｌｅｎｔ液相色谱工作站；ＫＱ－ ５０ＤＢ数控超声波清洗器（江苏昆山市超声仪器有限公司）；ＴＤＬ一５一Ａ型低速台式离心机（上海安亭科学仪 器厂）；ＭＳ２型迷你振荡器（广州仪科实验室技术有限公司）；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ＿Ｑ Ｇｒａｄｉｅｎｔ超纯水装置（美国，Ｍｉ卜
表５健康人尿样加标回收（ｎ＝５）
ＴａｂＩｅ ５ Ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｔｈｅ ｕｒｉｎｅ ｓａｍｐｌｅ
Ｏ．０５～２．０肛ｇ／ｍＬ、ｏ．０１～１．ｏ ｐｇ／ｍＬ和Ｏ．３～１０．ｏ ｐｇ／ｍＬ范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系，其 线性回归方程分别是：ｙ一２１７．５ｌｚ一１．１２７（ｒ＝０．９９９０）；ｙ一３１３．４３ｚ＋１２．６２２（ｒ—ｏ．９９８２）；ｖ一５１７．６１ｚ
＋２．２６５９（ｒ—ｏ．９９９５）；ｙ一５．１６１８ｚ—ｏ．１４４７（，．＝ｏ．９９９８）；以三倍信噪比计算，检出限依次是：ｏ．００３“ｇ／
中，加６．ｏ ｍｏｌ／Ｉ。的盐酸１～２滴，加ｏ．０５ ｍｏｌ／Ｌ碘一碘化钾氧化液１．ｏ ｍＬ，于暗处放置３０ ｍｉｎ，滴加ｏ．０５
ｍｏｌ／Ｌ抗坏血酸还原液１．ｏ ｍＬ，摇匀，加水至５ ｍＩ。，经Ｏ．４５弘ｍ的微孔滤膜过滤得进样液。（３）取晨尿
１．ｏ
ｍＩ。置于５ ｍＬ塑料离心管中，加入Ｏ．１ ｍＬ
ｍｉｎ，１２ ０００
中图分类号：０６５７．７＋２ 文献标识码：Ａ
蝶呤类化合物（Ｐｔｅｒｉｄｉｎｅｓ）在生物体代谢过程中起重要的辅助作用，可作为体内“淋巴细胞一巨噬细胞 轴”所介导的细胞免疫防御系统激活程度的标志物，体液中其水平的高低反映了体内细胞免疫状态，已用 于多种疾病的监测Ⅲ。主要的几种蝶呤类化合物包括蝶呤（Ｐｔｅｒｉｎ）、新蝶呤（Ｎｅｏｐｔｅｒｉｎ）、黄蝶呤（Ｘａｎ— ｔｈｏｐｔｅｒｉｎ）、异黄蝶呤（Ｉｓｏｘａｎｔｈｏｐｔｅｒｉｎ）、蝶呤一６一羧酸（Ｐｔｅｒｉｎ一６一ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ）、生物蝶呤（Ｂｉｏｐｔｅｒｉｎ）和墨 蝶呤（Ｓｅｐｉａｐｔｅｒｉｎ）等。其中，以新蝶呤的研究最为广泛，已应用于临床上多种类型疾病的诊疗∞４］，其它蝶 呤类化合物相对研究较少¨柚］。墨蝶呤是蝶呤类化合物的一种，目前主要研究对象为动物细胞及人体脑 脊液，对人体尿液中墨蝶呤含量检测的研究鲜有报道。 本文系统探讨了人体尿液中蝶呤、新蝶呤、生物蝶呤和墨蝶呤的色谱分离条件，同时考察了尿液的前 处理方法，在此基础上，建立了四种蝶呤类化合物同时分析的新方法，并应用于健康人、普通病人和癌症病 人尿样检测，取得了较好的效果。 １
速为１．Ｏ ｍＬ／ｍｉｎ时，新蝶呤、蝶呤、生物蝶呤和墨
三．
‘晶 ￡
旦 ．兰
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三
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１５
２０
２５
３０
Ｔｉｍｅ／ｍｉｎ
图ｌ
Ｆｉｇ．１
四种蝶呤类化合物的色谱分离图
Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ ｏｆ ｆｏｕｒ ｐｔｅｒｉｄｉｎ器 ｐｇ／ｍＬ）；２．Ｂｉｏｐｔｅｒｉｎ（Ｏ．１肛ｇ／ｍＬ）；３．Ｐｔｅｒｉｎ
弘ｇ／ｍＬ和０．１５弘ｇ／ｍＬ。加标平均回收率在８４．８％～１２０．ｏ％之间。用该方法测定了 健康人、普通病人和癌症病人尿样中的蝶呤、新蝶呤、生物蝶呤和墨蝶呤，发现癌症病人 尿样中的新蝶呤水平与健康人和普通病人相比有所升高，生物蝶呤水平有所降低。该 方法准确，可行，适用于临床上尿样中蝶吟类化合物的检测。 关键词：蝶呤类化合物；人体尿液；高效液相色谱；荧光检测
５ ６ ７
ＯＯ６
Ｏ Ｏ １１
Ｏ
Ｏ Ｏ７ １ Ｏ Ｏ １５ Ｏ ＯＯ５ Ｏ Ｏ２ ８
３ ２９ Ｏ Ｏ ３ ８７ ３ ５７１ ３
４
Ｏ ４３ ６
Ｏ
ＯＯ９
Ｏ １６
２ ６Ｏ
Ｏ Ｏ ５６
Ｏ Ｏ
Ｏ５
Ｏ●
ｌ８ ｌ９ ２０ ａ：ｊ±ｓ；ｂ：ｎｏｔ ｄｅｔｅｃｔｅｄ．
Ｏ Ｏ３ ９
Ｏ ９２７ Ｏ ６ ５ ４ ＋一士±土士
所降低。
表ｌ健康人尿样的分析结果（疗＝６）
Ｔａｂｌｅ １ Ｔｈｅ ａｎａＩｙｔｉｃａＩ Ｉ‘ｅｓｕＩｔｓ ｏｆ ｕｒｉｎｅ ｓａｍｐＩｅｓ
ｆｒ咖ｈｅａｌｔｈｙ ｐｅｏｐｌｅ（ｎ＝＝６）
９ １０ １１ １２ １３ １４
Ｏ．４２８±Ｏ．０２３ ２．５５９士Ｏ．０７２ ２．０５０±Ｏ．０５７ ２．５７０士Ｏ．０１４ Ｏ．３９９士Ｏ．０５０ ３．４９ｌ士Ｏ．０１６
第２７卷
ＩｎｆＯｍａｔｉ伽０ｆ
Ｓｅｘ
Ｏｒｄｉｎａｒｙ ｐａｔｉｅｎ协ａｎｄ ＳａｍｐＩｅ １５ １６ １７ １８ １９ ２０
ｃａｎｃｅｒ
ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｓｅｘ ｍａｌｅ ｍａｌｅ ｍａｌｅ ｍａｌｅ ｍａｌｅ ｆｅｍａｌｅ Ａｇｅ ４８ ６５ ７６ ５３ ６３ ５９
Ａｇｅ ７９ ６９ ８ ２４ ３４ ２２
Ｏ．０１８±Ｏ．０１０ １．５１９±Ｏ．０２６ １．６５６ ２．３７５±Ｏ．０２１ Ｏ．１１４±Ｏ．００５ １．０５９士Ｏ．０２７
Ｏ．２６１±Ｏ．００６ Ｏ．６７９土Ｏ．０５９ ＮＤ ＮＤ Ｏ．０８２ Ｏ．６１４±Ｏ．００８
ＮＤ ＮＤ ＮＤ ＮＤ ＮＤ ＮＤ
表３癌症病人尿样的分析结果（捍＝６）