HLA-B27高分辨基因分型的临床
HLA-B27分子游离重链与AS
HLA-B27分子的主要功能是：识别和处理抗原肽，然后在 递呈给T淋巴细胞。HLA-B27分子具有特殊的生物学效应， 它在体外具有形成重链二聚体的能力，主要是通过B27分 子第67位氨基酸的残基半氨酸的二硫键结合形成稳定的二 聚体。通过认识HLA-B27分子结构的特异性，重要的是深 入研究游离重链的表达是否应该认为是导致AS的发病原因 之一。当HLA-B27分子适当的、正确的组装时，其递呈的 抗原肽通常被CD8 CTL识别；但当AS发生时，限制性的 CIM Th细胞却能识别非折叠、空载或缺失的B27分子。在 这种情况下，就是HLA II类分子递呈B27重链，降解后形 成的多肽被CD4 Th细胞识别后导致关节炎症。此研究目 前还存在争议。
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HLA-B*2705基因分布最广，几乎见于所有人种。 甚至认为其它等位基因都是由HLA-B*2705基因发 生突变、移位形成的。 HLA-B*2705编码的蛋白最为显著的特点就是在B袋 上的45位发生氨基酸的突变，这一改变直接影响 HLA-B27分子在细胞表面的表达，影响HLA-B27分 子与抗原肽的结合，同时影响了HLA-B27分子对胞 内外抗原的递呈。
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【differential diagnosis juvenile ankylosing spondylitis and juvebile rheumatoid arthritis by subtypes of HLA-B27 alleles】报道：和该疾病相关 的HLA-B*27的等位基因涉及B*2705,B*2704, B*2707,B*2702基因。在HLA-B27抗原阳性的 JRA患者中，B*2705基因占60.7%，B*2704基 因占28.57%，B*2702基因占3.57%，B*2707
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急性前葡萄膜炎（AAU)
急性前葡萄膜炎(acute anterior uveitis，AAU) 是一类常见的自身免疫性致盲眼病 ，病因复杂、 病程长、易反复发作,要确定其发病原因仍比较困 难。自1973年Brewerton DA等人首次报道HLA— B27抗原与AAU之间的相关性以来，迄今为止，已 发现2O多种眼病与HLA抗原具有相关性 ，其中最 主要的是HLA—B27抗原与AAU之间的相关性。
易感性等位基因
B*2701,B*2702,B*2704,B*2705,B*27 10 B*2702, B*2704, B*2705, B*2713 B*2724 B*2709，B*2705 B*27XX B*2702 B*27XX B*27XX B*27XX B*27XX B*27XX B*27XX
HLA-B27高分辨基因分型 的临床应用
天津秀鹏生物技术有限公司
1
HLA-B27分子及其等位基因
2
与HLA-B27相关的疾病
3
HLA-B27检测方法
4
本公司试剂盒简介
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1.HLA-B27抗原分子及其等位基因
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HLA-B27抗原分子结构及其特点
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PCR-SSP:针对HLA-B*27基因的外显子2的序列，
合成相应的HLA-B*27基因引物，在
PCR扩增仪上扩增即可，这种特异性 的PCR扩增产物可通过琼脂糖凝胶电 泳检出，凝胶成像系统下观察结果。
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AS的基因学检测
不同人群的AS患者涉及的B*27等位基因
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与AS相关的B*27等位基因
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不同人群AS患者的HLA-B*27等位基因频率
摘自【HLA—B*27高分辨等位基因在1 606例疑似强直性脊柱炎患者中的表达】
Yoቤተ መጻሕፍቲ ባይዱr company slogan
HLA-B27与AS致病机制的研究
HLA-B27分子与非折叠蛋白理论假说 HLA-B27分子游离重链与AS 其它
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HLA-B27分子非折叠蛋白理论假说
HLA I类分子是在内质网成熟的，新合成的HLA Iα进入内质网腔 与钙连蛋白结合，使I类分子在内质网中维持部分折叠，继而与新 合成的β2-微球蛋白组装成完整的I类分子，此时B27分子才能被认 为是成熟的，转运至细胞表面。研究发现，HLA-B27折叠速度较其他 HLA分子（非HLA-B27分子）慢。导致内质网腔中出现大量的折叠不 良或部分折叠的HLA-B27重链部分，通常情况下，非折叠的重链在内 质网腔内能够被清除，但由于一些相关物质的缺乏或无效，所致非折 叠的重链堆积，形成了非折叠蛋白反应。有资料报道，AS的发生可能 与这些HLA-B27分子的未折叠有关。
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此外，HLA-B27抗原与白血病、心脏疾病、鼻咽癌、银屑病、
关节炎型肠炎也有相关性，但相关报道较少 。
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名称
强直性脊柱炎
类风湿性关节炎 青少年自发性关节炎 脊椎关节炎 关节炎型炎症性肠病 白塞病 银屑病 白血病 银屑病 鼻咽癌 赖姆疏螺旋体病 HIV-1感染
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其它
HLA-B27可提高致关节炎的细菌在胞内的存活率， 从而加剧关节炎的严重度。 B27改变信号转导学说，即HLA-B27通过修饰 炎症因子基因相关的信号转导过程而致关节炎。 HLA-B39,HLA-B60可能对AS的诱发起到一定的作用。
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【Association between HLA-B27 antigen and acute anterior uveitis】指出：国内外报道有所不同，国内报 道37.0％-60％ AAU患者HLA-B27抗原呈阳性，国外报道19 ％-88％呈阳性,而B*27等位基因与AAU的关系报道较少。 【acute anterior uveitis and HLA-B27】报道，在HLAB27抗原阳性的AAU患者中,HLA-B*2704基因占44．7%, B*2705基因占56%。
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其它疾病
【Genetic markers linked to rheumatoid arthritis are also strongly associated with articular manifestations in ulcerative colitis patients】 【Flt3一ITD mutations can generate leukaemia specific neoepitopes： potential role for immunotherapeutic approaches】 【Ankylosing spondylitis is linked to Klebsiella—the evidence】 等三篇文献报道：HLA-B27抗原与白塞氏病也 有一定的相关性。
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3.HLA-B27的检测方法
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微量淋巴细胞毒实验（CDC） 流式细胞术（FCM） 分子生物学技术（PCR）
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三种检测方法的对比
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HLA-B27基因分型检测方法 特异性引物序列聚合酶链反应 (PCR-SSP) 序列特异性寡核苷酸-聚合酶链反应（PCR-SSO） 聚合酶链反应-直接测序分型（PCR-SBT）
基因占7.14%。
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HLA-B27与JRA致病机制的研究
以各种感染性微生物作为外来抗原（HLA-B27分子与其结构 有相似性），激活免疫细胞，通过损伤或分泌细胞因子触 发异常的免疫反应，引起自身组织的损害和变性。 特别是细菌、病毒的特殊成分作为超抗原，其结构与人类 MHC抗原有同源性，不需抗原呈递细胞加工处理，即可直接 与T细胞受体直接结合（HLA-B27充当细胞表面受体），激 活T细胞。
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HLA-B27与AAU致病机制的研究
葡萄膜炎-受体假说：HLA—B27(+)的AAU可能 由于HLA—B27分子担当细胞表面受体，其与微 生物结合，由此引起葡萄膜炎。 分子拟态假说:HLA—B27分子在结构上与激发 引起AAU的微生物肽序列相似,从而引发葡萄膜炎。
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HLA-B27抗原分子结构
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α 1区与α2区的肽链折叠后共同构成一个抗原 结合凹槽，槽内形成A,B,C,D,E,F共6个袋状结 构，其中B袋在HLA-B27分子中是最保守的结构。 凹槽的作用是结合抗原肽，使抗原肽与HLA-B27 分子牢固的结合。
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其中HLA-B*2701与HLA-B*2705编码的蛋白 在78-81范围内有2个氨基酸的不同； 其中HLA-B*2702与HLA-B*2705编码的蛋白 在78-81范围内有3个氨基酸的不同； 其中HLA-B*2703与HLA-B*2705编码的蛋白 仅有1个氨基酸的差别，即在59位前者 为组氨酸（His），后者为酪氨酸（Tyr）；
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强直性脊柱炎（AS）
1973年Brewerton和schiosstein发现 强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis AS）与HLA-B27抗原有 非常强的相关,这是目前唯一有临床 价值的血型相关抗原,这在迄今已知 的HLA与疾病的关联中是最强和最典 型的。
HLA-B27／B7检测在强直性脊柱炎诊断中的价值分析
分 比及平均 Ｍ ｎ Ｘ对 Ａ Ｓ的诊断 、 临床分级 和早期预测有一定 的价值 。 【 关键词】 强直性脊柱炎 ； 人类 白细胞抗原 Ｂ ２ ７； 荧光强度
Ｃｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ ｖ ａ ｌ ｕ ｅ ｏ ｆ ＨＬＡ－ Ｂ２ ７ ／ Ｂ７ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｆ ｏ ｒ ｄ ｉ ａ ｇ ｎ ｏ ｓ ｉ ｓ ｆ ｏ ｒ ａ ｎ ｋ ｙ ｌ ｏ ｓ ｉ ｎ ｇ ｓ ｐ ｏ ｎ ｄ ｙ ｉ ｌ ｔ ｉ ｓ
直 性脊 柱炎 （ Ａ Ｓ ） 患者的诊断和 临床 分级价值 。方 法 选择 ２ ０ １ ４年 １ 月至 ２ ０ １ ５年 ４月普洱 市人民医 院收治 的确诊 Ａ Ｓ患者 ３ ８ 例为 Ａ Ｓ组 ， 其他原 因引起 的腰腿痛患者 ４ ０例为非 Ａ Ｓ组 ， 同期本 院体检健康 志愿者 ３ ０ 例 为健 康对 照组 。用 流式 细胞仪检测 ３ 组 ＨＬ Ａ — Ｂ ２ ７ ／ Ｂ ７ 一 百分 比及平均 Ｍｎ Ｘ， 并结合影像学 检查结果进行临床分级评估 。结果 Ａ Ｓ组 ＨＬ Ａ — Ｂ ２ ７ ／ Ｂ ７ 一 百分 比［ （ ９ ２ ． ２ １ ±３ ． ３ ０ ） ％ 比（ ４ ６ ． ０ ４ ±２ ． １ １ ） ％、 （ ２ ９ ． ５ ７ ±１ ． ２ ５ ） ％］ 和 平 均 Ｍｎ Ｘ（ １ ３ ． ７ ±０ ． ５比 １ ． ５ ±０ ． １ 、 ２ ． １ ±０ ． １ ） 均 明显 高 于 非 Ａ Ｓ组 及 健 康 对 照 组 （ Ｐ均 ＜０ ． ０ ５ ） ， Ａ Ｓ组 ＨＬ Ａ — Ｂ ２ ７阳性率显著高于非 Ａ Ｓ组及健康对照组 ［ ９ ２ ． １ ％（ ３ ５ ／ ３ ８ ） 比１ ２ ． ５ ％（ ５ ／ ４ ０ ） 、 ３ ． ３ ％（ １ ／ ３ ０ ） ， Ｐ均 ＜０ ． ０ ５］ ； Ｘ线 Ｉ一Ⅳ级 Ｈ Ｌ Ａ — Ｂ ２ ７百分 比差异无 统计 学意义 ［ 分别 为 （ ９ ２ ． ０ ３ ±３ ． ０ ５ ） ％、
人类白细胞抗原b27基因检测方法
人类白细胞抗原b27基因检测方法
人类白细胞抗原B27（HLA-B27）基因检测是一种用于确定一个
人是否携带HLA-B27基因的检测方法。
HLA-B27基因与脊柱关节炎
等自身免疫性疾病的发病风险密切相关。
以下是关于HLA-B27基因
检测方法的详细解释：
1. PCR法，PCR（聚合酶链式反应）是一种常用的HLA-B27基
因检测方法。
通过PCR，可以扩增DNA样本中的HLA-B27基因片段，然后利用特定的试剂进行检测。
2. 血清学检测，血清学检测是另一种常见的HLA-B27基因检测
方法。
该方法通过检测血清中的HLA-B27抗体来判断是否患有相关
疾病。
3. 分子生物学方法，分子生物学方法包括Southern blotting、序列特异性引物扩增（SSP）和序列特异性杂交（SSO）等技术，这
些方法可以对HLA-B27基因进行精确的检测和分析。
4. 流式细胞术，流式细胞术结合特定的HLA-B27抗体，可以用
于检测HLA-B27基因的表达水平。
5. 高通量测序，近年来，随着高通量测序技术的发展，可以利用这些技术对HLA-B27基因进行全面的测序和分析。
需要指出的是，HLA-B27基因检测方法的选择取决于实验室的设备和技术水平，以及医生的建议。
在进行HLA-B27基因检测前，应该咨询医生，了解不同检测方法的优缺点，以便选择最适合的方法。
同时，需要注意的是，HLA-B27基因检测结果需要由专业的医生进行解读和分析，以确定相关疾病的风险。
HLA-B27基因检测的临床应用
维普资讯
荧光定量PCR染料法检测强直性脊柱炎患者HLA-B27基因及分型
论著 临床研究荧光定量P C R染料法检测强直性脊柱炎患者H L AＧB２７基因及分型∗罗秀霞,尹志华,张春容,陈㊀杰,叶志中ә,黄进贤(深圳市福田区风湿病专科医院,广东深圳５１８０４０)㊀㊀摘㊀要:目的㊀探讨荧光定量P C R染料法检测强直性脊柱炎(A S)患者人类白细胞抗原B２７(H L AＧB２７)基因及亚型的临床应用价值.方法㊀收集２０１４年１月至２０１５年３月深圳市福田区风湿病专科医院已确诊的强直性脊柱炎患者血液标本４３例和体检健康者血液标本５６例,采用流式细胞法检测H L AＧB２７基因,同时采用荧光定量P C R染料法检测H L AＧB２７基因及分型.结果㊀流式细胞法检测４３例A S患者中４０例阳性(９３．０２％),荧光定量P C R染料法检测３９例阳性(９０．７０％),两者符合率为９７．５０％.３９例H L AＧB２７者中B２７０４亚型者有３２例(８２．０５％),B２７０５亚型者有７例(１７．９５％).结论㊀荧光定量P C R染料法检测H L AＧB２７基因准确率高,与流式细胞法有高度一致性,同时还能检测H L AＧB２７基因亚型,具有很好的临床推广价值和应用前景.关键词:人类白细胞抗原B２７;㊀荧光定量P C R染料法;㊀流式细胞法;㊀强直性脊柱炎D O I:１０．３９６９/j．i s s n．１６７３Ｇ４１３０．２０１８．１３．００５中图法分类号:R５９３．２３文章编号:１６７３Ｇ４１３０(２０１８)１３Ｇ１５５０Ｇ０３文献标识码:AT h e d e t e c t i o no fH L AＧB２７g e n e a n d g e n e t y p i n g o f a n k y l o s i n g s p o n d y l i t i s p a t i e n t s b y f l u o r e s c e n c eP C R∗L U OX i u x i a,Y I N Z h i h u a,Z HA N GC h u n r o n g,C H E NJ i e,Y EZ h i z h o n gә,HU A N GJ i n x i a n(S h e n z h e nF u t i a n H o s p i t a l f o rR h e u m a t i cD i s e a s e s,S h e n z h e n,G u a n g d o n g５１８０４０,C h i n a)A b s t r a c t:O b j e c t i v e㊀T o i n v e s t i g a t e t h e c l i n i c a l a p p l i c a t i o n v a l u e o f f l u o r e s c e n c e p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n (P C R)．i n t h e h u m a n l e u c o c y t e a n t i g e nＧB２７(H L AＧB２７)g e n e a n d g e n e t y p i n g d e t e c t i o no f a n k y l o s i n g s p o n d yＧl i t i s(A S)p a t i e n t s．M e t h o d s㊀At o t a l o f４３c l i n i c a l b l o o ds a m p l e so fA Sa n d５６s a m p l e so fh e a l t h y c o n t r o l s w e r e c o l l e c t e d i nS h e n z h e nF u t i a nh o s p i t a l f o r r h e u m a t i c d i s e a s e s f r o mJ a n u a r y２０１４t oM a r c h２０１５．H L AＧB２７g e n ew a s d e t e c t e db y f l o wc y t o m e t r y．H L AＧB２７g e n ea n d g e n e t y p i n g w a sa l s od e t e c t e db y t h e f l u o r e s c e n c e P C R m e t h o d．R e s u l t s㊀A m o n g４３s a m p l e s,４０s a m p l e sw e r e H L AＧB２７p o s i t i v e(９３．０２％)b y f l o wc y t o m e t r y w h i l e３９s a m p l e s w e r e H L AＧB２７p o s i t i v e(９０．７０％)b y f l u o r e s c e n c eP C R．T h et o t a lc o i n c i d e n c er a t e w a s ９７．５０％．A m o n g３９p o s i t i v es a m p l e s,３２s a m p l e sw e r e H L AＧB２７０４p o s i t i v e(８２．０５％)a n d７s a m p l e sw e r e H L AＧB２７０５p o s i t i v e(１７．９５％)．C o n c l u s i o n㊀T h e f l u o r e s c e n c eP C R i s a n a c c u r a t em e t h o d t o d e t e c tH L AＧB２７g e n e a n d p r e s e n t s h i g hc o n s i s t e n c y w i t h f l o wc y t o m e t r y．I t c a na l s od e t e c t t h eH L AＧB２７g e n e t y p i n g．I tm a yh a v e g r e a t c l i n i c a l a p p l i c a t i o nv a l u e a n d p r o s p e c t s．K e y w o r d s:h u m a n l e u c o c y t e a n t i g e nＧB２７;㊀f l u o r e s c e n c e p o l y m e r a s e c h a i nr e a c t i o n;㊀f l o wc y t o m e t r y;㊀a n k y l o s i n g s p o n d y l i t i s㊀㊀人类白细胞抗原B２７(H L AＧB２７)是B基因座编码的主要组织相容性复合体Ⅰ类(MH CⅠ)表面抗原,位于第６染色体上.研究发现H L AＧB２７与强直性脊柱炎(A S)高度相关,是迄今为止所知的与疾病相关性中最强的白细胞抗原.在世界不同地区,约９０％~９６％的强直性脊柱炎患者携带H L AＧB２７基因[２],该病起病大多缓慢而隐匿,当影像学检查出现痕迹确诊时,患者病情已经发展到比较严重的阶段,因此病程早期是治疗的关键期.临床检测H L AＧB２７为早期诊断疑似A S患者提供参考.本研究采用荧光定量P C R染料法检测H L AＧB２７基因及分型,并与流式细胞术法进行比较,探讨荧光定量P C R染料法检测H L AＧB２７基因及亚型的临床应用价值.１㊀资料与方法１．１㊀一般资料㊀选取２０１４年１月至２０１５年３月在深圳市福田区风湿病专科医院体检的健康者５６例,其中男４３例,女１３例,平均年龄(４０．２８ʃ１０．２１)岁;住院并已确诊的A S患者４３例,其中男３４例,女９０５５１ 国际检验医学杂志２０１８年７月第３９卷第１３期㊀I n t J L a bM e d,J u l y２０１８,V o l．３９,N o．１３∗基金项目:国家自然科学基金资助项目(８１１０２２６６㊁８１３０１５２９);广东省自然科学基金(S２０１３０４００１２２９６);深圳市科技计划项目(J C Y J２０１４０４１６０９４２５６８９１);福田区科技计划项目(F TW S２０１３０８);深圳市医疗卫生三名工程资助项目(S Z S M２０１６０２０８７).㊀㊀作者简介:罗秀霞,女,主管技师,主要从事自身免疫性疾病的实验室检查研究.㊀ә㊀通信作者,EＧm a i l:y e z h i z h o n g＠１２６．c o m.㊀㊀本文引用格式:罗秀霞,尹志华,张春容,等．荧光定量P C R染料法检测强直性脊柱炎患者H L AＧB２７基因及分型[J]．国际检验医学杂志,２０１８,３９(１３):１５５０Ｇ１５５２．例,平均年龄(３７．９５ʃ９．０１)岁.根据修订的纽约标准(１９８４年)进行A S诊断:(１)下腰背痛的病程至少持续３个月,疼痛随活动改善,但休息不减轻;(２)腰椎在前后和侧屈方向活动受限;(３)胸廓扩展范围小于同年龄和性别的正常值;(４)双侧骶髂关节炎Ⅱ~Ⅳ级,或单侧骶髂关节炎Ⅲ~Ⅳ级.如果患者具备(４)并分别附加(１)~(３)条中的任何１条可确诊为A S.１．２㊀仪器与试剂㊀流式细胞法检测H L AＧB２７基因采用美国B D公司生产的F A C SC a l i b u r流式细胞仪.H L AＧB２７检测试剂盒(流式细胞法)[国食药监械(进)字２０１０第３４０２０５６]购自美国B D公司.荧光定量P C R染料法检测H L AＧB２７基因及分型采用美国A B I公司生产的荧光定量P C R仪(７３００型),血液基因组D N A提取试剂盒(离心柱法)购自天根(北京)生化技术有限公司;H L AＧB２７基因分型测定试剂盒(荧光定量P C R染料法)[国食药监械(进)字２０１３第３４０１５６４]购自天津市秀鹏生物技术开发有限公司.１．３㊀方法１．３．１㊀D N A提取㊀取乙二胺四乙酸(E D T A)抗凝血３００μL,按试剂盒说明提取D N A,D N A产物－２０ħ保存备用.１．３．２㊀荧光定量P C R染料法检测H L AＧB２７及分型㊀按试剂盒说明进行操作.P C R循环参数:９６ħ２m i n;９６ħ２０s,６８ħ６０s共５个循环;９６ħ２０s,６５ħ５０s,７２ħ４５s共１０个循环;９６ħ２０s,６３ħ５０s,７２ħ４５s共１５个循环,７２ħ４５s采集荧光;７２ħ２m i n;最后加上一个D N A溶解曲线.按说明书进行结果判断.１．３．３㊀流式细胞法检测H L AＧB２７㊀在测定管中加入３０μL抗H L AＧB２７F I T C/C D３P E抗体和６０μL 抗凝血,混匀后室温避光染色１５m i n;加入２m L溶血素,２０００r/m i n离心５m i n后弃上清,用磷酸盐缓冲液(P B S)洗两次后,再用P B S混悬后上机检测.上机获取细胞１５０００个检测,结果使用B D公司专用H L AＧB２７分析软件进行分析.以C D３ＧP E标记的T 淋巴细胞设门,检测门内细胞抗H L AＧB２７F I T C信号的平均荧光强度,并与参考值相比较,大于或等于此值判定为H L AＧB２７阳性,小于则为H L AＧB２７阴性.１．４㊀统计学处理㊀采用S P S S１３．０统计学软件进行分析,根据资料类型采用χ２检验进行统计分析,P＜０．０５表示差异有统计学意义.２㊀结㊀㊀果２．１㊀流式细胞检测结果㊀流式细胞检测结果显示４３例A S患者中４０例H L AＧB２７阳性(９３．０２％),３例阴性;５６例健康体检者中１例阳性,５５例阴性.２．２㊀荧光定量P C R染料法检测A S患者H L AＧB２７及其分型㊀荧光定量P C R染料法结果显示４３例A S 患者中３９例H L AＧB２７阳性(９０．７０％),４例阴性;５６例健康体检者全部阴性.３９例H L AＧB２７阳性者中, H L AＧB２７０４亚型的有３２例(８２．０５％),H L AＧB２７０５亚型的有７例(１７．９５％),未检测出其他亚型.２．３㊀两种方法检测H L AＧB２７的一致性㊀两种方法检测H L AＧB２７,只有１例流式细胞法阳性,而荧光P C R法阴性,其余相同.以流式细胞法试剂盒检测结果作为参照,两种试剂盒阳性符合率为９７．５０％(３９/４０),差异有统计学意义(χ２＝３１．４４４,P＜０．０５),两种方法具有高度的一致性,见表１.表１㊀㊀两种方法检测H L AＧB２７比较(n)流式细胞法荧光定量P C R染料法阳性(＋)阴性(－)合计阳性(＋)３９１４０阴性(－)０３３合计３９４４３２．４㊀两种方法灵敏度㊁特异度㊁阳性预测值和阴性预测值比较㊀流式细胞检测的灵敏度为９３．０２％,特异度为９８．２１％,阳性预测值为９７．５６％,阴性预测值为９４．８３％;荧光定量P C R染料法检测的灵敏度为９０．７０％,特异度为１００．００％,阳性预测值为１００．００％,阴性预测值为９３．３３％.两种方法差别不明显,见表２.表２㊀㊀两种检测方法的灵敏度㊁特异度㊁阳性㊀㊀㊀预测值和阴性预测值(％)检测方法灵敏度特异度阳性预测值阴性预测值流式细胞法９３．０２９８．２１９７．５６９４．８３荧光定量P C R染料法９０．７０１００．００１００．００９３．３３３㊀讨㊀㊀论㊀㊀H L AＧB２７是H L AB座上的一组重要等位基因,在免疫系统中主要负责细胞间的相互识别,诱导免疫反应和调节免疫应答.大量的研究证明A S与H L AＧB２７强相关[１].目前,检测H L AＧB２７的方法主要有微量淋巴细胞毒试验检测法㊁流式细胞法㊁聚合酶链反应Ｇ序列特异性引物(P C RＧS S P)法与荧光定量P C R染料法等[２].微量淋巴细胞毒试验检测法㊁流式细胞术法的检测对象是人类白细胞表面的H L AＧB２７抗原,其检测结果受细胞纯度㊁补体差异㊁单抗效价及H L A高度多态性的影响,并且会因抗体交叉性反应的影响而可能出现假阳性[３],目前在临床上最常用的就是流式细胞法[４Ｇ５].P C RＧS S P法与荧光定量P C R等分子生物学检测方法具有特异度强㊁灵敏度高㊁稳定性好,标本可保存及可重复鉴定的特点[６].荧光定量P C R染料法因无需电泳而具有简单,快速的优势;并且试验中不需要取出P C R产物,因此可防止P C R产物污染[７].本研究采用了流式细胞法和荧光定量P C R染料法同时对已经确诊的A S患者进行检测,结果流式细胞法的阳性率为９３．０２％(４０/４３),而荧光定量P C R 染料法的阳性率为９０．７０％(３９/４３),两种方法阳性符合率达到９７．５０％,具有高度的一致性,这与侯伟等[８]㊁白世杰等[９]㊁刘巧灵等[１０]及叶阿里等[１１]的结果１５５１国际检验医学杂志２０１８年７月第３９卷第１３期㊀I n t J L a bM e d,J u l y２０１８,V o l．３９,N o．１３相似.人类白细胞抗原是已知人类最复杂的显性多态遗传系统,近年来随着基因分型技术的发展,证实H L AＧB２７不是单一抗原,而是由多种等位基因所构成的亚型构成,现已确定有４４个等位基因,这些亚型存在着人种和地区的差异,同时不同的亚型虽然可能只相差１个或几个氨基酸,但却显示出对A S的易感性和抗性,因此对疑似A S患者进行H L AＧB２７分型检测,有助于A S的诊断和鉴别诊断.本研究对３９例H L AＧB２７阳性标本检测结果显示H L AＧB２７０４亚型占８２．０５％,H L AＧB２７０５亚型占１７．９５％.国内不同地区(包括湖南㊁上海㊁陕西㊁四川)[１２Ｇ１５]的相关报道结果均显示A S患者H L AＧB２７的亚型以B２７０４和B２７０５为主,其中B２７０４占大多数;而山东地区H L AＧB２７０５亚型占６３．３３％,H L AＧB２７０４占３６．６７％[１６];内蒙古地区H L AＧB２７０５亚型占４９．４０％,H L AＧB２７０４占４４．５０％[９];有可能存在南北地区的差异.而深圳地区外来人口很多,大多数来自中国南方地区,因此本研究结果与上述的４个南方地区的结果相符,主要以H L AＧB２７０４为主.由于本研究的样本数太少,临床资料不是很全,未进行亚型与临床特征的相关性分析,根据已有的研究暂未发现亚型与临床特征如病程㊁活动度㊁分期等有明显的相关性.４㊀结㊀㊀论㊀㊀荧光定量P C R染料法和流式细胞法都是检测H L AＧB２７的好方法,特异度好㊁准确度高.相比之下,荧光定量P C R染料法还具有设备通用性强,对样本要求低,制备简单,高通量等特点,加上还能同时进行分型检测,因此具有很好的临床推广价值和应用前景.参考文献[１]R O S T OM S,D O U G A D O S M,G O S S E C L,e ta l．N e w t o o l s f o r d i a g n o s i n g s p o n d yＧl o a r t h r o p a t h y[J]．J i o n t B o n eS p i n e,２０１０,７７(２):１０８Ｇ１１４．[２]杨霄鹏,惠玲．人类白细胞抗原B２７的实验室诊断[J]．分子诊断与治疗杂志,２０１５,７(４):２７６Ｇ２７９．[３]刘毓刚,李琳,吴丽娟,等．流式细胞法检测人类白细胞抗原B２７/B７表达在诊断强直性脊柱炎中的价值[J]．国际检验医学杂志,２０１２,３３(２):１３８Ｇ１４０．[４]洪俊,饶永彩．流式H L AＧB２７测定法在强直性脊柱炎诊断中的临床价值[J]．职业与健康,２０１２,２８(６):６９３Ｇ６９５．[５]卢峰,上官莉娟,陈涛,等．流式细胞仪检测H L AＧB２７在强直性脊柱炎筛查中的应用及分析[J]．国际检验医学杂志,２０１７,３８(１３):１７７９Ｇ１７８３．[６]D U A N Q M,P U A P A I R O J C,R OM P H R U K A,e ta l．H L AＧB∗２７s u b t y p e si n N o r t h e r n a n d N o r t h e a s t e r nT h a i s,K a r e n s,a n dB a m a r sd e t e r m i n e db y ah i g hＧr e s o l uＧt i o nP C RＧS S Pt e c h n i q u e[J]．T i s s u e A n t i g e n s,２００９,７３(６):５９０Ｇ５９４．[７]闻海丰,冯忠军,韩文龙,等．实时荧光聚合酶链反应熔解曲线检测人类白细胞抗原B２７方法建立及评价[J]．临床荟萃,２０１５,３０(６):６７４Ｇ６７６．[８]侯伟,许晓东．２种H L 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e x p r e s s i o n i s a s s o c i a t e dw i t h p o oＧr e r c l i n i c a l o u t c o m e s i nr e s e c t e dT３g a s t r i ca d e n o c a r c i n oＧm a[J]．A mJC l i nP a t h o l,２０１６,１４６(３):２７８Ｇ２８８．[８]B L A K ESJ,T E N G M W．R o l e o f I LＧ１７a n d I LＧ２２i na uＧt o i m m u n i t y a n d c a n c e r[J]．A c t a sD e r m o,２０１４,１０５(S u pＧp l１):４１Ｇ５０．[９]J I A L,WU C．T h eb i o l o g y a n df u n c t i o n so fT h２２c e l l s [J]．A d vE x p M e dB i o l,２０１４,８４１(１):２０９Ｇ２３０．[１０]张轶,李晓英,师雷锋．白细胞介素２２在疾病中的作用[J]．免疫学杂志,２０１７,８(１):７１１Ｇ７１６．[１１]S A A L I M M,R E S HAM S,MA N Z O O RS,e t a l．I LＧ２２:a p r o m i s i n g c a n d i d a t et oi n h i b i tv i r a lＧi n d u c e dl i v e rd i s e a s e p r o g r e s s i o na n dh e p a t o c e l l u l a r c a r c i n o m a[J]．T u m o u rB iＧo l,２０１６,３７(１):１０５Ｇ１１４．[１２]Y A N G X,Z H E N GSG．I n t e r l e u k i nＧ２２:a l i k e l y t a r g e t f o r t r e a t m e n t o fa u t o i m m u n ed i s e a s e s[J]．A u t o i m m u n R e v,２０１４,１３(６):６１５Ｇ６２０．(收稿日期:２０１７Ｇ１１Ｇ２１㊀修回日期:２０１８Ｇ０２Ｇ２２)２５５１ 国际检验医学杂志２０１８年７月第３９卷第１３期㊀I n t J L a bM e d,J u l y２０１８,V o l．３９,N o．１３。
浙江地区强性脊柱炎患者人白细胞抗原-B27基因亚型的分
浙江地区强直性脊柱炎患者人白细胞抗原-B27基因亚型的分布状况及在临床诊断与个体化治疗中的应用一、立项背景和意义强直性脊柱炎(Ankylosing spondylitis, AS)是一种慢性、进行性的自身免疫性疾病，主要累及骶髋关节、脊柱及其四肢，多发生于青壮年，我国患病率达到0.3%，就此推算我国患病人数约为360万。
该病致残率高，严重影响人民健康和生活质量，目前临床常规治疗药物是非类固醇类抗炎药（NSAID）、柳氮磺嘧啶（SASP）及甲氨蝶呤（MTX）等，主要用于缓解症状，长期应用可引起诸多副作用。
目前多认为AS是在遗传性背景的基础上，免疫学、微生物学等多因素参与的结果，但具体发病机制仍不确切。
从1973年Brewerton和Schlosstein发现AS与人白细胞抗原-B27（HLA-B27）有强关联性以来，世界各地有大量的文献作了报道。
其一对HLA-B27的地域和民族分布状况做了较详细的研究，发现不同国家和地区的HLA-B27亚型与AS的关联程度不同，有的亚型甚至起到了保护作用。
有研究表明：不同种族和人群中，HLA-B27阳性比例不同，AS发病率不同；而且强直性脊柱炎特定的临床表现和病情严重性也与HLA-B27密切相关[1]。
其二对发病原因和机制提出了多种假说，如关节源性致病肽假说、重链表面异常折叠理论、蛋白质错误折叠理论、HLA-B27等位基因多态性等等。
但尚未阐明HLA-B27与疾病的真正原因。
而以上理论几乎都涉及到HLA-B27与AS发病的免疫机制有关。
已有确凿的证据表明，AS是与暴露在环境中的病原微生物有关，有非常明显的免疫交叉反应存在，其主要原因是错误的分子折叠导致原来提呈的抗原肽复合物与CD8+T细胞结合而变成了与CD4+T细胞的结合，产生一系列的细胞免疫反应。
大量的HLA-B27的错误折叠也导致了未折叠蛋白反应（unfolded protein response,UPR）加剧，使炎性反应更加强烈。
荧光定量PCR染料法在HLA-B27检测中的应用
荧光定量PCR染料法在HLA-B27检测中的应用富显果;唐宝佳;杨菁;曹罗元;叶作东;黄宝英【摘要】目的探讨荧光定量PCR染料法检测HLA-B27基因对于诊断强直性脊柱炎的临床应用价值.方法应用流式细胞术和荧光定量PCR技术对强直性脊柱炎疑似患者170例进行HLA-B27基因及其亚型检测,对结果不一致样本,进一步应用PCR-直接测序法进行B27测序分析.结果两种方法检测符合率为92.9％,差异无统计学意义(P＞0.05);5例结果不一致样本为流式细胞分析阳性,而荧光定量PCR法和PCR-直接测序分析为B* 40亚型或B*40与B*58的杂合型;在158例AS相关患者中,共检出3种HLA-B27等位基因:B*2704为主要亚型,占96.8％,其次为B*2705,占1.9％,另有2例为B*2706,占1.3％,结论荧光定量PCR染料法可有效提高HLA-B27检测的准确性,并能够实现HLA-B27亚型分析,可为深入探讨HLA-B27在AS中发病中的作用提供依据.【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2018(022)006【总页数】4页(P939-942)【关键词】等位基因特异性PCR;荧光定量PCR;流式细胞术;强直性脊柱炎;HLA-B27【作者】富显果;唐宝佳;杨菁;曹罗元;叶作东;黄宝英【作者单位】福建医科大学附属宁德市医院中心实验室;福建医科大学附属宁德市医院检验科,福建宁德352100;福建医科大学附属宁德市医院血液风湿科;福建医科大学附属宁德市医院中心实验室;福建医科大学附属宁德市医院中心实验室;福建医科大学附属宁德市医院检验科,福建宁德352100;福建医科大学附属宁德市医院中心实验室【正文语种】中文【中图分类】R593.23人类白细胞抗原B27是6号染色体短臂上的主要组织相容性复合体基因B位点上的第27等位基因的表达产物。
既往研究表明 HLA-B27与强直性脊柱炎(Ankylosing spondylitis,AS)之间存在高度的相关性,AS患者中HLA-B27阳性率高达96%以上,而在健康人群中则少于10%[1,2]。
临床检验HLA-B27生化指标具体意义、强直性脊柱炎关联及阳性临床特征
临床检验HLA-B27生化指标具体意义、强直性脊柱炎关联及阳性临床特征组织相容性复合物B27全称HLA-B27，是HLA家族成员。
HLA抗原是人类主要组织相容性复合体（Major Histocompatibility Complex, MHC）表达产物，在免疫系统中主要负责细胞之间的相互识别和诱导免疫反应，调节免疫应答的功能。
根据HLA抗原结构，功能与组织分布的不同，可分为三类：Ⅰ类分子为HLA-A、-B、-C系列抗原，广泛分布于各组织有核细胞表面，包括血小板和网织红细胞，成熟红细胞不含HLA抗原；Ⅱ类分子为HLA-D/DR、-DP、DQ系列抗原，主要在B细胞和抗原提呈细胞上表达，这两类抗原都与移植有关，其中Ⅱ类抗原更为重要；Ⅲ类分子为补体成分，HLA-B27基因属于Ⅰ型MHC基因，基本上表达在机体中所有有核细胞上，淋巴细胞表面有丰富的含量。
与强直性脊柱炎相关性早在1973年就证实B27与强直性脊柱炎之间存在很强的关联性，27与强直性脊柱炎的联系是迄今已知的HLA与疾病的关联中最强和最典型一种。
强直性脊柱炎患者B27阳性率高达90%以上，正常人群中仅仅为4-7%。
不同人群流行病学调查在不同种族、不同地区人群中，B27阳性的阳性率是不同的，因而强直性脊柱炎发病率也不同。
加拿大Haida族人阳性率最高，达到50%，4.3%人发生强直性脊柱炎；日本人B27阳性率很低，仅仅为0.5%，强直性脊柱炎发病率很罕见，仅仅为0.006%；而在印第安人群中，50％的人HLA—B27阳性，其中12％的人患强直性脊柱炎；欧美白种人中B27阳性率为4％～13％，而强直性脊柱炎的发病率为0.1-0.3％；而中国人群的B27阳性率为2%-8%，强直性脊柱炎发病率约为0.3%。
检查项目与指标诊断意义B27阳性并不一定是强直，B27阳性与强直性脊柱并没有绝对的相关性。
B27阳性并不是确诊强直性脊柱炎的唯一因素，诊断强直性脊柱炎需要结合临床症状包括腰背痛，骶髂关节X线，详细的体格检查等才能确诊。
HLAB27检测及其临床应用详解
AS患病率 0.3% 1％ 很低
6～12％
AS患者B27阳性率 90～95% 80～100% 22% 57% 80～100%
8
HLA-B27检测方法及评价
➢ 抗原水平
微量细胞毒法 ELISA IMS-ELISA 流式细胞术法
➢ 基因水平
PCR-SSP
9
微量细胞毒法（microlymphocytotoxic test，MLCT）
4
血清阴性脊柱关节病共同特点
➢ 临床上有很多共同或重叠之处：
眼炎，尿道炎，前列腺炎， 口腔、肠道和生殖器溃疡 结节性红斑，银屑病样皮疹 坏死性脓皮病，血栓性静脉炎
➢ 基本病理变化以肌腱端周围和韧带附着于骨的部位为主(附着端炎)而
非滑膜，也可发生在眼、主动脉瓣、肺实质和皮肤，而不同于以滑膜 病变为主的类风湿性关节炎，而且无类风湿皮下结节。
5
HLA-B27相关疾病：强直性脊柱炎
Ankylosing Spondylitis，AS
➢ 患病率：0.3%，20-30岁，男女比例 10:1，有家族倾向； ➢ 主要侵犯：中轴关节（骶髂关节、脊柱骨突、脊柱旁软组织）
可伴发外周关节及关节外表现，严重者发生脊柱畸形和关节强直
➢ B27检测可作为有相关症状或高危人群AS早期的筛选方法！ ➢ AS不是RA的一种特殊类型！
12
流式细胞术法
➢ 利用荧光标记的HLA-B27单克隆抗体，与细胞表面的B27抗原结合，使
结合后的淋巴细胞具有一定的荧光强度，这种荧光强度可由流式细胞 仪测得的通道值来反映，以其值的高低判断HLA-B27抗原表达百分比 ，从而判断HLA-B27是否阳性。
➢ 优点：全自动仪器检测，减少了人为因素的影响，重复性高，结果判
流式细胞术检测HLA_B27及其临床意义
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HLA-B27基因亚型分型检测
２ ０ １ ３年 ６月 第 １ ７卷
第 ６期
一
９ ８ ３ 一
文章编号 ： １ ０ ０ ７ —４ ２ ８ ７ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ６ —０ ９ ８ ３ ～０ ３
ＨＬ Ａ— Ｂ ２ ７基 因亚 型 分 型 检测
黄 宝英 ， 杨 菁 ， 富显果 ， 曹罗元 ， 唐 宝佳
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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱＨＬ Ａ— Ｂ ２ ７型 别 。
种病 因不 明 的骨一 韧 带结 合部 慢 性 炎性 疾 病 ， 主要 累及 骶 骼关 节 、 脊柱 、 脊 柱 软 织 及 四肢 关 节 ， 多见 于 中青 年 男性 ， 主要 症 状 是 腰 、 骶 以及 下 肢 关 节 疼 痛 ， 晚期 患 者脊 柱僵 直成板 状 ， 活动受 限 ， 基 因遗传 和免
（ 福 建 医科 大 学 附 属 宁 德 市 医 院 细 胞 分 子 生 物 学 实 验 室 ， 福建 宁德 ３ ５ ２ １ ０ ０ ）